Name: Ocena inwazji bakteryjnej komórek serca w hodowli i kolonizacji serca u zakażonych myszy przy użyciu Listeria monocytogenes (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Poznaj metody oceny inwazji Listeria monocytogenes do komórek serca w hodowli in vitro oraz kolonizacji serca u myszy. Protokół obejmuje infekcję komórek, inokulację dożylną i monitorowanie zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty Publicznej Służby Zdrowia AI41816 i AI099339 (N.E.F.) oraz przez F31AI094886-01 (P.D.M.) od NIAID. Wyłączną odpowiedzialność za ich treść ponoszą autorzy i nie muszą one odzwierciedlać oficjalnych poglądów źródeł finansowania.

<ol><li>Freitag, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+hot+dogs+to+host+cells%3A+how+the+bacterial+pathogen+Listeria+monocytogenes+regulates+virulence+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiol%22%5BJournal%5D)">From hot dogs to host cells: how the bacterial pathogen Listeria monocytogenes regulates virulence gene expression.</a> Future Microbiol. 1, 89-101 (2006).</li>
<li>Drevets, D. A., Bronze, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Listeria+monocytogenes%3A+epidemiology%2C+human+disease%2C+and+mechanisms+of+brain+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunol+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Listeria monocytogenes: epidemiology, human disease, and mechanisms of brain invasion.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 53, 151-165 (2008).</li>
<li>Farber, J. M., Peterkin, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Listeria+monocytogenes.+a+food-borne+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Listeria monocytogenes. a food-borne pathogen.</a> Microbiol. Rev. 55, 476-511 (1991).</li>
<li>Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+how+Listeria+monocytogenes+targets+and+crosses+host+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Understanding how Listeria monocytogenes targets and crosses host barriers.</a> Clin Microbiol Infect. 11, 430-436 (2005).</li>
<li>Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+listeriosis+and+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Human listeriosis and animal models.</a> Microbes Infect. 9, 1216-1225 (2007).</li>
<li>Bou Ghanem, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((InlA+promotes+dissemination+of+Listeria+monocytogenes+to+the+mesenteric+lymph+nodes+during+food+borne+infection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice.</a> PLoS Pathog. 8, e1003015(2012).</li>
<li>Melton-Witt, J. A., Rafelski, S. M., Portnoy, D. A., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+infection+with+signature-tagged+Listeria+monocytogenes+reveals+organ-specific+growth+and+dissemination+routes+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Oral infection with signature-tagged Listeria monocytogenes reveals organ-specific growth and dissemination routes in guinea pigs.</a> Infect Immun. 80, 720-732 (2012).</li>
<li>Alonzo, F. 3rd, Bobo, L. D., Skiest, D. J., Freitag, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+subpopulations+of+Listeria+monocytogenes+with+enhanced+invasion+of+cardiac+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evidence for subpopulations of Listeria monocytogenes with enhanced invasion of cardiac cells.</a> J Med Microbiol. , (2011).</li>
<li>Adler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+pseudotumor+of+the+heart+caused+by+Listeria+monocytogenes+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect%22%5BJournal%5D)">Inflammatory pseudotumor of the heart caused by Listeria monocytogenes infection.</a> J Infect. 58, 161-163 (2009).</li>
