Name: Monitorowanie parametrów hemodynamicznych układu układowego i wątroby u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 9 s
Description: Poznaj metodę monitorowania parametrów hemodynamicznych układu układowego i wątroby u myszy. Technika obejmuje pomiar ciśnienia krwi, ciśnienia żyły wrotnej oraz przepływu w tętnicy wątrobowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane przez Niemieckie Federalne Ministerstwo Edukacji i Badań (BMBF) finansowane przez "Wirtualną Sieć Wątroby". Chciałbym podziękować Frankowi Schubertowi i René Gumpertowi z centrum medialnego Szpitala Uniwersyteckiego w Jenie za ich pomoc w produkcji filmu i stworzenia animacji oraz Isabel Jank za nagranie dźwięku.

Pomieszczenia i wszystkie przeprowadzone procedury były zgodne z niemieckim ustawodawstwem dotyczącym dobrostanu zwierząt.
1. Kalibracja czujników (postępuj zgodnie z instrukcjami producenta dotyczącymi kalibracji czujników)
1.1) Kalibracja cewnika Millar. Zanurz końcówkę cewnika w sterylnej wodzie lub soli fizjologicznej na 30 minut przed wyważeniem (wyzerowaniem) i kalibracją.
<ol>
	<li>Podłącz czujnik Millar do kanału millar1 mostka amplifier i włóż końcówkę czujnika Millar do słupa wody.</li>
	<li>Ustaw wartość słupa wody na 0 cmH2O. W oknie programu do analizy danych wybierz bridge amplify i wyzeruj go. Można ustawić wartość bazową 0 cmH2O.</li>
	<li>Ustaw wartość słupa wody na 20 cmH2O. Uruchom postęp okna oprogramowania do analizy danych i zatrzymaj się. Wybierz "jednostki" w oknie wzmocnienia mostka, ustaw odpowiednio linię bazową 0 i 20 cmH2O. Ustaw "jednostkę" na cmH2O.</li>
	<li>Skalibruj millar2 do pomiaru CAP w ten sam sposób (ustaw dwie linie bazowe 90 i 110 cmH2O).</li>
</ol>
1.2) Kalibracja sondy przepływu krwi
<ol>
	<li>Umieść sondę w wodzie dejonizowanej. Połącz sondę z systemem sondy przepływu transsonicznego.</li>
	<li>W oknie oprogramowania do analizy danych wybierz opcję Input amplify (Wzmocnienie wejściowe), aby wyzerować sondę przepływu. Dostosuj jednostki.</li>
	<li>Naciśnij przycisk, aby "przetestować kanał", aby odebrać sygnał: jeśli sygnał ma 3-4 kreski, oznacza to, że sygnał jest dobry. W przypadku uzyskania dobrego sygnału, procedura może być kontynuowana.</li>
	<li>Naciśnij przycisk, aby "kanał zerowy" i przeskalować kanał, aby sprawdzić, czy wartość została skalibrowana, czy nie.</li>
	<li>Naciśnij przycisk, aby "zmierzyć kanał" w celu późniejszego pomiaru.</li>
</ol>
2. Przygotuj mysz do zabiegu chirurgicznego
<ol>
	<li>Umieść mysz w komorze indukcyjnej i znieczul ją 2% izofluranem i 0,3 ml/min tlenu. Operację można wykonać, jeśli u myszy nie ma odruchu wycofywania się z palca u stóp.</li>
	<li>Ogol futro w obszarach chirurgicznych, w tym na lewej szyi i brzuchu.</li>
	<li>Umieść mysz na stole operacyjnym i przymocuj ją za pomocą taśm. Stosuj maść weterynaryjną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu w okresie operacji.</li>
	<li>Umieść poduszkę z gazy pod szyją, aby uzyskać optymalną ekspozycję pola operacyjnego szyi.</li>
	<li>Zdezynfekuj pole operacyjne i umieść wysterylizowane gazy, aby przykryć mysz, pozostawiając otwarte pole operacyjne.</li>
</ol>
3. Pomiar parametrów życiowych
<ol>
	<li>Włóż igły EKG podskórnie do łapek myszy.</li>
	<li>Umieść czujnik oddechowy pod tylną częścią myszy.</li>
	<li>Umieść sondę temperatury w odbytnicy myszy.</li>
	<li>Rejestruj temperaturę, EKG i częstość oddechów myszy w oprogramowaniu do analizy danych.</li>
</ol>
4. Operacja szyi w celu ogólnoustrojowego monitorowania układu krążenia
4.1) Rozwarstwienie naczynia
<ol>
	<li>Zidentyfikuj środkową linię szyi, środkowy punkt obojczyka, kąt żuchwy.</li>
	<li>Wykonaj 2 cm podłużne nacięcie od kąta żuchwy do środkowego punktu obojczyka, który znajduje się 0,5 cm po lewej stronie linii środkowej.</li>
	<li>Wypreparuj gruczoł podżuchwowy, odwróć go i przykryj gazą nasączoną solą fizjologiczną.</li>
	<li>Zidentyfikuj żyłę szyjną, wypreparuj ją i umieść trzy jedwabne szwy 6-0 pod żyłą w celu późniejszego podwiązania i utrwalenia.</li>
