Name: Technika pozyskiwania wątroby świń i przeszczepu ortotopowego z wykorzystaniem aktywnej zastawki Porto-Caval (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: Poznaj technikę ortotopowego przeszczepu wątroby u świń z aktywnym pomostem porto-cavalno-jugularnym. Metoda zapewnia stabilną hemodynamikę, zapobiega zastojowi jelit i uszkodzeniom naczyń włosowatych podczas zabiegu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badanie było wspierane przez granty badawcze z Roche Organ Transplant Research Foundation (ROTRF) i Astellas. Markus Selzner otrzymał nagrodę ASTS Career Development Award. Matthias Knaak był wspierany przez stypendium badawcze Astellas. Dziękujemy Uwe Mummenhoffowi i rodzinie z Birmingham za ich hojne wsparcie.

<ol><li>Mehrabi, A., Fonouni, H., Muller, S. A., Schmidt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+concepts+in+transplant+surgery%3A+liver+transplantation+today%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch.+Surg%22%5BJournal%5D)">Current concepts in transplant surgery: liver transplantation today.</a> Langenbecks Arch. Surg. 393 (3), 245-260 (2008).</li>
<li>Qiu, J., Ozawa, M., Terasaki, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Transpl%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in the United States.</a> Clin. Transpl. , 17-28 (2005).</li>
<li>Chalstrey, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+orthotopic+liver+transplantation+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Technique of orthotopic liver transplantation in the pig.</a> Br. J. Surg. 58 (3), 585-588 (1971).</li>
<li>Esmaeilzadeh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+guidelines+for+porcine+liver+allo-transplantation%3A+a+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Technical guidelines for porcine liver allo-transplantation: a review of literature.</a> Ann. Transplant. 17 (2), 101-110 (2012).</li>
<li>Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+of+orthotopic+liver+transplantation+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Observations of orthotopic liver transplantation in the pig.</a> Br. Med. J. 2 (5550), 478-480 (1967).</li>
<li>Memsic, L., Quinones-Baldrich, W., Kaufman, R., Rasool, I., Busuttil, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+porcine+orthotopic+liver+transplantation+using+a+venous-venous+bypass+with+and+without+a+nonpulsatile+perfusion+pump%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A comparison of porcine orthotopic liver transplantation using a venous-venous bypass with and without a nonpulsatile perfusion pump.</a> J. Surg. Res. 41, 33-40 (1986).</li>
<li>Torres, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+alterations+during+orthotopic+liver+experimental+transplantation+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Cir.+Bras%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic alterations during orthotopic liver experimental transplantation in pigs.</a> Acta. Cir. Bras. 23 (2), 135-139 (2008).</li>
<li>Battersby, C., Hickman, R., Saunders, S. J., Terblanche, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+function+in+the+pig.+1.+The+effects+of+30+minutes%27+normothermic+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Liver function in the pig. 1. The effects of 30 minutes' normothermic ischaemia.</a> Br. J. Surg. 61 (1), 27-32 (1974).</li>
<li>Smith, A. C., Swindle, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+swine+for+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Ilar.+J%22%5BJournal%5D)">Preparation of swine for the laboratory.</a> Ilar. J. 47 (4), 358-363 (2006).</li>
<li>Swindle, M. M., Smith, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Best+practices+for+performing+experimental+surgery+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Surg%22%5BJournal%5D)">Best practices for performing experimental surgery in swine.</a> J. Invest. Surg. 26 (2), 63-71 (2013).</li>
<li>Moench, C., Moench, K., Lohse, A. W., Thies, J., Otto, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+ischemic-type+biliary+lesions+by+arterial+back-table+pressure+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Prevention of ischemic-type biliary lesions by arterial back-table pressure perfusion.</a> Liver Transpl. 9 (3), 285-289 (2003).</li>
<li>Koski, E. M., Suhonen, M., Mattila, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound-facilitated+central+venous+cannulation%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Ultrasound-facilitated central venous cannulation.</a> Crit. Care Med. 20 (3), 424-426 (1992).</li>
<li>Lange, J. J., Hoitsma, H. F., Meijer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthetic+management+in+experimental+orthotopic+liver+transplantation+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Anaesthetic management in experimental orthotopic liver transplantation in the pig.</a> Eur. Surg. Res. 16 (6), 360-365 (1984).</li>
<li>Kaiser, G. M., Heuer, M. M., Fruhauf, N. R., Kuhne, C. A., Broelsch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+handling+and+anesthesia+for+experimental+surgery+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">General handling and anesthesia for experimental surgery in pigs.</a> J. Surg. Res. 130 (1), 73-79 (2006).</li>
<li>Heuer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+swine+without+venovenous+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in swine without venovenous bypass.</a> Eur. Surg. Res. 45 (1), 20-25 (2010).</li>
<li>Gruttadauria, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+orthotopic+liver+autotransplantation%3A+facilitated+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Surg%22%5BJournal%5D)">Porcine orthotopic liver autotransplantation: facilitated technique.</a> J. Invest. Surg. 14 (2), 79-82 (2001).</li>
<li>Falcini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Veno-venous+bypass+in+experimental+liver+transplantation%3A+portal-jugular+versus+caval-portal-jugular%5BTitle%5D)+AND+%22G.+Chir%22%5BJournal%5D)">Veno-venous bypass in experimental liver transplantation: portal-jugular versus caval-portal-jugular.</a> G. Chir. 11 (4), 206-210 (1990).</li>
<li>Filipponi, F., Benassai, C., Falcini, F., Martini, E., Cataliotti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+tract+complications+in+orthotopic+liver+transplantation%3A+an+experimental+study+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Ital.+J.+Surg.+Sci%22%5BJournal%5D)">Biliary tract complications in orthotopic liver transplantation: an experimental study in the pig.</a> Ital. J. Surg. Sci. 19 (2), 131-136 (1989).</li>
<li>Terblanche, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+homotransplantation%3A+an+experimental+study+in+the+unmodified+pig%5BTitle%5D)+AND+%22S.+Afr.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver homotransplantation: an experimental study in the unmodified pig.</a> S. Afr. Med. J. 42 (20), 486-497 (1968).</li>
<li>Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+liver+transplants+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of liver transplants in the pig.</a> Br. Med. J. 4 (5580), 645-648 (1967).</li>
<li>Battersby, C., Egerton, W. S., Balderson, G., Kerr, J. F., Burnett, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Another+look+at+rejection+in+pig+liver+homografts%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Another look at rejection in pig liver homografts.</a> Surgery. 76 (4), 617-623 (1974).</li>
<li>Net, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+normothermic+recirculation+is+mediated+by+ischemic+preconditioning+in+NHBD+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">The effect of normothermic recirculation is mediated by ischemic preconditioning in NHBD liver transplantation.</a> Am. J. Transplant. 5 (10), 2385-2392 (2005).</li>
