Name: System radiotelemetryczny do monitorowania funkcji układu krążenia u szczurów z przecięciem rdzenia kręgowego i przeszczepami embrionalnych nerwowych komórek macierzystych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Poznaj metodę radiotelemetrii do monitorowania funkcji układu krążenia u szczurów z przecięciem rdzenia kręgowego i przeszczepami embrionalnych komórek macierzystych. Technika umożliwia ocenę czynności sercowo-naczyniowej u świadomych zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Praca była wspierana przez granty z NIH/NINDS (NS054883), Fundacji Craiga H. Neilsena (280072) oraz Veterans Administration i Canadian Spinal Research Organization. Dziękujemy Rat Resource and Research Center, University of Missouri, Columbia, Missouri, za dostarczenie szczurów GFP.

Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC). Wytyczne NIH dotyczące opieki i bezpieczeństwa zwierząt laboratoryjnych są ściśle przestrzegane. Zwierzęta z zabiegami chirurgicznymi były odpowiednio leczone w celu zminimalizowania bólu i dyskomfortu.
1. Krzywizna rdzenia kręgowego i przeszczepianie komórek
<ol>
	<li>Autoklaw narzędzi chirurgicznych przed wszystkimi operacjami. Użyj sterylizatora gorących kulek (Fine Science Tools), aby usunąć patogeny i zanieczyszczenia mikrobiologiczne z narzędzi między zabiegami na różnych zwierzętach. Podczas operacji należy używać sterylnych rękawiczek chirurgicznych, fartucha i zasłon. Stosuj aseptyczną technikę chirurgiczną do każdego zabiegu chirurgicznego.</li>
	<li>Znieczulenie samic szczurów Fischer 344 za pomocą kombinacji (2 ml/kg) ketaminy (25 mg/ml), ksylazyny (1,3 mg/ml) i acepromazyny (0,25 mg/ml) podawanych we wstrzyknięciu dootrzewnowym (i.p.).</li>
	<li>Ogol plecy i kilkakrotnie oczyść skórę betadyną i etanolem.</li>
	<li>Przetnij skórę za pomocą ostrza #10 i tępo wypreparuj warstwy mięśni. Użyj skalpela, aby odizolować kręgi, odsłonić kręg T3 i wykonać laminektomię grzbietową za pomocą rongeurs z cienką końcówką.</li>
	<li>Naciąć oponę twardą wzdłużnie i przeciąć rdzeń kręgowy na poziomie T4 za pomocą kombinacji nożyczek do irydektomii i mikroaspiracji, aby utworzyć około 1 mm szczelinę ostrocaudalną między kikutami rdzenia kręgowego.</li>
	<li>Odczekaj około 1 - 2 minuty, aż krwawienie całkowicie ustaje, następnie zszyj mięśnie 3-0 Vycril i zamknij skórę klipsami do ran.</li>
	<li>Natychmiast po zabiegu należy wstrzyknąć mleczaną chorobę Ringera (5 ml), buprenorfinę (0,035 mg/kg) i ampicylinę (33 mg/kg) podskórnie i utrzymywać szczury w ciepłym inkubatorze do momentu przebudzenia.</li>
	<li>Roztwór Ringera i ampicyliny należy wstrzykiwać raz na dobę przez okres do 10 dni, a buprenorfinę dwa razy na dobę przez 3 dni lub do momentu ustąpienia objawów bólu i niepokoju. Nie należy zwracać zwierzęcia do towarzystwa innych zwierząt, dopóki nie wyzdrowieje w pełni.</li>
	<li>Ręcznie opróżniać pęcherz dwa razy dziennie przez około dwa tygodnie, aż do ustalenia się odruchowego opróżniania pęcherza, a następnie opróżniać pęcherz raz dziennie przez cały okres przeżycia, jeśli to konieczne.</li>
