Name: Zakłócanie rekonsolidacji pamięci strachu u ludzi przez noradrenergiczny β-bloker (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Dowiedz się, jak zakłócać rekonsolidację pamięci strachu u ludzi za pomocą propranololu, noradrenergicznego β-blokera. Ta metoda umożliwia trwałe osłabienie skondycjonowanych odpowiedzi lękowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca jest wspierana przez grant VICI (Merel Kindt) od Holenderskiej Organizacji Badań Naukowych.

Oświadczenie etyczne: Nasz zatwierdzony przez lekarza protokół spełnia wymagania Komisji Etycznej Wydziału Psychologii Uniwersytetu w Amsterdamie dotyczące testowania uczestników na ludziach.
1. Dołączenie elektrod do przestraszenia i wstrząsu wzmocnionego strachem
<ol>
	<li>Upewnij się, że środowisko eksperymentalne składa się z wyciszonego pokoju uczestników i oddzielnego pokoju eksperymentatora.</li>
	<li>Wykorzystaj dwa komputery z czterema ekranami do nagrywania i monitorowania reakcji fizjologicznych, a także do prezentowania uczestnikom skryptu eksperymentalnego.</li>
	<li>Przymocuj dwustronne obroże samoprzylepne do elektrod EMG.</li>
	<li>Oczyść skórę uczestnika poniżej prawego lub lewego oka oraz na czole za pomocą wacika nasączonego alkoholem. Poinstruuj uczestników, aby trzymali oczy zamknięte, aby uniknąć potencjalnego podrażnienia oczu.</li>
	<li>Napełnij środek elektrod EMG wysoce przewodzącym żelem elektrolitowym za pomocą strzykawki. Nie próbuj napełniać elektrod poprzez sukcesywne nakładanie niewielkich ilości żelu, ponieważ zwiększa to ryzyko powstania pęcherzyków powietrza w żelu, co może negatywnie wpłynąć na nagrania.</li>
	<li>Podłącz jedną z elektrod EMG poniżej dolnej powieki prawego lub lewego oka w linii ze źrenicą w spojrzeniu do przodu. Przymocuj drugą około 1 - 2 cm bocznie do pierwszej, podążając za krzywizną dolnej powieki. Przymocuj odniesienie do podłoża na czole około 1 cm poniżej linii włosów. Optymalne umiejscowienie elektrod względem mięśnia może wymagać indywidualnej regulacji.</li>
	<li>Nałóż kroplę żelu przewodzącego na elektrody uderzeniowe i przymocuj je do lewego górnego nadgarstka za pomocą nylonowego paska na rzep. Upewnij się, że pasek nie jest zbyt ciasny.</li>
	<li>Dostosuj intensywność porażenia prądem trwającym 2 ms dla każdego uczestnika indywidualnie. Poinformuj uczestników, że wstrząs powinien być "nieprzyjemny, ale nie bolesny".</li>
	<li>Ręcznie uruchom wstrząsy. Zacznij od intensywności 1 mA i kontynuuj wyzwalanie pojedynczych wstrząsów – stopniowo zwiększając intensywność w krokach co 2 lub 3 mA – aż uczestnik wskaże, że wstrząs jest "nieprzyjemny, ale nie bolesny".</li>
	<li>Zapisz końcowy poziom szoku i utrzymuj go przez pozostałą część eksperymentu.</li>
</ol>
2. Przejęcie strachu - Dzień 1
Czas trwania około 45 min.
<ol>
	<li>Poinstruuj uczestników o dostarczaniu wstrząsów i możliwym podawaniu chlorowodorku propranololu. Ponadto należy ich poinformować, że propranolol HCl jest stosowany w leczeniu nadciśnienia tętniczego. Uzyskaj pisemną świadomą zgodę.</li>
	<li>Przebadaj uczestników pod kątem ich stanu zdrowia i wszelkich stanów, które byłyby przeciwwskazaniem do przyjęcia pojedynczej dawki 40 mg propranololu HCl: ciąża, zaburzenia napadowe, zaburzenia oddychania, choroby układu krążenia, choroby układu krążenia u krewnych pierwszej linii, cukrzyca, zaburzenia wątroby lub nerek, obecne stosowanie leku przeciwdepresyjnego lub psychoza.</li>
	<li>Uzyskaj pomiary ciśnienia krwi i tętna za pomocą elektronicznego ciśnieniomierza. Poproś uczestników, aby zdjęli rękę z rękawów i bezpiecznie założyli nadmuchiwany mankiet na ramię. Poinstruuj uczestników, aby zrelaksowali się i usiedli z ręką lekko zgiętą na tym samym poziomie co serce i wygodnie spoczywali na stole lub innej płaskiej powierzchni. Aby włączyć do eksperymentu, ciśnienie krwi powinno wynosić powyżej 90/60 mmHg, a tętno powyżej 60 uderzeń na minutę.</li>
	<li>Podawaj Inwentarz Stanu i Cechy Lęku42 i Indeks Wrażliwości na Lęk43, gdy uczestnik zostanie medycznie oczyszczony. Podawaj również Kwestionariusz Rafobii44, używając zdjęć pająków jako bodźców warunkowych.</li>
	<li>Ustaw uczestników przed ekranem komputera i podłącz elektrody EMG i elektrody uderzeniowe (patrz sekcja 1 "Mocowanie elektrod Strach Wzmocnionych Strachem i Elektrod Szokowych").</li>
	<li>Użyj dwóch różnych procedur uczenia się — patrz kroki 2.6.1 i 2.6.2. Poinformuj uczestników o dwóch różnych obrazkach, które zobaczą na ekranie komputera. Poinstruuj ich, aby monitorowali związek między obrazami, które widzą, a momentem, w którym otrzymują wstrząs.
	<ol>
		<li>Uczenie się nieasymptotyczne: Poinformuj uczestników, że w większości przypadków po jednym z obrazów nastąpi porażenie prądem, podczas gdy po drugim nigdy nie nastąpi wstrząs.</li>
		<li>Uczenie się asymptotyczne: Poinformuj uczestników, po którym z dwóch obrazków zawsze nastąpi porażenie prądem, a po którym obrazie nigdy nie nastąpi wstrząs (np. instruowane uczenie się strachu).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Poinformuj uczestników o głośnych dźwiękach, które usłyszą przez słuchawki. Powiedz im, aby nie zwracali uwagi na hałasy.</li>
	<li>Poinstruuj uczestników, aby poinformowali o oczekiwanym porażeniu prądem podczas prezentacji wszystkich zdjęć, przesuwając kursor na ciągłych skalach ocen za pomocą myszy i naciskając lewy przycisk myszy w ciągu 5 sekund po wystąpieniu bodźca, aby potwierdzić ich oczekiwanie. Upewnij się, że waga składa się z 11 punktów oznaczonych od "na pewno nie ma porażenia prądem" przez "niepewne" do "na pewno porażenie prądem". Prezentuj skale w sposób ciągły u dołu ekranu komputera, aby pomóc uczestnikom skupić uwagę na obrazkach. Gdy obrazy znikną, kursor powinien automatycznie powrócić do pozycji "niepewnej".</li>
	<li>Powiedz uczestnikom, aby nie spuszczali wzroku z ekranu i siedzieli tak nieruchomo, jak to możliwe, z obiema rękami ułożonymi w zrelaksowanej pozycji z nadgarstkami uniesionymi do góry na biurku przed nimi. Załóż słuchawki. Przyciemnij światła i zamknij drzwi. Rozpocznij eksperyment w drugim pokoju.</li>
	<li>Podczas akwizycji strachu jeden z dwóch obrazów kończy się równolegle z szokiem: CS1, podczas gdy drugi nigdy nie następuje po wstrząsie: CS2. Wykorzystaj bodźce związane ze strachem, aby wzmocnić skojarzenie strachu podczas przyswajania. Na przykład zdjęcia pająków: numery IAPS 1200 - 1201.</li>
	<li>Prezentuj zarówno CS1, jak i CS2 przez 8 sekund. Głośne dźwięki lub sondy zaskoczenia - 40 ms i 104 dB - są prezentowane 7 sekund po rozpoczęciu CS, a w przypadku CS1 po nich następuje porażenie prądem o długości 2 ms 500 ms później.</li>