<li>Antolin, J., Gutierrez, A., Segoviano, R., Lopez, R., Ciguenza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocarditis+due+to+Listeria%3A+description+of+two+cases+and+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Endocarditis due to Listeria: description of two cases and review of the literature.</a> Eur J Intern Med. 19, 295-296 (2008).</li>
<li>Brouqui, P., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocarditis+due+to+rare+and+fastidious+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Endocarditis due to rare and fastidious bacteria.</a> Clin Microbiol Rev. 14, 177-207 (2001).</li>
<li>Brusch, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+infections+in+the+immunosuppressed+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Cardiac infections in the immunosuppressed patient.</a> Infect Dis Clin North Am. 15, 613-638 (2001).</li>
<li>McCue, M. J., Moore, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocarditis+with+microabscess+formation+caused+by+Listeria+monocytogenes+associated+with+myocardial+infarct%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Myocarditis with microabscess formation caused by Listeria monocytogenes associated with myocardial infarct.</a> Hum Pathol. 10, 469-472 (1979).</li>
<li>Menard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+L-type+calcium+channel+expression+during+retinoic+acid-induced+differentiation+of+H9C2+cardiac+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Modulation of L-type calcium channel expression during retinoic acid-induced differentiation of H9C2 cardiac cells.</a> J Biol Chem. 274, 29063-29070 (1999).</li>
<li>Czuprynski, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Listeria+monocytogenes%3A+silage%2C+sandwiches+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Health+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Listeria monocytogenes: silage, sandwiches and science.</a> Anim Health Res Rev. 6, 211-217 (2005).</li>
<li>Grundler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surface+proteins+InlA+and+InlB+are+interdependently+required+for+polar+basolateral+invasion+by+Listeria+monocytogenes+in+a+human+model+of+the+blood-cerebrospinal+fluid+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">The surface proteins InlA and InlB are interdependently required for polar basolateral invasion by Listeria monocytogenes in a human model of the blood-cerebrospinal fluid barrier.</a> Microbes Infect. 15, 291-301 (2013).</li>
<li>Zeldovich, V. B., Robbins, J. R., Kapidzic, M., Lauer, P., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+extravillous+trophoblasts+restrict+intracellular+growth+and+spread+of+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Invasive extravillous trophoblasts restrict intracellular growth and spread of Listeria monocytogenes.</a> PLoS Pathog. 7, e1002005(2011).</li>
<li>Kimes, B. W., Brandt, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+a+clonal+muscle+cell+line+from+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Properties of a clonal muscle cell line from rat heart.</a> Experimental cell research. 98, 367-381 (1976).</li>
<li>McMullen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+sequence+of+Listeria+monocytogenes+07PF0776%2C+a+cardiotropic+serovar+4b+strain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Genome sequence of Listeria monocytogenes 07PF0776, a cardiotropic serovar 4b strain.</a> J Bacteriol. 194, 3552(2012).</li>
</ol>

