Name: Kontrolowany model uderzenia kory mózgowej w przypadku urazowego uszkodzenia mózgu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-05T16:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Poznaj model kontrolowanego uderzenia kory mózgowej do badania urazowego uszkodzenia mózgu u myszy. Ta metoda pozwala na kontrolowane i powtarzalne wprowadzanie obrażeń mózgu w celu analizy patologii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez fundusze z Indiana Spinal Cord & Brain Injury Research Grants (SCBI 200-12), Ralph W. and Grace M. Showalter Research Award, Indiana University Biological Research Grant, NIH grants RR025761 i 1R21NS072631-01A.

Opieka nad zwierzętami 
Samce myszy C57 BL/6 trzymano w grupach i trzymano w 12/12-godzinnym cyklu światło/ciemność ze swobodnym dostępem do pożywienia i wody ad libitum. Zwierzęta wykorzystane w tym protokole miały 10-12 tygodni. Wszystkie zabiegi zostały przeprowadzone zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Uniwersytetu Indiana.
1. Przygotowanie chirurgiczne
<ol>
	<li>Znieczulić mysz za pomocą mieszaniny ketaminy i ksylazyny (87,7 mg/ml ketaminy i 12,3 mg/ml ksylazyny) i podać (1 ml/kg) we wstrzyknięciu IP.</li>
	<li>Ogol głowę myszy między uszami.</li>
	<li>Nałóż galaretkę na bazie ropy naftowej na oczy myszy, aby zapobiec wysuszeniu podczas operacji.</li>
	<li>Oczyść ogolone miejsce 10% jodem. Następnie użyj 70% etanolu, aby usunąć jod.</li>
	<li>Zamocuj główkę myszy w ramie stereotaktycznej za pomocą pasków nausznych i płytki zgryźnej. Upewnij się, że mózg jest stabilny.</li>
</ol>
2. Kraniektomia
<ol>
	<li>Wykonaj podłużne nacięcie na środku głowy nożyczkami. Użyj hemostatu, aby przytrzymać skórę na lewej stronie.</li>
	<li>Użyj aplikatora z bawełnianą końcówką, aby usunąć krew i tkankę z kości, aby odsłonić czaszkę. Pozostaw odsłoniętą czaszkę do wyschnięcia na 1 minutę.</li>
	<li>Użyj kleszczy, aby wywrzeć nacisk i upewnić się, że czaszka pozostaje nieruchoma. Zidentyfikuj anatomiczne punkty orientacyjne Lambda (aspekt ogonowy) i Bregma (aspekt czołowy). Narysuj okrąg na środku Lambda i Bregma o średnicy 4 mm i odległości 0,5 mm od linii środkowej.</li>
	<li>Użyj wiertła, aby przeciąć wzdłuż zaznaczonego okręgu. Delikatnie zdmuchnij pył kostny. Nie należy całkowicie przewiercać kości, aby zapobiec uszkodzeniu opony twardej.</li>
	<li>Użyj kleszczy, aby usunąć kość i odsłonić oponę twardą.</li>
</ol>
3. Impakcja
System uderzeniowy zawiera skrzynkę kontrolną do ustawiania parametrów uderzenia, siłownik do wykonywania uderzenia oraz ramkę stereotaktyczną do zabezpieczania siłownika i głowicy myszy przed uderzeniem.
<ol>
	<li>Wstępnie ustaw prędkość siłownika na 3 m/s przed operacją.</li>
	<li>Wstępnie ustawione różne głębokości deformacji, aby wywołać różne nasilenie obrażeń. Głębokości deformacji 0,0-0,2 mm, 0,5-1,0 mm i 1,2-2,0 mm skutkowałyby odpowiednio łagodnym, umiarkowanym i ciężkim TBI. Protokół ten wyjaśniał, w jaki sposób osiągnąć umiarkowanie ciężkie uszkodzenie mózgu o głębokości deformacji 1 mm przy użyciu prędkości 3 m/s.</li>
	<li>Przymocuj siłownik do uchwytu w ramie stereotaktycznej i za pomocą przesuwających go mikromanipulatorów zamocuj okrągłą, płaską końcówkę siłownika (o średnicy 3 mm) pośrodku otwartego obszaru czaszki. Następnie wyreguluj końcówkę pod kątem równoległym do powierzchni miejsca uderzenia.</li>
	<li>Ustal punkt zerowy, przesuwając siłownik w dół w modelu przedłużającym, aż końcówka dotknie powierzchni miejsca uderzenia. Następnie ustaw kanał Z na stereotaktycznym panelu sterowania na zero.</li>
	<li>Cofnąć końcówkę impaktora, jednocześnie przesuwając siłownik o 1 mm w dół.</li>
	<li>Naciśnij przycisk uderzenia, aby uderzyć w miejsce urazu i osiągnąć głębokość odkształcenia 1 mm.</li>
</ol>
4. Zamknięcie miejsca kontuzji
<ol>
	<li>Użyj aplikatorów z bawełnianą końcówką, aby usunąć krew po uderzeniu, ale nie dotykaj obszaru urazu.</li>
	<li>Umieść mysz na ciepłej podkładce, aby utrzymać temperaturę ciała.</li>
	<li>Po ustaniu krwawienia należy zaszyć ranę. Umieść zwierzę z powrotem w czystej klatce i pozwól mu dojść do siebie po operacji przez noc na ciepłej podkładce.</li>
	<li>Buprenorfinę należy podawać w dawce 0,05-0,10 mg/kg mc. mc. co 8-12 godzin przez 2 dni po zabiegu.</li>
</ol>

