Name: Metodologia syntezy asymetrycznych układów biosprzężonych pochodzących z ferrocenu za pomocą metodologii opartej na żywicy w fazie stałej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Poznaj metodę syntezy asymetrycznych biokoniugatów ferrocenowo-biotynowych na żywicy w fazie stałej. Technika ta umożliwia łatwą izolację i efektywną immobilizację na powierzchniach złota.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

KG było wspierane przez grant Fundacji R.A. Welch P-1760, TCU Andrews Institute of Mathematics & Science Education (dla KG), TCU Research and Creativity Activity Grant (dla KG) oraz TCU SERC Grant (dla JHS).

1. Synteza biotyny-Fc-cysteiny (1)
<ol>
	<li>Metody fazy stałej do wytwarzania żywicy 1.
	<ol>
		<li>Umieścić żywicę zawierającą biotynę (250 mg, 0,145 mmol) w strzykawce ze spiekaną wodą i spęcznieć żywicę, pobierając dimetyloformamid (5 ml) i potrząsając strzykawką na wytrząsarce laboratoryjnej przez 20 minut. Wydalić roztwór i powtórzyć pęcznienie dimetyloformamidu jeszcze raz.</li>
		<li>Usunąć grupę ochronną Fmoc, dodając do strzykawki 4-6 ml 20% piperydyny w dimetyloformamidzie, a następnie wstrząsając przez 10-15 minut. Powtórz proces deprotekcji z kolejnymi 4-6 ml piperydyny. Przemyć żywicę sekwencją 3x dimetyloformamid, 3x dimetyloformamid:metanol (1:1), 3x metanol:dichlorometan (1:1), 3x dichlorometan, ~5 ml każdy. Wykonaj test ninhydryny (+) na małej próbce (~10) kulek, aby potwierdzić udaną deprotekcję przez obecność niebieskiego po podgrzaniu.</li>
		<li>Zmieszać roztwór zawierający kwas 1'-Fmoc-amino-ferroczyno-1-karboksylowy (203,3 mg, 0,4350 mmol), hydrat 1-hydroksybenzotriazolu (58,8 mg, 0,413 mmol), diizopropylokarbodiamid (0,0673 ml, 0,435 mmol), diizopropyloetyloaminę (0,0757 ml, 0,435 mmol) oraz mieszaninę 4:1 dichlorometanu i dimetyloformamidu. Pobrać go do strzykawki i delikatnie wstrząsać wytrząsarką laboratoryjną przez 6 godzin. Następnie wyjąć roztwór ze strzykawki i umyć zgodnie z wcześniejszym opisem.</li>
		<li>Wykonaj test ninhydryny (-), jak opisano powyżej, aby potwierdzić sprzężenie. Test ninhydryny może być nadal przydatny w potwierdzaniu sprzężenia pomimo pomarańczowego koloru koralika pochodzącego z przyczepienia ugrupowania zawierającego żelazo.</li>
		<li>Następnie usunąć grupę Fmoc przez dodanie 20% piperydyny do dimetyloformamidu i umyć zgodnie z powyższym opisem. Test ninhydryny (+) powinien być użyty do potwierdzenia usunięcia Fmoc.</li>
		<li>Przygotować roztwór złożony z Fmoc-Cys(Trt)-OH (254,8 mg, 0,4350 mmol), 1-hydroksybenzotriazolu hydratu (58,8 mg, 0,4125 mmol), diizopropylokarbodimidu (0,0673 ml, 0,4350 mmol), diizopropyloetyloaminy (0,0757 ml, 0,4350 mmol) oraz mieszaniny 4:1 dichlorometanu i dimetyloformamidu. Dodaj ten koktajl sprzęgający cysteinę, strzykawkę ze strzykawką i delikatnie wstrząsaj przez 6 godzin. Umyj zgodnie z protokołem opisanym wcześniej.</li>
		<li>Potwierdź sprzężenie za pomocą testu ninhydryny (-), a następnie usuń składnik Fmoc z 20% piperydyną i przemyj. Sprawdź wolną aminę końcową za pomocą testu ninhydryny (+).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozszczepienie 1 z żywicy.