Autorzy nie informują o żadnych sprzecznych interesach finansowych.

L. monocytogenes jest szeroko rozpowszechnionym i dobrze scharakteryzowanym ludzkim patogenem, zdolnym do wywoływania wielu różnych objawów chorobowych15. Bakteria została wcześniej opisana ze względu na jej zdolność do przemieszczania się przez bariery, takie jak bariera krew-mózg i bariera łożyskowo-płodowa, w celu dotarcia i skolonizowania ośrodkowego układu nerwowego i rozwijającego się płodu. Zdolność organizmu do kolonizacji tych tkanek in vivo jest często uzupełniana zdolnością in ...

Listeria monocytogenes to wewnątrzkomórkowy patogen Gram-dodatni, zdolny do wywoływania ciężkiej choroby w populacjach podatnych, w tym u osób starszych, kobiet w ciąży, osób z HIV/AIDS i osób otrzymujących chemioterapię1. Zakażenie w tych populacjach jest często wynikiem spożycia skażonych produktów spożywczych, a większość zakażeń jest związana z wybuchami epidemii przenoszonych przez żywność na dużą skalę2,3. U ludzi i innych ssaków L. monocytogenes jest zdolny do przemieszczania się przez granicę nabłonkową jelita cienkiego, a następnie jest transportowany do wątroby4,5. Modele zwierzęce sugerują, że spożyte bakterie replikują się w kosmkach jelitowych i przechodzą do wątroby przez żyłę wrotną lub rozprzestrzeniają się przez węzły chłonne krezkowe do krwiobiegu, prowadząc do rozsiewu krwiotwórczego do wątroby i śledziony6,7. W wątrobie i śledzionie bakteria jest zdolna do pośredniczenia w wychwytywaniu zarówno do profesjonalnych fagocytów, jak i rezydentnych komórek miąższowych i szybko tworzy infekcje w tych narządach. Wraz ze wzrostem obciążenia bakteryjnego liczne bakterie są rozpraszane z powrotem do krwi, gdzie są zdolne do dalszej kolonizacji wrażliwych tkanek, w tym ośrodkowego układu nerwowego i łożyska (jeśli są obecne). Kolonizacja tych miejsc wyklucza najczęstsze objawy listeriozy u ludzi, w tym zapalenie opon mózgowych, zapalenie mózgu i poronienia płodu2.
Ostatnio wykazano, że wybrane subpopulacje L. monocytogenes mają zwiększoną zdolność do inwazji i replikacji w tkance serca8. Objawy zajęcia serca są zróżnicowane i wahają się od zapalenia wsierdzia i zapalenia osierdzia do piorunującego zapalenia mięśnia sercowego wraz z nieprawidłowościami przewodzenia9-13. Ogólna liczba przypadków sercowych L. monocytogenes w ciągu roku jest niska, ale może być niedoszacowana, ponieważ ten aspekt infekcji nie jest ogólnie dobrze rozpoznany. Kolonizacja serca przez patogeny często wymaga predyspozycji gospodarza, takich jak istniejące wcześniej uszkodzenia zastawek lub sztuczne zastawki serca. Istnieją jednak zidentyfikowane izolaty L. monocytogenes, które wyróżniają się zdolnością do kolonizacji serc zakażonych zwierząt przy braku jakiegokolwiek uszkodzenia serca i/lub nieprawidłowości8.
Tutaj opisano metody in vitro i in vivo do oceny bakteryjnej kolonizacji tkanki serca u zakażonych zwierząt za pomocą testów inwazyjnych w hodowli tkankowej, jak również infekcji żywych zwierząt. Metody te okazały się przydatne nie tylko w identyfikacji szczepów mogących kolonizować tkankę serca u zakażonych zwierząt, ale powinny być również przydatne w identyfikacji produktów genów bakteryjnych, które służą do zwiększenia inwazji komórek serca i / lub powodują zmiany w patologii serca. Metody te ułatwiają porównanie kardiotropizmu między wieloma szczepami. W opisanych tutaj metodach L. monocytogenes 10403S jest używany jako dobrze przebadany przedstawiciel szczepu niekardiotropowego, a izolat kliniczny 07PF0776 jest używany jako reprezentatywny przykład szczepu kardiotropowego. Te dwa szczepy zostały wybrane w celu porównania inwazji bakteryjnej komórek serca in vitro i kolonizacji serc zakażonych myszy in vivo. Izolat 07PF0776 jest izolatem klinicznym wyleczonym z ropnia międzykomorowego, który spowodował śmiertelną arytmię u pacjenta z HIV+8. Izolaty L. monocytogenes mogą różnić się pod względem potencjału wirulencji, a biorąc pod uwagę skłonność Listerii do zakażania osób z immunosupresją i kobiet w ciąży, osoby w tych populacjach powinny zachować ostrożność podczas oceny różnych izolatów klinicznych.