	<li>Dwa tygodnie później ponownie znieczul szczury po SCI, jak opisano powyżej, i ponownie odsłonij miejsce uszkodzenia rdzenia kręgowego. Trzymaj oponę twardą zamkniętą, aby zatrzymać wszczepione komórki w miejscu uszkodzenia.</li>
	<li>Wstrzyknąć 10 μl roztworu komórkowego (3,5 × 105 μl), pobranego z wszechobecnych transgenicznych zarodków szczurów GFP E14 i osadzonego w fibrynogenie i trombinie5,6, do epicentrum jamy zmiany chorobowej oraz na granicy rostralnej i ogonowej zmiany z wieloma miejscami wstrzyknięcia, używając wyciągniętej szklanej mikropipety o średnicy wewnętrznej 40 μm, podłączony do strzykawki Hamiltona.</li>
	<li>Zszyj warstwy mięśniowe i zamknij skórę klipsami do ran.</li>
	<li>Wykonaj wstrzyknięcie po operacji i pielęgnację pęcherza zgodnie z opisem w krokach 1.6 – 1.8.</li>
	<li>Na tydzień przed perfuzją wstrzyknij dootrzewnowo 0,5% Fluorogold (FG, 0,4 ml w wodzie destylowanej), aby wstecznie oznaczyć współczulne neurony przedzwojowe w rdzeniu kręgowym7.</li>
</ol>
2. Implantacja nadajnika
<ol>
	<li>Namocz nadajniki w 2% roztworze aldehydu glutarowego (4 ml 50% glutaraldydu w 96 ml wody destylowanej) przez co najmniej 1 - 2 godziny (do 10 godzin) w temperaturze pokojowej w celu sterylizacji.</li>
	<li>Dokładnie umyj nadajniki sterylnym 0,9% soli fizjologicznej 3 razy i przechowuj je w soli fizjologicznej do czasu użycia (nie dłużej niż 1 godzina).</li>
	<li>Osiem tygodni po przeszczepie komórek E14 (10 tygodni po urazie) należy ponownie znieczulić szczury, które przeszły SCI z przeszczepem komórek lub bez oraz naiwne szczury kontrolne.</li>
	<li>Ogol okolice brzucha i kończyny tylne. Oczyść skórę za pomocą Betadine. Połóż szczura na stole operacyjnym w pozycji leżącej.</li>
	<li>Naciąć skórę na brzusznej części brzucha i wewnętrznej stronie uda po prawej stronie za pomocą ostrza #15.</li>
	<li>Przetnij podskórne tkanki łączne, aby odsłonić wiązkę naczyń udowych i nerw za pomocą małych nożyczek.</li>
	<li>Oddziel tętnicę udową od żyły i nerwu za pomocą cienkich kleszczy z zakrzywionymi końcówkami.</li>
	<li>Umieść trzy jedwabne szwy pod tętnicą i zrób luźny węzeł w każdym szwie.</li>
	<li>Nałóż 0,1 ml lidokainy (2%) na powierzchnię tętnicy, aby wywołać rozszerzenie naczyń krwionośnych w celu późniejszego cewnikowania.</li>
	<li>Zabezpiecz naczynie dystalnie trwałym węzłem jedwabnym i tymczasowym blokiem proksymalnie, rozciągając luźny szew jedwabny.</li>
	<li>Nakłuć tętnicę za pomocą zakrzywionej igły o rozmiarze 20 i wprowadzić końcówkę cewnika telemetrycznego (o długości 8 cm) za pomocą narzędzia do wprowadzania cewnika.</li>
	<li>Wprowadzić cewnik rostrale do 4 cm, umieszczając w ten sposób końcówkę w aorcie piersiowej.</li>
	<li>Zakotwicz cewnik w naczyniu, zawiązując trzy jedwabne szwy wokół tętnicy udowej.</li>
	<li>Wykonaj podskórną kieszeń wzdłuż boku między ogonową krawędzią klatki piersiowej a najbardziej czaszkowym przedłużeniem zasięgu kolana za pomocą nożyczek.</li>
	<li>Włóż korpus nadajnika do kieszeni i zszyj go z tkanką łączną otaczającą nadajnik, aby uniknąć nadmiernego ruchu.</li>