	<li>Rozpocznij rzeczywiste uczenie się strachu, przedstawiając dziesięć podstawowych sond strachu, aby zmniejszyć początkową reaktywność strachu:
	<ol>
		<li>Uczenie się nieasymptotyczne: Przedstaw w sumie 8 prób CS1 na schemacie 75% wzmocnienia: 6 prób CS1 jest wzmocnionych przez szok - pierwsza i piąta próba są niewzmocnione. Dalej przedstawia 8 badań CS2 oraz 8 badań NA w odstępach międzypróbnych.</li>
		<li>Uczenie asymptotyczne: Przedstaw w sumie 3 próby CS1 na schemacie 100% wzmocnienia: wszystkie próby CS1 są wzmacniane przez szok. Ponadto zaprezentuj 3 próby CS2, a także 3 sondy ostrzegawcze z samym hałasem (NA) w odstępach między próbami.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przeciwwaga dla przypisywania obrazów jako CS1 i CS2 między uczestnikami. Losowo dobieraj kolejność typów prób w blokach CS1 - CS2 - NA tak, aby żaden typ próby nie powtarzał się więcej niż dwa razy. Zmieniaj interwały między próbami – podczas których uczestnicy widzą ekran – między 15 sekundami, 20 sekundami i 25 sekundami, ze średnią 20 sekund.</li>
	<li>Po zakończeniu eksperymentu odłącz elektrody i pozwól uczestnikom oczyścić żel.</li>
	<li>Poinstruuj uczestników, aby ocenili przyjemność szoku na 11-punktowej skali ocen w zakresie od minus 5 (tj. nieprzyjemny) do 5 (tj. przyjemny).</li>
	<li>Wyraźnie poinstruuj uczestników, aby zapamiętali to, czego nauczyli się podczas nabywania strachu, aby zwiększyć retencję awaryjną CS-US w następnych dniach, a także zapobiec błędnemu oczekiwaniu innego schematu awaryjnego podczas kolejnych testów. Ponadto, aby ułatwić pobranie próbek śliny następnego dnia, poinstruuj uczestników, aby powstrzymali się od ćwiczeń, kofeiny i alkoholu w ciągu 12 godzin oraz unikali jedzenia i picia innych niż woda, a także palenia tytoniu i szczotkowania zębów w ciągu 2 godzin przed następną sesją.</li>
	<li>Po użyciu dokładnie wyczyść elektrody wodą: pozbądź się całego żelu, nie rysując żadnej części warstwy AgCl. Po oczyszczeniu nie wycieraj wody, ale użyj innego zestawu elektrod na następnym uczestniku i pozwól drugiemu zestawowi wyschnąć z czasem.</li>
</ol>
3. Reaktywacja pamięci - Dzień 2
Czas trwania około 105 min.
<ol>
	<li>Losowo przypisz uczestników do stanu propranololu HCl lub pigułki placebo z ograniczeniem, że warunki są dopasowane pod względem wyników STAI tak blisko, jak to możliwe, biorąc pod uwagę, że lęk przed cechą determinuje zmniejszające strach skutki zakłócenia rekonsolidacji45. Dopasuj uczestników do wyników SPQ, a także używając zdjęć pająków jako bodźców warunkowych.</li>
	<li>Uzyskaj pomiary ciśnienia krwi i tętna, a także próbki śliny: poinstruuj uczestników, aby po prostu umieścili wacik w ustach na około 3 minuty. Po usunięciu należy utrzymać ślinę w temperaturze minus 25°C.</li>
	<li>W przypadku warunku braku reaktywacji propranololu przejdź do kroku 4.8.1.</li>
	<li>Ustaw uczestników przed ekranem komputera i podłącz elektrody EMG i elektrody uderzeniowe (patrz rozdział 1 "Mocowanie elektrod do przestraszenia i wstrząsu wzmocnionego strachem"). Poinformuj uczestników, że intensywność wstrząsu pozostanie taka sama.</li>
	<li>Poinformuj uczestników, że te same dwa obrazki zostaną wyświetlone na ekranie komputera i poproś ich, aby przypomnieli sobie, czego nauczyli się poprzedniego dnia - po jednym z obrazków ponownie nastąpi porażenie prądem w większości (tj. uczenie się nieasymptotyczne) lub we wszystkich przypadkach (tj. uczenie się asymptotyczne), podczas gdy po drugim nigdy nie nastąpi wstrząs. Poinstruuj uczestników, aby podczas prezentacji wszystkich zdjęć poinformowali o spodziewanym porażeniu prądem. Załóż słuchawki i przyciemnij światła. Zamknij drzwi i rozpocznij eksperyment z drugiego pokoju.</li>
	<li>Rozpocznij reaktywację pamięci, prezentując 10 podstawowych sond przestraszenia, aby zmniejszyć początkową reaktywność przestraszenia. Następnie przedstawiono pojedynczą niewzmocnioną próbę CS1, po której następuje pojedyncze badanie NA.</li>
	<li>Odłącz uczestników od zestawu eksperymentalnego i pozwól im oczyścić żel. Posadź ich za drugim stołem.</li>
	<li>Podawać "podwójnie ślepą" doustną dawkę tabletki placebo lub 40 mg chlorowodorku propranololu. Tabletki powinny być zaślepione przez aptekę lub kolegę niezależnie od badania. Ponadto uważa się, że po podaniu leku konieczny jest lekarz dyżurny posiadający wiedzę na temat protokołu.
	<ol>
		<li>Podawać "pojedynczo ślepą" doustną dawkę 40 mg chlorowodorku propranololu w stanie braku reaktywacji propranololu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wstaw okres odpoczynku trwający około 90 minut. Zaproponuj uczestnikom czasopisma do czytania. W międzyczasie wyczyść elektrody.</li>
	<li>Ponownie uzyskaj pomiary ciśnienia krwi i tętna, a także próbki śliny.</li>
</ol>
4. Test - Dzień 3
Czas trwania około 45 min.
<ol>
	<li>Uzyskaj pomiary ciśnienia krwi i tętna.</li>
	<li>Ustaw uczestników przed ekranem komputera i przymocuj elektrody EMG i elektrody uderzeniowe. Ponownie poinformuj uczestników, że intensywność wstrząsu pozostanie taka sama.</li>
	<li>Poinstruuj uczestników, że te same dwa obrazki zostaną wyświetlone na ekranie komputera. Ponownie poinstruuj uczestników, aby poinformowali o spodziewanym porażeniu prądem podczas prezentacji wszystkich zdjęć. Załóż słuchawki i przyciemnij światła. Zamknij drzwi i rozpocznij eksperyment z drugiego pokoju.</li>
	<li>Rozpocznij eksperyment od przedstawienia 10 podstawowych sond przestraszających. Podczas wymierania obecnych jest około 12 niewzmocnionych prób CS1 i CS2, a także 12 prób NA. Po wyginięciu uczestnicy otrzymują trzy niesygnalizowane US: przywrócenie. Ponownie zaprezentuj uczestnikom około 4 niewzmocnionych prób CS1 i CS2, a także 4 próby NA po niesygnalizowanych testach przywracania w USA.</li>