<table><tbody><tr><td>Difco</td><td>BHI Bulion Base</td><td>237200</td><td>2 kg proszku do naparu z Brain Heart (bez agaru)</td></tr><tr><td>Difco</td><td>Agar</td><td>214510</td><td>2 kg agaru granulowanego</td></tr><tr><td>Difco</td><td>BHI Agar</td><td>241810</td><td>2 kg Brain Heart Infusion Powder z 7,5% Agarem</td></tr><tr><td>in vitrogen</td><td>LB Bulion Base</td><td>12975-084</td><td>2 kg Luria Bulion Base Powder (bez agaru)</td></tr><tr><td>Fisher</td><td>Glass Szkiełka nakrywkowe</td><td>12-545-80</td><td>Szkiełka nakrywkowe szklane 12 mm</td></tr><tr><td>Falcon</td><td>24-dołkowa płytka do hodowli tkankowej</td><td>35-3047</td><td>24-dołkowa, płytka do hodowli tkankowej poddawana działaniu osocza</td></tr><tr><td>Falcon</td><td>14 ml Probówka polistyrenowa</td><td>352051</td><td>14 ml Probówki polistyrenowe</td></tr><tr><td>Falcon</td><td>96-dołkowa płytka dolna</td> Falcon <td>35-3077</td><td>Płytka 96-dołkowa poddana hodowli nietkankowej</td></tr><tr><td>Corning</td><td>0,05% trypsyna, 0,53 mM EDTA (1X)</td><td>25-052-CI</td><td>Podstawowy roztwór trypsyny EDTA do hodowli tkankowej</td></tr><tr><td>Corning</td><td>DMEM (wysoka glukoza, wysoka pirogronian)</td><td>15-013-CU</td><td>Pożywka DMEM bez FBS, glutaminy i antybiotyków</td></tr><tr><td></td><td>Corning Pen/Strep/Glut Solution</td><td>30-009-CI</td><td>Podstawowa mieszanina penicyliny, streptomycyny i L-glutaminy do hodowli tkankowej</td></tr><tr><td>Corning</td><td>Gentamycyna</td><td>30-005-CR</td><td>50 mg/ml Roztwór podstawowy gentamycyny do hodowli tkankowej</td></tr><tr><td>Cellgro (Corning)</td><td>L-Glutamina</td><td>25005197</td><td>Zapas Roztwór L-glutaminy bez antybiotyków</td></tr><tr><td>Kolba Denville</td><td>75cm^2</td><td>T1225</td> Kolba <td>75 cm2 Kolba poddana kulturze tkankowej</td></tr><tr><td>Denville</td><td>1,5 ml probówki do mikrowirówek</td><td>2013004</td><td>1,5 ml probówki do mikrowirówek</td></tr><tr><td>ATCC</td><td>H9c2 Cardiac Mioblasty</td><td>CRL-1446</td><td>Mioblasty serca szczura</td></tr><tr><td>Hyklon</td><td>Płodowa surowica bydlęca</td><td>SH30070.63</td><td>Płodowa surowica bydlęca</td></tr></tbody></table>

ocena inwazji bakteryjnej komórek serca w hodowli i kolonizacji serca u zakażonych myszy przy użyciu listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes to Gram-dodatni fakultatywny patogen wewnątrzkomórkowy, który jest zdolny do wywoływania poważnych infekcji inwazyjnych u pacjentów z obniżoną odpornością, osób starszych i kobiet w ciąży. Najczęstsze objawy listeriozy u ludzi to zapalenie opon mózgowych, zapalenie mózgu i poronienia płodu. Znaczące, ale znacznie mniej udokumentowane następstwa inwazyjnego zakażenia L. monocytogenes dotyczą serca. Śmiertelność z powodu chorób serca może wynosić do 35% pomimo leczenia, jednak bardzo niewiele wiadomo na temat kolonizacji tkanki serca przez L. monocytogenes i wynikających z niej patologii. Ponadto ostatnio okazało się, że subpopulacje L. monocytogenes mają zwiększoną zdolność do inwazji i wzrostu w tkance serca. Protokół ten szczegółowo opisuje metody in vitro i in vivo, które mogą być stosowane do oceny kardiotropizmu izolatów L. monocytogenes. Przedstawiono metody zakażenia mioblastów serca szczura H9c2 w hodowli tkankowej, a także do oznaczania kolonizacji bakteryjnej serc zakażonych myszy. Metody te są przydatne nie tylko do identyfikacji szczepów o potencjale kolonizacji tkanki serca u zakażonych zwierząt, ale mogą również ułatwić identyfikację produktów genów bakteryjnych, które służą do zwiększenia inwazji komórek serca i / lub napędzania zmian w patologii serca. Metody te umożliwiają również bezpośrednie porównanie kardiotropizmu między wieloma szczepami L. monocytogenes.

Wybrane izolaty L. monocytogenes wykazują zwiększoną inwazyjność do komórek serca w hodowlach komórkowych oraz w mysich modelach infekcji. Rycina 1 przedstawia przykład wyglądu kolonii bakteryjnych po metodzie spot platingu zawiesin na pożywkach agarowych. Metoda ta pozwala na dokładną ocenę CFU w próbce bez konieczności wykorzystywania dużej liczby szalek z agarem. Rycina 2 przedstawia przykład testu opartego na hodowli tkankowej, porównującego zdolność szczepu 10403S do inwazj...

