Name: Sekcja całego ciała szklistego do analizy witreodynamicznej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: Poznaj technikę izolacji całego, nienaruszonego ciała szklistego z oczu świń pośmiertnych. Metoda zachowuje strukturę anatomiczną i umożliwia badanie właściwości fizycznych oraz chemicznych ciała szklistego.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy wymieniają następujące źródła finansowania: Whittier Foundation, Harrington Foundation, National Institutes of Health and Research to Prevent Blindness.

Wszystkie wyłuszczone oczy zostały uzyskane z rzeźni, a wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi przepisami dotyczącymi bezpieczeństwa biologicznego.
<ol>
	<li>Przymocuj wyłuszczone oko do powierzchni. W tym celu należy umieścić szpilki do tkanek w nadmiarze tkanki wokół oka i przymocować je do płyty styropianowej.</li>
	<li>Wypreparuj i odłącz spojówkę okołolimbową od oka.
	<ol>
		<li>Użyj cienkich kleszczy (0,3 kleszczyka) i mikronożyczek (nożyczki Westcotta), aby naciąć spojówkę na rąbku i tępo odciąć ją od twardówki. Przetnij spojówkę wzdłuż rąbka, gdy rozwarstwienie postępuje, aby umożliwić dalszą sekcję.</li>
		<li>Usuń spojówkę na całej długości oka (360 stopni), aby odsłonić jak najwięcej twardówki. 
		UWAGA: Pomocne jest pozostawienie niewielkiej ilości spojówki, aby ułatwić mocowanie oka za pomocą szpilek chirurgicznych lub kleszczy podczas pozostałej części zabiegu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Utwórz płat twardówki o pełnej grubości wzdłuż jednej strony oka (ostrze skalpela 69).
	<ol>
		<li>Wykonaj nacięcie twardówki o średnicy ~5 mm równolegle do rąbka i 3 mm z tyłu do rąbka, delikatnie nacinając twardówkę skalpelem (ostrze skalpela 11), aż do wyświetlenia ciemno zabarwionego naczyniówki. Uważaj, aby nie naciąć samego naczyniówki.</li>
		<li>Ostrożnie wypreparuj wzdłuż płaszczyzny między twardówką a naczyniówką, nożyczkami (przy użyciu sekcji) lub skalpelem, aż będzie można powiększyć potencjalną przestrzeń między tymi tkankami, delikatnie popychając naczyniówkę do środka.</li>
		<li>Wykonaj kolejne nacięcie twardówki prostopadle do pierwszego nacięcia twardówki ostrymi mikronożyczkami, tworząc nacięcie w kształcie litery T.</li>
		<li>Następnie kontynuuj preparowanie w sposób obwodowy, aby usunąć tkankę twardówki z leżącego poniżej naczyniówki i delikatnie odepchnij naczyniówkę od twardówki, jak wspomniano powyżej.</li>
		<li>W razie potrzeby powiększ płat twardówki.
		<ol>
			<li>Delikatnie tępo, wypreparuj naczyniówkę z dala od twardówki przez cały proces.</li>
			<li>Powiększaj płatek, aż nacięcie wykonane prostopadle do rąbka dotrze do nerwu wzrokowego, a nacięcie wykonane równolegle do rąbka będzie miało co najmniej jedną trzecią obwodu oka (45°).</li>
			<li>Użyj płata twardówki jako źródła dźwigni do manipulowania okiem podczas rozwarstwienia. Przeciwbieżna trakcja na klapie ułatwia rozwarstwienie.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Powtórz poprzedni krok na drugim płatze twardówkowym.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Odetnij płaty twardówkowe, aby odsłonić duży obszar naczyniówki.</li>
	<li>Kontynuuj nacięcie wykonane w kroku 3 wokół obwodu oka (360 stopni).</li>
	<li>Usuń pozostałą tkankę naczyniówkowo-siatkówkową.
	<ol>
		<li>W odsłoniętym obszarze użyj bawełnianej końcówki, aby delikatnie zetrzeć pozostałą tkankę naczyniówkowo-siatkówkową. Alternatywnie, delikatnie chwyć tkankę kleszczami i oderwij ją od leżącego pod spodem ciała szklistego.</li>
		<li>W razie potrzeby wykonaj nacięcie w naczyniówce, zaczynając od nerwu wzrokowego. Następnie delikatnie oderwij naczyniówkę, aby odsłonić siatkówkę i korę ciała szklistego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kontynuuj preparowanie naczyniówki z dala od twardówki, a następnie oderwij naczyniówkę, aby uzyskać całe, nienaruszone ciało szkliste.</li>
	<li>Użyj obręczy twardówki przymocowanej do rogówki, aby ustawić całe ciało szkliste w pożądanym miejscu. W tym momencie ciało szkliste jest przyczepione do przedniej twardówki i soczewki.</li>
	<li>Tępo wypreparuj ciało szkliste od wewnętrznej strony twardówki, wokół soczewki, usuwając całą twardówkę.</li>
	<li>W razie potrzeby użyj narzędzia, aby zgarnąć soczewkę z ciała szklistego. Użyj próbki do różnych eksperymentów witreodynamicznych.