	<li>Zidentyfikuj mięsień mostkowo-obojczykowo-sutkowy, oddziel go od górnego brzucha omohyoida i tylnego brzucha mięśnia dwubrzuścowego i pociągnij go za pomocą retraktora, aby ułatwić odsłonięcie tętnicy szyjnej.</li>
	<li>Wypreparuj tętnicę szyjną i umieść trzy jedwabne szwy 6-0 pod tętnicą w celu późniejszego podwiązania i unieruchomienia.</li>
</ol>
4.2) Pomiar przepływu krwi w tętnicy szyjnej
<ol>
	<li>Umieść sondę transsoniczną wokół tętnicy szyjnej, utrzymuj ją stabilnie i zoptymalizuj kontakt za pomocą żelu ultradźwiękowego lub soli fizjologicznej.</li>
	<li>Rejestruj prędkość przepływu krwi w tętnicy szyjnej zgodnie z informacją wyświetlaną na małym ekranie urządzenia transsonicznego za pomocą oprogramowania do analizy danych</li>
	<li>Wyjmij sondę po zakończeniu pomiaru</li>
</ol>
4.3) Pomiar ciśnienia w tętnicy szyjnej (CAP)
<ol>
	<li>Podwiązać dystalny koniec tętnicy szyjnej i zacisnąć jej bliższy koniec.</li>
	<li>Umieść 2 szwy mocujące wokół tętnicy szyjnej. Użyj 10-0 prolenu do szwu podtrzymującego.</li>
	<li>Wykonaj małe nacięcie na przedniej ścianie naczynia.</li>
	<li>Włóż cewnik millar i przymocuj go za pomocą wstępnie założonych szwów.</li>
	<li>Rejestruj CAP w oprogramowaniu do analizy danych.</li>
</ol>
4.4) Pomiar przepływu krwi w żyle szyjnej
<ol>
	<li>Podnieś żyłę szyjną i umieść sondę przepływu transsonicznego, aby zmierzyć natężenie przepływu.</li>
	<li>Rejestruj natężenie przepływu w oprogramowaniu do analizy danych.</li>
</ol>
4.5) Pomiar centralnego ciśnienia żylnego (CVP)
<ol>
	<li>Zacisnąć bliższy koniec żyły szyjnej i podwiązać dystalny koniec.</li>
	<li>Wytnij małe nacięcie za pomocą mikronożyczek na przedniej ścianie naczynia.</li>
	<li>Włóż cewnik wypełniony płynem i przymocuj go za pomocą wstępnie założonych linii szwów.</li>
	<li>Zapisz CVP w oprogramowaniu do analizy danych.</li>
</ol>
5. Operacja jamy brzusznej w celu nabycia hemodynamiki wątroby
5.1) Identyfikacja statku
<ol>
	<li>Wykonaj poprzeczne nacięcie na brzuchu.</li>
	<li>Przełóż jelita na lewą stronę i przykryj mokrą gazą.</li>
	<li>Zidentyfikuj żyłę główną dolną, żyłę wrotną, wspólną tętnicę wątrobową i właściwą tętnicę wątrobową.</li>
	<li>Wlewaj trochę ciepłej soli fizjologicznej do jamy brzusznej i na powierzchnię jelit co 5 minut podczas całej procedury monitorowania.</li>
</ol>
5.2) Pomiar przepływu krwi przy portalu
<ol>
	<li>Przeciąć żyłę wrotną.</li>
	<li>Umieść jedwab 6-0 pod żyłą portalową, aby ułatwić podnoszenie naczynia podczas umieszczania sondy przepływu.</li>
	<li>Umieść sondę przepływu transsonicznego wokół żyły wrotnej i zmierz jej szybkość przepływu krwi.</li>
	<li>Zapisz szybkość przepływu krwi w żyle wrotnej.</li>
</ol>
5.3) Pomiar przepływu w tętnicy wątrobowej
<ol>
	<li>Ostrożnie przeciąć wspólną tętnicę wątrobową.</li>
	<li>Umieść jeden jedwabny szew 6-0 wokół naczynia, aby ułatwić podnoszenie naczynia.</li>
	<li>Umieść sondę przepływu wokół tętnicy.</li>
	<li>Zmierz jego przepływ krwi i uzyskaj dane.</li>
</ol>
5.4) Pomiar ciśnienia w żyle wrotnej (PVP)
<ol>
	<li>Wybierz jedną odnogę żyły krezkowej z kilkoma bocznymi odgałęzieniami, która spływa prosto do żyły wrotnej.</li>
	<li>Podwiązać dystalny koniec wybranej żyły krezkowej. Upewnij się, że podwiązanie znajduje się blisko rurki jelitowej. Liguj jego małe gałęzie</li>
	<li>Umieść 2 szwy mocujące za pomocą 6-0 prolenu wokół żyły. Kluczowym punktem tej procedury jest unikanie dotykania tętnicy krezkowej podczas podwiązywania żyły.</li>
	<li>Zacisnąć proksymalny koniec żyły wrotnej.</li>
	<li>Umieść 2 szwy rozciągowe za pomocą 10-0 prolenu. Wystąpi pewne krwawienie, ponieważ szew podtrzymujący powinien przenikać przez ścianę naczyniową cienkiej żyły krezkowej.</li>
	<li>Wykonaj małe nacięcie na żyle za pomocą mikronożyczek ukośnie pod kątem 45 stopni.</li>
	<li>Włóż cewnik Millar przez żyłę krezkową do żyły wrotnej i zamocuj go</li>
	<li>Zapisz ciśnienie w żyle wrotnej. Pod koniec zabiegu poświęć myszy przez wykrwawienie w znieczuleniu.</li>
</ol>