Listeria monocytogenes powoduje infekcje płodu u kobiet w ciąży i zapalenie opon mózgowych w populacjach podatnych. Subpopulacje bakterii mogą kolonizować tkankę serca, powodując zapalenie mięśnia sercowego u pacjentów i zwierząt laboratoryjnych. W tym miejscu przedstawiamy protokół, który opisuje, jak ocenić inwazję komórek serca L. monocytogenes in vitro i kolonizację serca u zakażonych zwierząt.

Ocena inwazji bakteryjnej komórek serca w hodowli i kolonizacji serca u zakażonych myszy przy użyciu Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest przedstawienie efektywnych metod oceny zakażenia komórek serca przez drobnoustroje przy użyciu modeli in vivo i in vitro kolonizacji serca oraz inwazji komórek serca. Cel ten osiąga się poprzez uprawę kultur bakteryjnych, a następnie zbieranie, przemywanie i resuspensję komórek bakteryjnych w soli fizjologicznej z buforem fosforanowym. Następnie monowarstwy komórek serca hodowane na szkiełkach przedmiotowych są zakażane zawiesiną bakteryjną lub zawiesina bakteryjna jest wprowadzana do organizmów myszy poprzez wstrzyknięcia do żyły ogonowej.Następnie komórki serca inkubuje się w obecności gentamycyny w celu zabić bakterie zewnątrzkomórkowe, po czym przeprowadza się lizę komórek w celu odzyskania bakterii. Stan zdrowia bakterii lub zainfekowanych zwierząt monitoruje się przez dwa do trzech dni po infekcji, a następnie zwierzęta uśpić w celu wyizolowania narządów docelowych. Na koniec zawiesiny komórkowe i tkankowe rozcieńcza się i wysiewa metodą spot plating, aby określić liczbę żywotnych bakterii związanych z komórkami lub narządami docelowymi.Ostatecznie kolonie bakterii są przeliczone na podłożu agarowym w celu określenia wydajności inwazji

assessing-bacterial-invasion-cardiac-cells-culture-heart-colonization

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ocena inwazji bakterii na komórki serca w kulturze i kolonizacji serca u zarażonych myszy za pomocą Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes jest organizmem modelowym do badania odpowiedzi immunologicznych i genetycznej podatności myszy na bakterie wewnątrzkomórkowe. Metoda ta umożliwia pomiar ładunku bakteryjnego oraz przygotowanie jednokomórkowych zawiesin wątroby i śledziony myszy do analizy FACS w celu określenia zmian w komórkach odpornościowych wywołanych zakażeniem Listeria.

Pomiar ładunku bakteryjnego i odpowiedzi immunologicznych u myszy zainfekowanych Listeria monocytogenes

Źródło: McMullen, P. D., Freitag, N. E. Ocena inwazji bakterii na komórki serca w hodowli i kolonizacji serca u zakażonych myszy z użyciem Listeria monocytogenes. J. Vis. Exp. (2015)Ten film pokazuje wstrzyknięcie Listeria monocytogenes do żyły ogonowej myszy w celu wywołania infekcji ogólnoustrojowej. Pokazuje krążenie bakteryjne, kolonizację narządów oraz ilościowe określenie obciążenia bakteryjnego w sercu poprzez homogenizację tkanek, wykonywanie seryjnego rozcieńczania i płyty płytowe.

Ilościowe określenie obciążenia bakteryjnego w sercu myszy po wstrzyknięciu Listeria monocytogenes do żyły ogonowo-ogonowocznej

Ten film demonstruje metodę tworzenia modelu infekcji w tkankach łożyska w celu badania rozprzestrzeniania się infekcji. Posiew narządów łożyska ex vivo jest zakażony Listeria monocytogenes, fakultatywnym pasożytem wewnątrzkomórkowym. Bakterie atakują trofoblasty kosmkowe (EVT), aby dostać się do tkanki łożyska, a następnie rozmnażają się do innych komórek poprzez rozprzestrzenianie się z komórki na komórkę.

