Name: Testy cytotoksyczności w czasie rzeczywistym w ludzkiej krwi pełnej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Poznaj metodę oceny cytotoksyczności przeciwciał w ludzkiej krwi pełnej z rozdzielczością pojedynczych komórek. Technika WCA umożliwia analizę czasu rzeczywistego zabijania komórek nowotworowych przed badaniami na zwierzętach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy programowi IMAT National Cancer Institute z NIH za sfinansowanie tej pracy [R33 CA174616-01A1].

1. Przygotowanie komórki docelowej
<ol>
	<li>Utrzymuj komórki docelowe (np. Komórki chłoniaka Rajiego) w pożywce wzrostowej (pożywka hodowlana RPMI 1640, z 10% inaktywowaną termicznie płodową surowicą bydlęcą (FBS), 4nM L-glutaminą i 500 IU / ml penicyliny / streptomycyny) w temperaturze 37oC w inkubatorze 5% CO2</li>.
	<li>Odwirować próbkę, aby zagnieździć komórki docelowe w probówce o pojemności 15 ml. Czas wirowania różni się w zależności od typu komórek; wirować przez 3 minuty przy 468 x g dla komórek Raji.</li>
	<li>Najpierw należy zassać wszelkie pęcherzyki powstałe na powierzchni supernatantu i usunąć cały supernatant.</li>
	<li>Dodać 10 ml PBS do probówki. Ponownie zawiesić komórki, odpipetowując roztwór kilka razy w górę iw dół, aby rozbić zlepek komórek.</li>
	<li>Odwirować próbkę przez 3 minuty przy 468 x g.</li>
	<li>Odessać wszelkie pęcherzyki powstałe na powierzchni supernatantu i usunąć cały supernatant.</li>
</ol>
2. Przygotowanie mikromacierzy komórkowych
<ol>
	<li>Zaopatrz się w zestawy 96-dołkowych płytek do mocowania komórek lub szkiełka do 8-dołkowych z pojedynczą matrycą komórek (patrz tabela materiałów/odczynników).</li>
	<li>Nałóż 1,2 μl Aktywatora na odczynnik DNA z zestawu. Nakrętkę zamknąć, odwrócić do góry nogami i delikatnie wstrząsnąć, aby wymieszać roztwór.</li>
	<li>Pozwól roztworowi zareagować przez 20 minut w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Nanieść zmieszany roztwór na osad komórek docelowych (w probówce o pojemności 15 ml).</li>
	<li>Dodać zielone barwniki cytozolowe fluorescencyjne o końcowym stężeniu 500 nM.</li>
	<li>Inkubować komórki docelowe z mieszanym roztworem i barwnikiem przez 30 minut w temperaturze pokojowej na wytrząsarce orbitalnej.</li>
	<li>Przemyć komórki dwukrotnie 5 ml PBS i ponownie zawiesić komórki w 10 ml pożywki wzrostowej.</li>
	<li>Nanieść 100 μl roztworu z kroku 2.7 na każdą studzienkę. Policz liczbę komórek za pomocą hemacytometru. Upewnij się, że liczba komórek mieści się w zakresie od 5×104 do 1×106 komórek na studzienkę.</li>
	<li>Po 10-15 minutach inkubacji w temperaturze pokojowej należy delikatnie przemyć próbki dwukrotnie pożywką o objętości 200-300 μl, aby usunąć wszelkie niezwiązane komórki. 
	UWAGA: Po umyciu w każdym dołku pozostaje około 5-10 μl podłoża wzrostowego.</li>
</ol>
3. Testy cytotoksyczności krwi pełnej
<ol>
	<li>Do każdej próbki należy dodać 180 μl ludzkiej krwi pełnej.</li>
	<li>Otrzymać roztwór przeciwciała anty-CD20 w stężeniu 5 mg/ml i przeprowadzić seryjne rozcieńczenie w celu uzyskania 50, 20, 10, 5, 2, 1, 0,5 μg/ml roztworu przeciwciała anty-CD20 w probówkach o pojemności 1,5 ml. Dodać 20 μl każdego stężenia przeciwciała anty-CD20 do każdej próbki, dobrze wykonując trzy próbki.</li>
	<li>Dodać jodek propidyny o końcowym stężeniu 500 nM do każdego dołka.</li>
	<li>Otrzymaną płytkę inkubować w temperaturze 37°C z 5% CO2 przez 16 godzin.</li>
	<li>Zobrazuj komórki na szkiełkach lub płytkach 96-dołkowych za pomocą automatycznego systemu obrazowania z 8-krotnym powiększeniem.</li>
	<li>Użyj programu zliczania komórek automatycznego systemu obrazowania, aby określić ilościowo wyniki. 
	UWAGA: Oprogramowanie automatycznego systemu obrazowania zapewnia proste operacje zliczania komórek krok po kroku. Protokół korzystania z tego oprogramowania można znaleźć na stronie internetowej dostawcy.</li>
	<li>Wybierz opcję [Review Results] (Przejrzyj wyniki) na stronie głównej oprogramowania.</li>
	<li>Wybierz opcję [Plik zapisany dla próbek].</li>
	<li>Średnia intensywność pierwszej bramki FITC >50, a następnie średnia intensywność bramki TxRed >20.</li>
	<li>Wybierz opcję [Przegląd płyty].</li>
	<li>Wybierz [Eksportuj tabele]. 
	UWAGA: Formuła procentowego zabijania komórek programu jest pokazana poniżej: 
	% zabijania komórek docelowych = (# komórek zabarwionych zarówno na zielono, jak i na czerwono/ # komórek zabarwionych na zielono)*100%</li>
</ol>