<ol><li>Albuszies, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+increased+cardiac+output+on+hepatic+and+intestinal+microcirculatory+blood+flow%2C+oxygenation%2C+and+metabolism+in+hyperdynamic+murine+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of increased cardiac output on hepatic and intestinal microcirculatory blood flow, oxygenation, and metabolism in hyperdynamic murine septic shock.</a> Crit Care Med. 33 (10), 2332-2338 (2005).</li>
<li>Bernhard, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphatidylcholine+molecular+species+in+lung+surfactant%3A+composition+in+relation+to+respiratory+rate+and+lung+development%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Phosphatidylcholine molecular species in lung surfactant: composition in relation to respiratory rate and lung development.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25 (6), 725-731 (2001).</li>
<li>Cheever, A. W., Warren, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+vein+ligation+in+mice%3A+portal+hypertension%2C+collateral+circulation%2C+and+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Portal vein ligation in mice: portal hypertension, collateral circulation, and blood flow.</a> 18, 405-407 (1963).</li>
<li>Costa, G., Aguiar, B. G., Coelho, P. M., Cunha-Melo, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+increase+of+portal+pressure+during+the+acute+and+chronic+phases+of+murine+schistosomiasis+mansoni+and+its+reversibility+after+treatment+with+oxamniquine%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Trop%22%5BJournal%5D)">On the increase of portal pressure during the acute and chronic phases of murine schistosomiasis mansoni and its reversibility after treatment with oxamniquine.</a> Acta Trop. 89 (1), 13-16 (2003).</li>
<li>Cui, S., Shibamoto, T., Zhang, W., Takano, H., Kurata, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+resistance+increases+during+rat+anaphylactic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Venous resistance increases during rat anaphylactic shock.</a> Shock. 29 (6), 733-739 (2008).</li>
<li>Geerts, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+three+research+models+of+portal+hypertension+in+mice%3A+macroscopic%2C+histological+and+portal+pressure+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Exp.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Comparison of three research models of portal hypertension in mice: macroscopic, histological and portal pressure evaluation.</a> Int. J. Exp. Pathol. 89 (4), 251-263 (2008).</li>
<li>Huang, H., Deng, M., Jin, H., Dirsch, O., Dahmen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraoperative+vital+and+haemodynamic+monitoring+using+an+integrated+multiple-channel+monitor+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Intraoperative vital and haemodynamic monitoring using an integrated multiple-channel monitor in rats.</a> Lab Anim. 44 (3), 254-263 (2010).</li>
<li>Krege, J. H., Hodgin, J. B., Hagaman, J. R., Smithies, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+noninvasive+computerized+tail-cuff+system+for+measuring+blood+pressure+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">A noninvasive computerized tail-cuff system for measuring blood pressure in mice.</a> Hypertension. 25 (5), 1111-1115 (1995).</li>
<li>Kuga, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+local+autoregulation+of+cerebrovascular+blood+flow%3A+a+deep-brain+imaging+study+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol.%22%5BJournal%5D)">Rapid and local autoregulation of cerebrovascular blood flow: a deep-brain imaging study in the mouse.</a> J. Physiol.. 587 (Pt 4), 745-752 (2009).</li>
<li>Muraki, T., Strain Kato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((difference+in+the+effects+of+morphine+on+the+rectal+temperature+and+respiratory+rate+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">difference in the effects of morphine on the rectal temperature and respiratory rate in male mice.</a> Psychopharmacology (Berl). 89 (1), 60-64 (1986).</li>
<li>Nielsen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricular+volume+measurement+in+mice+by+conductance+catheter%3A+evaluation+and+optimization+of+calibration%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Left ventricular volume measurement in mice by conductance catheter: evaluation and optimization of calibration.</a> Am. J. Physiol Heart Circ. Physiol. 293 (1), H534-H540 (2007).</li>
<li>Sakamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+portal+hypertension+and+hepatic+blood+flow+in+cirrhotic+rats+by+oestrogen%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Improvement of portal hypertension and hepatic blood flow in cirrhotic rats by oestrogen.</a> Eur. J. Clin. Invest. 35 (3), 220-225 (2005).</li>
<li>Reverter, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+deep+sedation+on+the+accuracy+of+hepatic+and+portal+venous+pressure+measurements+in+patients+with+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Impact of deep sedation on the accuracy of hepatic and portal venous pressure measurements in patients with cirrhosis.</a> Liver Int. 34 (1), 16-25 (2014).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Monitorowanie hemodynamiki wątroby jest ważnym narzędziem badawczym w hepatologii i chirurgii wątroby i dróg żółciowych. Pozyskanie danych hemodynamicznych wątroby pomaga scharakteryzować wpływ zabiegów wątrobowo-żółciowych na układ krążenia. Pozyskiwanie danych hemodynamicznych wątroby jest również potrzebne do zbadania wpływu leków na ciśnienie wrotne i przepływ wrotny, np. co jest potrzebne w badaniach oceniających leki wazoaktywne.
Pomimo niewielkich rozmiarów, parametry życiowe, ...