<ol><li>Menon, D. K., Schwab, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Position+statement%3A+definition+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Phys+Med+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Position statement: definition of traumatic brain injury.</a> Arch Phys Med Rehabil. 91 (11), 1637-1640 (2010).</li>
<li>Lighthall, J. W., Dixon, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Experimental models of brain injury.</a> J Neurotrauma. 6 (2), 83-97 (1989).</li>
<li>Dixon, C. E., Clfton, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+controlled+cortical+impact+model+of+traumatic+brain+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A controlled cortical impact model of traumatic brain injury in the rat.</a> J Neurosci Methods. 39 (3), 253-262 (1991).</li>
<li>Scheff, S. W., Baldwin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morris+water+maze+deficits+in+rats+following+traumatic+brain+injury%3A+lateral+controlled+cortical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Morris water maze deficits in rats following traumatic brain injury: lateral controlled cortical impact.</a> J Neurotrauma. 14 (9), 615-627 (1997).</li>
<li>Smith, D. H., Soares, H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+parasagittal+controlled+cortical+impact+in+the+mouse%3A+cognitive+and+histopathologic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A model of parasagittal controlled cortical impact in the mouse: cognitive and histopathologic effects.</a> J Neurotrauma. 12 (2), 169-178 (1995).</li>
<li>Hannay, H. J., Feldman, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+controlled+cortical+impact+model+of+head+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Validation of a controlled cortical impact model of head injury in mice.</a> J Neurotrauma. 16 (11), 1103-1114 (1999).</li>
<li>Natale, J. E., Ahmed, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profile+changes+are+commonly+modulated+across+models+and+species+after+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Gene expression profile changes are commonly modulated across models and species after traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 20 (10), 907-927 (2003).</li>
<li>Anderson, R. W., Brown, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+mechanics+and+axonal+injury+in+a+sheep+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Impact mechanics and axonal injury in a sheep model.</a> J Neurotrauma. 20 (10), 961-974 (2003).</li>
<li>Lighthall, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+cortical+impact%3A+a+new+experimental+brain+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Controlled cortical impact: a new experimental brain injury model.</a> J Neurotrauma. 5 (1), 1-15 (1988).</li>
<li>Chen, S., Pickard, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+cellular+pathology+after+controlled+cortical+impact+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Time course of cellular pathology after controlled cortical impact injury.</a> Exp Neurol. 182 (1), 87-102 (2003).</li>
<li>Long, J. B., Bentley, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast+overpressure+in+rats%3A+recreating+a+battlefield+injury+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Blast overpressure in rats: recreating a battlefield injury in the laboratory.</a> J Neurotrauma. 26 (6), 827-840 (2009).</li>
<li>Clark, R. S., Schiding, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+accumulation+after+traumatic+brain+injury+in+rats%3A+comparison+of+weight+drop+and+controlled+cortical+impact+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Neutrophil accumulation after traumatic brain injury in rats: comparison of weight drop and controlled cortical impact models.</a> J Neurotrauma. 11 (5), 499-506 (1994).</li>
<li>Werner, C., Engelhard, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of traumatic brain injury.</a> Br J Anaesth. 99 (1), 4-9 (2007).</li>
<li>Colicos, M. A., Dixon, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed%2C+selective+neuronal+death+following+experimental+cortical+impact+injury+in+rats%3A+possible+role+in+memory+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Delayed, selective neuronal death following experimental cortical impact injury in rats: possible role in memory deficits.</a> Brain Res. 739 (1-2), 111-119 (1996).</li>
<li>Raghavendra Rao, V. L., Dogan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury+leads+to+increased+expression+of+peripheral-type+benzodiazepine+receptors%2C+neuronal+death%2C+and+activation+of+astrocytes+and+microglia+in+rat+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury leads to increased expression of peripheral-type benzodiazepine receptors, neuronal death, and activation of astrocytes and microglia in rat thalamus.</a> Exp Neurol. 161 (1), 102-114 (2000).</li>
<li>Gao, X., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+traumatic+brain+injury+promotes+neural+precursor+proliferation+without+increasing+neurogenesis+in+the+adult+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Moderate traumatic brain injury promotes neural precursor proliferation without increasing neurogenesis in the adult hippocampus.</a> Exp Neurol. 239, 38-48 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Najbardziej krytycznymi krokami do skutecznego generowania spójnych TBI przy użyciu elektronicznego systemu uderzenia magnesu w celu wywołania CCI są: 1) stabilne zamocowanie główki myszy w ramie stereotaktycznej; 2) generowanie tego samego rozmiaru okna kostnego między myszami i usuwanie kości bez uszkadzania opony twardej pod nią podczas kraniektomii; 3) prawidłowe ustawienie końcówki udarowej na środku otwartej przestrzeni i ustalenie punktu zerowego przed uderzeniem.
Głowica myszy musi być...