	<ol>
		<li>Przygotować roztwór TFA (9,45 ml), wody (0,25 ml), 1,2-etaneditiolu (0,25 ml) i triizopropylosilanu (0,1 ml), dodać do strzykawki i delikatnie wstrząsać przez 4 godziny.</li>
		<li>Zebrać powstały czerwono-brązowy roztwór do probówki Eppendorfa i powoli odparować TFA za pomocą strumienia powietrza.</li>
		<li>Dodaj zimny eter dietylowy (~15 ml) do probówki Eppendorf, aby wytrącić 1, który spowoduje delikatne mieszanie. Wyizolować produkt przez odwirowanie (1 g, 5 min). Następnie powtórzyć cykle płukania eterem dietylowym (łącznie ~60 ml) i odwirować, aby uzyskać 1 w postaci czerwonego/brązowego ciała stałego.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Charakterystyka i analiza 1
<ol>
	<li>Upewnij się, że tożsamość jest zgodna z połączeniem i składem pokazanym na rysunku 2, używając 1H (16 skanów) i 13C NMR (512 skanów) w deuterowanym metanolu (300 μl) i analizie ESI-MS. 
	Spodziewaj się następujących wyników: 
	1Widmo H NMR (CD3OD) δ/ppm: 1,407-1,684 (m, 6H), 2,245 (t, 2H), 2,665-3,150 (m, 12H), 4,015 (t, 1H), 4,104 (d, 2H), 4,274 (q, 1H), 4,426 (d, 2H), 4,479 (q, 1H), 4,595 (t, 1H) i widmo 13C NMR (CD3OD) δ/ppm: 24,644 (CH2), 25,472 (CH2), 28,051(CH2), 28,300 (CH2), 35.474 (CH2), 38.698 (CH2), 39.241 (CH2), 39.717 (CH2), 55.340/55.538 (Cp-ring), 60.286 (CH), 61.964 (CH), 62.521/62.821 (Cp-ring), 66.038/66.170 (Cp-ring), 69.153/69.328 (Cp-ring), 71.468/71.593 (Cp-ring), 76.466 (CH), 171.770 (C=O), 175.361 (C=O). 
	ESI-MS (m/z): Znaleziono: 639.00 [1+Na]+, Teoretyczny: 639.1 [1+Na]+ i HR-MS (m/z): Znaleziono: 617.2049 [1+H]+ , Teoretyczny: 617.1622 [1+H]+.</li>
	<li>Wykonaj HPLC, analizę elementarną, aby potwierdzić skład izolowanego 1, 
	Przeprowadzić chromatogramy HPLC przy użyciu kolumny C8 z odwróconymi fazami ze 100% MeOH przy natężeniu przepływu 0,5 ml/min. Uwaga: Czas retencji HPLC wynosił: 3,198-4,674 min.</li>
</ol>
3. Unieruchomienie 1 na złotej powierzchni
<ol>
	<li>Wytnij złote szkiełka z polimerem na kwadraty o wymiarach ~0,25 w2.</li>
	<li>Napełnij zlewkę o pojemności 50 ml roztworem wody DI o stężeniu 1 (~1 mM).</li>
	<li>Dodaj złoty szkiełko do zlewki i przykryj szkiełkiem zegarkowym. Pozostawić szkiełko do inkubacji O/N w temperaturze pokojowej bez mieszania.</li>
	<li>Wyjmij złote szkiełko z roztworu i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu.</li>
	<li>Uzyskaj obrazy skaningowej mikroskopii elektronowej za pomocą skaningowego mikroskopu elektronowego (lub jego odpowiednika) w celu obserwacji unieruchomionych 1.</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Synteza asymetrycznych pochodnych ferrocenu jest trudna w rozwiązaniu. Na przykład próby wyprodukowania 1 w roztworze skutkowały niską wydajnością pożądanego produktu (mniej niż 20%). Podobnie, reakcje z wykorzystaniem kwasu karboksylowego 1'-amino-ferrocenu (bez Fmoc) i biotyny związanej z żywicą dały nierozpuszczalny produkt zgodny z produktem polimeryzowanym opisanym przez Baristic i wsp. i minimalny produkt. 47 Sytuację dodatkowo komplikuje fakt, że ferrocen i jego pochod...