Ogólnym celem tego filmu było zademonstrowanie procedury monitorowania w czasie rzeczywistym w celu uzyskania parametrów hemodynamicznych układu i wątroby. Uzasadnieniem dla opracowania tej procedury jest jej ogromna wartość dla interwencji eksperymentalnych u myszy, które wymagają uzyskania parametrów hemodynamicznych ogólnoustrojowych i wątrobowych. Procedura może być stosowana u zwierząt nieleczonych oraz w trakcie lub po danej eksperymentalnej interwencji chirurgicznej wątroby i dróg żółciowych, takiej jak częściowa hepatektomia, podwiązanie żyły wrotnej i przeszczepienie wątroby.
Pozyskiwanie danych hemodynamicznych wątroby u gryzoni wymaga proponowanej procedury inwazyjnej. Perfuzji wątroby nie można uzyskać nieinwazyjnie. Istnieją jednak alternatywy dla uzyskania ogólnoustrojowego ciśnienia krwi. Techniki monitorowania, takie jak technika mankietu ogonowego8, zostały wykorzystane do pomiaru ciśnienia krwi zarówno u szczurów, jak i myszy. Technika mankietu ogonowego może być stosowana u zwierząt przytomnych. Podczas pomiaru ciśnienia krwi zwierzę należy umieścić i ustawić w określonej niewygodnej pozycji. W instrukcji urządzenia do mankietu na ogon producent podaje, że myszy mogą stać się nerwowe i zestresowane, co może zmniejszyć krążenie w ogonie. W takich okolicznościach obwodowe ciśnienie krwi nabyte w ogonie może być znacznie niższe niż centralne ciśnienie krwi.
Pełna procedura monitorowania została przeprowadzona za pomocą zintegrowanego wielokanałowego monitora wykorzystującego szereg czujników do akwizycji danych. Ciśnienie krwi uzyskano poprzez wprowadzenie cewnika do odpowiedniego naczynia po starannym wypreparowaniu mikrochirurgicznym i naświetleniu pod mikroskopem. Natężenie przepływu mierzono poprzez umieszczenie sondy przepływu transsonicznego wokół każdego zbiornika.
Już opisaliśmy podobną procedurę śródoperacyjnego monitorowania dla szczurów, co zaowocowało obszerną serią fizjologicznych danych hemodynamicznych porównywalnych z pojedynczymi danymi zgłoszonymi z innych grup7. Dlatego uznaliśmy, że ta procedura stanowi dobrą podstawę do przystosowania go do myszy, gatunku 10-krotnie mniejszego od szczura. Kluczową różnicą w stosunku do procedury na szczurach jest użycie cewników Millar do pozyskiwania danych dotyczących ciśnienia krwi zamiast systemu cewników opartych na płynie. Dane o przepływie uzyskano również za pomocą sond przepływu transsonicznego, tyle że znacznie mniejszych niż w przypadku odpowiednich statków dla szczurów.
Ze względu na mały rozmiar zwierzęcia, oprzyrządowanie myszy jest technicznie trudne, ale wykonalne. Po zakończeniu oprzyrządowania akwizycja danych i analiza podstawowych danych dotyczących żywotności jest prosta, ponieważ można użyć wstępnie zdefiniowanego pliku ustawień. Plik ustawień musi być zdefiniowany raz na początku serii eksperymentów i może być przechowywany i używany we wszystkich kolejnych eksperymentach.
Do tej pory stosowaliśmy tę procedurę do oceny efektów hemodynamicznych wątroby w ostrych eksperymentach. Mierzyliśmy CAP i PVP przed i bezpośrednio po 70% częściowej hepatektomii (PH) oraz w eksperymentach z zaciskaniem/odzaciskaniem. Zacisnęliśmy więzadło wątrobowo-dwunastnicze prawego płata stanowiącego 20% masy wątroby, a następnie nastąpiło krótkie (5 minut) zaciśnięcie środkowego i lewego płata bocznego reprezentującego łącznie 90% masy wątroby. Odzaciskanie rozpoczęło się od zwolnienia zacisku z prawego płata, a następnie uwolnienia środkowego i lewego płata bocznego. Maksymalny czas zaciskania wynosił poniżej 10 min.

<table><tbody><tr><td>PowerLab 16/30&nbsp;</td><td>ADInstruments</td><td>PL3516</td><td></td></tr><tr><td>Quad Bridge Amp</td><td>ADInstruments</td><td>FE224</td><td>Wzmacniacz mostkowy&nbsp;</td></tr><tr><td>Animal Bio Amp</td><td>ADInstruments</td><td>FE136</td><td></td></tr><tr><td>Elektrody igłowe do FE136 (3 szt.)</td> <td>ADInstruments</td><td>MLA1213</td><td></td></tr><tr><td>modułu przepływomierza okołonaczyniowego</td><td>Transonic</td><td>TS420</td><td></td></tr><tr><td>Flowprobe MA0.5PSB/MA1PSB</td><td>Transonic</td><td>MA0.5PSB/MA1PSB</td><td></td></tr><tr><td>SPR-1000 Cewnik ciśnieniowy dla myszy</td><td>Millar instruments</td><td>841-0001</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik wypełniony płynem&nbsp;</td><td>Terumo</td><td>SR+DU2619PX</td><td>26G, 0,64 razy; Mikronożyczki 19mm</td></tr><tr><td></td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>nr 14058-09</td><td></td></tr><tr><td>mikro serrefine</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>No.18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Aplikator mikrozacisków</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>nr 18057-14</td><td></td></tr><tr><td>Mikrokleszczyki proste</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>nr 00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Zakrzywione mikrokleszczyki</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>nr 00649-11</td><td></td></tr><tr><td>uchwyt igły</td><td>F&middot; S&middot; L</td><td>nr 12061-01</td><td></td></tr><tr><td>6-0 jedwab</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 prolene</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 prolene</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 prolene</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Urządzenie do odcinania ogona&nbsp;</td><td>Kent Scientific</td><td></td><td>www.kentscientific.com</td></tr><tr><td>LabChart7</td><td>ADInstruments</td><td></td><td>dane&nbsp; oprogramowanie analityczne&nbsp;</td></tr></tbody></table>