Urazowe uszkodzenie mózgu (TBI) definiuje się jako zmianę w funkcjonowaniu mózgu lub inny dowód patologii mózgu, spowodowany przez siłę zewnętrzną1. TBI pozostają poważnym problemem zdrowotnym na całym świecie, szczególnie w Stanach Zjednoczonych. Według Centers for Disease Control and Prevention, co najmniej 1,7 miliona TBI występuje rocznie w Stanach Zjednoczonych, co powoduje 30,5% wszystkich zgonów związanych z urazami. W 2000 roku bezpośrednie koszty medyczne i pośrednie koszty TBI wyniosły szacunkowo 76,5 miliarda dolarów w samych Stanach Zjednoczonych. Chociaż postęp technologiczny i terapeutyczny w poprzednich dekadach poprawił jakość i długość życia osób cierpiących na TBI, obecnie nie ma skutecznych metod leczenia farmakologicznego lub zapobiegawczego. Ze względu na złożoność i dalekosiężne skutki TBI, w tym uszkodzenia tkanek, śmierć komórek i zwyrodnienie aksonów, nie ma dwóch identycznych urazów; w związku z tym żaden obecny model TBI dla zwierząt nie odtwarza dokładnie wszystkich aspektów TBI obserwowanych u ludzi. Jednak modele zwierzęce zapewniają możliwość wytwarzania prawie identycznych urazów niezbędnych do zbadania różnych skutków TBI z nadzieją na dalsze zrozumienie klinicznych objawów TBI.
Model kontrolowanego uderzenia korowego (CCI) wykorzystuje system uderzeń do fizycznego uderzenia w odsłoniętą oponę twardą zwierzęcia. Wywołuje TBI w zakresie od łagodnego do ciężkiego, podobnego do tych, których doświadczają ludzie. Uraz ten został po raz pierwszy scharakteryzowany u fretki2, a później został przystosowany do stosowania u szczura3,4, myszy5-7 i owcy8. Od czasu pierwszej charakterystyki miejsce urazu zostało umieszczone zarówno nad linią środkową2,9, jak i korą boczną10. CCI zapewnia łatwą i dokładną metodę badania skutków i potencjalnych metod leczenia TBI.
Oprócz modelu CCI, modele płynnego uderzenia i spadku masy są powszechnie używane do produkcji TBI. Modele te mają jednak ograniczenia, w tym mniejszą kontrolę nad parametrami urazu, powodując zmiany histopatologiczne nieobserwowane u ludzi TBI oraz większą częstość przypadkowych zgonów u myszy3,5,10. Model fali uderzeniowej jest również używany do produkcji TBI. Chociaż model fali uderzeniowej nie odtwarza zmian histopatologicznych obserwowanych po uderzeniu mechanicznym, model ten dokładnie tworzy TBI, których doświadcza szczególnie personel wojskowy11. Model kontrolowanego uderzenia kory mózgowej jest łatwy do kontrolowania dzięki precyzyjnej kontroli parametrów deformacji, takich jak czas, prędkość i głębokość uderzenia5. Taka dokładność sprawia, że odtworzenie niemal identycznych obrażeń w całej grupie zwierząt jest bardziej wykonalne. Co najważniejsze, CCI odtwarza TBI z cechami obserwowanymi u ludzkich TBI12. Nie ma jednak jednego modelu zwierzęcego, który byłby w pełni skuteczny w odtwarzaniu pełnego spektrum zmian patologicznych obserwowanych po TBI. Konieczne są dalsze badania, aby w pełni ujawnić ostre i przewlekłe zmiany, które zachodzą po TBI.
Po TBI występują dwa rodzaje urazów: pierwotne i wtórne. Uraz pierwotny występuje w momencie uderzenia i nie jest wrażliwy na zabiegi terapeutyczne; Jednak urazy wtórne, które utrzymują się po początkowym urazie, podlegają leczeniu13. Model kontrolowanego uderzenia kory mózgowej powoduje uraz pierwotny, co pozwala naukowcom na zbadanie skutków TBI i potencjalnych metod leczenia potencjalnie długotrwałych skutków urazów wtórnych. Obszary potencjalnych badań z wykorzystaniem modelu CCI obejmują śmierć neuronów, obrzęk mózgu, neurogenezę, efekty naczyniowe, zmiany histopatologiczne, deficyty pamięci i wiele innych3,13-16.