Biosensory to małe urządzenia, które wykorzystują technologię rozpoznawania biomolekularnego jako platformę do selektywnej analizy i są wykorzystywane ze względu na ich specyficzność, szybkość i niski koszt. Bioczujniki elektrochemiczne do wykrywania biomolekuł znajdują się w czołówce tej dziedziny ze względu na swoją prostotę, opłacalność i wysoką czułość. 1,3 Ogólna anatomia tych czujników to elektroda wyposażona w cząsteczkę rozpoznającą specyficzną dla markera biologicznego, który jest przedmiotem zainteresowania. Wiązanie biomarkera przez cząsteczkę rozpoznającą powoduje lokalną zmianę potencjału lub prądu, którą można wykryć za pomocą prostego pomiaru. Do tej pory ugrupowanie rozpoznawania może obejmować enzymy, 4-8 przeciwciał, 9-12 całych komórek, 13-16 receptorów, 17-20 peptydów21-23 i DNA24 i w dużej mierze koncentruje się na większych, biologicznych cząsteczkach. 25-28 Wysiłki badawcze w tej dziedzinie koncentrowały się głównie na immunoczujnikach, w których immunoglobulina jest unieruchomiana za pomocą aktywnego rdzenia redoks (takiego jak ferroken) i wykorzystywana do wykrywania przeciwciał będących przedmiotem zainteresowania. Badania te zostały wyłączone z zastosowań klinicznych ze względu na słabą precyzję i czasochłonność wynikającą z powikłań wynikających ze stosowania antygenu/przeciwciał. 1,3 Coraz więcej uwagi poświęca się wykrywaniu małych cząsteczek (poniżej 1 kg/mol), które mają znaczenie biomedyczne, żywnościowe i środowiskowe, a także mają znaczenie dla bezpieczeństwa narodowego. 29 Najbardziej znanymi przykładami urządzeń biosensorycznych są monitory do samokontroli, które są wyposażone w elektrody enzymatyczne z sitodrukiem sprzężone z kieszonkowym miernikiem amperometrycznym. Systemy te zazwyczaj wykorzystują metodę kulometryczną, w której mierzy się całkowitą ilość ładunku generowanego w reakcji utleniania glukozy w pewnym okresie czasu. Urządzenia nadające się do sprzedaży muszą być przenośne, wytrzymałe i trzymane w ręku, aby były łatwe w użyciu dla ogółu społeczeństwa.
Znaczniki redoks, takie jak ferrocene, są niezbędne do zapewnienia elektrochemicznej detekcji biomarkerów lub małych cząsteczek w roztworze, ponieważ większość biomarkerów nie jest wewnętrznie aktywna elektrochemicznie. 30-38 Ferrocen to cząsteczka metaloorganiczna, która jest złotym standardem w elektrochemii, co czyni ją doskonałym wyborem do integracji z biosensorami elektrochemicznymi. Aktywne gatunki redoks na bazie ferrocenu przyciągnęły już znaczną uwagę ze względu na ich niewielkie rozmiary, dobrą stabilność, wygodny dostęp do syntetyczności, łatwą modyfikację chemiczną, względną lipofilowość i łatwość strojenia redoks. 3,30-42 Małe cząsteczki oparte na rdzeniu ferrocenu są szeroko stosowane jako detektory jonów metali i małych cząsteczek. 32-38,43 Systemy ukierunkowane na większe gatunki, takie jak biomolekuły, wykorzystywały przyłączanie dużych przeciwciał lub immunoglobulin do pochodnych ferrocenu, które zostały osadzone na powierzchni elektrochemicznej. 1,3,39,44 W każdym przypadku potencjał i intensywność prądu pary redoks FeIII/FeII uległy zmianie po sprzężeniu molekularnym, tworząc w ten sposób nowy uchwyt spektroskopowy wskazujący na obecność cząsteczki analitu. Zmiana ta wynika z rozległego nakładania się na siebie, które występuje między układem pi pierścieni cyklopentadienylu a żelaznymi orbitalami d. Jeśli układ pi zostanie zmodyfikowany, tj. derywatyzowany lub poddany reakcji, to oddziaływanie orbitalne z kolei ulegnie zmianie. Będzie to miało wpływ na rdzeń Fe i może być obserwowane jako przesunięcie potencjału pary FeIII/FeII. 40,45,46 Te właściwości sprawiają, że taki system jest atrakcyjny do stosowania jako środek kwantyfikujący w elektrochemicznym teście immunologicznym lub bioczujniku.
Aby wytworzyć systemy zawierające ferrocen, specyficzne dla pojemności biosensorów, optymalne jest zmodyfikowanie jednego pierścienia Cp za pomocą bioreceptora specyficznego dla cząsteczki docelowej i wykorzystanie drugiego pierścienia Cp jako molekularnego łącznika z odczytem elektrochemicznym lub elektrodą (Rysunek 1). Synteza tych asymetrycznych pochodnych ferrocenu jest utrudniona przez reakcje uboczne i tworzenie się gatunków dimerycznych i polimerowych powstających w wyniku sieciowania międzycząsteczkowego. 47 Jednak chemia sprzęgająca wytwarzająca wiązanie amidowe jest najbardziej bezpośrednią drogą do uzyskania prostych pochodnych ferrocenu obejmujących składniki biologiczne, takie jak peptydy i ich metabolity. Dlatego techniki fazy stałej opracowane po raz pierwszy w latach 50. przez Merrifielda do syntezy peptydów mogą być stosowane do związków metaloorganicznych zawierających ferrosen. Dzięki zastosowaniu ortogonalnie podstawionej cząsteczki kwasu 1'-Fmoc-amino-ferrocen-1-karboksylowego, skonstruowano i szczegółowo opisano w niniejszym dokumencie układ ferrocenowy, który może zawierać ugrupowanie receptorowe (biotynę), odczyt elektrochemiczny (ferrocen) i składnik łącznikowy immobilizujący (cysteina). Omówiono syntezę tego biokoniugatu, a także dowody na unieruchomienie na powierzchni złota. Praca ta stanowi pierwszą prezentację systemu złożonego z biotyny, ferrocenu i aminokwasu do immobilizacji na powierzchni złota.