	<li>Odłącz elektrody i pozwól uczestnikom oczyścić żel. Zapłać uczestnikom niewielką kwotę za udział w eksperymencie. Dokładnie wyczyść elektrody wodą.</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W serii badań konsekwentnie wykazujemy, że niezależnie od płci, 40 mg beta-blokera noradrenergicznego propranololu podawane przed lub po reaktywacji pamięci skutecznie neutralizuje uwarunkowaną reakcję strachu (tj. obronną reakcję strachu). Żaden z czterech mechanizmów nawrotu – przywrócenia, odnowienia, spontanicznego powrotu do zdrowia i szybkiego ponownego nabycia – nie zaobserwowano po przerwaniu rekonsolidacji propranololem27-32,37. Warto zauważyć, że efekty neutralizujące strach zaobserwowano tylko dla obronnej reakcji strachu, ale ani dla oceny oczekiwanej zagrożenia, ani dla przewodnictwa skóry. Dane dotyczące kondycjonowania elektrodermalnego nie są tutaj podane, ponieważ ogólne wzorce SCR nie odbiegały znacząco od ocen oczekiwanej długości. W badaniach nad warunkowaniem strachu u ludzi uzyskuje się zwykle wiele wskaźników reakcji warunkowej (np. oczekiwanie US, SCR, reakcja na zaskoczenie, rozszerzenie źrenicy, aktywność neuronalna) ze względu na walidację krzyżową46. Jednak obecnie istnieją przekonujące dowody na to, że te różne poziomy odpowiedzi niekoniecznie działają zgodnie, a nawet mogą się od siebie oddzielać3,27-32,34,37,47. Należy zauważyć, że reakcja zaskoczenia jest automatycznym odruchem obronnym, który jest wzmacniany w odpowiedzi na CS, który jest związany z US o ujemnej wartościowości i generalnie nie można go zaobserwować w przypadku USS o neutralnej lub dodatniej walencji47,48 (np. stymulacja wibrodotykowa lub zadanie czasu reakcji). W związku z tym nasilenie defensywnego odruchu zaskoczenia jest wiarygodnym i specyficznym wskaźnikiem warunkowania awersyjnego34. Natomiast kondycjonowanie SCR może wystąpić niezależnie od wartościowości US47,48. Biorąc pod uwagę, że wartościowość afektywna USA nie modyfikuje SCR, kondycjonowanie elektrodermalne jest niespecyficzną miarą pobudzenia antycypacyjnego. Dlatego uważamy, że SCR jest mniej odpowiedni jako miara behawioralna w badaniach nad warunkowaniem awersyjnym u ludzi.
Jeśli spekulujemy na temat przełożenia tych wyników na praktykę kliniczną, należy wziąć pod uwagę kilka kwestii i potencjalnych ograniczeń. Po pierwsze, można zadać sobie pytanie, czy farmakologiczna manipulacja za pomocą beta-adrenolityku noradrenergicznego jest rzeczywiście konieczna, aby zakłócić proces rekonsolidacji, czy też procedura behawioralna mająca na celu zakłócenie rekonsolidacji przyniosłaby podobny efekt neutralizujący. Mimo że jednosesyjne leczenie niską dawką propranololu jest wyraźnie nietoksyczne, zawsze preferowana jest całkowicie behawioralna procedura niż interwencja farmakologiczna. Rzeczywiście istnieje alternatywna metoda, w której trening wymierania jest prezentowany w oknie rekonsolidacji49. W kilku badaniach nie udało się jednak powtórzyć tych oryginalnych ustaleń Schillera i wsp. 29,50-52 , ale patrz 53,54. Oprócz tych sprzecznych wyników, innym potencjalnym ograniczeniem wygaszania w procedurze reaktywacji byłoby to, że w praktyce klinicznej reakcja strachu na ogół nie jest wygaszona w jednosesyjnym leczeniu ekspozycją. Na przykład, wyimaginowana ekspozycja dla pacjentów z PTSD tradycyjnie wymaga dziesięciu sesji, zanimstrach ustąpi. Tak więc, nawet uznając oczywiste wady prostego leczenia farmakologicznego w porównaniu z interwencją całkowicie behawioralną, uważamy, że manipulacja noradrenergiczna rekonsolidacją pamięci wydaje się być bardziej wykonalna niż wygaśnięcie w oknie rekonsolidacji.
Druga kwestia dotyczy optymalnych warunków do wywołania rekonsolidacji pamięci. Istnieje coraz więcej dowodów na to, że mechanizmy pośredniczące w behawioralnym wyrażaniu lęku są wyraźnie oddzielone od mechanizmów pośredniczących w procesie rekonsolidacji31,32,56-60. Na przykład, ostatnie badania na zwierzętach ujawniły zróżnicowane i dysocjujące receptory w ciele migdałowatym podstawno-bocznym, pośredniczące w ekspresji, destabilizacji i restabilizacji wcześniej uwarunkowanych wspomnień strachu61,62. Behawioralny wyraz pamięci strachu jest nie tylko oddzielony od procesów pośredniczących w reaktywacji pamięci (tj. dostępu do śladu pamięciowego), ale wydaje się również, że nie jest niezbędny do wystąpienia rekonsolidacji61. W związku z tym wyrażanie strachu podczas reaktywacji pamięci nie informuje o tym, czy ślad pamięciowy wchodzi w fazę labilną. Biorąc pod uwagę, że destabilizacja pamięci jest warunkiem wstępnym, aby beta-bloker noradrenergiczny zakłócał proces restabilizacji, ważnym pytaniem jest, w jaki sposób możemy wywnioskować skuteczną destabilizację pamięci w praktyce klinicznej. Wiele wyników wskazuje, że kluczowym czynnikiem w indukowaniu rekonsolidacji i odróżnieniu rekonsolidacji od odzyskiwania pamięci lub konsolidacji nowej pamięci38,63 jest stopień błędu przewidywania wywołanego podczas odzyskiwania pamięci31,32. Biorąc jednak pod uwagę, że nie ma obiektywnego kryterium, które pozwoliłoby określić optymalny stopień błędu przewidywania w praktyce klinicznej, obecnych wyników badań laboratoryjnych nie można łatwo przełożyć na protokoły leczenia.
Kolejnym wyzwaniem związanym z przełożeniem literatury z zakresu neuronauki na praktykę kliniczną jest ekologiczna zasadność paradygmatu. Dowody na zakłócenie rekonsolidacji zostały pokazane głównie u zwierząt i ludzi w przypadku stosunkowo nowych (sprzed jednego dnia) i prostych wspomnień strachu (tj. szok tonalny; szok obrazowy). Nie jest oczywiste, że zakłócanie rekonsolidacji starszych, silniejszych i szerszych sieci pamięci, takich jak u pacjentów z PTSD, jest tak skuteczne, jak wykazano w laboratorium w przypadku warunkowania strachu. Również w odniesieniu do zmiennej zależnej nadal nie jest jasne, czy obserwacje z badań laboratoryjnych na zwierzętach i ludziach uogólniają się na pacjentów z zaburzeniami lękowymi. Efekty redukujące strach są do tej pory wykazywane głównie w przypadku behawioralnej ekspresji warunkowania awersyjnego (tj. zachowania zamrożenia u gryzoni lub obronnego odruchu strachu u ludzi), z jednym tylko wyjątkiem, w którym wykazaliśmy, że również subiektywne uczucia niepokoju zostały znacząco zneutralizowane przez noradrenergiczną blokadę rekonsolidacji pamięci37. Można zadać sobie pytanie, czy te efekty redukujące strach w laboratorium wskazują na typowe doświadczenia strachu i zachowań unikających charakterystycznych dla pacjentów z zaburzeniami lękowymi. Przyszłe badania powinny zbadać, czy obecne odkrycia rzeczywiście uogólniają się na zachowania unikające, jeden z głównych objawów zaburzeń lękowych.
Podsumowując, choć procedura warunkowania awersyjnego Pawłowa jest doskonałym narzędziem do badania podstawowych mechanizmów uczenia się strachu i pamięci, nie możemy łatwo przełożyć wyników badań laboratoryjnych na praktykę kliniczną. Zdobyte przez nas spostrzeżenia na temat optymalnych, brzegowych i koniecznych warunków rekonsolidacji pamięci powinny być traktowane jedynie jako punkt wyjścia do opracowania terapii opartych na rekonsolidacji. Z drugiej strony, szeroko zakrojone badania nad treningiem wyginięcia zaowocowały interwencjami opartymi na ekspozycji, które nadal należą do najskuteczniejszych metod leczenia zaburzeń lękowych i innych powiązanych zaburzeń. Biorąc pod uwagę, że noradrenergiczna blokada rekonsolidacji pamięci przyćmiewa przeciwlękowy efekt uczenia się przez wygaszanie, zakłócenie rekonsolidacji wskazuje na obiecującą nową interwencję, która skutecznie zmniejszy nadmierne i irracjonalne lęki.