<table><tbody><tr><td>Jod powidonu 7,5%</td> <td>Purdue produkt L.P.</td><td></td><td>Peeling chirurgiczny</td></tr><tr><td>Aplikatory z bawełnianą końcówką</td><td>Henry Schein</td><td>100-6015</td><td>Usuń krew i zanieczyszczenia</td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td>Chirurgia</td></tr><tr><td>Forcept</td><td>Fine Science Tools</td><td>11293-00</td><td>Chirurgia</td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>13021-12</td><td>Chirurgia</td></tr><tr><td>Akumulatorowa akumulatorowa mikrowiertarka</td><td>Stoelting</td><td>58610</td><td>Połącz z zadziorami do generowania okna kostnego</td></tr><tr><td>Zadziory do Micro Drill</td><td>Fine Science Tools</td><td>19007-05</td><td></td></tr><tr><td>Monofilament do szwów</td><td>Ethicon</td><td>G697</td><td>Szew</td></tr><tr><td>Alkohol tert-amylowy</td><td>Sigma</td><td>152463-250ML</td><td>Wytwarzanie 2,5% Avertin</td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromoetanol</td><td>Sigma</td><td>T48402-25G</td><td>Wytwarzanie 2,5% Avertin</td></tr></tbody></table>

kontrolowany model uderzenia kory mózgowej w przypadku urazowego uszkodzenia mózgu