<table><tbody><tr><td>Biotyna Żywica Novatag</td><td>NovaBiochem</td><td>8550510001</td><td></td></tr><tr><td>TORVIQ 10 ml Strzykawka strzykawkowa Luer Lock</td><td>Fisher</td><td>NC9299151</td><td></td></tr><tr><td>piperydyna</td><td>Acros</td><td>P/3520/PB05</td><td></td></tr><tr><td>test ninhydrynowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60017-1ea</td><td></td></tr><tr><td>Kwas 1'-Fmoc-amino-ferroczyno-1-karboksylowy</td><td>Omm Scientific</td><td>na specjalne zamówienie</td><td></td></tr><tr><td>N,N&prime; -Diizopropylokarbodimide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D125407-5G</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Novabiochem</td><td>8520080025</td><td></td></tr><tr><td>kwas trifluorooctowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5408</td><td></td></tr><tr><td>1,2-etanedithiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2930</td><td></td></tr><tr><td>triizopropylosilan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>probówki Eppendorf (20 ml)</td><td>dowolne źródło</td><td></td><td></td></tr><tr><td>metanol</td><td>dowolne źródło</td><td></td><td>wysuszyć za pomocą sit molekularnych przed użyciem i przechowywać w butelce o pojemności 100 ml dla łatwego użycia</td></tr><tr><td>dichlorometan</td><td>dowolne źródło</td><td></td><td>wysuszyć sitami molekularnymi przed użyciem i przechowywać w butelce o pojemności 100 ml dla łatwego użycia</td></tr><tr><td>dimetyloformamid</td><td>z dowolnego źródła</td><td></td><td>Wysuszyć za pomocą sit molekularnych przed użyciem i Przechowywać w butelce o pojemności 100 ml dla łatwego użycia</td></tr><tr><td>Odwiruj</td><td>dowolne źródło</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

metodologia syntezy asymetrycznych układów biosprzężonych pochodzących z ferrocenu za pomocą metodologii opartej na żywicy w fazie stałej

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Wczesne wykrycie jest kluczem do skutecznego leczenia większości chorób i jest szczególnie niezbędne do diagnozowania i leczenia wielu rodzajów raka. Najczęstszymi stosowanymi technikami są metody obrazowania, takie jak obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego (MRI), topografia emisji pozytonów (PET) i topografia komputerowa (CT) i są optymalne do zrozumienia fizycznej struktury choroby, ale można je wykonywać tylko raz na cztery do sześciu tygodni ze względu na stosowanie środków do obrazowania i całkowity koszt. Mając to na uwadze, rozwój technik "przyłóżkowych", takich jak bioczujniki, które oceniają stopień choroby i/lub skuteczność leczenia w gabinecie lekarza i robią to w odpowiednim czasie, zrewolucjonizowałby protokoły leczenia. 1 W celu zbadania bioczujników opartych na ferrocenie do wykrywania biologicznie istotnych cząsteczek2 opracowano metody wytwarzania biokoniugatów ferrocen-biotyna opisane w niniejszym dokumencie. W tym raporcie skupimy się na układzie biotyna-ferrocen-cysteina, który można unieruchomić na powierzchni złota.