<li>Guarrera, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+machine+perfusion+of+liver+grafts+for+transplantation%3A+technical+development+in+human+discard+and+miniature+swine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Hypothermic machine perfusion of liver grafts for transplantation: technical development in human discard and miniature swine models.</a> Transplant Proc. 37 (1), 323-325 (2005).</li>
<li>Minor, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+reconditioning+by+gaseous+oxygen+improves+survival+after+liver+transplantation+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hypothermic reconditioning by gaseous oxygen improves survival after liver transplantation in the pig.</a> Am. J. Transplant. 11 (12), 2627-2634 (2011).</li>
<li>Kelly, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+partial+liver+transplantation%3A+a+novel+model+of+the+%27small-for-size%27+liver+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Porcine partial liver transplantation: a novel model of the 'small-for-size' liver graft.</a> Liver Transpl. 10 (2), 253-263 (2004).</li>
<li>Meijer, S., Hoitsma, H. F., Visser, J. J., de Lange, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+survival+following+orthotopic+liver+transplantation+in+pigs%3B+with+special+reference+to+gastric+ulcer+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Neth.+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Long term survival following orthotopic liver transplantation in pigs; with special reference to gastric ulcer complications.</a> Neth. J. Surg. 36 (6), 168-171 (1984).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Eksperymentalny OLTx u świń jest trudną procedurą w warunkach badawczych bez zasobów intensywnej terapii przewidzianych w scenariuszu klinicznym. Możliwe powikłania obejmują niestabilność hemodynamiczną, krwotok, niedokrwienie narządów, hipotermię oraz dekompensację metaboliczną i oddechową. W przypadku każdej grupy badawczej obowiązkowe jest wystarczające przeszkolenie proceduralne w zakresie technikichirurgicznej5 oraz znieczulenia świni14,15 w celu osiągnięcia reprezentatywnych i odtwarzalnych wyników.
W literaturze opisano wiele subtelności technicznych, zwłaszcza w odniesieniu do5. fazy rekonstrukcji naczyń krwionośnych. Opisany powyżej protokół OLTx dostarcza wymaganych informacji dla modelu zastępującego cukrzycę, przypominającego ludzki OLTx. Przedstawione wyniki wskazują na wiarygodną przeżywalność zwierząt i odzyskiwanie przeszczepów zarówno w modelach HBD, jak i DCD. Protokół ma zastosowanie w scenariuszach przeżycia krótkoterminowego stosowanych na przykład w eksperymentach z reperfuzją przeszczepów, a także w długoterminowych modelach przeżycia, takich jak badania tolerancji.
Jedną z największych przeszkód w przypadku OLTx u świń jest stosunkowo słaba tolerancja zaciskania krzyżowego żyły głównej i wrotnej. Przekrwienie splanchniczne w fazie bezwątrobowej powoduje nadciśnienie żylne i uszkodzenie naczyń włosowatych, które mogą prowadzić do poważnego niedokrwienia jelit i niestabilności hemodynamicznej aż do nieodwracalnego wstrząsu nawet poreperfuzji narządów7. Ponieważ żyła główna jest całkowicie osadzona w miąższu wątroby, zabieg z zachowaniem cavy na barana nie jest możliwy. Całkowita niedrożność żyły głównej podczas fazy rekonstrukcji żyły głównej pogarsza stabilność hemodynamiczną świni. Chociaż kilka doniesień pokazuje, że OLTx u świń można osiągnąć podczas całkowitego zamknięcia żyły głównej i wrotnej trwającej mniej niż 25 minut16,17, technika pomostowania wrotno-głównego szyjnego na czas rekonstrukcji naczyń jest bezpieczniejszą i bardziej praktyczną opcją7-9,18. Z doświadczenia autorów wynika, że pasywne obejście wrotno-szyjne nie jest optymalne, aby utrzymać świnię w stanie hemodynamicznym w fazie bezwątrobowej. Model bypass, obejmujący aktywną dekompresję zarówno podwątrobowej jamy, jak i żyły wrotnej, pozwala na spokojną fazę rekonstrukcji zespolenia nadwątrobowego i wrotnego nawet przy wydłużonym czasie zaciskania z powodu nieprzewidzianych powikłań. W przeciwieństwie do wcześniejszych doniesień7, splenektomia nie jest obowiązkowa po usunięciu cewnika pomostowego. Zarówno tętnica śledziona, jak i żyła są zamknięte mniej więcej w połowie długości śledziony, pozostawiając bliższą połowę wystarczająco perfundowaną. Powikłań, takich jak krwawienie lub zator powietrzny spowodowany odłączeniem obejścia, można uniknąć, upewniając się, że obejście jest starannie umieszczone i odpowiednio zabezpieczone.
W eksperymentach OLTx z długoterminowym przeżyciem zespolenie dróg żółciowych jest uważane za słaby punkt ze względu na wysoki odsetek powikłań19. Tkanka żółciowa jest bardzo delikatna i wymaga szczególnej troski podczas obchodzenia się z nią. Opisano wiele różnych technik zespolenia5,19. Zespolenie typu end-to-end jest technicznie łatwe i wiąże się z minimalnymi powikłaniami19. Szew ciągły za pomocą igły bez cięcia, obejmującej duże odcinki tkanki łącznej wokół dróg żółciowych, wydaje się być lepszy niż szew przerywany. Przewód żółciowy ulega niepotrzebnemu naprężeniu, gdy pojedyncze szwy przerwanego szwu są zawiązane. Może to spowodować rozerwanie tkanek i kolejne wycieki żółci. Materiał szwu – wchłanialny lub niewchłanialny – zwykle nie jest ważny, ze względu na jego ograniczoną żywotność do momentu zakończenia leczenia świni. W przypadku modeli długoterminowego przeżycia przez kilka miesięcy preferowane są szwy wchłanialne – takie jak w ludzkim OLTx.
Szczególną ostrożność należy zachować podczas obserwacji pooperacyjnej. Obowiązkowe jest odpowiednie odżywianie i zaopatrzenie w płyny, niezawodny protokół uśmierzania bólu i odpowiedni reżim immunosupresyjny. W przypadku długoterminowych eksperymentów szczególnie ważna wydaje się immunosupresja. W porównaniu z innymi ssakami, świnie wykazują zaskakująco niski wskaźnik odrzucenia immunologicznego po OLTx20,21. Nacieki z okrągłych komórek są maksymalne w drugim tygodniu po przeszczepie i zmniejszają się samoistnie nawet bez immunosupresji. Odrzucenie rzadko jest przyczyną śmierci po świńskim OLTx22. Jednak nawet przy wspomnianym tutaj protokole immunosupresji obejmującym podawanie steroidów dożylnie i inhibitorów kalcyneuryny p.o., odrzucenie przeszczepu jest wskazane przez łagodny wzrost aminotransferaz rozpoczynający się około 4 dni po OLTx i potwierdzony przez pozorną infiltrację okrągłokomórkową pola wrotnego. Inhibitory kalcyneuryny mogą być podawane w dawce p.o.23,24 lub i.v.25,26; Obie metody mają wady. Nawet w przypadku doustnych środków pomocniczych rzeczywista ilość docierająca do przewodu pokarmowego pozostaje nieuchwytna. Z drugiej strony, ciągła infuzja dożylna w kojcu świni z aktywnym zwierzęciem jest trudna. W związku z tym podanie dożylne musi być wykonywane w bolusie, co skutkuje wysokimi skokami stężenia leku wraz z potencjalnymi skutkami toksycznymi. Niemniej jednak wydaje się, że obie metody aplikacji pozwalają na długoterminowe przeżycie.
Podobnie jak w warunkach klinicznych, zalecana jest profilaktyka pooperacyjnych owrzodzeń stresowych. Krwawienie pooperacyjne z powodu wrzodów trawiennych jest częstym problemem i może być związane z upośledzeniem czynności wątroby27. Po kilku przypadkach krwawienia z przewodu pokarmowego w obu grupach OLTx, autorzy rozpoczęli regularną profilaktykę pantoprazolem i od tego czasu nie doświadczyli żadnego krwawienia z przewodu pokarmowego.
Ścisłe utrzymanie sterylnych warunków śródoperacyjnych, porównywalnych z warunkami panującymi na klinicznej sali operacyjnej, a w konsekwencji profilaktyka antybiotykowa, zmniejsza ryzyko powikłań infekcyjnych.
Podsumowując, artykuł ten zawiera praktyczne informacje dotyczące tworzenia programu OLTx dla świń w warunkach badawczych. Wystarczające poświęcenie, praktyka i praca zespołowa są ważne, aby skrócić okres uczenia się, uzyskać wiarygodne wyniki oraz zmniejszyć koszty i liczbę zwierząt badawczych.

