Wpływ produktów z męskich gruczołów dodatkowych na składanie jaj u ślimaków

Ogólnym celem tego protokołu jest scharakteryzowanie wpływu białek płynu nasiennego na zachowanie podczas składania jaj przez gatunki hermafrodytów żyjących jednocześnie. Osiąga się to poprzez najpierw izolację osób ze standaryzowanej kultury laboratoryjnej, a następnie sekcję narządów docelowych. Po drugie, pobiera się plemniki i sporządza się roztwór leczniczy.

Następnie ślimaki są sztucznie zapładniane. Następnie umieszcza się je w eseju biograficznym. W standardowych warunkach masy jajowe są zbierane, skanowane i umieszczane w indywidualnych BS do wyklucia.

Po kilku tygodniach pisklęta są liczone i skanowane, po czym wszystkie zdjęcia można przeanalizować za pomocą bezpłatnego oprogramowania. Protokół ten może pomóc odpowiedzieć na pytania dotyczące procesów doboru płciowego, w których pośredniczą białka płynu nasiennego. Ponieważ przyglądamy się tutaj jednoczesnym hermafrodytom, możemy również zająć się kwestią, czy procesy te działają w podobny, czy różny sposób, jak u różnych gatunków płciowych.

Do tego protokołu użyliśmy świetnego IL in les, który utrzymujemy na Uniwersytecie VU w Amsterdamie. Używamy tego gatunku do badania pytań dotyczących doboru płciowego i rozmnażania. U hermafrodytów, ze względu na stosunkowo duży rozmiar ciała, jest eksperymentalnie bardzo dostępny.

Ponadto, ponieważ jest używany w wielu różnych dyscyplinach biologicznych jako gatunek modelowy, wiemy dużo o podstawowej biologii tych zwierząt. Nazywam się Yumi. Jestem doktorem nauk humanistycznych na Wydziale Nauk Ekologicznych.

Na całym uniwersytecie zademonstruję następujące protokoły. Zacznijmy. Aby wykonać wiarygodną biosę, najczęściej stosuje się posiew laboratoryjny w celu wykluczenia się zmiennych.

Woda o niskiej zawartości miedzi jest utrzymywana w temperaturze 20 stopni Celsjusza, a cykl jasnej ciemności wynosi 12 na 12 godzin. Na Uniwersytecie VU hodowla laboratoryjna jest utrzymywana w zbiornikach hodowlanych z ciągłą wymianą wody. W standardowych warunkach dorosłe ślimaki są karmione sałatą na libido i rozdzielane według ich klasy wiekowej.

Po usunięciu ślimaków z obiektu hodowlanego zostaną one uznane za użytkowane i nie będą mogły zostać zwrócone do zbiorników hodowlanych. Przed rozpoczęciem zabiegu będziesz potrzebować mikroskopu stereoskopowego, płytki preparacyjnej z szpilkami, małych nożyczek chirurgicznych, kleszczy, strzykawki wypełnionej roztworem chlorku magnezu i kilku ręczników papierowych do eutanazji ślimaka, wniknięcia w stopę igłą do wstrzykiwań pod kątem 45 stopni i delikatnego nacisku w sposób ciągły, aż ślimak się rozluźni i pozostanie rozciągnięty. Wyjąć igłę do wstrzykiwań i upewnić się, że ślimak został poddany eutanazji.

Następnie weź kleszcze i ostrożnie usuń skorupę. Podążając za krzywizną do połowy, delikatnie zeskrob mięsień umięśniony z muszli. Następnie delikatnie wykręć ślimaka z muszli, podążając za kierunkiem nawijania muszli.

Teraz ślimak został usunięty ze skorupy i muszlę można wyrzucić. Następnie umieść ślimaka na płytce preparacyjnej i wbij szpilkę w tylną część stopy. Następnie wbij szpilkę w głowę.

Napnij trochę ślimaka i umieść szpilkę w talerzu. Teraz ślimak jest gotowy do sekcji. Włącz światło mikroskopu stereoskopowego i wyreguluj mikroskop.

Przed wykonaniem pierwszego nacięcia ważne jest, aby zlokalizować żeński por. Będzie to później punktem odniesienia. Wykonaj pierwsze nacięcie tuż pod krawędzią płaszcza i przetnij w kierunku żeńskiego por.