	<li>Zszyj skórę jedwabną nicią nr 6.</li>
	<li>Natychmiast po zabiegu należy wstrzyknąć mleczaną chorobę Ringera (5 ml), buprenorfinę (0,035 mg/kg) i ampicylinę (33 mg/kg) podskórnie i utrzymywać szczury w ciepłym inkubatorze do momentu przebudzenia.</li>
</ol>
3. Zapis podstawowego średniego ciśnienia tętniczego (MAP) i tętna (HR)
<ol>
	<li>Już jednego dnia po wszczepieniu nadajnika połóż pojedyncze zwierzę na podkładce odbiornika i włącz nadajnik. Odczekaj około 10 - 15 minut, aby przyzwyczaić zwierzę i ustabilizować parametry sercowo-naczyniowe.</li>
	<li>Rejestruj spoczynkowe MAP i tętno, które są uzyskiwane na podstawie ciśnienia tętniczego tętna za pomocą skomputeryzowanego systemu gromadzenia danych przez co najmniej 1 godzinę. Zbieraj dane co 5 sekund.</li>
	<li>Monitoruj zwierzęta w sposób ciągły i usuwaj punkty danych podczas występowania widocznych skurczów. Dla każdego zwierzęcia średnie punkty danych, aby uzyskać wartości średnie.</li>
</ol>
4. Dysrefleksja autonomiczna wywołana rozdęciem jelita grubego
<ol>
	<li>Szczury szczepione NSC lub kontrolne SCI należy trzymać w ręczniku dostarczonym z granulkami jedzenia w środku na odbiorniku nadajnika. Zwykle szczury mogą pozostać w gotowości do współpracy podczas zabiegu.</li>
	<li>Wprowadzić cewnik zakończony lateksem z balonem do odbytnicy na około 2 cm i przymocować go do ogona za pomocą taśmy8.</li>
	<li>Włącz nadajnik i odczekaj 10-15 minut, aby ciśnienie krwi powróciło do stanu sprzed insercji.</li>
	<li>Wywołaj wzdęcie jelita grubego poprzez powolne napełnianie balonu przez 10 sekund za pomocą 1,4 ml powietrza przez 1 minutę, aby wytworzyć ciśnienie około 30 mmHg.</li>
	<li>Rejestruj MAP i HR 1 minutę przed, 1 minutę w trakcie i 1 minutę po wzdęciu jelita grubego; próbki danych co 3 sekundy podczas 3-minutowej procedury.</li>
	<li>Wykonaj 2-3 próby na zwierzę z co najmniej 15-minutowym odstępem czasu między dwoma badaniami.</li>
	<li>Przedawkowanie zwierząt (i. p.) z kombinacją znieczulenia w podwójnej dawce opisaną powyżej, jeśli nie ma dalszej oceny. Zwierzęta należy przelać solą fizjologiczną, a następnie 4% paraformaldehydem.</li>
	<li>Dla każdego zwierzęcia należy uśrednić wartości odpowiednio przed i w trakcie rozdęcia jelita grubego; obliczyć różnicę między zmianami MAP i HR wywołanymi rozdęciem dla każdego badania; uśrednić z 2-3 prób, aby uzyskać wartości średnie.</li>
</ol>
5. Czyszczenie nadajnika
<ol>
	<li>Usuń nadajnik z ciała zwierzęcia po znieczuleniu, ale przed perfuzją. Natychmiast namoczyć w zlewce wypełnionej wodą destylowaną do czasu czyszczenia; Unikaj wysuszenia urządzenia telemetru.</li>
	<li>Przenieś telemetr do 1% enzymatycznego roztworu czyszczącego Terg-A-Zyme (10 g/l wody) na 24 godziny w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Ponownie zeżeluj końcówkę cewnika nadajnika za pomocą igły o rozmiarze 30 podłączonej do strzykawki z żelem.</li>
	<li>Ostrożnie osusz nadajnik za pomocą złożonej miękkiej chusteczki i przechowuj go w oryginalnej plastikowej tacy.</li>
</ol>