Ortotopowy przeszczep wątroby (OLTx) jest jedyną opcją leczenia dla pacjentów ze schyłkową niewydolnością wątroby lub zaawansowanym rakiem wątrobowokomórkowym. W ciągu ostatnich 25 lat liczba kandydatów na liście oczekujących stopniowo rosła i obecnie znacznie przewyższa liczbę dostępnych przeszczepów. W większości regionów transplantacyjnych od 20 do 30% pacjentów znajdujących się na liście oczekujących na przeszczep wątroby umiera bez przeszczepu narządu lub zostaje usuniętych z listy z powodu postępu choroby. Pilnie potrzebne są strategie mające na celu zwiększenie puli dawców, a tym samym liczby dostępnych przeszczepów. Rozszerzone kryteria alokacji narządów, przedłużone zachowanie przeszczepu i indukcja tolerancji immunologicznej nadal stanowią główne wyzwania kliniczne1-3. W związku z tym eksperymentalne badania nad OLTx mają kluczowe znaczenie dla optymalizacji klinicznej praktyki OLTx.
Świński OLTx to dobrze znany model eksperymentalny, który pod wieloma względami przypomina ludzki OLTx, w tym pod względem wielkości wątroby, anatomii i fizjologii4-6. W ten sposób stała się standardową metodą eksperymentalną w dziedzinach badawczych, takich jak techniki chirurgiczne, fizjologia, immunologia, konserwacja i uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne. Wpiśmiennictwie opisano liczne techniki pobierania przeszczepów, hepatektomii po biorcy, a w szczególności rekonstrukcji naczyń krwionośnych5. Wybór odpowiedniej techniki różni się w zależności od preferencji badacza i jego możliwości technicznych.
W przeciwieństwie do scenariusza dla ludzi, przekrwienie splanchniczne podczas fazy bezwątrobowej stanowi poważny problem u świńskiego OLTx. Późniejsze niedokrwienie jelit i zastoinowe uszkodzenie naczyń krwionośnych może spowodować poważną niestabilność hemodynamiczną, zagrażając przeżyciu świni, a tym samym powodzeniu eksperymentu7-9. Dlatego wystarczająca dekompresja jelit jest obowiązkowa, szczególnie w mniej wyrafinowanych technicznie warunkach eksperymentalnych.
Korzystanie z aktywnego zastawki porto-caval-szyjnej na czas trwania fazy bezwątrobowej jest niezawodną opcją pozwalającą uniknąć przekrwienia jelit. System może być wykorzystywany do wczesnych eksperymentów reperfuzyjnych, a także do długoterminowych scenariuszy przeżycia. Poniższy protokół zawiera wszystkie informacje dotyczące stabilnego i powtarzalnego modelu przeszczepu wątroby u świń, w tym pobieranie wątroby od dawcy, operację biorcy, w tym hepatektomię i techniki rekonstrukcji naczyń krwionośnych od końca do końca, oraz opiekę pooperacyjną.