<ol><li>Hutchinson, L., Kirk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+drug+attrition+rates--where+are+we+going+wrong%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">High drug attrition rates--where are we going wrong.</a> Nat Rev Clin Oncol. 8, 189-1890 (2011).</li>
<li>Moreno, L., Pearson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attrition+rates+be+reduced+in+cancer+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Informa+healthcare%22%5BJournal%5D)">Attrition rates be reduced in cancer drug discovery.</a> Informa healthcare. 8, 363-368 (2013).</li>
<li>Seok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+Host+Response+to+Injury%2C+Large+Scale+Collaborative+Research+Program.+Genomic+responses+in+mouse+models+poorly+mimic+human+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inflammation and Host Response to Injury, Large Scale Collaborative Research Program. Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 3507-3512 (2013).</li>
<li>Suntharalingam, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+storm+in+a+phase+1+trial+of+the+anti-CD28+monoclonal+antibody+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cytokine storm in a phase 1 trial of the anti-CD28 monoclonal antibody TGN1412.</a> N Engl J Med. 355, 1018-1028 (2006).</li>
<li>Eastwood, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibody+TGN1412+trial+failure+explained+by+species+differences+in+CD28+expression+on+CD4%2B+effector+memory+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibody TGN1412 trial failure explained by species differences in CD28 expression on CD4+ effector memory T-cells.</a> Br J Pharmacol. 161, 512-526 (2010).</li>
<li>Hsiao, S. C., Liu, H., Holstlaw, T. A., Liu, C., Francis, C. Y., Francis, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+assays+for+quantifying+cytotoxicity+with+single+cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Real time assays for quantifying cytotoxicity with single cell resolution.</a> PLoS One. 8, 10-1371 (2013).</li>
<li>Wang, S. Y., Weiner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rituximab%3A+a+review+of+its+use+in+non-Hodgkin%E2%80%99s+lymphoma+and+chronic+lymphocytic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Rituximab: a review of its use in non-Hodgkin’s lymphoma and chronic lymphocytic leukemia.</a> Expert Opin Biol Ther. 8, (2008).</li>
<li>Dalle, S., Thieblemont, C., Thomas, L., Dumontet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+in+clinical+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Agents+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies in clinical oncology.</a> Anticancer Agents Med Chem. 8, 523-532 (2008).</li>
<li>Brunner, K. T., Mauel, J., Cerottini, J. C., Chapuis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assay+of+the+lytic+action+of+immune+lymphoid+cells+on+51-Cr-labelled+allogeneic+target+cells+in+vitro%3B+inhibition+by+isoantibody+and+by+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Quantitative assay of the lytic action of immune lymphoid cells on 51-Cr-labelled allogeneic target cells in vitro; inhibition by isoantibody and by drugs.</a> Immunology. 14, 181-196 (1968).</li>
<li>Korzeniewski, C., Callewaert, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzyme-release+assay+for+natural+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">An enzyme-release assay for natural cytotoxicity.</a> J Immunol Methods. 64, (1983).</li>
<li>Gerlier, D., Thomasset, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+MTT+colorimetric+assay+to+measure+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Use of MTT colorimetric assay to measure cell activation.</a> Immunol Methods. 94, 57-63 (1986).</li>
<li>Toriello, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+microfluidic+bioprocessor+for+single-cell+gene+expression+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Integrated microfluidic bioprocessor for single-cell gene expression analysis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, (2008).</li>
<li>Douglas, E. S., Hsiao, S. C., Onoe, H., Bertozzi, C. R., Francis, M. B., Mathies, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA-barcode+directed+capture+and+electrochemical+metabolic+analysis+of+single+mammalian+cells+on+a+microelectrode+array%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">DNA-barcode directed capture and electrochemical metabolic analysis of single mammalian cells on a microelectrode array.</a> Lab on a Chip. 9, 2010-2015 (2008).</li>
<li>Mayr, L. M., Bojanic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+trends+in+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Novel trends in high-throughput screening.</a> Current opinion in pharmacology. 9, 580(2009).</li>
<li>Zanella, F., Lorens, J. B., Link, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+content+screening%3A+seeing+is+believing%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">High content screening: seeing is believing.</a> Trends in Biotechnology. 28, 237-245 (2010).</li>
<li>Coelho, J., P, L., Quinn, S., Murphy, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+image+analysis+for+high-content+screening+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Automated image analysis for high-content screening and analysis.</a> J Biomol Screen. 15, 726-734 (2010).</li>
<li>Sundberg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+and+ultra-high-throughput+screening%3A+solution-+and+cell-based+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">High-throughput and ultra-high-throughput screening: solution- and cell-based approaches.</a> Current Opinion in Biotechnology. 11, 47(2000).</li>
<li>Simmons, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+medicine+is+more+than+genomic+medicine%3A+confusion+over+terminology+impedes+progress+towards+personalized+healthcare%5BTitle%5D)+AND+%22PERS+MED%22%5BJournal%5D)">Personalized medicine is more than genomic medicine: confusion over terminology impedes progress towards personalized healthcare.</a> PERS MED. 9, 85(2012).</li>
</ol>