monitorowanie parametrów hemodynamicznych układu układowego i wątroby u myszy

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

Wykorzystanie modeli mysich w badaniach eksperymentalnych ma ogromne znaczenie dla badania fizjologii wątroby i zaburzeń patofizjologicznych. Jednak ze względu na mały rozmiar myszy rzadko opisywano szczegóły techniczne procedury monitorowania śródoperacyjnego odpowiedniej dla myszy. Wcześniej informowaliśmy o procedurze monitorowania w celu uzyskania parametrów hemodynamicznych dla szczurów. Teraz dostosowaliśmy procedurę, aby uzyskać parametry hemodynamiczne ogólnoustrojowe i wątrobowe u myszy, gatunku dziesięciokrotnie mniejszego niż szczury. Film ten demonstruje oprzyrządowanie zwierząt, a także proces pozyskiwania danych potrzebnych do oceny hemodynamiki układowej i wątrobowej u myszy. Parametry życiowe, w tym temperatura ciała, częstość oddechów i tętno, były rejestrowane przez cały czas trwania zabiegu. Ogólnoustrojowe parametry hemodynamiczne obejmują ciśnienie w tętnicy szyjnej (CAP) i centralne ciśnienie żylne (CVP). Parametry perfuzji wątrobowej obejmują ciśnienie w żyle wrotnej (PVP), szybkość przepływu wrotnego, a także szybkość przepływu w tętnicy wątrobowej wspólnej (tabela 1). Oprzyrządowanie i akwizycja danych w celu zarejestrowania normalnych wartości została zakończona w ciągu 1,5 godziny. Podczas tej procedury parametry hemodynamiczne ogólnoustrojowe i wątrobowe pozostawały w prawidłowych zakresach.
Ta procedura jest trudna, ale wykonalna. Zastosowaliśmy już tę procedurę do oceny hemodynamiki wątroby u normalnych myszy, a także podczas 70% częściowej hepatektomii i w eksperymentach z zaciskaniem płata wątroby. Średnie PVP po resekcji (n= 20) wynosiło 11,41±2,94cmH2O, czyli było istotnie wyższe (P<0,05) niż przed resekcją (6,87±2,39cmH2O). Wyniki eksperymentu z zaciskaniem płata wątroby wykazały, że ta procedura monitorowania jest czuła i odpowiednia do wykrywania niewielkich zmian ciśnienia wrotnego i natężenia przepływu wrotnego. Podsumowując, procedura ta jest niezawodna w rękach doświadczonego mikrochirurga, ale powinna być ograniczona do eksperymentów, w których myszy są absolutnie potrzebne.

Parametry życiowe myszy, takie jak częstość oddychania i częstość akcji serca, są ewidentnie znacznie wyższe niż u szczura. Średnie systemowe ciśnienie tętnicze oraz ciśnienie w żyle szyjnej są zbliżone do wartości u szczura, a nawet do danych u ludzi.
Dane hemodynamiczne wątroby są wyraźnie odmienne. Uzyskano prawidłowe wartości od 8 myszy. Przepływ krwi w żyłach wrotnych u prawidłowych myszy mieścił się w zakresie od 1,6 do 2,3 ml/min. Przepływ w wspólnej tętnicy wątrobowej wynosił od 0,10 d...

Ten film pokazuje, jak nabyć hemodynamikę układu i wątroby u myszy. Całe monitorowanie obejmuje rejestrację parametrów życiowych, ogólnoustrojowego ciśnienia krwi, centralnego ciśnienia żylnego, szybkości przepływu w tętnicy wątrobowej wspólnej i ciśnienia w żyle wrotnej, a także szybkości przepływu wrotnego u myszy.