Forma związana z żywicą związku 1 przedstawiona jest na Rysunku 2. Kowalencyjne przyłączenie komponentu ferrocenowego nadaje kuleczkom żywicy pomarańczowy odcień, który utrzymuje się podczas ciągłego przemywania i świadczy o unieruchomieniu kompleksu zawierającego żelazo, w przeciwieństwie do adsorpcji żelaza przez komponent PEG kuleczki żywicy. Forma wolna od żywicy związku 1 ma kolor identyczny z kuleczkami żywicy. Po usunięciu związku z kuleczek żywicy, czystość i wyd...

Synteza asymetrycznych gatunków ferrocenu jest wyzwaniem przy użyciu technik rozwiązań. Niniejszy raport koncentruje się na metodach przeprowadzonych w celu wytworzenia biokoniugatu ferrocen-biotyna przy użyciu łatwych i czystych reakcji przeprowadzanych w drodze syntezy w fazie stałej. Wykazano, że włączenie ugrupowania tiolanowego nadaje zdolność do unieruchamiania na powierzchniach złota.

Metodologia syntezy asymetrycznych układów biosprzężonych pochodzących z ferrocenu za pomocą metodologii opartej na żywicy w fazie stałej

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

Ogólnym celem następnego eksperymentu jest wytworzenie asymetrycznych biokoniugatów ferne-biotyny, które mogą zostać unieruchomione na powierzchni złota. Jest to realizowane poprzez syntezę biokoniugatu ferne-biotyny na żywicy w fazie stałej. W drugim kroku biokoniugat jest usuwany z żywicy, co umożliwia izolację i charakterystykę związku.Następnie biokoniugat inkubuje się z powierzchnią złota, aby umożliwić adhezję tiolatów do złota. Wyniki pokazują, że biokoniugat ferne można otrzymać z dobrą wydajnością i czystością, a następnie unieruchomić na powierzchni złota. Główną zaletą zastosowania tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak metody w roztworze, jest prosta i bezpośrednia puryfikacja.Aby uniknąć powstawania produktów ubocznych charakterystycznych dla metod w roztworze, opracowaliśmy tę metodę, kierując się kwestiami wydajności i praktyczności czujników glukozy stosowanych w monitorowaniu pacjentów z cukrzycą. Procedurę tę zaprezentują Sean Rodich oraz Paulina Gonzalez, odpowiednio student studiów doktoranckich i licencjackich z mojego laboratorium. W pierwszej kolejności należy umieścić 250 mg żywicy obciążonej biotyną w strzykawce z filtrem spiekanym.Napęcznie żywicę, pobierając pięć mililitrów dimetyloformamidu i wstrząsając strzykawką na wytrząsarce laboratoryjnej przez 20 minut. Po zakończeniu usunąć roztwór i powtórzyć proces napęczniania dimetyloformamidem. Następnie usunąć grupę ochronną FOC, dodając do strzykawki od czterech do sześciu mililitrów 20% papiny w dimetyloformamidzie, a następnie wstrząsając przez 10 do 15 minut. Po powtórzeniu procesu usuwania ochrony, przemyć żywicę trzykrotnie w kolejności: dimetyloformamidem, mieszaniną dimetyloformamidu i metanolu w stosunku 1:1, mieszaniną metanolu i dichlorometanu w stosunku 1:1 oraz dichlorometanem.Po usunięciu roztworu przeprowadź test ninhydrynowy na niewielkiej próbce kulek, aby potwierdzić skuteczną ochronę głęboką poprzez obecność koloru niebieskiego po podgrzaniu. Następnie przygotuj roztwór zawierający jeden aminokwas z grupą ochronną Fmoc, jeden kwas karboksylowy, hydrat HOBT, DIC, diizopropyloetyloaminę oraz mieszaninę dichlorometanu i dimetyloformamidu w stosunku 4:1. Naciągnij ten roztwór do strzykawki z fritem i delikatnie wstrząsaj na wstrząsarce laboratoryjnej przez sześć godzin.Po przemyciu żywicy należy przeprowadzić test hyran zgodnie z wcześniejszym opisem, aby