<table><tbody><tr><td>Siarczan atropiny 15 mg/30ml</td><td>Krokwia 8 Produkty</td><td>238481</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,3 mg/ml</td><td>RB Pharmaceuticals LDT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin 1 g</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2237138</tr><tr><td>Cyklosporyna roztwór doustny 5 000 mg/50 ml</td><td>Novartis Pharmaceuticals Canada Inc.</td><td></td><td></td>2150697</tr><tr><td>Cytrynian fentanylu 0,25 mg/5 ml</td><td>Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2240434</tr><tr><td>Heparyna 10 000 iU/10 ml</td><td>Leo Pharma A/S</td><td>453811</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane 99,9%, 250 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2231929</tr><tr><td>Chlorowodorek ketaminy&nbsp; 5000 mg/50 ml</td><td>Bimeda-MTC Animal Health Inc.</td><td></td><td></td>612316</tr><tr><td>Dzwonek z mleczanami" s + 5% dekstroza, 0,5 l</td><td>Baxter Corporation</td><td>61131</td><td></td></tr><tr><td>Dzwonek z mleczanem s, 1 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61085</td><td></td></tr><tr><td>Metronidazol 500 mg/100 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td>870420</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam 50 mg/10 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2242905</tr><tr><td>Pantoprazol 40 mg</td><td>tabletki powlekane Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2306727</tr><tr><td>Chlorek potasu 40 mEq/20 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>37869</td><td></td></tr><tr><td>Propofol 1,000 mg/100 ml</td><td>Pharmascience Inc.</td><td></td><td></td>2244379</tr><tr><td>Siarczan protaminy 50 mg/5 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2139537</tr><tr><td>Sól fizjologiczna 0,9%, 1 l</td><td>Baxter Corporation</td><td>60208</td><td></td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu 50 mEq/50 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>261998</td><td></td></tr><tr><td>Solu-Medrol 500 mg</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2367963</tr><tr><td>Kwas traneksamowy 1,000 mg/10 ml</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2064413</tr><tr><td>Roztwór Uniwersytetu Wisconsin, SPS-1</td><td>Systemy odzyskiwania narządów</td><td>SPS-1</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaine Dotchawiczo 10 mg/50 ml</td><td>AstraZeneca</td><td>2003767</td><td></td></tr><tr><td>Appose ULC 35 W Zszywacz do skóry</td><td>Covidien Kanada</td><td>803712</td><td></td></tr><tr><td>Maxon, 1</td><td>Covidien Kanada</td><td>606173</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 0</td><td>Covidien Kanada</td><td>S606</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 2-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S405</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 3-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S404</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 4-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP581X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 5-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP725X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 6-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP733X</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik i.v, 18 G</td><td>BD Kanada</td><td>381147</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik Cook TPN, 9.5 Fr</td><td>Cook Medical Company</td><td>C-TPNS-9.5-90</td><td></td></tr><tr><td>PSI Zestaw do cewnika osłonkowego, 8.5 Fr</td><td>Arrow International</td><td>ASK-09803-UHN</td><td></td></tr><tr><td>Linia pomp infuzyjnych</td><td>Smith Medical ASD Inc.</td><td>21-0442-25</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw administracyjny wątroby (linia do spłukiwania)</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>17175</td><td></td></tr><tr><td>Mallinckrodt, rurka tchawicza, 6,5 mm</td><td>Covidien Canada</td><td>86449</td><td></td></tr><tr><td>Rurka łącząca ssanie Med-Rx</td><td>Benlan Inc.</td><td>70-8120</td><td></td></tr><tr><td>Torba na organy</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>2990</td><td></td></tr><tr><td>Końcówka ssąca</td><td>Tyco Healthcare Group LP</td><td>8888501023</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, Ołówek kauteryzacyjny</td><td>Covidien Canada</td><td>E2515H</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, Elektroda zwrotna pacjenta</td><td>Covidien Canada</td><td>E7507</td><td></td></tr><tr><td>Złącze obejściowe 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>955083-001</td><td></td></tr><tr><td>Złącze obejściowe 3/8" x 3/8" Luer Lock</td><td>Raumedic AG</td><td>955163-001</td><td></td></tr><tr><td>Złącze obejściowe Y 3/8" x 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>961360-002</td><td></td></tr><tr><td>Rurka obejściowa 1/4" x 1/16"</td><td>Raumedic AG</td><td>039505-010</td><td></td></tr><tr><td>Rurka obejściowa 3/8" x 3/32"</td><td>Raumedic AG</td><td>039535-005</td><td></td></tr><tr><td>Pompa odśrodkowa Rotaflow</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>HC 2821</td><td></td></tr><tr><td>Pierścień zaciskowy węża ze stali nierdzewnej, 5mm</td><td>Oetiker</td><td>16700007</td><td></td></tr><tr><td>Retraktor brzucha</td><td>Medite GmbH</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>de Bakey &ndash; Beck, Podwątrobowy zacisk Cava</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB519R</td><td></td></tr><tr><td>- Deithrich, Zacisk atraumatyczny (żyła wrotna)</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB525R</td><td></td></tr><tr><td>Zacisk Gregory Bulldog, zakrzywiony</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB382R</td><td></td></tr><tr><td>Gregory Bulldog Clamp, prosty</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB381R</td><td></td></tr><tr><td>Potts &ndash; De Martel, Nożyczki</td><td>Aesculap Inc.</td><td>BC648R</td><td></td></tr><tr><td>Satinsky, Zacisk nadwątrobowy Cava</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB605R</td><td></td></tr><tr><td>Symetryczny zacisk do rurek</td><td>Codman Instruments</td><td>198010</td><td></td></tr><tr><td>Maszyna anestezjologiczna, Optimax</td><td>Moduflex Sprzęt anestezjologiczny</td><td>Przepływomierz obejściowy SN5180</td><td></td></tr><tr><td>, HT 110</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td></td><td></td>HT110B11106</tr><tr><td>Sonda przepływomierza, H6XL</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>H6Xl689</td><td></td></tr><tr><td>Pompa do terapii cieplnej, T / Pump</td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP500-G89D19</td><td></td></tr><tr><td>Pompa infuzyjna 3,000</td><td>SIMS Graseby LTD.</td><td></td><td></td>SN300050447</tr><tr><td>Para izofluranu 19.1</td><td>Draeger Medical Canada Inc.</td><td>Nie dotyczy</td><td></td></tr><tr><td>monitora, Datex AS 3</td><td>Instrumentarium Corp./ Hitachi</td><td>D-VHC14-23-02</td><td></td></tr><tr><td>Napęd odśrodkowy Rotaflow</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>952301</td><td></td></tr><tr><td>Konsola Rotaflow Podkładka</td> do terapii temperaturowej <td>Maquet-Dynamed</td><td>706035</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP26E</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab Force Tx</td><td>Valleylab Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Respirator 216151480, sprzęt medyczny AV 800</td><td>DRE</td><td>40800AVV</td><td></td></tr><tr><td>Ciepły dotyk, system ogrzewania pacjenta</td><td>Nellcor/ Covidien Canada</td><td>5015300A</td><td></td></tr></tbody></table>

technika pozyskiwania wątroby świń i przeszczepu ortotopowego z wykorzystaniem aktywnej zastawki porto-caval