Nasze mózgi są zaprogramowane do nauki. Ludzie są dobrze wyposażeni w zdolność uczenia się potencjalnych zagrożeń w życiu, a być może nawet ważniejsze jest poznanie predyktorów niebezpieczeństwa. Warunkowanie awersyjne Pawłowa jest doskonałym narzędziem do badania asocjacyjnego uczenia się strachu nie tylko u ludzi, ale także w szerokim zakresie organizmów1,2. Procedura ta polega na przedstawieniu nieszkodliwego, biologicznie neutralnego bodźca warunkowego (CS, np. tonu lub obrazu) szkodliwemu lub szkodliwemu bodźcowi bezwarunkowemu (US), zwykle łagodnemu porażeniu prądem. Jeśli CS stanie się wiarygodnym predyktorem USA, CS wywoła typowe dla gatunku uwarunkowane reakcje behawioralne (np. zastygnięcie w bezruchu u szczurów i wzmocniony odruch przerażenia u ludzi), które są konceptualizowane jako wyraz strachu (patrz 3 dla krytycznych komentarzy do tej terminologii). Badania nad warunkowaniem awersyjnym nie tylko przyczyniają się do lepszego zrozumienia molekularnych i komórkowych procesów kojarzenia strachu, uczenia sięi pamięci4, ale także stanowią podstawę do zrozumienia etiologii i przebiegu zaburzeń lękowych5. Warto jednak wspomnieć, że zaburzenia lękowe niekoniecznie wynikają z bezpośrednich doświadczeń warunkowających, takich jak traumatyczne wydarzenia. Mogą one również wynikać z pośrednich lub zastępczych doświadczeń związanych z uczeniem się strachu6. Ale niezależnie od historii uczenia się, asocjacyjna pamięć strachu leży u podstaw zaburzeń lękowych. Paradygmat warunkowania Pawłowa nie tylko udowodnił swoją przydatność w zrozumieniu pochodzenia zaburzeń lękowych, ale jest również doskonałym modelem translacyjnym do rozwoju i postępu w leczeniu zaburzeń lękowych5.
W laboratorium dwie najszerzej badane procedury redukcji wyuczonego strachu to (1) wygaszanie i (2) zakłócanie rekonsolidacji. Mimo że trening wygaszania – tj. powtarzająca się ponowna ekspozycja na CS7,8 bez wzmocnienia – jest skuteczną strategią przeciwlękową, badania nad warunkowaniem strachu na zwierzętach i ludziach niezawodnie pokazują, że uwarunkowana reakcja strachu może łatwo powrócić poprzez ponowną ekspozycję na niesygnalizowane USG (tj. przywrócenie), zmianę kontekstu (tj. odnowienie) lub upływ czasu (tj. spontaniczne wyzdrowienie)7,9,10. Panuje konsensus co do tego, że uczenie się przez wygaszanie nie wymazuje pierwotnego wspomnienia strachu, ale zamiast tego odzwierciedla tworzenie się nowej pamięci hamującej. W konsekwencji wspomnienie strachu może się ponownie pojawić, powodując powrót strachu nawet po pierwotnie udanym wygaszeniu strachu. Różne źródła nawrotów są nadal poważnym wyzwaniem dla praktyki klinicznej.
Alternatywnym podejściem do zmniejszania reakcji na uwarunkowany strach jest niedawno (ponownie) odkryta procedura zakłócania rekonsolidacji pamięci za pomocą środków farmakologicznych. Ta procedura jest bardzo obiecująca, ponieważ nie tylko zmniejsza uwarunkowane reakcje strachu, ale nawet wydaje się wymazywać asocjacyjną pamięć strachu, co może ostatecznie rozwiązać problem nawrotu.
Rekonsolidacja pamięci odnosi się do dwufazowego procesu, w którym poprzednio skonsolidowane wspomnienia przechodzą do przejściowego stanu zdestabilizowanego podczas pobierania i wymagają zależnej od czasu restabilizacji, aby przetrwać14-18. Transkrypcja genów, synteza białek i RNA są niezbędne do tej restabilizacji i dają możliwość czynnikom amnezyjnym wpływania na pamięć strachu. Amnezja z powodu wyuczonego strachu została wykazana u zwierząt przez leki (np. anizomycynę) ukierunkowane na wymaganą syntezę białek14,19,20 lub uwalnianie neuroprzekaźników21,22. Synteza białek może być również zaburzona przez noradrenergiczny beta-adrenolik propranolol, który ma hamować stymulowaną noradrenaliną fosforylację CREB23-25. Działanie propranololu redukujące strach wykazano u zwierząt i ludzi26-32. W serii badań dyskryminacyjnych związanych z warunkowaniem strachu konsekwentnie wykazaliśmy, że propranolol (40 mg) podawany przed lub po reaktywacji pamięci skutecznie zmniejszał uwarunkowaną reakcję strachu i zapobiegał nawrotowi strachu u zdrowych uczestników.
Dowód zasady
Podstawowy projekt używany w naszych badaniach nad warunkowaniem strachu na zakłócaniu rekonsolidacji obejmuje testowanie przez różne fazy przez trzy kolejne dni w odstępie co najmniej 24 godzin, aby (1) wesprzeć (re)konsolidację wspomnień i (2) pozwolić narkotykowi wypłukać się przed testem. W dniu 1 - fazie nabywania strachu, zdrowi uczestnicy są wystawieni na serię prezentacji obrazkowych. Jeden bodziec obrazowy (CS1+) jest wielokrotnie łączony z awersyjnym bodźcem elektrycznym (US), co skutkuje nabyciem skojarzenia strachu, podczas gdy inny bodziec obrazowy (CS2-) nigdy nie następuje po US. W dniu 2 - fazie reaktywacji pamięci, ponowna ekspozycja na niewzmocniony bodziec warunkowy (CS1-) zazwyczaj wywołuje uwarunkowaną reakcję strachu. W tej fazie podajemy ogólnoustrojowo 40 mg propranololu HCl, antagonisty receptora β-adrenergicznego, który pośrednio celuje w syntezę białek wymaganą do rekonsolidacji25. Ze względu na maksymalne stężenia propranololu33 w osoczu, w naszych pierwszych eksperymentach podaliśmy doustną dawkę propranololu 90 minut przed reaktywacją wspomnienia strachu. Jednakże, aby uzyskać bardziej optymalny test rekonsolidacji, środek amnezyjny powinien być podawany po reaktywacji pamięci. Dlatego w naszych ostatnich eksperymentach zawsze podawaliśmy propranolol po reaktywacji pamięci z bardzo podobnymi wynikami. W dniu 3 - fazie testu, zachowanie pamięci strachu jest testowane 24 godziny po interwencji (tj. pierwsza próba testowa dzień 3), po której następuje procedura wygaszania i wyzwalacze sytuacyjne w celu sprawdzenia powrotu strachu (tj. przywrócenie, odnowienie, spontaniczne wyzdrowienie, szybkie ponowne przejęcie). W celu ustalenia, czy działanie propranololu wymaga aktywnego odzyskiwania wspomnienia strachu, lek powinien być podawany innej grupie uwarunkowanej strachem bez reaktywacji pamięci (tj. warunek braku reaktywacji propranololu)27,28. Wykorzystaliśmy nasilenie odruchu przerażenia jako miarę reagowania na uwarunkowany strach oraz internetowe oceny oczekiwań w USA jako wskaźnik uczenia się awaryjnego. Nasilenie odruchu strachu jest pojmowane jako specyficzny i wiarygodny wskaźnik strachu34, któremu służy ciało migdałowate35. Najczęściej stosowanym bodźcem wywołującym przerażenie jest "sonda przestraszenia", głośny dźwięk, który jest emitowany przez słuchawki podczas bodźca lub w przerwie między dwoma prezentacjami bodźca (tj. interwały międzypróbne)36. Silniejsze reakcje zaskoczenia na głośny hałas podczas bodźca warunkowanego strachem (CS1+) w porównaniu z bodźcem kontrolnym (CS2-) odzwierciedlają stan strachu uczestnika wywołany przez bodziec, którego się obawia (CS1+).
W serii 10 kolejnych eksperymentów na niezależnych próbkach 27-32,37 konsekwentnie powtórzyliśmy nasze pierwotne odkrycie, gdzie zakłócenie rekonsolidacji pamięci strachu przez beta-adrenergiczny bloker propranolol HCl skutecznie zmniejszyło warunkowy odruch strachu i zapobiegło nawrotowi strachu27. Obserwacje, że ekspozycja na pierwotne wzmacniacze (tj. przywrócenie), zmiana kontekstu (tj. odnowienie) lub zwykły upływ czasu (tj. spontaniczne powrót do zdrowia) nie doprowadziły do ponownego pojawienia się uwarunkowanej reakcji strachu, jak to zwykle obserwuje się po treningu wygaszania, potwierdzają wyższość zakłócania rekonsolidacji nad uczeniem się wygaszania. Oprócz tych technik odzyskiwania, uczenie się reakwizycji nie ujawniło żadnych oszczędności w stosunku do wcześniej wyuczonej reakcji strachu. Podsumowując, odkrycia te sugerują, że zakłócenie rekonsolidacji asocjacyjnej pamięci strachu przez propranolol skutecznie zmniejszyło emocjonalną ekspresję pamięci strachu.
Ponadto, przetestowaliśmy kilka warunków brzegowych i koniecznych do przerwania rekonsolidacji: (1) Sesja reaktywacji pamięci wydaje się proceduralnie podobna do treningu wygaszania (tj. niewzmocnionej ekspozycji), ale powinna obejmować mniej prób bez wzmocnienia niż trening wygaszania, ponieważ beta-blokery noradrenergiczne (np. propranolol) mogą również zakłócać tworzenie pamięci wygaszania, zamiast celować w pierwotne wspomnienie strachu38,39; (2) Odzyskiwanie pamięci nie jest wystarczające do rekonsolidacji pamięci18,31,40,41. Propranolol zmniejszał tylko uwarunkowany strach, gdy podczas sesji odzyskiwania można było się czegoś nauczyć31,32. Rozbieżność między tym, czego już się nauczyliśmy, a tym, czego można się nauczyć podczas danej sesji wyszukiwania (tj. błąd przewidywania) wydaje się być niezbędna do wywołania rekonsolidacji asocjacyjnej pamięci strachu32. Wyniki wskazują, że wystąpienie błędu predykcji jest warunkiem koniecznym do rekonsolidacji i stanowi użyteczne narzędzie do opracowywania i optymalizacji terapii opartych na rekonsolidacji u pacjentów cierpiących na zaburzenia lękowe.