potwierdzić zajście sprzęgania. Następnie należy usunąć grupę FM o poprzez dodanie 20%ine w dimetyloformamidzie do żywicy w strzykawce, a po wstrząsaniu przemyć w ten sam sposób co poprzednio. Należy przygotować roztwór składający się z fmm cyst trit till O-H-O-B-T hydrate, DIC di, izopropyloetylaminy oraz mieszaniny dichlorometanu i dimetyloformamidu w stosunku cztery do jednego.Dodaj ten koktajl do sprzęgania cystyny do strzykawki z filtrem i delikatnie wstrząsaj przez sześć godzin. Po potwierdzeniu sprzęgania za pomocą testu HYN, usuń komponent F MOC za pomocą 20%ine. Po zakończeniu płukania zweryfikuj obecność wolnej aminy końcowej za pomocą testu hydrazynowego.Na tym etapie należy przygotować roztwór kwasu trichlorooctowego w wodzie, etanolu oraz izopropanolu. Następnie należy wprowadzić roztwór do strzykawki. Po wstrząsaniu przez cztery godziny zebrać otrzymany czerwonobrązowy roztwór do probówki typu Eppendorf i powoli odparować kwas trichlorooctowy przy użyciu strumienia powietrza.Następnie do probówki typu Eppendorf dodaj około 15 ml zimnego eteru dietylowego w celu wytrącenia produktu, który uformuje się podczas delikatnego mieszania. Wyizoluj produkt poprzez wirowanie. Następnie powtórz cykle przemywania eterem dietylowym i wirowania.W celu otrzymania biokoniugatu ferne-biotyny w postaci czerwonobrązowego ciała stałego, potwierdź tożsamość biokoniugatu ferne-biotyny za pomocą spektroskopii NMR protonów i węgla oraz analizy E-S-I-M-S. Przeprowadź analizę HPLC i analizę elementarną, aby potwierdzić skład wyizolowanego związku.Po pełnej charakterystyce produktu, potnij złote plastry na podłożu polimerowym na kwadraty o powierzchni około 0,25 square inches. Następnie napełnij zlewkę o pojemności 50 milliliter roztworem bio-konjugatu ferne biotin w wodzie dejonizowanej o stężeniu one millimolar. Włóż jedną z płytek złotych do zlewki i przykryj zlewkę zAssuming szkiełkiem zegarkowym.Pozostawić preparat do inkubacji przez noc w temperaturze pokojowej, bez mieszania. Po inkubacji wyjąć złote szkiełko z roztworu i wypłukać wodą dejonizowaną. Po wyschnięciu szkiełka wykonać obrazy za pomocą skaningowego mikroskopu elektronowego, aby zaobserwować unieruchomiony biokonjugat ferne biotyny.Tutaj przedstawiono formę biokoniugatu ferne-biotyna 1 związanego z żywicą. Kowalencyjne przyłączenie komponentu ferne nadaje kuleczkom żywicy pomarańczowy odcień, co wskazuje na unieruchomienie kompleksu zawierającego żelazo, w przeciwieństwie do absorpcji żelaza przez komponent PEG kuleczki żywicy. Po usunięciu związku z kuleczek żywicy, otrzymana czystość i wydajność są znacznie wyższe niż w przypadku typowej metodologii w roztworze.Po opanowaniu techniki, procedura ta może zostać wykonana w ciągu trzech dni, pod warunkiem właściwego przeprowadzenia. Należy pamiętać, że praca z kwasem chlorowodorowym oraz fluorkami może być niezwykle niebezpieczna; podczas wykonywania tej procedury zawsze należy zachować środki ostrożności, takie jak stosowanie środków ochrony osobistej i przeprowadzanie prac w komorze dyfuzyjnej.

synthetic-methodology-for-asymmetric-ferrocene-derived-bio-conjugate

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Metodologia syntetyczna dla asymetrycznych układów biokoniugatowych pochodzenia ferrocenowego poprzez metodę fazy stałej opartą na żywicy

Opisano wydajną syntezę na fazie stałej funkcjonalizowanego trimeru bis-peptydowego z wykorzystaniem procedury odszczepiania typu „safety catch” z żywicy HMBA.