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

Sukces przeszczepu wątroby doprowadził do dramatycznego niedoboru narządów. Każdego roku znaczna liczba pacjentów znajdujących się na liście oczekujących na przeszczep wątroby umiera bez otrzymania przeszczepu narządu lub zostaje usunięta z listy z powodu postępu choroby. Nawet po udanym przeszczepie, odrzucenie przeszczepu i skutki uboczne immunosupresji pozostają głównymi problemami dla przeżycia przeszczepu i zachorowalności pacjentów. 
Eksperymentalne badania na zwierzętach były kluczowe dla sukcesu transplantacji wątroby i nadal odgrywają kluczową rolę w rozwoju klinicznej praktyki transplantacyjnej. W szczególności ortotopowy model przeszczepu wątroby u świń (OLTx) jest optymalny dla badań klinicznych ze względu na jego bliskie podobieństwo do wielkości, anatomii i fizjologii człowieka. 
Dekompresja przekrwienia jelit podczas fazy bezwątrobowej świńskiego OLTx jest ważna dla zagwarantowania niezawodnego przeżycia zwierząt. Zastosowanie aktywnej zastawki porto-caval-szyjnej pozwala na uzyskanie doskonałej dekompresji jelitowej. System może być wykorzystywany zarówno do krótkoterminowych, jak i długoterminowych eksperymentów przetrwania. Poniższy protokół zawiera wszystkie informacje techniczne dotyczące stabilnego i powtarzalnego modelu przeszczepu wątroby u świń, w tym pooperacyjnej opieki nad zwierzętami.

W pierwszym badaniu nad transplantacją model dawcy z bijącym sercem (HBD, n = 5) porównano z modelem DCD (n = 10) poddanym 45-minutowemu ciepłemu niedokrwieniu in situ. W obu grupach przeszczepy przechowywano w lodzie przez 10 h po pobraniu.
W grupie HBD 100% świń biorców przeżyło do końca okresu obserwacji w 5. dniu po transplantacji. W grupie DCD tylko 50% świń biorców przeżyło 5 dni z powodu problemów z krzepliwością lub dekompensacji metabolicznej, będących wynikiem obniżonej pooperacyjnej funkcji wątroby.
Wszystkie próbki krwi pobrano z centralnego cewnika żylnego. Po wirowaniu otrzymano próbki surowicy, które poddano analizie pod kątem uszkodzenia hepatocytów (aminotransferaza asparaginianowa, AST), funkcji dróg żółciowych (bilirubina całkowita i fosfataza alkaliczna) oraz funkcji wątroby (INR). Przebieg czasowy każdego markera przedstawiono na Rysunkach 2 - 5.
Poziomy AST osiągnęły szczyt po 24 h (1414 ± 538 U/L w grupie HBD i 2296 ± 1313 U/L w grupie DCD, p = 0,13) i powróciły do wartości niemal prawidłowych po 5 dniach. Podobnie wartości fosfatazy alkalicznej były znacznie zwiększone po 36 h w grupie DCD (224 ± 111 U/L) w porównaniu z grupą HBD (162 ± 54 U/L, p = 0,27). Podczas gdy całkowita bilirubina była stabilna w grupie HBD (≤ 10 µmol/L przez cały czas), w grupie DCD stopniowo wzrastała aż do 5. dnia (23 ± 31 µmol/L, p = 0,43). Duże odchylenie standardowe wartości bilirubiny w grupie DCD wskazuje na specyficzną heterogeniczność uszkodzenia dróg żółciowych w tej grupie. Wskaźnik INR jako marker funkcji wątroby wykazał trend podobny do wartości AST. Wartości osiągnęły szczyt w 24 h i powróciły do poziomów niemal prawidłowych po 5 dniach. Grupa HBD wykazała niższe wartości z szczytem na poziomie 1,47 ± 0,34 w porównaniu z grupą DCD (szczyt 1,70 ± 0,36, p = 0,32).
<img alt="Ustawienie sprzętu do pomostowania wątroby, przedstawiające cewniki i pompę odśrodkową na schemacie chirurgicznym." src="/files/ftp_upload/52055/52055fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Schemat bocznikowania wrotkowo-kawowo-żylnego. Pomost jest wypełniony roztworem Lactated Ringer’s. Następnie część kawowa zostaje zaciśnięta zaciskiem do drenów, części żylna i śledzionowa zostają połączone z wcześniej przygotowanymi cewnikami, pomost zostaje otwarty, a pompa odśrodkowa uruchomiona po zaciśnięciu żyły wrotnej. Po resekcji wątroby część kawowa pomostu zostaje wprowadzona i zabezpieczona w kikucie żyły głównej dolnej poniżej wątroby, powyżej żył nerkowych. Zacisk do drenów zostaje zwolniony, aby umożliwić dekompresję kawową, oprócz dekompresji wrotnej.
<img alt="Wyniki transplantacji; wykres testów funkcji wątroby, poziomy AST, HBD vs. DCD, oś czasu po operacji." src="/files/ftp_upload/52055/52055fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Aminotransferaza asparaginianowa (AST) (HBD n = 5, DCD n = 10). AST jest czułym markerem uszkodzenia hepatocytów. Szczyt po 24 h jest niższy w grupie HBD niż w grupie DCD, co sugeruje mniejsze uszkodzenie reperfuzyjne wątroby; mniejsze odchylenie standardowe wskazuje na bardziej jednorodne wyniki w grupie HBD.
<img alt="Wykres przedstawiający poziomy bilirubiny po przeszczepie; dwa zestawy danych, czas względem całkowitej bilirubiny (μmol/L)." src="/files/ftp_upload/52055/52055fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3. Bilirubina całkowita (HBD n = 5, DCD n = 10). Bilirubina całkowita, jako marker odpływu żółci i integralności przewodów żółciowych, wykazuje stabilny i jednorodny trend z wartościami poniżej 10 µmol/L w grupie HBD. Krzywa bilirubiny w grupie DCD stopniowo rośnie w czasie i wykazuje wysokie odchylenie standardowe, co sugeruje uszkodzenie dróg żółciowych jedynie w części grupy eksperymentalnej.
<img alt="Poziomy fosfatazy alkalicznej, czas transplantacji, wykres porównujący warunki HBD i DCD, wykres." src="/files/ftp_upload/52055/52055fig4.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rysunek 4. Fosfataza alkaliczna (HBD n = 5, DCD n = 10). Fosfataza alkaliczna jest wskaźnikiem uszkodzenia dróg żółciowych. Wartości dla grupy HBD są niższe niż dla grupy DCD, co sugeruje mniejszy stopień uszkodzenia dróg żółciowych.
<img alt="Porównanie wskaźnika INR po transplantacji, wykres liniowy; grupy HBD vs DCD w ciągu 5 dni, analiza statystyczna." src="/files/ftp_upload/52055/52055fig5.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 5"> 
Rycina 5. INR (HBD n = 5, DCD n = 10). Wysoka wartość INR wskazuje na upośledzoną funkcję hepatocytów z powodu zmniejszonego uwalniania czynników krzepnięcia. W obu grupach, HBD i DCD, wartości INR wracają do normy 5 dni po transplantacji, co sugeruje regenerację funkcji wątroby. Wartości dla grupy HBD wydają się być niższe.