Obróć się wokół poru bonno w kierunku głowy. Upewnij się, że przecinasz tylko skórę i nie uderzasz w żadne narządy i tniesz w linii prostej. W tym badaniu przeanalizujemy gruczoł krokowy i pęcherzyki nasienne odpowiednio dla płynu nasiennego i plemników.

Należy pamiętać, że w przypadku pełnych zapasów nasienia i płynu nasiennego, ślimaki powinny być izolowane przez jeden tydzień i karmione ad libido. Sekcja jest taka sama, jak wyjaśniono wcześniej. Pęcherzyki nasienne znajdują się w tylnej części zwierzęcia.

Następnie gruczoł krokowy zostanie zawieszony w soli fizjologicznej i umieszczony na lodzie. Później. Zostaną one zmieszane z roztworami leczniczymi.

Przed wstrzyknięciem dopochwowym pobrane plemniki zostaną dodane do płynu nasiennego lub poszczególnych białek w odpowiedniej dawce. Do tej techniki sztucznego zapłodnienia potrzebna będzie strzykawka o pojemności jednego mililitra Zawierająca roztwór testowy dopasuj igłę do wstrzykiwań na strzykawkach, upewniając się, że w strzykawkach do wstrzykiwań nie utknęły pęcherzyki, ostrożnie używaj silikonowej rurki. Nasunąć silikonową rurkę na igłę do wstrzykiwań.

Upewnij się, że rurka jest przebita i usuń powietrze z rurki. Przed wstrzyknięciem ślimak musi zostać uspokojony. Będzie to przebiegać zgodnie z tym samym protokołem, co w rozdziale drugim.

Ślimak otrzyma dawkę od dwóch do trzech mililitrów 50 mikro molowców chlorku magnezu. Kiedy ślimak jest odpowiednio uspokojony i zrelaksowany, połóż go w formie, aby utrzymać go w stabilnej pozycji. Następnie chwyć koniec silikonowej rurki parą cienkich kleszczyków i delikatnie wepchnij ją w żeński por.

Następnie delikatnie przycisnąć strzykawkę i ostrożnie wstrzyknąć zalecaną objętość roztworu testowego. Odczekaj pół minuty, aż ciśnienie w rurce rozprzestrzeni się na narząd żeński. Następnie ostrożnie wyjmij rurkę i włóż ślimaka do własnego pojemnika

W końcu ślimaki zostały sztucznie zapłodnione. Można je przetransportować do zbiorników eksperymentalnych i rozpocząć test biologiczny bios. Ślimaki wyzdrowieją z uspokojenia po kilku godzinach. Testy biologiczne.

W przypadku doboru płciowego eksperymenty trwają zwykle dwa tygodnie, zanim będzie można rozpocząć biosa. Ważne jest, aby umieścić wszystkie osoby w ich własnych pojemnikach i oznaczyć je. Następnie zmierz długość skorupy każdego ślimaka.

Jest to dobry wskaźnik ich rozmiaru, który może mieć wpływ na zachowania seksualne. Następnie ślimaki umieszcza się w zbiorniku eksperymentalnym. W tym zbiorniku panują takie same standardowe warunki jak w hodowli.

Jak omówiono w rozdziale pierwszym, ważne jest, aby umieścić pojemniki we właściwej orientacji, tak aby otwory podążały za przepływem wody w zbiorniku. Podczas testów biologicznych ślimaki muszą być regularnie karmione. Standardową ilość krążków sałaty kroi się metalowym dziurkaczem.

Wystarczająca dawka to dwie dyski co drugi dzień. Z gatunkiem modelowym, lumia stauss, Ślimaki powinny być sprawdzane pod kątem masy jajowej co drugi dzień. Te masy jaj zostaną zebrane do pomiarów.

Do skanowania jaj potrzebny będzie laptop zawierający sterownik skanera, skaner płaski, standardowa waga milimetrowa, łyżka do przenoszenia masy jajecznej i szklane talerze do układania na masie jajowej. Najpierw weź łyżkę i zeskrob masy jajeczne ze ścianek pojemnika. Masy jajowe, które są nieprzezroczyste, zostały właśnie złożone i nie można ich użyć.

W tym pomiarze umieść masy jajowe na płytkach przenoszących i powtarzaj te kroki, aż płytki będą pełne. Następnie ułóż masy jajeczne na szklanych płytkach w tej samej kolejności, co płytki przenoszące. Masy jajeczne przykleją się do szklanej płytki, odwróć ją do góry nogami i ostrożnie umieść na skanerze płaskim tuż pod wagą.