<ol><li>Krassioukov, A. V., Furlan, J. C., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+dysreflexia+in+acute+spinal+cord+injury%3A+an+under-recognized+clinical+entity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Autonomic dysreflexia in acute spinal cord injury: an under-recognized clinical entity.</a> J Neurotrauma. 20, 707-716 (2003).</li>
<li>Lindan, R., Joiner, E., Freehafer, A. A., Hazel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+clinical+features+of+autonomic+dysreflexia+in+patients+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Paraplegia%22%5BJournal%5D)">Incidence and clinical features of autonomic dysreflexia in patients with spinal cord injury.</a> Paraplegia. 18, 285-292 (1980).</li>
<li>Inskip, J. A., Ramer, L. M., Ramer, M. S., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+assessment+of+animals+with+spinal+cord+injury%3A+tools%2C+techniques+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Autonomic assessment of animals with spinal cord injury: tools, techniques and translation.</a> Spinal Cord. 47, 2-35 (2009).</li>
<li>Mayorov, D. N., Adams, M. A., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Telemetric+blood+pressure+monitoring+in+conscious+rats+before+and+after+compression+injury+of+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Telemetric blood pressure monitoring in conscious rats before and after compression injury of spinal cord.</a> J Neurotrauma. 18, 727-736 (2001).</li>
<li>Hou, S., Tom, V. J., Graham, L., Lu, P., Blesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+restoration+of+cardiovascular+function+by+embryonic+neural+stem+cell+grafts+after+complete+spinal+cord+transection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Partial restoration of cardiovascular function by embryonic neural stem cell grafts after complete spinal cord transection.</a> J Neurosci. 33, 17138-17149 (2013).</li>
<li>Lu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-distance+growth+and+connectivity+of+neural+stem+cells+after+severe+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Long-distance growth and connectivity of neural stem cells after severe spinal cord injury.</a> Cell. 150, 1264-1273 (2012).</li>
<li>Akhavan, M., Hoang, T. X., Havton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+detection+of+fluorogold-labeled+neurons+in+long-term+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved detection of fluorogold-labeled neurons in long-term studies.</a> J Neurosci Methods. 152, 156-162 (2006).</li>
<li>Maiorov, D. N., Fehlings, M. G., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+severity+of+spinal+cord+injury+and+abnormalities+in+neurogenic+cardiovascular+control+in+conscious+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Relationship between severity of spinal cord injury and abnormalities in neurogenic cardiovascular control in conscious rats.</a> J Neurotrauma. 15, 365-374 (1998).</li>
<li>Laird, A. S., Carrive, P., Waite, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+and+temperature+changes+in+spinal+cord+injured+rats+at+rest+and+during+autonomic+dysreflexia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular and temperature changes in spinal cord injured rats at rest and during autonomic dysreflexia.</a> J Physiol. 577, 539-548 (2006).</li>
<li>Phillips, A. A., Krassioukov, A. V., Ainslie, P. N., Warburton, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baroreflex+function+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Baroreflex function after spinal cord injury.</a> J Neurotrauma. 29, 2431-2445 (2012).</li>
<li>Osborn, J. W., Taylor, R. F., Schramm, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+arterial+pressure+after+chronic+spinal+transection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Determinants of arterial pressure after chronic spinal transection in rats.</a> Am J Physiol. 256, 666-673 (1989).</li>
<li>Rabchevsky, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+gabapentin+on+muscle+spasticity+and+both+induced+as+well+as+spontaneous+autonomic+dysreflexia+after+complete+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of gabapentin on muscle spasticity and both induced as well as spontaneous autonomic dysreflexia after complete spinal cord injury.</a> Front Physiol. 3, 329(2012).</li>
<li>Hou, S., Lu, P., Blesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+supraspinal+vasomotor+pathways+and+autonomic+dysreflexia+after+spinal+cord+injury+in+F344+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Auton+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of supraspinal vasomotor pathways and autonomic dysreflexia after spinal cord injury in F344 rats.</a> Auton Neurosci. 176, 54-63 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Tradycyjnie, kaniula wypełniona płynem jest wprowadzana do tętnicy i podłączana do przetwornika ciśnienia w celu zarejestrowania parametrów sercowo-naczyniowych jako migawki końcowej u każdego zwierzęcia11. Aby stale monitorować wydolność układu krążenia przez długi czas, w wielu laboratoriach stosuje się systemy radio-telemetryczne. To bardziej wyrafinowane narzędzie może rejestrować ciśnienie krwi u przytomnych, swobodnie poruszających się zwierząt. W porównaniu z cewnikami wypełnionymi płynem, telemetria je...