Eksperymentalne badania na zwierzętach odgrywają kluczową rolę w rozwoju klinicznej praktyki transplantacyjnej. Ortotopowy model przeszczepiania wątroby u świń (OLTx) jest bardzo zbliżony do warunków panujących u ludzi i jest często stosowany w badaniach klinicznych. Poniższy protokół zawiera wszystkie informacje dotyczące wiarygodnego modelu OLTx świni przy użyciu aktywnej zastawki porto-caval-szyjnej.

Technika pozyskiwania wątroby świń i przeszczepu ortotopowego z wykorzystaniem aktywnej zastawki Porto-Caval

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

Ogólnym celem tej procedury jest wiarygodne przeprowadzenie allogenicznego przeszczepu wątroby u świń, zapewniając stabilną hemodynamikę zwierząt w trakcie i po operacji. Osiąga się to poprzez wdrożenie najpierw aktywnej zastawki wrotnej żyły szyjnej przed krzyżowym zaciśnięciem żyły CVA i żyły wrotnej, aby uniknąć przekrwienia jelit podczas fazy implantacji. Następnie wykonuje się ortotopowe przeszczepienie wątroby techniką endozastępczości, rozpoczynając od zespolenia z przewodem wątrobowym nadpaptowym.Następnie dochodzi do zespolenia żyły wrotnej i reperfuzji wątroby. Na koniec usuwa się przetokę wrotną żyły szyjnej i uzupełnia się pozostałe zespolenie żyły wątrobowej cva, tętnicy wątrobowej i przewodu żółciowego wspólnego. Ostatecznie świnia odstawiła znieczulenie i była ściśle monitorowana po operacji.Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak całkowita niedrożność naczyń krwionośnych lub bierne nachylenie, jest to, że w tej konkretnej technice całkowicie unika się przekrwienia śledziony podczas fazy anabolicznej. W ten sposób zapobiegamy nadciśnieniu żylnemu i uszkodzeniom naczyń włosowatych, które mogą prowadzić do poważnego niedokrwienia jelit i niestabilności hemodynamicznej Po wycięciu wątroby od świni dawcy i znieczuleniu świni biorcy zgodnie z protokołem tekstowym, umieściliśmy świnię biorcę w pozycji leżącej na stole operacyjnym na poduszce grzewczej. Po intubacji użyj geometrii nasadki, aby potwierdzić, że została wykonana prawidłowo za pomocą pulsoksymetrii na ogonie lub uchu świni.Monitoruj tętno i nasycenie tlenem. Wykonaj technikę Seldingera, aby wprowadzić induktor osłonki do lewej żyły szyjnej zewnętrznej, który zostanie później wykorzystany do aktywnego obejścia szyjnego wrotnego. Po wprowadzeniu cewnika do całkowitego żywienia pozajelitowego do prawej żyły szyjnej zewnętrznej w sterylnych warunkach, należy wypreparować prawą tętnicę szyjną i wprowadzić cewnik polipropylenowy w celu inwazyjnego monitorowania ciśnienia tętniczego.Następnie użyj dwóch jedwabnych krawatów zerowych, aby otoczyć tętnicę, aby umożliwić awaryjne podwiązanie. Następnie wykonaj laparotomię w linii środkowej i włóż retraktor brzuszny, aby uzyskać wystarczający dostęp do prawego górnego kwadrantu. Następnie w środkowych krokach podziel więzadło wątroby i dwunastnicy w pobliżu wątroby między wiązaniami.Zidentyfikuj, podziel i oznacz gałęzie tętnicy wątrobowej i przewodu żółciowego. Następnie rozetnij tętnicę wątrobową w kierunku wstecznym, aż dojdziesz do podziału tętnicy żołądkowo-dwunastniczej. Następnie uwolnij żyłę wrotną z przylegającej tkanki za pomocą elektrokoagulacji zmobilizowanej żylnej CVA z zaotrzewnowej po prawej stronie, aby odsłonić hel śledziony mniej więcej w połowie wzdłuż śledziony.Ostrożnie oczyść tętnicę śledzionową i żyłę z przylegających warstw otrzewnej. Następnie użyj jedwabnych opasek 4 2 0, aby otoczyć zarówno tętnicę śledzionową, jak i żyłę. Wprowadzić induktor 8,5 French Sheller z dwoma dodatkowymi otworami w końcówce cewnika do żyły śledzionowej, skierowany dystalnie w kierunku żyły wrotnej z jednym z dwóch opasek zerowych.Przymocuj cewnik dystalnie do jego wprowadzenia i użyj kolejnych dwóch opasek zerowych, aby zamknąć żyłę proksymalnie do wprowadzenia. Następnie wlej sól fizjologiczną do obejścia składającego się z głowicy pompy odśrodkowej, rurki szyjnej i dopływu zarówno z gałęzi portalowej, jak i gałęzi kawowej. Umieść rurkę clamp na bliższym końcu rurki kawałkowej.Następnie podłącz portal i otwór szyjny bypassu do obu cewników wprowadzających osłonę i użyj metalowego węża clamp pierścieniowy, aby uszczelnić połączenie. Umieść głowicę pompy odśrodkowej w pozycji pompy trzy minuty po podaniu dożylnie 1000 miligramów kwasu teksańskiego i 10 000 j.m. heparyny. Otwórz zaciski obu cewników wprowadzających osłonkę i zaciśnij krzyżowo żyłę wrotną.Następnie uruchom pompę odśrodkową z prędkością około 1 500 obrotów na minutę. Następnie za pomocą zacisku krzyżowego deba back clamp, żyła podwątrobowa CVA po prostu czaszkowa do żył nerkowych. Mocno uciskaj tkankę wątroby, aby wycisnąć część resztki krwi.Następnie za pomocą zacisku Statsky zaciskaj krzyżowo żyłę wątrobową sup, w tym obręcz przeponową, jednocześnie cofając wątrobę w mgnieniu oka. Teraz przeciąć CVA żyły nanadwątrobowej bezpośrednio na jej granicy z tkanką wątroby i przeciąć żyłę wrotną w pobliżu helu wątrobowego około czterech centymetrów czaszki do zacisku CVA podwątrobowego. Wytnij otwór w przedniej ścianie żyły głównej w tym otworze.Umieść złącze otworu obejściowego