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

Każdego roku ponad milion Amerykanów doznaje urazowego uszkodzenia mózgu (TBI). W połączeniu z występowaniem TBI na całym świecie, skutki fizyczne, emocjonalne, społeczne i ekonomiczne są oszałamiające. Dlatego konieczne są dalsze badania nad skutkami TBI i skutecznymi metodami leczenia. Model kontrolowanego uderzenia korowego (CCI) wywołuje urazowe uszkodzenia mózgu, od łagodnych do ciężkich. Metoda ta wykorzystuje sztywny impaktor do dostarczania energii mechanicznej do nienaruszonej opony twardej odsłoniętej po kraniektomii. Uderzenie odbywa się przy precyzyjnych parametrach z zadaną prędkością, aby osiągnąć z góry określoną głębokość odkształcenia. Chociaż istnieją inne modele TBI, takie jak spadek masy ciała i płynna perkusja, CCI jest dokładniejszy, łatwiejszy do kontrolowania, a co najważniejsze, powoduje urazowe uszkodzenia mózgu podobne do tych obserwowanych u ludzi. Jednak żaden model TBI nie jest obecnie w stanie odtworzyć zmian patologicznych identycznych z tymi, które obserwuje się u ludzi. Model CCI umożliwia badanie krótko- i długoterminowych skutków TBI, takich jak śmierć neuronów, deficyty pamięci i obrzęk mózgu, a także potencjalne metody leczenia TBI.

Model kontrolowanego urazu korowego (CCI) pozwala na wywołanie TBI o stopniu ciężkości od łagodnego do ciężkiego. Po uderzeniu stopień obrzęku czaszki, krwawienia oraz zniekształcenia czaszki w miejscu uderzenia ujawnia stopień ciężkości urazu wynikający z parametrów prędkości i głębokości deformacji. Łagodne TBI skutkują obrzękiem czaszki w miejscu uderzenia i niewielkim krwawieniem ze względu na ograniczony przerwany otwór w oponie twardej. Umiarkowane TBI objawiają się obrzękiem czaszki i nasilonym krwawieniem spowodo...

Urazowe uszkodzenia mózgu (TBI) pozostają poważnym problemem zdrowotnym. Wykorzystując model chirurgii kontrolowanego wpływu kory mózgowej, można przeprowadzić badania nad skutkami TBI i możliwymi metodami leczenia.

Kontrolowany model uderzenia kory mózgowej w przypadku urazowego uszkodzenia mózgu