Monitorowanie parametrów hemodynamicznych układu układowego i wątroby u myszy

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

W tym filmie przedstawiono procedurę monitorowania hemodynamiki układowej i wątroby u myszy. Monitorowanie obejmuje rejestrację parametrów życiowych, ogólnoustrojowego ciśnienia krwi, ciśnienia w żyle wrotnej centralnego ciśnienia żylnego, a także szybkości przepływu wrotnego u myszy. To, co jest potrzebne do pełnej procedury monitorowania, to komputer z siódmą kartą laboratoryjną, mikroskop stereoskopowy i aparat do znieczulenia oraz system DI.Komponenty System DI. Komponenty obejmują czas tranzytu, przepływomierz, laboratorium energetyczne i poczwórny mostek. Do akwizycji danych potrzebujemy również kondycjonera temperatury i sygnału EKG do rejestracji, dyrektywy temperatury i tętna.Oto instrumenty, których potrzebujemy. Materiały do szycia, których potrzebujemy, to sześć zero jedwabiu, sześć zero proline, siedem zero proline, 10 zero proline. Jest to czujnik temperatury, czujnik EKG i czujnik oddechowy.Jest to sonda przepływu krwi, MA jeden PSB do pomiaru natężenia przepływu żyły wrotnej. Jest to sonda przepływu krwi, MA 0,5 PSB do pomiaru natężenia przepływu w tętnicy wspólnej ciała, tętnicy szyjnej i żyle moczowej. To jest Milli C Theater, bardzo czuły przetwornik ciśnienia do pomiaru ciśnienia krwi.Kalibracja kina Milli C. Podłącz jeden czujnik Millera do dwukanałowego kanału Millera, który jest ustawiony na pomiar ciśnienia w żyle wrotnej. Włóż końcówkę czujnika Millera do milimetra słupa wody.Najpierw ustaw wartość kolumny wody na zero centymetrów wody w oknie wykresu laboratoryjnego siódem. Wybierz bridge amplify i zero It.Uruchom postęp A następnie zatrzymaj się. W ten sposób możemy uzyskać wartość bazową do zera centymetrów wody.Następnie ustaw wartość słupa wody na 20 centymetrów wody. Uruchom postęp, a następnie zatrzymaj się tutaj. Pokazano linię bazową 20-centymetrowego słupa wody.Wybierz jednostki w oknie. Ustaw linię bazową zera i 20 centymetrów wody na odpowiednią wartość napięcia. Dostosuj urządzenie do kalibracji sondy przepływu krwi w odległości kilku centymetrów.Umieść sondę w wodzie dejonizowanej. Podłącz sondę do systemu sondy przepływu transsonicznego i okienka boćwiny. Wybierz wejście amplify, aby wyzerować sondę przepływu.Dostosuj jednostki. Naciśnij przycisk, aby przetestować kanał, aby odebrać sygnał. Jeśli sygnał ma od trzech do czterech kresek, oznacza to, że sygnał jest dobry.W przypadku uzyskania dobrego sygnału możemy przejść dalej. Naciśnij przycisk, aby zobaczyć kanał drogowy i kanał skali, aby sprawdzić, czy wartość została skalibrowana, czy nie. Naciśnij przycisk Aby zmierzyć kanał do późniejszego pomiaru i nasycić mysz 2% fluorem ISO i 0,3 mililitra tlenu na minutę.Zamocuj mysz na stole operacyjnym za pomocą podkładki rozgrzewającej. Umieść poduszkę z gazy pod szyją, aby uzyskać optymalną ekspozycję pola operacyjnego. Włóż igły EKG podskórnie do pauzy.Umieść czujnik oddechowy pod tylną częścią myszy. Umieść sondę temperatury w odbytnicy myszy. Rejestruj temperaturę myszy, EKG i częstość oddechów w laboratorium.Wykres siódmy operacja szyi do ogólnoustrojowego monitorowania układu sercowo-naczyniowego. Zdezynfekuj szyję myszy. Zidentyfikuj środkową linię szyi, środkowy punkt obojczyka, kąt żuchwy.Wykonaj dwucentymetrowe nacięcie wzdłużne od kąta żuchwy do środkowego punktu obojczyka około 0,5 centymetra po lewej stronie linii środkowej. Ta animacja pokaże anatomię szyi. Gruczoł podżuchwowy możemy zidentyfikować natychmiast po otwarciu nacięcia.Po odwróceniu gruczołu podżuchwowego możemy zidentyfikować żyłę umięśnioną zewnętrzną i jej gałęzie. Pod żyłą umięśnioną możemy zobaczyć warstwę mięśniową, w tym mięsień wyrostka sutkowatego mostka, górny brzuch mięśnia wyrostka mięśniowego i mięsień gnykowy mostka. Po odciągnięciu tych mięśni na bok możemy zidentyfikować, że tętnica szyjna ze szczególnym uwzględnieniem tętnicy szyjnej i żyły zewnętrznej ula.Te dwa naczynia są potrzebne do wprowadzania cedów. Tutaj pokażemy procedurę chirurgiczną. Najpierw rozetnij gruczoł podskórny, odwróć go i przykryj gazą z soli fizjologicznej.Możemy zidentyfikować żyłę eula zewnętrzną. Natychmiast wypreparuj żyłę ugla i umieść 3 6 0 szwów jedwabnych, jeden do podwiązania, a pozostałe dwa do mocowania. Uwolnij ścianę naczynia, przycinając tkankę tłuszczową na powierzchni żyły.Upewnij się, że nie uszkodzisz ściany naczynia, w przeciwnym razie spowoduje to silne krwawienie. Następnie oddziel mostkowy mięsień wyrostka sutkowatego Plato, górny brzuch mięśnia omohyoidalnego i rufowego. Odciągnij mięsień wyrostka sutkowatego mostka na bok za pomocą retraktora.Wtedy możemy zidentyfikować tętnicę szyjną. Wypreparuj tętnicę szyjną i umieść trzy szwy do mocowania i podwiązania z sześcioma pomiarami przepływu krwi w tętnicy szyjnej z zerem. Umieść sondę transsoniczną MA 0.5 PSB wokół tętnicy szyjnej.Utrzymuj go stabilnie. Zoptymalizuj kontakt za pomocą żelu ultradźwiękowego lub soli fizjologicznej. Zapisz natężenie