Synteza na fazie stałej funkcjonalizowanego bis-peptydu z wykorzystaniem metodologii „safety catch”

Ten protokół szczegółowo opisuje ważne kroki wymagane do biokoniugacji białka zawierającego cysteinę z maleimidem, w tym oczyszczanie odczynników, warunki reakcji, oczyszczanie biokoniugatu i charakterystykę biokoniugatu.

Synteza biokoniugatów białkowych za pomocą chemii cysteiny-maleimidu

Przedstawiono potencjalną ogólną metodę syntezy rozpuszczalnych w wodzie wielometalicznych matryc peptydowych zawierających z góry określoną sekwencję centrów metali.

Synteza rozpuszczalnego w wodzie złożonego układu metalowo-organicznego

Przedstawiamy protokół budowy spiralnych peptydów tioeterowych/siarczków winylu za pomocą fotoindukowanej hydrotiolacji tiol-en/tiol-yne.

Konstruowanie peptydów helisowych na uwięzi tioeteru/siarczku winylu za pomocą fotoindukowanej hydrotiolacji tiolu-enu / yny

Tutaj prezentujemy protokół, aby zademonstrować skuteczną metodę syntezy spirocyklicznych heterocykli. Pięcioetapowy proces wykorzystuje syntezę w fazie stałej i regenerację strategii łącznika Michaela. Generalnie trudna do syntezy, przedstawiamy konfigurowalną metodę syntezy cząsteczek spirocyklicznych, która w inny sposób jest niedostępna dla innych nowoczesnych podejść.

Synteza oksymów spirocyklicznych w fazie stałej [4.4]

W tym protokole opiszemy syntezę PODS, odczynnika na bazie fenyoksadiazolylu metylosulfonu do selektywnego przyłączania ładunków do tioli biomolekuł, szczególnie przeciwciał. Ponadto opiszemy syntezę i charakterystykę dwufunkcyjnego chelatora nośnego POD oraz jego koniugację z modelowym przeciwciałem.

Synteza i biokoniugacja odczynników tiolowo-reaktywnych do tworzenia immunokoniugatów modyfikowanych selektywnie

Przedstawiono protokół do syntezy kodowanych informacyjnie oligomerów peptoidowych oraz do sekwencyjnego samoorganizowania tych peptoidów w drabinki molekularne przy użyciu amin i aldehydów jako dynamicznych par kowalencyjnych reagentów oraz kwaśnych triflatów metali ziem rzadkich Lewisa jako odczynników wielozadaniowych.

Synteza peptydów niosących informacje i ich sekwencyjna dynamiczna samoorganizacja kowalencyjna

Ten protokół przedstawia syntezę cyklicznych peptydów poprzez bissalkilację między cysteiną a metioniną oraz łatwą reakcję tiol-yne wywołaną przez centrum propargylu sulfonium.

Konstruowanie cyklicznych peptydów przy użyciu centrum sulfonowego na uwięzi

Ten protokół opisuje syntezę cyklicznych peptydów penetrujących komórki z aromatycznymi wiązaniami krzyżowymi oraz ocenę ich przepuszczalności przez bariery biologiczne.

Budowa cyklicznych peptydów penetrujących komórki w celu zwiększenia penetracji barier biologicznych

Wysokociśnieniowy aparat szafirowy jest unikalnym narzędziem do badania, bez pobierania próbek, zachowania fazowego w szerokim zakresie ciśnień. Za pomocą cetetometru można rejestrować bardzo precyzyjne pomiary objętości w celu pomiaru rozszerzalności cieczy i składu fazowego. W związku z tym ta metoda syntezy umożliwia badanie (1) równowag fazowych mieszanin wieloskładnikowych oraz (2) zachowania się podziału katalizatora lub związków modelowych w funkcji ciśnienia.

Wysokociśnieniowa cela szafirowa do pomiarów równowagi fazowej w systemach CO2 / organicznych / wodnych

Poznaj metodę syntezy asymetrycznych biokoniugatów ferrocenowo-biotynowych na żywicy w fazie stałej. Technika ta umożliwia łatwą izolację i efektywną immobilizację na powierzchniach złota.

Metodologia syntezy asymetrycznych układów biosprzężonych pochodzących z ferrocenu za pomocą metodologii opartej na żywicy w fazie stałej (Wideo) | JoVE Journal

Metodologia syntezy asymetrycznych układów biosprzężonych pochodzących z ferrocenu za pomocą metodologii opartej na żywicy w fazie stałej

Przeglądaj więcej filmów