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie urazowych uszkodzeń mózgu przy użyciu modelu kontrolowanego uderzenia korowego. Osiąga się to poprzez uprzednie znieczulenie i przygotowanie myszy do operacji. Drugim etapem zabiegu jest wykonanie kraniektomii typu C.Trzecim krokiem jest ustawienie systemu uderzeniowego o żądanych parametrach. Ostatnim krokiem jest oddziaływanie na odsłonięty mózg. Ostatecznie wyniki mogą pokazać uszkodzoną jamę korową poprzez obrazowanie wypreparowanego mózgu i immunohistochemię.Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, będą miały trudności, ponieważ mają trudności z generowaniem spójnych urazów mózgu. Procedurę zademonstruje dr Shang Gao, pracownik naukowy w naszym laboratorium. Po znieczuleniu mysz goli głowę między uszami, oczyszcza odsłoniętą skórę naprzemiennymi peelingami z 10% jodu i 70% etanolu.Następnie należy nasmarować oczy, aby nie wyschły. Następnie zamocuj mysz w ramce stereotaktycznej, korzystając z listew nausznych i płytki zgryzowej. Głowa powinna być bardzo stabilna.Kraniektomię należy rozpocząć od podłużnego nacięcia na środku głowy za pomocą nożyczek. Następnie użyj hemostatu, aby przytrzymać skórę z boku za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką Wytrzyj, oczyść i odsłoń kość czaszki. Pozostaw na minutę do wyschnięcia, zanim przejdziesz dalej.Po wyschnięciu użyj kleszczy, aby wywrzeć nacisk na czaszkę. Upewnij się, że preparat pozostaje nieruchomy. Zidentyfikuj punkty orientacyjne lambda i breg ma.Następnie w ich środku narysuj okrąg o średnicy czterech milimetrów, czyli pół milimetra od linii środkowej. Następnie wywierć wzdłuż zaznaczonego okręgu, aby kość była łatwa do złamania, ale nie przenikaj do opony twardej. W razie potrzeby usuń kurz.Następnie użyj kleszczy, aby odłamać krąg kości, odsłaniając oponę twardą. Kraniektomia C jest najbardziej krytycznym krokiem. Uzyskanie spójnych parametrów okna kostnego pozwoli na stałą ciężkość urazu.Upewnij się, że odpowiedni rozmiar, prędkość i siła wiertła są dobrze używane. Wiercenie System udarowy wykorzystuje siłownik do wykonania uderzenia w czaszkę i ma pewne parametry, które należy ustawić. Ustaw prędkość siłownika na trzy metry na sekundę.Następnie przymocuj siłownik do ramy stereotaktycznej. Za pomocą mikromanipulatorów ustaw siłownik o szerokości trzech milimetrów w otwartym obszarze czaszki. Następnie wyreguluj końcówkę siłownika tak, aby była równoległa do powierzchni uderzenia.Aby ustawić punkt zerowy, wysuń siłownik i opuść go, aż końcówka dotknie miejsca uderzenia. Ustawia odpowiedni kanał Z w ramce na zero. Teraz cofnij końcówkę, w tym przypadku o jeden milimetr.Następnie ustaw głębokość deformacji dla odpowiedniego urazowego uszkodzenia mózgu, które przesunie siłownik. Następnie naciśnij przycisk uderzenia, aby spowodować obrażenia po uderzeniu. Oczyść krew aplikatorem z bawełnianą końcówką, ale nie dotykaj rany.Przenieś mysz do ciepłej podkładki i monitoruj uraz Gdy krwawienie ustanie, zszyj ranę, a następnie umieść mysz z powrotem w czystej klatce na ciepłej podkładce i pozwól jej tam dojść do siebie przez noc. Po uderzeniu obrzęk, krwawienie i zniekształcenie czaszki ujawnia prawdziwą powagę urazu. Ograniczone do całkowitego naruszenie opony twardej będzie miało duży wpływ na ilość krwawienia i spowoduje łagodne lub umiarkowane TBI.Utrwalenie tkanki i obejrzenie jej pod mikroskopem z łatwością odróżnia umiarkowane i ciężkie TBI. Tutaj jest. Barwienie L służy do porównania grupy kontrolnej z myszą, która otrzymała umiarkowaną jamę TBIA, która rozciąga się głęboko w korę.Model ten może być wykorzystany do badania takich zniesławień, jak również śmierci neuronów i innych zmian histopatologicznych spowodowanych urazami mózgu Po opanowaniu tej techniki można wykonać w ciągu 15 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo.

controlled-cortical-impact-model-for-traumatic-brain-injury

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film demonstruje procedurę wywoływania urazowego uszkodzenia mózgu (TBI) w modelu mysim. Znieczulona mysz z odsłoniętą czaszką jest pobierana w celu stworzenia otworu w czaszce, a następnie wywoływane jest kontrolowane uszkodzenie kory mózgowej za pomocą urządzenia uderzeniowego. Uraz uszkadza tkankę mózgową, powodując upośledzenie funkcji poznawczych i koordynacji ruchowej.

Generowanie mysiego modelu urazowego uszkodzenia mózgu za pomocą urządzenia impaktorowego

Wstrząśnienie mózgu jest najczęstszym rodzajem urazowego uszkodzenia mózgu. W związku z tym powtarzalny model zwierzęcy wstrząsu mózgu, który odtwarza ważne cechy urazu u pacjentów, może zapewnić środki do badania wstrząsu mózgu w rygorystyczny, kontrolowany i skuteczny sposób.