<table><tbody><tr><td>2 komputery z 4 ekranami</td><td>Dell</td><td>Optiplex 9010</td><td>Rejestracja i monitorowanie reakcji fizjologicznych. Prezentacja skryptu eksperymentalnego.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Wzmacniacz</td><td>Opracowano przez B. Molenkampa – Uniwersytet Amsterdamski</td><td></td><td>Zaprojektowany w oparciu o wzmacniacz Burr Brown INA101 oraz stop izolacyjny ISO103.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>VSSRP98&amp;nbsp;</td><td>Opracowano przez B. Molenkampa – Uniwersytet w Amsterdamie</td><td></td><td>Oprogramowanie do rejestracji fizjologicznej. Rejestracja aktywności elektromiograficznej (EMG) przy użyciu dołączonej pary przewodów elektrod podłączonych do wzmacniacza wejściowego o rezystancji wejściowej 10 MΩ.&amp;Omega; oraz pasmo przenoszenia od DC do 1500 Hz. Surowe sygnały EMG są integrowane w wzmacniaczu. Zintegrowane sygnały EMG są próbkowane z częstotliwością 1000 Hz i wykorzystywane do analizy danych.</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td></td><td>Analiza danych. Amplitudy szczytów wyznacza się poprzez obliczenie różnic między linią bazową (50 ms przed początkiem impulsu badawczego) a szczytami w przedziale czasowym od 30 do 150 ms po początku impulsu badawczego; wartości zapisuje się w mikrowoltach.</td></tr><tr><td>Prezentacja</td><td>NeuroBehavioral Systems Inc. - USA</td><td></td><td>Prezentacja bodźców.</td></tr><tr><td>&lt;a href="http://digitimer.com/products/clinical-neurophysiology/ds7aah-psarp-peripheral-stimulators/" target="_blank"&gt;Stymulator prądowy stały&lt;/a&gt;</td><td><a href="http://www.digitimer.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Digitimer Ltd.</a></td><td>&lt;a href="http://digitimer.com/products/clinical-neurophysiology/ds7aah-psarp-peripheral-stimulators/ds7a-ds7ah-hv-constant-current-stimulator-clinical-product/" target="_blank"&gt;DS7A&lt;/a&gt;</td><td>Generuje stymulację elektryczną</td></tr><tr><td>Elektrody do defibrylacji</td><td>Opracowane przez B. Molenkampa - Uniwersytet Amsterdamski</td><td></td><td>Elektrody Ag o wymiarach 20 mm x 25 mm z ustalonym średnim odstępem międzyelektrodowym wynoszącym 45 mm.</td></tr><tr><td>Słuchawki</td><td>Sennheiser Electronic GmbH &amp;amp; CO – Niemcy</td><td>HD 25-1 II</td><td>Prezentacja bodźców wywołujących reakcję przestrachu oraz szumów tła.</td></tr><tr><td>elektrody EMG</td><td>Opracowane przez B. Molenkampa – Uniwersytet Amsterdamski</td><td></td><td>Trzy spieczone elektrody Ag-AgCl o średnicy 7 mm.</td></tr><tr><td>Dwustronne kołnierze przylepne</td><td>MedCaT – Holandia</td><td>848125</td><td>13 mm x 5 mm. Do mocowania elektrod EMG do skóry.</td></tr><tr><td>Żel przewodzący</td><td>Signa Gel - Parker Laboratories Inc. - USA&amp;nbsp;</td><td>224.550.011</td><td>Ułatwia przewodzenie z powierzchni skóry do elektrod EMG oraz elektrod stymulujących.</td></tr><tr><td>Gaziki nasączone alkoholem&amp;nbsp;</td><td>Sanadep 0,5% - Microtek Medical - Holandia</td><td>3053800</td><td>Do oczyszczania skóry uczestnika.</td></tr><tr><td colspan="4">[nagłówek]</td></tr><tr><td>Sfigmomanometr</td><td>Omron Healthcare Europe B.V. – Holandia</td><td>M4-I HEM-752-E</td><td>Pomiar ciśnienia tętniczego i częstości akcji serca.</td></tr><tr><td>Bawełniane saliwety</td><td>Sarstedt – Niemcy</td><td>511.534</td><td>Pobieranie próbek śliny.</td></tr><tr><td>Strzykawka z zakrzywioną końcówką</td><td>Monoject - Covidien - USA</td><td>412</td><td>Nakłada żel na elektrody EMG i elektrody stymulujące.</td></tr><tr><td>Propranolol HCl – tabletki 40 mg i placebo&amp;nbsp;</td><td>Huygens Apotheek – Holandia</td><td></td><td>Tabletki powinny być identyczne pod względem zewnętrznym.</td></tr></tbody></table>