Dysfunkcja układu sercowo-naczyniowego występuje po urazie rdzenia kręgowego (SCI) na wysokim poziomie. Objawia się zaburzeniami ciśnienia krwi i tętna w spoczynku, niedociśnieniem ortostatycznym, niedociśnieniem wywołanym wysiłkiem fizycznym i dysrefleksją autonomiczną charakteryzującą się epizodami nadciśnienia tętniczego i bradykardią za pośrednictwem barorefleksji w odpowiedzi na bodźce czuciowe poniżej poziomu urazu1,2. Objawy te zakłócają codzienne życie pacjentów z uszkodzeniem rdzenia kręgowego. Dlatego ważne jest, aby ustanowić skuteczne narzędzia do badania zmian sercowo-naczyniowych u zwierząt z SCI i eksperymentalnych metod leczenia.
Aby zbadać funkcje układu krążenia u zwierząt, użyto kilku technik monitorowania ciśnienia krwi i tętna. Centralne parametry sercowo-naczyniowe można rejestrować za pomocą wprowadzenia kaniuli i telemetrii, podczas gdy nieinwazyjne mankiety ogonowe mogą być stosowane do pomiaru obwodowego ciśnienia krwi3. W porównaniu z innymi metodami, telemetria ma tę główną zaletę, że pozwala na ciągłą rejestrację u swobodnie poruszających się zwierząt i długoterminowe monitorowanie funkcji układu sercowo-naczyniowego4. W modelach zwierzęcych SCI zmiany ciśnienia krwi obwodowej po stymulacji eksperymentalnej mogą nie być wystarczająco duże, aby można je było wykryć. W związku z tym należy wybrać odpowiednią technikę monitorowania serca dla zwierząt z SCI.
W obecnym badaniu wprowadzono system radio-telemetryczny do monitorowania funkcji układu krążenia u dorosłych szczurów po całkowitym przecięciu rdzenia kręgowego. Szczury otrzymały przeszczepy syngenicznych komórek macierzystych pochodzących z pnia mózgu (E14) pochodzących z pnia mózgu (BS-NSC) w miejscu uszkodzenia. Szczury z obrażeniami i bez przeszczepu oraz naiwne, nieranne szczury służyły jako kontrole. Procedura telemetrii obejmuje sterylizację i implantację nadajnika (ryc. 1), rejestrację podstawowych parametrów sercowo-naczyniowych, reakcje wywołane rozdęciem jelita grubego oraz czyszczenie i przechowywanie nadajnika.