Autorzy nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

WCA jest kluczowym narzędziem do badań przesiewowych in vitro w kierunku nowotworów o rozdzielczościpojedynczej komórki 12-16, idealnie wykorzystywanym po tradycyjnych docelowych badaniach przesiewowych, takich jak testy CDC i ADCC9-11, oraz przed przedklinicznymi testami na zwierzętach. Obecnie podstawowe docelowe testy przesiewowe, takie jak testy CDC lub ADCC, są wykonywane w uproszczonej pożywce lub systemie buforowym. Jednak kandydaci na leki, którzy wykazują skuteczność w tych uproszc...

Ostatnie osiągnięcia w przemyśle farmaceutycznym doprowadziły do wzrostu zainteresowania realizacją specyficznych identyfikacji przeciwciał komórek nowotworowych i spersonalizowanych metod leczenia raka; jednak w procesie tym napotyka się kilka przeszkód. Tylko 5% środków, które mają działanie przeciwnowotworowe w fazie rozwoju przedklinicznego, jest dopuszczonych do obrotu po wykazaniu wystarczającej skuteczności w badaniach fazyII-III 1,2. Strategie przedkliniczne (zarówno in vitro, jak i in vivo) są nieoptymalne, ponieważ wiele przykładów wykazało, że leki przeciwnowotworowe zachowują się inaczej u ludzi i u zwierząt laboratoryjnych, głównie ze względu na ich różne składniki krwi3-5.
Aby zaspokoić konieczność stworzenia platformy do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych i zapewnić punkt kontrolny przed kosztownymi eksperymentami na zwierzętach i próbami klinicznymi, proponuje się test cytotoksyczności krwi ludzkiej (WCA) do oceny skuteczności leków przeciwnowotworowych w bardziej odpowiednim środowisku biologicznym. Test cytotoksyczności krwi pełnej może być stosowany do oceny odpowiedzi poszczególnych komórek na przeciwciała i innych kandydatów na leki w ludzkiej krwi pełnej.
WCA jest rozwijane poprzez włączenie technologii pozycjonowania komórek o wysokiej przepustowości z obrazowaniem o wysokiej przepustowości i wysokiej zawartości6. Dzięki zastosowaniu zautomatyzowanego systemu obrazowania można z dużą precyzją określić liczbę zarówno żywych, jak i martwych komórek. Ze względu na fakt, że komórki docelowe są unieruchomione na tej samej płaszczyźnie ogniskowej, WCA jest w stanie zapewnić ilościową analizę cytotoksyczności w czasie rzeczywistym bez usuwania czerwonych krwinek. Co więcej, automatyczny system obrazowania ma kilka zalet, takich jak to, że tylko komórki docelowe, które osiągnęły określone kryteria (np. komórki znakowane fluorescencyjnie i morfologia komórki) są bramkowane i przetwarzane. Pozwala również na produkcję 144 talerzy dziennie. W związku z tym ta zdolność obrazowania i przepustowość pozwalają na jednoczesne przeprowadzanie eksperymentów o wysokiej zawartości i przepustowości. Dzięki połączeniu WCA i zautomatyzowanego systemu obrazowania, można uzyskać wysokoprzepustową ilościową analizę cytotoksyczności komórek w bardziej istotnym biologicznie środowisku.