zakłócanie rekonsolidacji pamięci strachu u ludzi przez noradrenergiczny β-bloker

Disrupting Reconsolidation of Fear Memory in Humans by a Noradrenergic &#946;-Blocker

Podstawowy projekt używany w naszych badaniach nad warunkowaniem strachu na zakłócaniu rekonsolidacji obejmuje testowanie w różnych fazach przez trzy kolejne dni. W dniu 1 - fazie nabywania strachu, zdrowi uczestnicy są wystawieni na serię prezentacji obrazkowych. Jeden bodziec obrazowy (CS1+) jest wielokrotnie łączony z awersyjnym bodźcem elektrycznym (US), co skutkuje nabyciem skojarzenia strachu, podczas gdy inny bodziec obrazowy (CS2-) nigdy nie następuje po US. W dniu 2 - fazie reaktywacji pamięci, uczestnicy są ponownie narażeni na bodziec warunkowy bez US (CS1-), który zazwyczaj wywołuje warunkową reakcję strachu. Po reaktywacji pamięci podajemy doustnie dawkę 40 mg chlorowodorku propranololu, antagonisty receptora β-adrenergicznego, który pośrednio celuje w syntezę białek niezbędną do rekonsolidacji poprzez hamowanie stymulowanej noradrenaliną fosforylacji CREB. W dniu 3 - fazie testowej, uczestnicy są ponownie wystawiani na niewzmocnione bodźce warunkowe (CS1- i CS2-) w celu zmierzenia efektu manipulacji redukującego strach. Po tym teście retencji następuje procedura wygaszania i prezentacja wyzwalaczy sytuacyjnych w celu sprawdzenia powrotu strachu. Nasilenie odruchu przerażenia mrugania oczami mierzy się jako wskaźnik reakcji na uwarunkowany strach. Deklaratywna wiedza na temat związku ze strachem jest mierzona za pomocą internetowych ocen oczekiwań w USA podczas każdej prezentacji CS. W przeciwieństwie do uczenia się przez wygaszanie, zakłócenie rekonsolidacji jest ukierunkowane na pierwotną pamięć strachu, zapobiegając w ten sposób powrotowi strachu. Chociaż zastosowania kliniczne są wciąż w powijakach, zakłócenie rekonsolidacji pamięci strachu wydaje się być obiecującą nową techniką z perspektywą trwałego tłumienia ekspresji pamięci strachu u pacjentów cierpiących na zaburzenia lękowe i inne zaburzenia psychiczne.

Kontrola manipulacji propranololem: W przeciwieństwie do placebo w tabletkach, zarówno skurczowe, jak i rozkurczowe ciśnienie tętnicze (BP), a także poziom alfa-amylazy w ślinie powinny ulec obniżeniu 90 min po przyjęciu propranololu podczas reaktywacji pamięci, co wskazuje, że manipulacja lekiem wywołała zamierzony efekt fizjologiczny. BP oraz poziom alfa-amylazy w ślinie powinny ponownie powrócić do wartości bazowych podczas testu w 3. dniu.
Oceny oczekiwań wobec US: Przy zastosowaniu obecnego protokołu nie należy spodziewać się żadnego wpływu leczenia propranololem na oceny oczekiwań wobec US. Niezależnie od leczenia farmakologicznego, różnicowe oceny oczekiwań wobec US powinny wzrosnąć podczas nabywania lęku i zmaleć podczas uczenia się wygaszania 48 h później. Ponadto oczekuje się, że prezentacja niesygnalizowanych US spowoduje powrót różnicowych ocen oczekiwań (Rysunek 1A-C).
Warunek wstępny rekonsolidacji: Aby uruchomić proces rekonsolidacji, ślad pamięciowy musi zostać najpierw zdestabilizowany, co stanowi niezbędny warunek dla fazy restabilizacji. W przypadku destabilizacji pamięci lękowej niezbędne, choć niewystarczające, jest oczekiwanie zagrożenia w momencie reaktywacji (tj. nienaruszona oczekiwana zależność CS1-US)31. Opierając się na założeniu, że funkcją rekonsolidacji jest aktualizacja śladu pamięciowego w odpowiedzi na zmieniające się środowisko, reaktywacja pamięci powinna również wiązać się z błędem przewidywania (PE: rozbieżność między tym, co oczekiwane, a tym, co faktycznie następuje). Biorąc pod uwagę, że oceny oczekiwań względem US nie ulegają zmianom pod wpływem manipulacji propranololem, zmiany w oczekiwaniach dotyczących zagrożenia od etapu nabywania do testu (PE) mogą służyć jako niezależny wskaźnik destabilizacji pamięci (szczegóły w 32). Jednakże zmiany w oczekiwaniach co do zagrożenia mogą być obserwowane tylko wtedy, gdy reaktywacja pamięci następuje po uczeniu asymptotycznym. W przypadku częściowo wzmacnianego uczenia nieasymptotycznego, zmiana oczekiwań dotyczących zagrożenia nie jest konieczna do destabilizacji pamięci. Zatem próba wydobycia może wywołać rekonsolidację bez zmiany oczekiwań po uczeniu nieasymptotycznym.
Reakcja lękowa na bodziec zaskoczenia: Pomyślna nabycie lęku w dniu 1. jest demonstrowana przez wzrost różnicowej reakcji lękowej na bodziec zaskoczenia (tj. CS1 vs. CS2) od pierwszej do ostatniej próby nabywania (Rysunek 1D-F). Silniejsza reakcja lękowa na bodziec, który był wcześniej powiązany z wstrząsem (CS1), w porównaniu do samego hałasu podczas reaktywacji pamięci w dniu 2., dodatkowo wskazuje na to, że pamięć lękowa została dobrze skonsolidowana.
W fazie testowej w 3. dniu można spodziewać się zachowanej reakcji lękowej na bodziec zaskoczenia w grupie placebo: reakcja na CS1 powinna być silniejsza w porównaniu do CS2 na początku testu. Trening wygaszania następnie redukuje różnicę w odpowiedziach na bodźce zaskoczenia (t.j. CS1 vs. CS2). Ponadto prezentacja niesygnalizowanych bodźców US powinna doprowadzić do powrotu reakcji lękowej na CS1 w porównaniu do CS2 (Rysunek 1D).
W przeciwieństwie do placebo w tabletce, oczekuje się, że podanie propranololu HCl doprowadzi do wyeliminowania różnic w reakcjach lękowych startle (tj. CS1 vs. CS2) na początku fazy testu w trzecim dniu. Ponadto można przypuszczać, że niesygnalizowane bodźce US nie przywrócą reakcji lękowej startle (Rysunek 1E).
Należy zauważyć, że propranolol nie powinien wywołać żadnego efektu redukcji lęku, gdy tabletka jest podawana bez reaktywacji pamięci w dniu 2. (Rysunek 1F).
<img alt="Wykresy przedstawiające oczekiwanie na US oraz potencjalizowany strachem odruch orientacyjny w grupach placebo i propranololu podczas warunkowania." src="/files/ftp_upload/52151/52151fig1highres.jpg" width="700px" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Oceny oczekiwania na US w próbach CS1 i CS2 oraz reakcje lękowe (odruchy orientacyjne) w próbach CS1, CS2 i samym szumie (NA) podczas nabywania, reaktywacji pamięci, wygaszania i testu dla grup: placebo (A,D), propranololu (B,E) oraz propranololu bez reaktywacji (C,F). R-CS1- oznacza nieukrzepioną próbę reaktywacji. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52151/52151fig1large.jpg" target="_blank">Aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny, kliknij tutaj.</a>