Technika tworzenia modelu infekcji bakteryjnej w hodowli narządów ex vivo

Ten film pokazuje ilościowe określenie obciążenia bakteryjnego z perfundowanego mózgu myszy zakażonego Listeria monocytogenes.

Ocena kolonizacji bakteryjnej w mózgu myszy po zakażeniu Listeria monocytogenes

Ten artykuł opisuje nowatorską metodę doustnego zakażenia myszy za pomocą żywności skażonej Listeria monocytogenes. Protokół można łatwo dostosować do stosowania z innymi patogenami bakteryjnymi przenoszonymi przez żywność.

Przenoszenie Listeria monocytogenes drogą pokarmową drogą pokarmową u myszy

Listeria monocytogenes to Gram-dodatni patogen bakteryjny, często używany jako główny model do badania pasożytnictwa wewnątrzkomórkowego. Obrazowanie późnych etapów infekcji L. monocytogenes w kontekście małych interferujących badań przesiewowych RNA pozwala na globalne badanie szlaków komórkowych wymaganych do infekcji bakteryjnej docelowych komórek gospodarza.

Obrazowanie wydzielania InlC w celu zbadania zakażenia komórkowego patogenem bakteryjnym Listeria monocytogenes

Streptococcus pneumoniae tworzy dyskretne, nieropne, mikroskopijne zmiany w sercu. Przedstawiono protokół mysiego modelu powstawania mikrouszkodzeń serca. Prowadzone są szkolenia dotyczące wizualizacji mikrozmian za pomocą mikroskopii, rozróżniania wczesnych i późnych mikrouszkodzeń oraz metod wykrywania przebudowy serca w sercach rekonwalescentów.

Wizualizacja Streptococcus pneumoniae w obrębie mikrouszkodzeń serca i późniejsza przebudowa serca

Ten protokół opisuje, jak zaszczepić myszy C57BL/6J szczepem EGD Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) i zmierzyć odpowiedzi interferonu γ (IFN-γ) przez komórki NK (natural killer), limfocyty T (NKT) i adaptacyjne limfocyty T po zakażeniu. Protokół ten opisuje również, w jaki sposób przeprowadzać badania przeżycia u myszy po zakażeniu zmodyfikowaną dawką LD50 patogenu.

Eksperymentalne zakażenie Listeria monocytogenes jako model do badania odpowiedzi na interferon-γ gospodarza

Przedstawiono szczegółowy protokół mysiego modelu kolonizacji enterokwotocznej E. coli (EHEC) przy użyciu bakterii znakowanych bioluminescencyjnie. Wykrycie tych bioluminescencyjnych bakterii za pomocą nieinwazyjnego systemu obrazowania in vivo u żywych zwierząt może poszerzyć naszą obecną wiedzę na temat kolonizacji EHEC.

Wykrywanie enterokrwotocznej kolonizacji Escherichia coli u mysiego gospodarza za pomocą nieinwazyjnego systemu bioluminescencji in vivo

Podczas infekcji, Listeria monocytogenes jest zdolna do przekraczania bariery krew-mózg w celu kolonizacji mózgu. W tym protokole pokazujemy, jak ocenić kolonizację bakteryjną narządów po zakażeniu myszy. Przewidziana jest procedura wykonywania perfuzji całego narządu w celu specyficznego określenia liczby bakterii w miąższu mózgu.

Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes) Zakażenie mózgu

Opisujemy zarówno testy infekcji in vitro, jak i in vivo, które mogą być użyte do analizy aktywności czynników kodujących gospodarza.

Wykorzystanie patogenu bakteryjnego do badania odpowiedzi gospodarza na poziomie komórkowym i organizmowym

Poznaj metody oceny inwazji Listeria monocytogenes do komórek serca w hodowli in vitro oraz kolonizacji serca u myszy. Protokół obejmuje infekcję komórek, inokulację dożylną i monitorowanie zwierząt.

Ocena inwazji bakteryjnej komórek serca w hodowli i kolonizacji serca u zakażonych myszy przy użyciu Listeria monocytogenes

Przeglądaj więcej filmów