<table><tbody><tr><td>Zestawy płytek 96-dołkowych do mocowania komórek&nbsp;</td><td>Adheren</td><td>AP9601</td><td></td></tr><tr><td>Zawiesina Jednokomórkowa matryca 8-dołkowa szkiełko komorowe</td><td>Adheren</td><td>SS0801</td><td></td></tr><tr><td>Adherent Jednokomórkowa matryca 8-dołkowa szkiełko</td><td>Adheren</td><td>SS0802</td><td></td></tr><tr><td>Linia komórkowa chłoniaka CD20 +</td> <td>ATCC</td><td>CCL-86</td><td>Komórki Raji</td></tr><tr><td>Linia komórkowa chłoniaka CD20-ATCC</td><td></td> <td>CRL-8083</td><td>MC/CAR</td></tr><tr><td>RPMI 1640 z L-glutaminą</td><td>Life Technologies</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca</td><td>Thermo</td><td>SH30070.01HI</td><td></td></tr><tr><td>Peni/Strep</td><td>Life Technologies</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Barwnik cytozolowy</td><td>Life Technologies</td><td>C7025</td><td>Cell Tracker Green</td></tr><tr><td>Rituxan (biopodobny)&nbsp;</td><td>Eureka Therapeutics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ludzka krew pełna</td><td>Allcells</td><td>WB001</td><td></td></tr><tr><td>Jodek propidyny</td><td>Sigma</td><td>P4170-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Automatyczny system obrazowania</td><td>Urządzenia molekularne</td><td>Skontaktuj się z dostawcą</td><td>Cell Reporter</td></tr><tr><td>Program zliczania komórek</td><td>Urządzenia molekularne</td><td>Skontaktuj się z dostawcą</td><td>Cell Reporter</td></tr></tbody></table>

testy cytotoksyczności w czasie rzeczywistym w ludzkiej krwi pełnej

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

Test cytotoksyczności krwi pełnej oparty na żywych komórkach (WCA), który umożliwia dostęp do informacji czasowych na temat ogólnej cytotoksyczności komórek, został opracowany przy użyciu technologii wysokoprzepustowego pozycjonowania komórek. Docelowe populacje komórek nowotworowych są najpierw wstępnie zaprogramowane do unieruchomienia do formatu matrycy i znakowane zielonymi fluorescencyjnymi barwnikami cytozolowymi. Po utworzeniu macierzy komórkowej dodaje się przeciwciała w połączeniu z ludzką krwią pełną. Następnie dodaje się jodek propidyny (PI) w celu oceny śmierci komórki. Macierz komórek jest analizowana za pomocą automatycznego systemu obrazowania. Podczas gdy barwnik cytozolowy znakuje docelowe populacje komórek nowotworowych, PI oznacza martwe populacje komórek nowotworowych. W ten sposób procent zabijania docelowych komórek rakowych można określić ilościowo, obliczając liczbę komórek docelowych, które przeżyły, w stosunku do liczby martwych komórek docelowych. Dzięki tej metodzie naukowcy są w stanie uzyskać dostęp do informacji o cytotoksyczności komórek zależnych od czasu i dawki. Co ciekawe, nie stosuje się żadnych niebezpiecznych radiochemikaliów. Prezentowany tutaj WCA został przetestowany z chłoniakami, białaczką i liniami komórek guzów litych. W związku z tym WCA pozwala naukowcom ocenić skuteczność leku w bardzo istotnych warunkach ex vivo.