Zakłócanie rekonsolidacji jest obiecującym podejściem do tłumienia behawioralnej ekspresji pamięci strachu u pacjentów z zaburzeniami lękowymi lub zespołem stresu pourazowego. W serii badań nad warunkowaniem strachu u ludzi wykazaliśmy, że zakłócanie rekonsolidacji przez noradrenergiczny β-bloker propranolol jest bardzo skuteczne w usuwaniu uwarunkowanych reakcji strachu.

Zakłócanie rekonsolidacji pamięci strachu u ludzi przez noradrenergiczny β-bloker

The basic design used in our human fear-conditioning studies on disrupting reconsolidation includes testing over different phases across three consecutive ...

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest trwałe osłabienie strachu, odpowiadanie poprzez ukierunkowanie na proces rekonsolidacji pamięci. Osiąga się to poprzez sztuczne instalowanie strachu u ludzi poprzez zróżnicowane warunkowanie Pawłowa. W drugim kroku odzyskiwane jest wspomnienie strachu, co powoduje destabilizację pamięci.Następnie podaje się 40 miligramów propranololu w celu zakłócenia procesu rekonsolidacji pamięci. Wyniki wskazują na trwałą redukcję strachu w oparciu o reakcję strachu przed przerażeniem. Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak wygaszanie strachu, jest to, że strach jest trwale redukowany.Poniższe badanie powinno być przeprowadzone w pomieszczeniu z wyciszonym dźwiękiem, dołączonym do oddzielnego pomieszczenia dla eksperymentatora. Po dostarczeniu instrukcji i uzyskaniu zgody uzyskano pomiary ciśnienia krwi i tętna zgodnie ze standardowymi protokołami. Aby rozpocząć, przymocuj dwustronne obroże samoprzylepne do elektrod EMG.Użyj wacika nasączonego alkoholem, aby oczyścić skórę uczestnika poniżej jednego oka i na czole, poinstruuj uczestnika, aby trzymał oczy zamknięte, aby uniknąć potencjalnego podrażnienia. Następnie wypełnij środek elektrod EMG wysoce przewodzącym żelem elektrolitowym Za pomocą strzykawki unikaj wprowadzania pęcherzyków powietrza do żelu, które mogą negatywnie wpłynąć na nagrania. Przymocuj jedną z elektrod poniżej dolnej powieki oka w linii ze źrenicą w spojrzeniu do przodu.Przymocuj drugą około 1,5 centymetra boczną do pierwszej, podążając za krzywizną dolnej powieki. Następnie przymocuj odniesienie do podłoża na czole. Nałóż kroplę żelu przewodzącego na elektrody uderzeniowe i przymocuj je do lewego górnego nadgarstka za pomocą nylonowego paska na rzep.Upewnij się, że pasek nie jest zbyt ciasny. Poinformuj uczestnika, że wstrząs powinien być nieprzyjemny, ale nie bolesny. Dostosuj intensywność dwóch MS. Porażenie prądem dla każdego uczestnika indywidualnie.Gdy będziesz gotowy, ręcznie uruchom wstrząsy. Zacznij od intensywności jednego miliampera. Kontynuuj wyzwalanie pojedynczych wstrząsów, stopniowo zwiększając intensywność w przyrostach co dwa lub trzy miliampery.Przerwij się, gdy uczestnik zgłosi, że wstrząs jest nieprzyjemny, ale nie bolesny. Zapisz ostateczny poziom szoku i utrzymuj ten poziom. Przez pozostałą część eksperymentu informuj uczestników o obrazkach.Poinstruuj ich, aby monitorowali związek między obrazami, które widzą, a dostarczeniem wstrząsu. Poinstruuj uczestnika, aby zgłosił oczekiwaną dawkę porażenia prądem podczas testowania. Przesuwając kursor na ciągłych skalach ocen, poinstruuj uczestnika, aby nie odrywał wzroku od ekranu i siedział jak najspokojniej.Daj im słuchawki do noszenia podczas testów, przyciemnij światła i zamknij drzwi. Po wyjściu rozpocznij eksperyment z sąsiedniego pomieszczenia. Rozpocznij akwizycję strachu od przedstawienia 10 podstawowych sond przestraszenia, aby zmniejszyć początkową reaktywność strachu podczas nabywania strachu.Jeden z dwóch obrazów zakończy się wstrząsem na schemacie wzmocnienia 75%, podczas gdy drugi obraz nigdy nie będzie następował po samym dźwięku wstrząsu. Badania powinny być wprowadzane w odstępach między badaniami. Po przetestowaniu odłącz elektrody i dokładnie wyczyść je wodą.Całkowicie usuń żel, nie rysując warstwy chlorku srebra. Po oczyszczeniu nie wycieraj wody, ale użyj innego zestawu elektrod na kolejnym uczestniku. W drugim dniu badań należy wykonać pomiary ciśnienia krwi i tętna oraz próbki śliny.Ustaw uczestnika przed ekranem komputera i przymocuj elektrody EMG i wstrząsowe, jak pokazano wcześniej. Poinformuj uczestnika, że poziom wstrząsu pozostanie taki sam. Poinformuj uczestnika, że te same dwa obrazki zostaną wyświetlone na ekranie komputera i poproś, aby przypomniał sobie, czego nauczył się poprzedniego dnia.Ponownie poinstruuj uczestników, aby zgłosili oczekiwaną datę porażenia prądem. Po przyciemnieniu świateł i wyjściu z pomieszczenia rozpocznij reaktywację pamięci, prezentując 10 podstawowych sond przestraszenia, aby zmniejszyć początkową reaktywność przerażenia. Następnie przedstaw pojedynczą próbę CS bez wzmocnienia, a następnie próbę z pojedynczym szumem.Odłącz uczestnika od zestawu eksperymentalnego i pozwól mu oczyścić żel. Następnie poprowadź ich do osobnego stołu, aby podać doustną dawkę pigułki placebo lub 40 miligramów chlorowodorku propranololu w sposób podwójnie zaślepiony. Po podaniu należy rozpocząć okres odpoczynku trwający około 90 minut.Zaproponuj uczestnikom czasopisma do czytania w oczekiwaniu. Ponownie uzyskaj pomiary ciśnienia krwi i tętna, a także próbki śliny. Po 90 minutach od pobrania pomiarów ciśnienia krwi i tętna należy ustawić uczestnika przed ekranem komputera i przymocować elektrody EMG oraz elektrody uderzeniowe.Poinformuj uczestnika, że intensywność wstrząsu pozostanie taka sama. Poinstruuj uczestników, że te same dwa obrazki zostaną wyświetlone na ekranie komputera. Ponownie poinstruuj uczestników, aby zgłosili oczekiwane porażenie prądem podczas prezentacji wszystkich zdjęć.Gdy uczestnik będzie gotowy, zamknij drzwi, przyciemnij światła i rozpocznij eksperyment z drugiego pokoju. Rozpocznij eksperyment od zaprezentowania 10 podstawowych sond ostrzegawczych w fazie wygaszania. Przedstaw około 12 niewzmocnionych prób CS 1 i CS dwóch, a także 12 prób NA.Po wygaśnięciu przedstaw trzy razy bodziec bezwarunkowy bez znaku w celu przetestowania przywrócenia. Następnie przedstaw uczestnikom około czterech niewzmocnionych prób CS 1 i CS dwóch, a także czterech prób NA. Po zakończeniu badania odłącz elektrody, skompensuj uczestnika i dokładnie wyczyść elektrody wodą reprezentatywną dla wyników oczekiwania w USA.Oceny są wyświetlane tutaj. Leczenie propanololem nie ma istotnego wpływu na przedstawiciela ocen oczekiwań. Wyniki reakcji strachu przed strachem są pokazane tutaj dla grupy placebo.Reakcje zaskoczenia pozostały nienaruszone podczas testów w trzecim dniu. W przeciwieństwie do placebo, podanie propranololu po pobraniu eliminuje strach przed przerażeniem, reagując na początku badania w trzecim dniu. Propanolol nie ma żadnego działania zmniejszającego strach, gdy jest podawany przy braku odzyskiwania pamięci.Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak sztucznie zainstalować, a następnie znieść strach u ludzi.