Następnie dociśnij talerze, aby zgnieść masy jajeczne. To nawet teraz doda wszystkie jaja, dzięki czemu zostaną one równie dobrze zeskanowane. Przed skanowaniem zaleca się dostosowanie ustawień w celu uzyskania najlepszego wyniku.

W przypadku skanowania ważne jest, aby ustawić rozdzielczość do maksimum, aby wykonać podgląd skanu Aby następnie przyciąć obszar roboczy, a na koniec dostosować jasność i kontrast przed wykonaniem końcowego skanowania. Po zeskanowaniu masy jajowe zostaną umieszczone w oznaczonych przez siebie fiolkach, aby dojrzeć i wykluć się. Te fiolki mają wodę odświeżaną co drugi dzień, aby utrzymać tlen na odpowiednim poziomie.

Ponieważ wykluwa się więcej ślimaków, należy stosować różne techniki odświeżania wody. Najlepszą kolejnością jest najpierw nalewanie lub przelewanie, a później odsysanie wody za pomocą pipety z otwartym obrazem programu arkusza kalkulacyjnego JA. Aby najpierw nagrać dane i zdjęcie z obrazu J, użyj narzędzia do powiększania Aby przejść do skali milimetrowej.

Powiększ i dostosuj okno tak, aby jeden milimetr wypełnił ekran. Narysuj linię za pomocą narzędzia Linia między dwiema liniami wskaźnika. Następnie przejdź do analizy, a następnie ustaw skalę.

W menu podręcznym zobaczysz opcję Zmierzona długość, która dostosowuje znaną odległość do jednego i jednostkę do milimetrów. Zaznacz pole globalne i zamknij okno. Teraz, gdy skala została ustawiona, możemy przybliżyć się do pierwszych mas jaj Do 800%Użyj narzędzia eliptycznego, aby narysować obwód jaj.

Naciśnij D, aby narysować obwód. Pomoże to zapobiec dwukrotnemu mierzeniu tego samego jajka. Naciśnij M, aby zmierzyć obwód.

Po zebraniu wystarczającej ilości danych pojawi się okno. Okno danych można zapisać jako plik Excel. Dane można również kopiować bezpośrednio do arkusza.

Jeśli preferowane pomiary nie są wyświetlane w wyskakującym okienku, można je dostosować i przeanalizować. Ustawianie pomiarów, liczenie pojedynczych jaj na masę jaj można również wykonać za pomocą wtyczki licznika komórek. Przejdź do wtyczek.

Następnie przeanalizuj i wybierz licznik komórek. Pojawi się okno licznika komórek. Zaznacz pole Zachowaj oryginał i naciśnij przycisk inicjuj.

Pojawiło się nowe okno licznika. Wybierz narzędzie krzyżyk tutaj z paska narzędzi. Następnie wybierz typ licznika z menu licznika komórek.

Klikając w oknie licznika komórek, jaja zostaną policzone. Łączną liczbę można znaleźć obok typu licznika w menu licznika komórek. Za pomocą licznika komórek można policzyć wiele mas jajowych.

W razie potrzeby można dodawać i usuwać typy liczników, Ten numer należy skopiować ręcznie do arkusza kalkulacyjnego lub nacisnąć wyniki, a pojawi się okno. Wyświetlanie wszystkich wyników. Za pomocą tej metody pokazaliśmy, jak zbierać białka płynu nasiennego, jak testować je w sensowny sposób.

Wykazaliśmy to za pomocą kompletnego ekstraktu z gruczołu krokowego, ale oczywiście poszczególne białka płynu nasiennego można testować w ten sam sposób. Ponadto możliwe jest przyjrzenie się innym procesom i składaniu jaj. Wyniki naszych eksperymentów wykazały, że istnieje pojedyncze białko płynu nasiennego zwane statyną avios, które pośredniczy w zmniejszeniu drogi jajowej.

Ponadto stwierdzamy, że transfer płynu nasiennego zwiększa rozmiar lub słupki. Statyna jest pierwszym w pełni scharakteryzowanym białkiem płynu nasiennego w jednoczesnym hermafrodycie. Podczas gdy wpływ płynu nasiennego często zgłaszano u gatunków o różnych płciach, nasze wyniki podkreślają, że płyny nasienne są równie ważne u hermafrodytów.