Trwałe podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej u myszy: model przebudowy po zawale mięśnia sercowego i niewydolności serca

Ogólnym celem poniższych doświadczeń jest przedstawienie techniki trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej u myszy. Model ten jest stosowany do badania przebudowy serca i rozwoju niewydolności serca po zawale mięśnia sercowego. W pierwszej części filmu zademonstrowana zostanie procedura trwałego podwiązania, natomiast w drugiej części przedstawiona zostanie ocena funkcji serca z wykorzystaniem inwazyjnych pomiarów hemodynamicznych in vivo u myszy.

Model trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej zostanie zademonstrowany przez Marlin Locks, starszego technika zwierząt z Centrum Molekularnej Biologii Naczyniowej. Doktorant grupy mikro Eja przedstawi technikę inwazyjnych pomiarów hemodynamicznych u myszy. Zacznij od skupienia światła na okolicy szyi uspokojonej myszy.

Następnie podnieś język zwierzęcia za pomocą zestawu szpilek, aby można było wyraźnie zobaczyć wejście krtani. Przełóż samodzielnie przygotowaną, igłę o rozmiarze 20 przez krtań do tchawicy, a następnie podłącz mysz do respiratora, aby ocenić, czy intubacja została prawidłowo umieszczona. Przymocuj mysz do poduszki grzewczej, aby zapobiec hipotermii.

Uważanie, aby lewa tylna kończyna krzyżowała się z prawą tylną kończyną, aby uzyskać lepszy widok na lewą komorę podczas operacji. Następnie wykonaj małe poprzeczne nacięcie skóry aż do mostka i oddziel leżącą pod spodem skórę i mięśnie. Użyj jedwabnego szwu z pięcioma zerami, aby odciągnąć na bok mięśnie piersiowe, a następnie włóż zestaw szpilek, aby wykonać nacięcie w trzeciej przestrzeni międzyżebrowej.

Przesuń zestaw szpilek pod mięśniami międzyżebrowymi od strony bocznej do przyśrodkowej, aż do osiągnięcia mostka. Następnie wepchnij szpilkę od wewnątrz do skóry, aby przebić ścianę klatki piersiowej. Na koniec ostrożnie przetnij mięsień międzyżebrowy tuż nad szpilką, aby zakończyć torakotomię.

Uważając, aby nie przebić płuc, umieść gąbkę nasączoną 0,9% chlorkiem sodu w jamie ustnej, aby chronić płuca, a następnie wprowadź retraktor klatki piersiowej do przestrzeni międzyżebrowej, aby odsłonić lewy przedsionek, lewą komorę i lewą przednią zstępującą tętnicę wieńcową. Teraz podwiąż lewą przednią zstępującą tętnicę wieńcową za pomocą pojedynczej ligatury proliny z sześcioma zerowymi warstwami około jednego milimetra pod końcem lewego przedsionka i dystalnie do pierwszej gałęzi po przekątnej. Udane podwiązanie wywoła natychmiastowe przebarwienie, co spowoduje pojawienie się bladego mięśnia sercowego w dotkniętym obszarze.

Teraz umieść 3 6 0 tron szwów wokół przestrzeni międzyżebrowej i wyjmij gąbkę z jamy klatki piersiowej. Ponownie rozszerz płuca, blokując odpływ respiratora, a następnie mocno zaciśnij szwy i dociśnij klatkę piersiową, aby powtórzyć ponowne rozszerzanie. Użyj niewielkiej ilości soli fizjologicznej, aby potwierdzić brak pęcherzyków powietrza i pomyślne zamknięcie klatki piersiowej.

Następnie spójrz przez mięsień międzyżebrowy, aby potwierdzić normalne rozszerzanie się płuc. Zmień położenie obu mięśni piersiowych, aby służyły jako dodatkowa bariera zapobiegająca odmie opłucnowej i użyj pięciu zerowych jedwabnych szwów, aby zamknąć skórę. Następnie odłącz mysz od wentylatora, ogrzewając zwierzę na poduszce grzewczej, aż w pełni wyzdrowieje.

Przed rozpoczęciem pomiarów hemodynamicznych zanurz cewnik ciśnieniowy 1.0 French Miller w sterylnej wodzie o temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby zminimalizować dryft sygnału Po co najmniej 30 minutach elektronicznie skalibruj czujnik ciśnienia przy zerze i 100 milimetrach słupa rtęci i zapisz dane wyjściowe przy 2000 hercach. Następnie zabezpiecz mysz znieczulającą w pozycji leżącej na poduszce grzewczej, monitorując temperaturę zwierzęcia za pomocą sondy doodbytniczej. Ogol okolicę szyi, a następnie wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby odsłonić tarczycę.