z zamkiem przynęty skierowanym do przodu z jednym zerowym jedwabnym opaskiem. Zabezpiecz złącze w podczerwieni wątrobowej cva. Następnie otwórz rurkę clamp odgałęzienia kablowego obejścia.Na koniec otwórz zacisk CVA podwątrobowy, aby umożliwić obejście kablowe szyjne oprócz istniejącego obejścia wrotnego szyjnego. Po zwiększeniu prędkości pompy do około 2 500 obrotów na minutę należy upewnić się, że odpływ obejścia po stronie szyjnej wynosi od 900 do tysiąca mililitrów na minutę. Za pomocą czterech zerowych monofilamentowych szwów polipropylenowych.Zamknij wszystkie trzy kości żyły przeponowej po stronie biorcy na szwie aperturowym wątroby CVA. Dwuramienne cztery zerowe szwy polipropylenowe monofilamentowe wewnątrz, na zewnątrz w obu rogach SUP wątrobowego CVA po stronie biorcy. Po umieszczeniu narządu dawcy w jamie brzusznej należy przyciąć żylę wątrobową CVA dawcy tak, aby pasowała do strony biorczej.Używając wewnętrznych igieł ściegów w rogu bocznym biorcy, wykonaj wewnętrzny ścieg w rogu zewnętrznym z każdej ze stron cva dawcy wątroby. Po przybliżeniu biorcy i dawcy Austria zawiąż oba końce lewego szwu. Następnie wykonaj zewnętrzny wewnętrzny ścieg tylnej ściany kavy odbiorcy obok krawata i przebiegnij po tylnej ścianie.Idealnie odwracając ścianę kava z pozostałym szwem biegnącym po przedniej ścianie od lewego rogu. Następnie zwiąż ze sobą oba szwy używane do tylnej i przedniej ściany. Po przycięciu żyły wrotnej dawcy do odpowiedniej długości, użyj sześciu zerowych monofilamentowych szwów polipropylenowych do wykonania zespolenia żyły wrotnej od końca do końca, jak właśnie pokazano na krótko przed ukończeniem przedniej ściany, użyj innej linii do płukania do intubacji światła podwątrobowego hava i jednym litrem soli fizjologicznej o temperaturze pokojowej.Wypłukać roztwór UW przez żyłę wrotną podwątrobową hava. Następnie należy wykonać zespolenie i zawiązać szwy pozostawiając około 0,5 centymetra czynnika wzrostu. Następnie umieść kolejny zacisk tylny deba na podwątrobowym cva dawcy.Otwórz zacisk S wątrobowy CVA i sprawdź, czy nie ma krwawienia. Następnie otwórz zacisk portalowy, aby ponownie sfuzjować wątrobę, ponownie zaciśnij stronę odbiorczą żyły głównej podwątrobowej i umieść zacisk rurki na części kablowej obejścia. Po zatrzymaniu pompy odśrodkowej odetnij opaski złącza kablowego i wyjmij je.Zwróć pozostałą krew z bypassu do świni przez cewnik szyjny. Teraz zamknij zacisk, cewnik szyjny i odłącz obejście. Następnie, po podaniu 100 miligramów siarczanu protaminy w celu zantagonizowania heparyny, użyj pięciu zerowych szwów monofilamentowych, aby wykonać zespolenie od końca do końca podwątrobowego cva.Ponownie, reperfuzja podwątrobowej dolnej CVA poprzez zwolnienie obu zacisków. Po przycięciu łaty aortalnej wokół pnia trzewnej dawcy, umieść zacisk buldoga na wspólnej tętnicy wątrobowej proksymalnie do połączenia tętnicy żołądkowo-dwunastniczej. Po przepłukaniu tętnicy wątrobowej heparyną, użyj sześciu zerowych monofilamentowych szwów polipropylenowych do annesti os.Zwyrodnienie tętnicze od końca do końca w technice spadochronu biegowego, a następnie reperfuzuj, otwierając najpierw dystalny, a następnie proksymalny zacisk buldoga za pomocą szwów monofilamentowych 2 6 0. Użyj techniki biegania, aby prześledzić przewód żółciowy od końca do końca. Po sprawdzeniu, czy nie ma hemostazy, usuń cewnik wprowadzający osłonkę z żyły śledziony.Użyj dwóch pozostałych opasek, aby zamknąć bliższy i dalszy koniec za pomocą wchłanialnego szwu monofilamentowego o rozmiarze jeden. Zamknij ścianę brzucha. Na koniec użyj zszywacza do skóry lub dwóch szwów zerowych, aby zamknąć skórę.Zapoznaj się z protokołem tekstowym, aby uzyskać informacje na temat opieki pooperacyjnej. W naszym pierwszym badaniu transplantacyjnym 100% świń otrzymujących wątrobę od dawcy bijącego serca lub HBD przeżyło do końca obserwacji pięć dni po przeszczepie. Jednak tylko 50% świń otrzymujących wątrobę od dawców po śmierci krążeniowej lub DCD dotrwało do pięciodniowej analizy kontrolnej próbek krwi z powodu uszkodzenia komórek wątrobowych.Czynność dróg żółciowych i wątroby wykazała, że poziom ST osiągnął szczyt po 24 godzinach w obu grupach. Było to znacznie wyższe w grupie DCD w porównaniu z grupą HCD i powrót do prawie normalnych wartości po pięciu dniach. Podobnie, jak pokazano na tym wykresie, wartości fosfatazy alkalicznej były znacznie zwiększone po 36 godzinach w grupie DCD w porównaniu z grupą HBD, jak pokazano tutaj.Podczas gdy bilirubina całkowita była stabilna w grupie HPD, stopniowo wzrastała w grupie DCD do piątego dnia i wykazuje wysokie odchylenie standardowe, co sugeruje uszkodzenie dróg żółciowych tylko w części grupy eksperymentalnej. Na tym rysunku INR jako marker czynności wątroby wykazywał tendencję podobną do wartości A ST, które osiągnęły szczyt po 24 godzinach i zostały przywrócone do prawie normalnych wartości. Po pięciu dniach po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak używać aktywnego bypassu żylnego podczas ortotopowego przeszczepu wątroby świni.W ten sposób zapewniamy stabilne i stabilne warunki podczas całego zabiegu.