<table><tbody><tr><td>Fibrynogen (szczur)</td><td>Sigma</td><td>F6755-25MG</td><td>2 godziny w 37 oC do dystrybucji</td></tr><tr><td>Trombiny (szczur)</td><td>Sigma</td><td>T5772-100UN</td><td>Dissovle w 10 mM CaCl2</td></tr><tr><td>1% Terg-A-Zyme</td><td>Sigma</td><td>Z273287</td><td>Enzymatyczny roztwór do czyszczenia telemetru</td></tr><tr><td>Fluorogold</td><td>Fluorochrome</td><td></td><td>Dissovle w wodzie destylowanej i unikać światła</td></tr><tr><td>Telemetr&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; (PA-C40)</td>System rejestracji i analizy <td>Data Sciences International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Telementric</td><td></td><td>Międzynarodowe Stymulator Danych Międzynarodowy Stymulator Sygnału, Matryca Wymiany Danych, odbiorniki, Monitor ciśnienia otoczenia Cewnik</td>z końcówką balonową Edward Lifesciences 111F7-P Na wzdęcia jelita grubego <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

system radiotelemetryczny do monitorowania funkcji układu krążenia u szczurów z przecięciem rdzenia kręgowego i przeszczepami embrionalnych nerwowych komórek macierzystych

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

Wysoki uraz rdzenia kręgowego w odcinku piersiowym lub szyjnym (SCI) może prowadzić do dysfunkcji układu krążenia. Aby monitorować parametry sercowo-naczyniowe, wszczepiliśmy cewnik podłączony do nadajnika radiowego do tętnicy udowej szczurów, które przeszły przecięcie rdzenia kręgowego T4 z lub bez przeszczepu embrionalnych nerwowych komórek macierzystych pochodzących z pnia mózgu eksprymujących białko zielonej fluorescencji. W porównaniu z innymi metodami, takimi jak wprowadzenie kaniuli lub mankiet ogonowy, telemetria jest korzystna do ciągłego monitorowania ciśnienia krwi i tętna u swobodnie poruszających się zwierząt. Jest również zdolny do długoterminowego wielokrotnego pozyskiwania danych. U szczurów z uszkodzeniem rdzenia kręgowego z powodzeniem zarejestrowano podstawowe dane sercowo-naczyniowe w stanie nieskrępowanym i dysrefleksji autonomicznej w odpowiedzi na rozdęcie jelita grubego. Ponadto parametry sercowo-naczyniowe przed i po SCI można porównać u tego samego szczura, jeśli nadajnik zostanie wszczepiony przed przecięciem rdzenia kręgowego. Jednym z ograniczeń opisanej procedury telemetrii jest to, że implantacja w tętnicy udowej może wpływać na dopływ krwi do ipsilateralnej kończyny tylnej.

Stosując opisaną powyżej technikę telemetrii, pomyślnie zarejestrowano parametry układu krążenia u zwierząt z urazem rdzenia kręgowego. U zwierząt z samym SCI (urazem rdzenia kręgowego) MAP było znacząco obniżone, podczas gdy HR wzrosło w porównaniu z naiwnymi zwierzętami, co jest zgodne z wcześniejszymi doniesieniami9. U zwierząt z przeszczepem BS-NSC wartości MAP i HR zbliżyły się do poziomów mierzonych u zwierząt naiwnych (Rycina 2). Podczas rozciągania jelita grubego szczura uznawano za wy...

Przedstawiamy protokół korzystania z systemu radio-telemetrycznego do rejestrowania parametrów sercowo-naczyniowych u szczurów z transektem rdzenia kręgowego T4 osiem tygodni po przeszczepieniu embrionalnej nerwowej komórki macierzystej pnia mózgu w miejsce uszkodzenia. Telemetria to zaawansowana technika dokładnej oceny funkcji układu krążenia u przytomnych, swobodnie poruszających się szczurów z uszkodzeniem rdzenia kręgowego.