Następnie przymocuj szyję za pomocą zgiętych igieł i odciągnij na bok gruczoł ślinowy, aby odsłonić prawą tętnicę szyjną wspólną. Teraz zidentyfikuj nerw błędny, który przypomina białą nić i leży wzdłuż tętnicy, i użyj zakrzywionych kleszczy, aby ostrożnie oddzielić tętnicę od nerwu. Przełóż zakrzywione kleszcze pod prawą tętnicą szyjną wspólną, aby oddzielić ją od innych tkanek, usuwając tkankę łączną z okolic tętnicy.

Następnie przełóż 2 6 0 jedwabnych drutów pod prawą wspólną tętnicą szyjną i zawiąż ciasny węzeł na górnym drucie. Umieść drut w kierunku głowy, zamknij go i zamocuj za pomocą dystalnego podwiązania. Następnie przełóż drut proksymalny dwa razy od lewej do prawej i przymocuj go również w tym czasie za pomocą dwóch proksymalnych przewodów nieokluzyjnych.

Utrzymuj tętnicę szyjną wilgotną, kapiąc sterylny 0,9% chlorek sodu na tętnicę. Następnie użyj igły o rozmiarze 26, aby wykonać nacięcie w prawej tętnicy szyjnej wspólnej między dystalnym podwiązaniem a bliższym drutem nieokluzyjnym. Wprowadzić czujnik ciśnienia do tętnicy.

Następnie delikatnie popchnij cewnik ciśnieniowy do przodu i wyreguluj proksymalny drut nieokluzyjny w taki sposób, aby cewnik mógł ostrożnie przejść przez drut, pod obojczykiem i tak, aby naczynie pozostało wypełnione krwią. Teraz rozpocznij nagrywanie sygnału ciśnienia. U zdrowej myszy sygnał ciśnienia tętniczego waha się między ciśnieniem rozkurczowym od 60 do 70 milimetrów słupa rtęci a ciśnieniem skurczowym od 100 do 120 milimetrów słupa rtęci.

Skieruj cewnik przez tętnicę bezimienną i aortę do lewej komory. Ciśnienie w komorze będzie się wahać od zera do 100 do 120 milimetrów słupa rtęci. Na koniec, po ustabilizowaniu się cewnika wewnątrz lewej komory, nagrywaj sygnał przez 30 do 60 minut.

W zależności od wymagań eksperymentalnych, zakres zawału mięśnia sercowego można ocenić za pomocą podwójnego barwienia Evan's Blue, TTC. Pokazano tu reprezentatywne odcinki serca po 24 godzinach od podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej. Obszary zabarwione na niebiesko wskazują normalne obszary nieniedokrwienne.

Ciemnoczerwone zabarwione obszary wskazują na niedokrwione, ale żywotne regiony. To są obszary bez zawału, które są zagrożone. Natomiast bladoczerwone, ujemnie zabarwione obszary wskazują na obszary zawału, które zwykle stanowią od 50 do 60% całkowitej powierzchni ściany lewej komory.

Ekspansję zawału można określić ilościowo, oceniając przebieg w czasie długości i grubości zawału. Tutaj w tym przekroju pokazany jest reprezentatywny, poważny przekrój poprzeczny serca zabarwiony na czerwono w 28 dniu po trwałym podwiązaniu lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej. Rozszerzanie się znacznie rozciągniętego zawału odpowiada wzrostowi bezwzględnej długości zawału i zmniejszeniu grubości zawału.

Na tych wykresach pokazany jest reprezentatywny rejestr ciśnienia tętniczego i komorowego. Oczywistą różnicą między sygnałami tętniczymi a sygnałami komorowymi jest to, że sygnał drabinkowy spada do około zera milimetrów słupa rtęci podczas rozkurczu. Korzystając z tego modelu, należy zauważyć, że czynność serca będzie zależeć nie tylko od utraty tkanki mięśnia sercowego, ale także od procesu rozszerzania się zawału, gojenia bąków i tworzenia blizn oraz od współistniejącego rozwoju poszerzenia lewej komory, przerostu serca i przebudowy komory.