Przeciwciała anty-CD20 oraz komórki chłoniaka (komórki Raji i MC/CAR) wybrano jako system modelowy do zademonstrowania testu cytotoksyczności w krwi pełnej (WCA)7,8. Komórki Raji charakteryzowały się wysoką liczbą kopii CD20 na powierzchni komórki, natomiast komórki MC/CAR miały niską liczbę kopii CD20 w swojej błonie. Komórki docelowe najpierw barwiono na zielono za pomocą cytozolowych barwników fluorescencyjnych i rozmieszczano na płytce 96-dołkowej. W każdym dołku unieruchomiono od 10 000 do 50 000 docelowy...

Test cytotoksyczności krwi pełnej (WCA) jest testem cytotoksyczności opracowanym przez połączenie wysokoprzepustowej technologii pozycjonowania komórek z mikroskopią fluorescencyjną i automatycznym przetwarzaniem obrazu. Tutaj opisujemy, w jaki sposób komórki chłoniaka leczone przeciwciałem anty-CD20 mogą być analizowane w czasie rzeczywistym w ludzkiej krwi pełnej w celu zapewnienia ilościowej analizy cytotoksyczności komórkowej.

Testy cytotoksyczności w czasie rzeczywistym w ludzkiej krwi pełnej

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Celem tej procedury jest pomiar cytotoksyczności docelowych komórek nowotworowych w ludzkiej krwi pełnej z rozdzielczością pojedynczej komórki Najpierw generowana jest jednokomórkowa matryca docelowych komórek nowotworowych. Do macierzy komórkowej dodaje się ludzką krew pełną i stosuje się leki, takie jak przeciwciała. Komórki są następnie inkubowane z barwnikiem żywotności komórek, takim jak propidy, jodek, a obrazowanie o wysokiej przepustowości służy do pomiaru liczby martwych docelowych komórek rakowych zabarwionych na czerwono, co ostatecznie zapewnia skuteczność cytotoksyczności leku.Główną przewagą tej technologii nad istniejącymi metodami, takimi jak test LDH i chromu, jest to, że zabijanie komórek rakowych można przeprowadzić w ludzkiej krwi pełnej z możliwością obrazowania. Metoda ta może ocenić cytotoksyczność przeciwciał in vitro przed badaniem na zwierzętach Rozpocznij od uzyskania przyłączenia komórek 96. Zestawy płytek studzienkowych lub szkiełka z pojedynczą komorą z ośmioma dołkami w tym miejscu, zostanie użyta płytka 96-dołkowa.Nanieść 1,2 mikrolitra aktywatora na probówkę zawierającą odczynnik DNA z zestawu, zakręcić fiolkę, odwrócić ją i delikatnie wstrząsnąć, a

real-time-cytotoxicity-assays-in-human-whole-blood

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Test uwalniania chromu, powszechnie stosowana metoda wykrywania aktywności cytotoksycznych limfocytów T, posiada kilka ograniczeń. W niniejszym artykule, wykorzystując antygenowo specyficzne limfocyty T CD8 oraz linię komórkową raka piersi u ludzi SKBR3, zbadano podejście oparte na impedancji pod kątem zdolności do wykrywania śmierci komórek.

Wyznaczenie optymalnej aktywności cytotoksycznej ludzkich limfocytów T CD8 specyficznych dla Her2neu poprzez porównanie testu uwalniania Cr51 z systemem xCELLigence

Ten film demonstruje metodę monitorowania aktywności komórek CAR T przeciwko komórkom nowotworowym poprzez pomiary impedancji elektrycznej w czasie rzeczywistym. Śledzenie zmian impedancji ocenia skuteczność limfocytów CAR T w indukowaniu cytolizy komórek nowotworowych, dostarczając informacji na temat ich zdolności cytotoksycznych.

Test cytolizy in vitro w czasie rzeczywistym w celu oceny siły działania limfocytów CAR T

Opisujemy jednokomórkowy test wysokoprzepustowy do pomiaru cytotoksyczności limfocytów T podczas inkubacji z komórkami docelowymi nowotworu. Metoda ta wykorzystuje gęsty, elastomerowy układ dołków sub-nanolitrowych (~ 100 000 dołków / tablicę) w celu przestrzennego ograniczenia limfocytów T i komórek docelowych w określonych proporcjach i jest sprzężona z mikroskopią fluorescencyjną w celu monitorowania koniugacji efektor-cel i późniejszej apoptozy.