technique-porcine-liver-procurement-orthotopic-transplantation-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiamy łatwą do wdrożenia modyfikację klasycznej techniki dwóch mankietów stosowanej w ortotopowym przeszczepieniu wątroby u szczura.

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Ortotopowe przeszczepienie wątroby u szczurów jest niezbędnym modelem eksperymentalnym w badaniach biomedycznych. W niniejszym materiale przedstawiamy procedury chirurgiczne ortotopowego przeszczepienia wątroby szczura z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej z wykorzystaniem 50% częściowego graftu.

Procedury chirurgiczne w szczurzym modelu częściowego ortotopowego przeszczepu wątroby z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej

Pomocniczy przeszczep wątroby zapewnia tymczasowe wsparcie w ostrej niewydolności wątroby, aż do regeneracji niewydolnej wątroby. Heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby (HALT) z tętnicą żyły wrotnej (PVA) zapewnia wystarczającą czynność wątroby. Opracowaliśmy analogiczną technikę na szczurach, aby zbadać wpływ tętnicy żyły wrotnej na morfologię i funkcję przeszczepu.

Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby

Rekonstrukcja żyły głównej nadwątrobowej (SHVC) pozostaje trudnym krokiem w ortotopowym przeszczepie wątroby u szczurów. W tym artykule przedstawiamy krok po kroku protokół rekonstrukcji SHVC u szczurów przy użyciu nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego.

Szczurzy model ortotopowego przeszczepu wątroby z wykorzystaniem nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego do rekonstrukcji żyły głównej nadwątrobowej

Ten protokół ma na celu opisanie izolacji hepatocytów świń i dostarczania genów ex vivo w celu leczenia modeli chorób metabolicznych poprzez autologiczny przeszczep komórek. Chociaż ten konkretny model cieszy się wyjątkowymi zaletami, które sprzyjają skutecznej terapii, aplikacja jest istotną podstawą do zajęcia się dodatkowymi chorobami i wskazaniami.

Terapia genowa hepatocytów ex vivo za pośrednictwem wektora lentiwirusowego do autologicznego przeszczepu u świń

W tym protokole opisany jest model ortotopowego przeszczepu wątroby u świń po statycznym przechowywaniu narządów dawcy w chłodni przez 20 godzin bez użycia bypassu żylno-żylnego podczas wszczepienia. Podejście to wykorzystuje uproszczoną technikę chirurgiczną z minimalizacją fazy bezwątrobowej oraz zaawansowanym zarządzaniem objętością i wazopresorem.

Przeszczepienie wątroby świni bez bypassu żylno-żylnego jako model dawcy o rozszerzonych kryteriach

Opisany tutaj świński model normotermicznej perfuzji maszynowej wątroby (NMP) może być z powodzeniem wykorzystany do badania NMP jako strategii zachowania, narzędzia do oceny żywotności i platformy do naprawy narządów. Ma wysoką wartość translacyjną, jednak jest trudny technicznie i pracochłonny.

Chorobowa normemmiczna izolowana perfuzja wątroby u świń

W tym protokole omawiamy implementację modelu udanego ortotopowego przeszczepu wątroby (OLT) u myszy. Dodatkowo omówiono adiuwanty do dalszej analizy drożności przeszczepu allogenicznego po udanym OLT u myszy, w szczególności z wykorzystaniem skanów tomografii mikrokomputerowej (microCT).

Udany ortotopowy przeszczep wątroby u myszy z wykorzystaniem angiografii tomografii mikrokomputerowej

Ten protokół przedstawia metodologię tworzenia modelu świń wykorzystującego zmienną perfuzję maszynową (MP) w celu zachowania wątroby dawcy, a następnie ortotopowego przeszczepu wątroby (OLTx). Ma on na celu zwiększenie wskaźnika powodzenia OLTx przy użyciu dawstwa wątroby po śmierci krążeniowej (DCD) i ustanowienie stabilnego modelu.

Zachowanie wątroby od dawców świń po śmierci krążeniowej (DCD) metodą perfuzji i ortotopowego przeszczepu wątroby

Ten protokół dostarcza informacji technicznych dotyczących rekonstrukcji naczyń krwionośnych przy użyciu techniki mankietowej w ortotopowym przeszczepie wątroby u myszy.

Rekonstrukcja naczyń krwionośnych techniką mankietową w ortotopowym przeszczepie wątroby u myszy

Poznaj technikę ortotopowego przeszczepu wątroby u świń z aktywnym pomostem porto-cavalno-jugularnym. Metoda zapewnia stabilną hemodynamikę, zapobiega zastojowi jelit i uszkodzeniom naczyń włosowatych podczas zabiegu.

Technika pozyskiwania wątroby świń i przeszczepu ortotopowego z wykorzystaniem aktywnej zastawki Porto-Caval

Przeglądaj więcej filmów