System radiotelemetryczny do monitorowania funkcji układu krążenia u szczurów z przecięciem rdzenia kręgowego i przeszczepami embrionalnych nerwowych komórek macierzystych

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

Ogólnym celem tej procedury jest wszczepienie nadajnika rejestrującego parametry sercowo-naczyniowe oraz szczura z uszkodzonym rdzeniem kręgowym, któremu przeszczepiono embrionalne nerwowe komórki macierzyste. Osiąga się to poprzez najpierw całkowite przecięcie rdzenia kręgowego na poziomie T cztery u dorosłego szczura. Kolejnym krokiem, który ma miejsce dwa tygodnie później, jest przeszczepienie nerwowych komórek macierzystych pochodzących z pnia mózgu od szczurów w 14. dniu zarodkowym w miejsce zmiany.Trzecim krokiem osiem tygodni później jest wszczepienie nadajnika do tętnicy udowej szczura. Ostatnim krokiem jest wykonanie niezbędnych pomiarów i wywołanie dysrefleksji autonomicznej poprzez wzdęcie jelita grubego. Ostatecznie wyniki mogą wykazać częściową poprawę funkcji sercowo-naczyniowej u szczurów, którym przeszczepiono embrionalne nerwowe komórki macierzyste za pomocą telemetrii. Nagranie.Wizualna demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ implantacja nadajnika i rozróżnienie jelita grubego są trudne do nauczenia, ponieważ wymagają profesjonalnej wiedzy, którą należy wykonać osiem tygodni przed wszczepieniem nadajników. Szczury muszą przejść uraz rdzenia kręgowe

a-radio-telemetric-system-to-monitor-cardiovascular-function-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiono technikę chirurgiczną implantacji dostępnych komercyjnie nadajników telemetrycznych służących do ciągłego pomiaru biopotencjału (jednokanałowe EKG), częstotliwości akcji serca, wewnętrznej temperatury ciała oraz aktywności ruchowej u swobodnie poruszających się myszy. Zaprezentowano również zalecenia i protokoły dotyczące opieki pooperacyjnej i uśmierzania bólu w celu poprawy procesu rekonwalescencji, dobrostanu oraz przeżywalności zwierząt.

Implantacja nadajników radiotelemetrycznych umożliwiających pozyskiwanie danych dotyczących EKG, częstości akcji serca, wewnętrznej temperatury ciała i aktywności u swobodnie poruszających się myszy laboratoryjnych

Matryce fibrynowe zawierające czynniki wzrostu zostały użyte do zatrzymania przeszczepionych nerwowych komórek macierzystych w miejscach całkowitego przecięcia rdzenia kręgowego. Przeszczepione komórki całkowicie wypełniły jamę chorobową i zróżnicowały się w wiele typów komórek nerwowych, w tym neurony, które rozciągały aksony do rdzenia kręgowego gospodarza na duże odległości.

Promowanie przeżycia i różnicowania nerwowych komórek macierzystych z koktajlami fibryny i czynnika wzrostu po ciężkim urazie rdzenia kręgowego

Cewnik urządzenia telemetrycznego jest wszczepiany do aorty brzusznej w celu ciągłego zbierania danych hemodynamicznych od zwierząt przed i po przecięciu rdzenia kręgowego w obrębie klatki piersiowej. Nowatorskie oprogramowanie JAVA wykorzystano do analizy parametrów hemodynamicznych, a także częstotliwości i intensywności spontanicznych epizodów dysrefleksji autonomicznej.

Opracowanie algorytmu do przeprowadzenia kompleksowego badania dysrefleksji autonomicznej u zwierząt z dużym uszkodzeniem rdzenia kręgowego przy użyciu urządzenia telemetrycznego

Znieczulone myszy wykazują niefizjologiczne ogólnoustrojowe ciśnienie krwi, co uniemożliwia miarodajną ocenę tonu autonomicznego, biorąc pod uwagę ścisły związek między ciśnieniem krwi a autonomicznym układem nerwowym. W związku z tym przedstawiono nowatorską metodę jednoczesnego rejestrowania aktywności nerkowego nerwu współczulnego i ciśnienia krwi za pomocą wlewu dożylnego u przytomnych myszy.

Nowatorskie podejście do jednoczesnego rejestrowania aktywności nerek współczulnych i ciśnienia krwi za pomocą wlewu dożylnego u przytomnych, nieskrępowanych myszy.