przepływu krwi w tętnicy szyjnej, jak wskazano na małym ekranie urządzenia transsonicznego.Korzystając z siódmej karty laboratoryjnej, wyjmij sondę po zakończeniu pomiaru. Pomiar ciśnienia w tętnicy szyjnej podwiązuje dystalny koniec zacisku tętnicy szyjnej. Jego bliższy koniec.Zawiąż luźno szwy mocujące na później. Mocowanie Millia Theater Umieść jeden szew podnoszący za pomocą 10 zero proliny na przedniej ścianie. Aby ułatwić otwarcie nacięcia, wykonaj małe nacięcie na przedniej ścianie naczynia.Włóż Millia Theater i napraw go. Zwolnij zacisk. Zapisz ciśnienie w tętnicy szyjnej za pomocą lewego wykresu pomiaru przepływu krwi w żyle ulo.Zmierz przepływ krwi w żyłach ulo za pomocą liny przepływowej MA 0,5 P sb. Zapisz natężenie przepływu. Wyjmij sondę Po zakończeniu pomiaru, pomiar ciśnienia w żyle centralnej Zaciśnij proksymalny koniec żyły ulicznej, tak jak podwiązaj dystalny koniec.Wytnij małe nacięcie za pomocą mikronożyczek. Włóż cewnik wypełniony płynem, zamocuj go za pomocą wstępnie założonych linii szwów. Zwolnij zacisk.Zapisz centralne ciśnienie żylne Operacja jamy brzusznej w celu uzyskania hemodynamiki wątroby. Wykonaj poprzeczne nacięcie na brzuchu. Wyciągnij jelita na lewą stronę i przykryj je mokrą gazą.Po wyprowadzeniu jelit możemy zidentyfikować żyłę dolną kava, żyłę wrotną, tętnicę wątrobową wspólną oraz prawidłowy pomiar przepływu krwi w tętnicy wątrobowej. Przeciąć żyłę wrotną. Umieść sześć zerowych szwów jedwabnych pod żyłą wrotną, aby ułatwić podnoszenie naczynia.Umieść sondę przepływu MA jeden PSB wokół naczynia. Zmierz szybkość przepływu krwi. Zapisz dane, wyjmij sondę.Po zakończeniu pomiaru, pomiar wspólnego przepływu tętnicy wątrobowej, zidentyfikuj wspólną tętnicę wątrobową, ostrożnie ją rozbior. Miejsce 1 6 0 Jedwabny szew ułatwiający podnoszenie naczynia. Umieść sondę przepływu MA 0.5 PSB.Zmierz jego przepływ krwi i uzyskaj dane. Wyjmij sondę Po zakończeniu portalu pomiarowego, pomiaru ciśnienia żyły, wybierz jedną odnogę żyły krezkowej z kilkoma odgałęzieniami w miejscu, która spływa prosto do żyły wrotnej, jak pokazano w miejscu animacji. Dwa szwy mocujące wokół żyły.Później posłużą do naprawy mili cedru Place. Dwa szwy sztywne przy użyciu 10 zero proliny. Możemy również założyć jeden szew liftingujący na wewnętrznej ścianie żyły, co powinno ułatwić uniesienie ściany przedniej.Aby całkowicie otworzyć nacięcie, wykonaj małe nacięcie na żyle za pomocą mikronożyczek. Włóż mili CED do żyły krezkowej. Przejdź do zbiegu żyły wrotnej, aby uzyskać ciśnienie żyły wrotnej.Teraz zademonstrujemy procedurę chirurgiczną pomiaru portalu. Ciśnienie w żyle podwiązuje dystalny koniec wybranej żyły krezkowej. Podwiązane małe gałęzie umieszczono dwa szwy mocujące za pomocą sześciu zero proliny.Kluczowym punktem tej procedury jest unikanie dotykania tętnicy krezkowej. Podczas podwiązywania zacisku żyły proksymalny koniec żyły. Umieść dwa szwy sztywne za pomocą 10 zero proliny po obu stronach żyły.Wystąpi pewne krwawienie, ponieważ szwy podtrzymujące powinny przenikać przez ścianę naczyniową cienkiej żyły krezkowej. Użyj drobnego krzyża, aby wykonać małe nacięcie ukośnie pod kątem 45 stopni. Delikatnie włóż kino milli C i napraw go.Zwolnij zacisk. Włóż milli C Theater, aż dojdziesz do zbiegu żyły wrotnej, zapisz ciśnienie w żyle wrotnej. Cewnik może pozostać na miejscu do końca zakończenia procedury eksperymentalnej.Pomimo niewielkich parametrów życiowych, hemodynamikę ogólnoustrojową i wątrobową można monitorować nawet u myszy. Do tej pory ta procedura, którą stosowaliśmy, jest odpowiednia do oceny skutków hemodynamicznych wątroby w ostrych lub końcowych eksperymentach. Zebraliśmy już prawidłowe parametry hemodynamiczne myszy i zastosowaliśmy tę procedurę na 70% częściowej hepatektomii i zaciśnięciu pętli wątrobowej.Eksperyment, aby zaobserwować zmiany perfuzji wątroby. Parametry życiowe, takie jak częstość oddechów, tętno są oczywiście znacznie wyższe niż w kolorze czerwonym, co oznacza, że ogólnoustrojowe ciśnienie krwi i ciśnienie w żyłach ułkowych są podobne jak w czerwieni, a nawet podobne do danych dla ludzi. Dane hemodynamiczne dotyczące wątroby są oczywiście różne.Całkowity przepływ krwi i znormalizowany waha się od 1,6 do 2,3 mililitra na minutę Przepływ w tętnicy wątrobowej waha się zwykle od 0,1 do 0,35 mililitra na minutę. Ciśnienie wrotne mieści się w zakresie od 4,4 do 11,2 centymetra wody, średnie ciśnienie w żyle wrotnej przed i po 70% częściowej hepatektomii z 6,9 i 11,4 centymetra wody, co zbiegło się z różnicami u ludzi lub innych zwierząt doświadczalnych. Wskazuje to, że ta procedura bezpośredniego monitorowania jest czuła i dokładna w ocenie tych parametrów hemodynamicznych.Wyniki eksperymentu z zaciskaniem płata wątroby wykazały, że niewielkie zmiany perfuzji wątrobowej można wykryć za pomocą tej procedury monitorowania. Dlatego procedura ta może być stosowana w wielu eksperymentalnych dziedzinach badań, takich jak chirurgia wątroby i interwencja farmakologiczna w celu udokumentowania zmian hemodynamicznych. Następnie.