disrupting-reconsolidation-fear-memory-humans-noradrenergic

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Warunkowany lęk może zostać zredukowany poprzez proces hamowania nazywany wygaszaniem, jednak może on powrócić w określonych warunkach, takich jak upływ czasu lub ekspozycja na stres. Nasz protokół przedstawia nową metodę zapobiegania powrotowi lęku poprzez wprowadzenie wygaszania podczas okna rekonsolidacji (fazy ponownego utrwalania reaktywowanego wspomnienia).

Trening wygaszania w oknie rekonsolidacji zapobiega powrotowi lęku

W poniższym eksperymencie opisujemy protokół warunkowania strachu śladowego u myszy. Ten rodzaj pamięci asocjacyjnej obejmuje okres śladowy, który oddziela bodziec neutralny od bodźca bezwarunkowego.

Warunkowanie strachu śladowego u myszy

Stymulacja nerwu błędnego (VNS) pojawiła się jako narzędzie do wywoływania ukierunkowanej plastyczności synaptycznej w przodomózgowiu w celu modyfikacji szeregu zachowań. Ten protokół opisuje, jak zaimplementować VNS, aby ułatwić konsolidację pamięci wygaszania strachu.

Stymulacja nerwu błędnego jako narzędzie do indukowania plastyczności w szlakach istotnych dla uczenia się wymierania

Ten manuskrypt opisuje procedurę odzyskiwania pamięci w celu destabilizacji solidnych wspomnień nagrody i przepisywania ich za pomocą przeciwwarunkowania przed ich ponownym utrwaleniem.

Procedura wyszukiwania oparta na błędach predykcyjnych do destabilizacji i ponownego zapisywania nieprzystosowawczych wspomnień nagrody u osób pijących niebezpiecznie

Tutaj opisujemy szczegółową metodologię wymaganą do przeprowadzenia eksperymentów z uczeniem się strachu wzmocnionego stresem (SEFL), przedklinicznego modelu zespołu stresu pourazowego, zarówno u szczurów, jak i myszy. Model wykorzystuje aspekty warunkowania i zamrażania strachu Pawłowa jako wskaźnik zwiększonego strachu u gryzoni.

Uczenie się strachu wzmocnione stresem, solidny model zespołu stresu pourazowego u gryzoni

Opisujemy rozszerzony protokół warunkowania strachu, który powoduje przetrenowanie i inkubację strachu u szczurów. Protokół ten obejmuje pojedynczą sesję treningową z 25 parami ton-shock (tj. przetrenowanie) i porównaniem reakcji warunkowego zamrażania podczas testów kontekstowych i cue 48 godzin (krótkoterminowo) i 6 tygodni (długoterminowo) po treningu.

Inkubacja strachu przy użyciu rozszerzonego protokołu warunkowania strachu dla szczurów

Defensywne reakcje behawioralne zależą od intensywności zagrożenia, bliskości i kontekstu ekspozycji. Opierając się na tych czynnikach, opracowaliśmy klasyczny paradygmat warunkowania, który wywołuje wyraźne przejścia między warunkowym zamrożeniem a zachowaniem podczas lotu u poszczególnych badanych. Model ten ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia patologii związanych z zaburzeniami lękowymi, panikowymi i stresem pourazowym.

Nowy paradygmat warunkowania strachu Pawłowa do badania zachowań związanych z zamarzaniem i ucieczką

Unikanie jest kluczowe dla przewlekłej niepełnosprawności bólowej, jednak brakuje odpowiednich paradygmatów do badania unikania związanego z bólem. Dlatego opracowaliśmy paradygmat, który pozwala badać, w jaki sposób zachowania unikania związane z bólem są wyuczone (akwizycja), rozprzestrzeniają się na inne bodźce (uogólnienie), mogą być złagodzone (wygaszanie) i jak mogą następnie pojawić się ponownie (spontaniczne zdrowienie).

Badanie zachowań unikających związanych z bólem przy użyciu paradygmatu sięgania ramion robota

Ten artykuł przedstawia protokół dla kontekstowego i podpowiedzianego testu warunkowania strachu przy użyciu systemu analizy wideo do oceny uczenia się strachu i pamięci u myszy.

Kontekstowy i sygnalizowany test warunkowania strachu przy użyciu systemu analizy wideo u myszy

Ten artykuł opisuje zestaw metod pomiaru motywacji związanej z jedzeniem i wartości celów związanych z jedzeniem u ludzi.

Badanie nagrody w postaci jedzenia i motywacji u ludzi

Dowiedz się, jak zakłócać rekonsolidację pamięci strachu u ludzi za pomocą propranololu, noradrenergicznego β-blokera. Ta metoda umożliwia trwałe osłabienie skondycjonowanych odpowiedzi lękowych.

Zakłócanie rekonsolidacji pamięci strachu u ludzi przez noradrenergiczny β-bloker

Przeglądaj więcej filmów