Ten artykuł opisuje technikę wprowadzania pustego przewodu między kikuty rdzenia kręgowego po całkowitym przecięciu i wypełnieniu komórkami Schwanna (SC) oraz wstrzykiwalną macierzą błony podstawnej w celu wypełnienia i wspomagania regeneracji aksonów w poprzek szczeliny.

Przeszczep komórek Schwanna wewnątrz przewodów PVDF-TrFE w celu zmostkowania przeciętych kikutów rdzenia kręgowego szczura w celu promowania regeneracji aksonów w poprzek luki

Tutaj prezentujemy kombinację laserowego obrazowania perfuzji dopplerowskiej (LDPI) i laserowego monitorowania perfuzji dopplerowskiej (LDPM) do pomiaru lokalnych przepływów krwi w rdzeniu kręgowym i nasycenia tlenem (SO2), a także ustandaryzowaną procedurę wprowadzania urazu rdzenia kręgowego u szczura.

Wykorzystanie laserowego obrazowania dopplerowskiego i monitorowania do analizy mikrokrążenia rdzenia kręgowego u szczurów

Tutaj demonstrujemy działanie modelu minimalnego uszkodzenia rdzenia kręgowego u dorosłej myszy, która oszczędza centralną niszę kanałową, w której znajdują się endogenne nerwowe komórki macierzyste (NSC). Pokazujemy, w jaki sposób test neurosfery można wykorzystać do ilościowego określenia aktywacji i migracji ostatecznych i pierwotnych NSC po urazie.

Test neurosfery do oceny endogennej aktywacji nerwowych komórek macierzystych w mysim modelu minimalnego uszkodzenia rdzenia kręgowego

Hemisekcja kręgosłupa piersiowego u szczurów jest cennym i powtarzalnym modelem jednostronnego uszkodzenia rdzenia kręgowego do badania neuronalnych mechanizmów regeneracji lokomotorycznej i skuteczności leczenia. Ten artykuł zawiera szczegółowy przewodnik krok po kroku, jak wykonać zabieg hemisekcji i ocenić sprawność lokomotoryczną na arenie na otwartym boisku.

Operacja hemisesekcji rdzenia kręgowego klatki piersiowej i ocena lokomotoryczna w otwartym polu u szczura

Przedstawiono protokół instalacji i przygotowania elektrod domięśniowych, wraz z montowanym na zwierzętach, zminiaturyzowanym urządzeniem pomiarowym do analizy elektromiografii (EMG) w badaniach lokomocji. System ten umożliwia bezprzewodową transmisję danych EMG w czasie rzeczywistym w celu zbadania regeneracji lokomocji u szczurów po udarze.

Przenośny system pomiarowy elektromiograficzny dla małych zwierząt w czasie rzeczywistym

W tym artykule przedstawiono krok po kroku protokół dotyczący wszczepienia implantu telemetrycznego in vivo w aortę zstępującą szczurów, umożliwiając ciągłe i długotrwałe monitorowanie parametrów sercowo-naczyniowych, temperatury ciała oraz aktywności zwierząt przed i po ciężkim urazie rdzenia piersiowego wysokiego stopnia piersiowego.

In Vivo Telemetria do rejestrowania długoterminowych parametrów sercowo-naczyniowych, temperatury i aktywności w modelach szczurów z urazami rdzenia kręgowego

Poznaj metodę radiotelemetrii do monitorowania funkcji układu krążenia u szczurów z przecięciem rdzenia kręgowego i przeszczepami embrionalnych komórek macierzystych. Technika umożliwia ocenę czynności sercowo-naczyniowej u świadomych zwierząt.

System radiotelemetryczny do monitorowania funkcji układu krążenia u szczurów z przecięciem rdzenia kręgowego i przeszczepami embrionalnych nerwowych komórek macierzystych (Wideo) | JoVE Journal

System radiotelemetryczny do monitorowania funkcji układu krążenia u szczurów z przecięciem rdzenia kręgowego i przeszczepami embrionalnych nerwowych komórek macierzystych

Przeglądaj więcej filmów