monitoring-of-systemic-and-hepatic-hemodynamic-parameters-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Echokardiografia przezklatkowa stanowi nieinwazyjną metodę oceny funkcji serca u myszy. Połączenie obrazowania ultradźwiękowego i dopplerowskiego pozwala na wykonanie pomiarów wymiarów serca oraz przepływu krwi wewnątrzsercowego, co łącznie umożliwia ocenę funkcji skurczowej i rozkurczowej serca.

Echokardiografia przezklatkowa u myszy

Celem tego protokołu jest ocena ogólnoustrojowego ciśnienia krwi u świadomych, swobodnie poruszających się myszy za pomocą wszczepialnych urządzeń radiotelemetrycznych.

Długoterminowy pomiar ciśnienia krwi u swobodnie poruszających się myszy za pomocą telemetrii

Niekontrolowany krwotok, ważna przyczyna śmiertelności wśród pacjentów po urazach, może być modelowany za pomocą standardowego uszkodzenia wątroby w modelu mysim. Model ten skutkuje konsekwentną utratą krwi, przeżywalnością i pozwala na testowanie środków hemostatycznych. Ten artykuł zawiera krok po kroku proces wykonywania tego cennego modelu.

Niekontrolowany wstrząs krwotoczny modelowany za pomocą uszkodzenia wątroby u myszy z monitorowaniem hemodynamicznym w czasie rzeczywistym

Tutaj opisujemy szczegółowy protokół inwazyjnych pomiarów parametrów hemodynamicznych, w tym ciśnienia wrotnego, splanchnicznego przepływu krwi i hemodynamiki ogólnoustrojowej, aby scharakteryzować zespół nadciśnienia wrotnego u szczurów.

Inwazyjna charakterystyka hemodynamiczna zespołu wrotno-nadciśnieniowego u szczurów z marskością wątroby

Tutaj opisujemy i porównujemy dwie pozycje do uzyskania wierzchołkowego widoku czterokomorowego u myszy. Pozycje te umożliwiają ilościowe określenie funkcji prawej komory, zapewniają porównywalne wyniki i mogą być stosowane zamiennie.

Echokardiograficzny pomiar parametrów rozkurczowych prawej komory serca u myszy

Tutaj prezentujemy protokół do przeprowadzenia inwazyjnej oceny hemodynamicznej prawej komory i tętnicy płucnej u myszy przy użyciu metody chirurgicznej na otwartej klatce piersiowej.

Inwazyjna ocena hemodynamiczna układu prawej komory i tętniczego nadciśnienia płucnego wywołanego niedotlenieniem u myszy

Ten protokół krok po kroku przeprowadza wielokrotne dożylne podawanie dawki bolusa i inwazyjne monitorowanie hemodynamiczne u myszy. Badacze mogą wykorzystać ten protokół do przyszłych badań przesiewowych związków terapeutycznych w kierunku nadciśnienia tętniczego płucnego.

Wielokrotne dożylne dawkowanie bolusa i inwazyjna ocena hemodynamiczna w modelu nadciśnienia tętniczego płucnej myszy wywołanego niedotlenieniem

Pulsatywność hormonu luteinizującego (LH) jest cechą charakterystyczną funkcji rozrodczych. Opisujemy protokół zdalnej aktywacji określonych populacji neuronów związany z seryjnym automatycznym pobieraniem krwi. Technika ta pozwala na czasową modulację hormonalną, multipleksowanie i minimalizowanie efektów manipulacji na poziomie LH u przytomnych, swobodnie poruszających się i niezakłóconych zwierząt.

Zdalna aktywacja neuronów w połączeniu z automatycznym pobieraniem próbek krwi w celu indukcji i pomiaru krążącego hormonu luteinizującego u myszy

Ultraszybkie ultrasonografie dopplerowskie (UFUS) o wysokiej rozdzielczości przestrzennej (100 μm) i czułości stanowi odpowiednią nieinwazyjną metodę obrazowania w celu uzyskania kompleksowego jakościowego przeglądu naczyń wątrobowych. UFUS ułatwia również ilościowe pomiary mikrokrążenia, mając na celu pogłębienie naszej wiedzy na temat mechanizmów chorób naczyniowych.

Obrazowanie i kwantyfikacja unaczynienia wątroby myszy za pomocą ultraszybkich ultradźwięków dopplerowskich

Utrata odruchu prostowania od dawna służy jako standardowy substytut behawioralny dla utraty przytomności, zwany również hipnozą, u zwierząt laboratoryjnych.  Zmiany wrażliwości na lotne środki znieczulające spowodowane interwencjami farmakologicznymi można wykryć za pomocą starannie kontrolowanego systemu oceny o wysokiej przepustowości, który może być dostosowany do dostarczania dowolnego wziewnego środka terapeutycznego.

Ocena zmian w lotnej wrażliwości na znieczulenie ogólne myszy po miejscowej lub ogólnoustrojowej interwencji farmakologicznej

Poznaj metodę monitorowania parametrów hemodynamicznych układu układowego i wątroby u myszy. Technika obejmuje pomiar ciśnienia krwi, ciśnienia żyły wrotnej oraz przepływu w tętnicy wątrobowej.

Monitorowanie parametrów hemodynamicznych układu układowego i wątroby u myszy

Przeglądaj więcej filmów