Ilościowy, wysokoprzepustowy test cytotoksyczności pojedynczej komórki dla limfocytów T

Ten protokół opisuje czuły, komórkowy test cytotoksyczności. Wyliczając spadek częstości żywych docelowych limfocytów T CD4 + w obecności rosnącej liczby efektorowych limfocytów T CD8 +, test ten pozwala na bezpośrednią ocenę aktywności cytolitycznej limfocytów T CD8 + specyficznych dla antygenu.

Test cytometrii przepływowej opartej na komórkach do pomiaru aktywności cytotoksycznej

Ta praca opisuje zaawansowany proces dokładnego i szybkiego określania liczby komórek NK (Natural Killer) i cytotoksyczności komórek NK w próbkach ludzkiej krwi.

Analiza cytometryczna przepływu aktywności litycznej komórek NK w ludzkiej krwi pełnej

Metoda oparta na cytometrii przepływowej do ilościowego określania aktywności cytotoksycznej ludzkich komórek NK jest pokazana tutaj.

Test cytotoksyczności oparty na cytometrii przepływowej do oceny aktywności ludzkich komórek NK

Opisujemy ilościowy system testów cytolizy in vitro w czasie rzeczywistym, aby ocenić siłę działania limfocytów T z chimerycznym receptorem antygenu ukierunkowanych na płynne i lite komórki nowotworowe. Protokół ten można rozszerzyć w celu oceny innych komórek efektorowych układu odpornościowego, a także leczenia skojarzonego.

Test siły działania w czasie rzeczywistym dla chimerycznych limfocytów T receptora antygenowego ukierunkowanych na stałe i hematologiczne komórki nowotworowe

Protokół opisuje szybki, wysokoprzepustowy, niezawodny, niedrogi i bezstronny test do skutecznego określania żywotności komórek. Ten test jest szczególnie przydatny, gdy mitochondria komórek zostały uszkodzone, co zakłóca działanie innych testów. Test wykorzystuje automatyczne zliczanie komórek wybarwionych dwoma barwnikami jądrowymi – Hoechst 33342 i jodkiem propidyny.

Zautomatyzowany różnicowy test barwienia jądrowego do dokładnego określania cytotoksyczności mitokanu

Testy immunologiczne oparte na krwi pełnej dostarczają łatwego i zasobooszczędnego narzędzia do analizy odporności specyficznej dla antygenu do celów diagnostycznych i badawczych. W tym artykule przedstawiono zoptymalizowany protokół oparty na krwi pełnej z podwójną kostymulacją do kompleksowej analizy odporności gospodarza na patogeny grzybowe i wirusowe, w tym wersję o małej objętości dla pacjentów pediatrycznych i małych zwierząt.

Test krwi pełnej z podwójną kostymulacją do specyficznej dla antygenu analizy odporności gospodarza na patogeny grzybowe i wirusowe

Tutaj opisujemy metodę tworzenia kropelek podwójnej emulsji otaczających jedną limfocyt T i komórkę docelową raka, aby zbadać zabijanie komórek na poziomie pojedynczej komórki. Metoda ta pozwala na podwójną kwantyfikację zarówno cząsteczek cytotoksycznych, jak i apoptozy komórek docelowych w dużej populacji limfocytów T.

Test cytotoksyczności oparty na kropelkach w celu oceny limfocytów T receptora antygenu chimerycznego na poziomie pojedynczej komórki

Ten protokół zapewnia zstandaryzowany in vitro przepływ pracy dla spójnego pomiaru naturalnej, chimerycznej receptora antygenowego–pośredniczonej i zależnej od przeciwciał cytotoksyczności ludzkich naturalnych komórek zwanych zbójcami przy użyciu żywego obrazu komórkowego i cytometrii przepływowej.

Kwantyfikacja cytotoksyczności komórek NK potencjowanej przez chimeryczne receptory antygenowe i przeciwciała terapeutyczne z wykorzystaniem obrazowania żywych komórek i cytometrii przepływowej

Poznaj metodę oceny cytotoksyczności przeciwciał w ludzkiej krwi pełnej z rozdzielczością pojedynczych komórek. Technika WCA umożliwia analizę czasu rzeczywistego zabijania komórek nowotworowych przed badaniami na zwierzętach.

Testy cytotoksyczności w czasie rzeczywistym w ludzkiej krwi pełnej

Przeglądaj więcej filmów