Przeszczep skóry ogona w celu zbadania allogenicznych odpowiedzi limfocytów T CD4 u myszy

Ogólnym celem poniższej procedury jest wykonanie przeszczepu skóry ogona. Aby zbadać odrzucenie lub indukcję tolerancji za pośrednictwem limfocytów T w modelu mysim, osiąga się to poprzez najpierw pobranie skóry ogona od myszy dawcy. W drugim etapie przygotowuje się miejsce przeszczepu na zwierzęciu biorcy.

Następnie przeszczep jest przeszczepiany i mocowany za pomocą kleju tkankowego i bandaża w ostatnim etapie. Bandaż jest usuwany w siódmym dniu po przeszczepie, a przeszczep jest oceniany. Ostatecznie można badać odpowiedź alloimmunologiczną za pośrednictwem limfocytów T.

Ta technika przeszczepu skóry ogona stanowi potężny model do badania zależnego od limfocytów T odrzucania i indukcji tolerancji podczas allogenicznych odpowiedzi immunologicznych u myszy. Przed rozpoczęciem zabiegu otwórz bandaże na palcu i nałóż wazelinę na opuszki ran za pomocą bawełnianego wacika, upewniając się, że gaza jest całkowicie zakryta. Następnie zdezynfekuj ogon myszy dawcy poddanej eutanazji roztworem dezynfekującym.

Następnie umieść ogon na czystej plastikowej desce. Odwróć górny pasek do dołu i wykonaj podłużne powierzchowne nacięcie przez skórę wzdłuż linii środkowej ogona. Użyj kleszczy chwytających, aby oderwać skórę, a następnie umieść tkankę w 10-centymetrowym naczyniu do hodowli komórek wypełnionym 10 mililitrami HBSS.

Ogol miejsce grzbietowe znieczulonej myszy biorcy i użyj suchego kawałka gazy, aby usunąć wszelkie zanieczyszczające włosy. Po zdezynfekowaniu ogolonego miejsca przeszczepu roztworem aseptycznym uszczypnij skórę kleszczami w środkowej prawej stronie grzbietu i za pomocą zakrzywionych nożyczek wykonaj okrągłe nacięcie o średnicy około jednego na 0,6 centymetra. Następnie za pomocą skalpela wyciąć przeszczep z wyciętej skóry ogona dawcy, przycinając rogi, aby zaokrąglić tkankę, załadować przeszczep na skalpel i osuszyć nadmiar HBSS sterylnym wacikiem.

Następnie umieść wysuszoną tkankę na łożu przeszczepu myszy biorcy. Unikaj nakładania się na skórę dawcy i żywiciela, nakładając klej tkankowy wyłącznie na strefę kontaktu. Następnie owiń plaster bez zagnieceń wokół talii myszy i nałóż samoprzylepny, nieelastyczny bandaż, aby przymocować plaster do myszy, aby zapobiec zaczepieniu zębów myszy o bandaż.

Podczas rekonwalescencji należy wykonać trzymilimetrowe nacięcie w górnej brzusznej stronie materiału. Po pełnym wyzdrowieniu na rozgrzanej poduszce grzewczej włóż przeszczepione zwierzę z powrotem do klatki i oceń jego mobilność. Aby upewnić się, że bandaż nie jest zbyt ciasny, potraktuj mysz syropem paracetamolowym w wodzie zwierzęcia przez siedem dni.

Po sześciu do siedmiu dniach użyj sterylnych nożyczek do tętnic, aby przeciąć i ostrożnie usuń bandaże, uważając, aby nie rozciągać miejsca przeszczepu. Na koniec monitoruj przeszczepione myszy pod kątem objawów klinicznych i oceń odrzucenie przeszczepów skóry. W tym eksperymencie sześciu myszom C 57 BL przeszczepiono alloprzeszczepy IABM 12 i przeszczepy grzechu IAB.

Po zdjęciu bandaży przeszczep wykazywał oznaki gojenia się ran bez zamknięcia strefy kontaktowej u myszy C 57 BL six. Jeden do dwóch tygodni później zapalenie za pośrednictwem limfocytów T CD 4-dodatnich doprowadziło do pojawienia się martwiczych obszarów wewnątrz przeszczepu. Odrzucenie przeszczepów allogenicznych I A BM 12 zaobserwowano u sześciu myszy C 57 BL w ciągu 13 dni od przeszczepu.

Podczas gdy przeszczepy syn były tolerowane do 100 dni. Odrzucenie MHC klasy drugiej niedopasowanej skóry ogona zależy od obecności allogenicznych limfocytów T CD czterech dodatnich. Na przykład myszy z nokautem CD three E z niedoborem limfocytów T oraz myszy z nokautem RAG z limfocytami T i B wykazują całkowite gojenie się ran i tolerują przeszczepy I a BM 12 przez okres do 100 dni.

Akceptacja niedopasowanej skóry ogona IABM 12 pozwala na badanie allogenicznych limfocytów T CD czterech dodatnich i ich funkcji efektorowych w modelu mysim bez poważnych patologii chorobowych. Zaletą tego modelu przeszczepu skóry ogona jest to, że analizę funkcjonalną czterech dodatnich limfocytów T CD można łatwo przeprowadzić poprzez adoptywny transfer specyficznych dla antygenu czterech dodatnich limfocytów T CD W tym reprezentatywnym eksperymencie transfer dwóch razy 10 do czwartych transgenicznych komórek BM A specyficznych dla antygenu był wystarczający do wywołania odrzucenia wykresów IABM 12 u myszy z nokautem szmacianym w ciągu 13 dni. Zaobserwowano, że komórki BM V alfa dwa V beta eight z ekspresją A BM w łańcuchu tetra proliferują w znacznym stopniu w teście rozcieńczenia EFL six 70 i wytwarzają IFN Gamma po podjętej stymulacji PMA. Razem.

Dane te pokazują, że tylko kilka allogenicznych limfocytów T CD z czterema dodatnimi limfocytami T jest potrzebnych do odrzucenia jednego przeszczepu skóry A BM 12, co czyni to idealnym modelem do analizy allogenicznych limfocytów T przy braku ciężkiej patologii. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak przeprowadzić przeszczep skóry ogona i skutecznie monitorować odrzucenie przeszczepu.