Model powtarzającego się wstrząsu głowy u myszy

Ten protokół demonstruje metodologie dla mysiego modelu urazowego mózgu z otwartą czaszką i przeszczepu hodowanych ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych do miejsca urazu. W skrócie opisano również testy behawioralne i histologiczne wyników tych procedur.

Kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych

Tutaj opisujemy protokół indukcji mysiego urazowego uszkodzenia mózgu poprzez kontrolowane uderzenie w korę mózgową z otwartą głową.

Mysi model kontrolowanego wpływu na korę mózgową w celu indukcji urazowego uszkodzenia mózgu

Krwotok śródmiąższowy i zapalenie nerwów, któremu towarzyszy stłuczenie mózgu, mogą spowodować poważne wtórne uszkodzenie mózgu. Protokół ten szczegółowo opisuje model kontrolowanego wpływu kory mózgowej (CCI) na myszy, umożliwiając naukowcom badanie kontuzji krwotoku i pourazowych odpowiedzi immunologicznych oraz badanie potencjalnych terapii.

Przedkliniczny, kontrolowany model oddziaływania kory mózgowej w przypadku krwotoku pourazowego, stłuczenia i zapalenia nerwów

Protokół opisuje łagodne urazowe uszkodzenie mózgu w modelu mysim. W szczególności w pełni wyjaśniony jest protokół krok po kroku mający na celu wywołanie łagodnego urazu głowy w linii środkowej oraz charakterystyka modelu zwierzęcego.

Elektromagnetycznie sterowany model zamkniętej głowy łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu u myszy

Tutaj pokazano, jak model urazu głowy w stanie czuwania może być wykorzystany do zbadania wpływu powtarzających się łagodnych urazów mózgu (r-mTBI) na plastyczność synaptyczną w hipokampie. Model replikuje ważne cechy r-mTBI u pacjentów i jest stosowany w połączeniu z elektrofizjologią in vitro.

Ocena zmian plastyczności synaptycznej przy użyciu modelu łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu w stanie czuwania

Ten protokół przedstawia zmodyfikowany mysi model powtarzalnego łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu (rmTBI) wywołanego metodą zamkniętego urazu głowy (CHI). Podejście to obejmuje cieńsze okienko czaszki i płynną stymulację w celu zmniejszenia stanu zapalnego często spowodowanego ekspozycją opon mózgowych, a także lepszą odtwarzalność i dokładność w modelowaniu rmTBI u gryzoni.

Zmodyfikowany mysi model powtarzającego się łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu z przerzedzonym okienkiem czaszki i płynną stymulacją

W tym miejscu przedstawiamy protokół mający na celu ustanowienie modelu zwierzęcego z zamkniętym urazem głowy, replikującego wynik neuroobrazu niepowikłanego, łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu z zachowaną strukturą mózgu w ostrej fazie i długotrwałym zanikiem mózgu. Podłużne obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego jest podstawową metodą stosowaną do celów dowodowych.

Opracowanie nieskomplikowanego modelu łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu zmodyfikowanego metodą Weight-Drop i potwierdzonego rezonansem magnetycznym

Mysi model uszkodzenia płuc indukowanego przez respirator jest ważnym narzędziem do badania ostrego uszkodzenia płuc in vivo. W niniejszej pracy przedstawiamy łatwy w zastosowaniu model in situ ostrego uszkodzenia płuc, w którym do wywołania ostrej niewydolności płuc wykorzystano mechaniczną wentylację wysokociśnieniową.

Wentylacja z kontrolowanym ciśnieniem w celu wywołania ostrego uszkodzenia płuc u myszy

Poznaj model kontrolowanego uderzenia kory mózgowej do badania urazowego uszkodzenia mózgu u myszy. Ta metoda pozwala na kontrolowane i powtarzalne wprowadzanie obrażeń mózgu w celu analizy patologii.

Kontrolowany model uderzenia kory mózgowej w przypadku urazowego uszkodzenia mózgu

Przeglądaj więcej filmów