	<ol>
		<li>Umieścić próbkę w szklanej zlewce o znanej powierzchni wystawionej na działanie powietrza. Umieść sondę wrażliwą na tlen na krawędzi próbki. Użyj mikromanipulatora, aby przesunąć sondę na znaną odległość (r) w głąb próbki.</li>
		<li>Użyj praw dyfuzji Ficka, aby uzyskać teoretyczne równanie dyfuzji. Na podstawie danych zebranych w kroku 10.1 uzyskaj eksperymentalny współczynnik dyfuzji/termin reakcji itp.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Siggers, J. H., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+Mechanics+of+the+Eye%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Fluid+Mechanics%22%5BJournal%5D)">Fluid Mechanics of the Eye.</a> Annual Review of Fluid Mechanics. 44 (1), 347-372 (2012).</li>
<li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+human+vitreous+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in human vitreous structure.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 225 (2), 89-93 (1987).</li>
<li>Grignolo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrous+components+of+the+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22AMA+Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Fibrous components of the vitreous body.</a> AMA Arch Ophthalmol. 47 (6), 760-774 (1952).</li>
<li>Gisladottir, S., Loftsson, T., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+characteristics+of+vitreous+humour+and+saline+solution+follow+the+Stokes+Einstein+equation%5BTitle%5D)+AND+%22G+Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Diffusion characteristics of vitreous humour and saline solution follow the Stokes Einstein equation.</a> G Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 247 (12), 1677-1684 (2009).</li>
<li>Xu, J., Heys, J. J., Barocas, V. H., Randolph, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+and+diffusion+in+vitreous+humor%3A+implications+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Permeability and diffusion in vitreous humor: implications for drug delivery.</a> Pharm Res. 17 (6), 664-669 (2000).</li>
<li>Watts, F., Tan, L. E., Wilson, C. G., Girkin, J. M., Tassieri, M., Wright, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+micro-rheology+of+the+vitreous+humor+using+an+optically+trapped+local+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Optics%22%5BJournal%5D)">Investigating the micro-rheology of the vitreous humor using an optically trapped local probe.</a> Journal of Optics. 16 (1), 015301(2014).</li>
<li>Skeie, J. M., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+human+vitreous+body+elements+for+proteomic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of human vitreous body elements for proteomic analysis.</a> J Vis Exp. (47), e2455(2011).</li>
<li>Abdallah, W., Ameri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreal+oxygenation+in+retinal+ischemia+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Vitreal oxygenation in retinal ischemia reperfusion.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (2), 1035-1042 (2011).</li>
<li>Goldenberg, D., Trese, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+vitreodynamics%3A+what+is+it%3F+Why+is+it+important%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic vitreodynamics: what is it? Why is it important.</a> Expert Review of Ophthalmology. 3 (3), 273-277 (2008).</li>
<li>Choonara, Y. E., Pillay, V., Danckwerts, M. P., Carmichael, T. R., du Toit, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+implantable+intravitreal+drug+delivery+technologies+for+the+treatment+of+posterior+segment+eye+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">A review of implantable intravitreal drug delivery technologies for the treatment of posterior segment eye diseases.</a> J Pharm Sci. 99 (5), 2219-2239 (2010).</li>
<li>Balachandran, R. K., Barocas, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+modeling+of+drug+delivery+to+the+posterior+eye%3A+effect+of+active+transport+and+loss+to+choroidal+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Computer modeling of drug delivery to the posterior eye: effect of active transport and loss to choroidal blood flow.</a> Pharm Res. 25 (11), 2685-2696 (2008).</li>
<li>Smith, C. a, Newson, T. a, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+modeling+ocular+drug+transport+and+flow+through+the+eye+using+micro-CT%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for modeling ocular drug transport and flow through the eye using micro-CT.</a> Phys Med Biol. 57 (19), 6295-6307 (2012).</li>
<li>Quiram, P. A., Leverenz, V. R., Baker, R. M., Dang, L., Giblin, F. J., Trese, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplasmin-induced+posterior+vitreous+detachment+affects+vitreous+oxygen+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Microplasmin-induced posterior vitreous detachment affects vitreous oxygen levels.</a> Retina. 27 (8), 1090-1096 (2007).</li>
<li>Shui, Y., Holekamp, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gel+state+of+the+vitreous+and+ascorbate-dependent+oxygen+consumption%3A+relationship+to+the+etiology+of+nuclear+cataracts%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The gel state of the vitreous and ascorbate-dependent oxygen consumption: relationship to the etiology of nuclear cataracts.</a> Arch Ophthalmol. 127 (4), 475-482 (2009).</li>
<li>Burk, S. E., Da Mata, A. P., Snyder, M. E., Schneider, S., Osher, R. H., Cionni, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+vitreous+using+kenalog+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Visualizing vitreous using kenalog suspension.</a> J Cataract Refract Surg. 29 (4), 645-651 (2003).</li>
<li>Spaide, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+the+Posterior+Vitreous+with+Dynamic+Focusing+and+Windowed+Averaging+Swept+Source+Optical+Coherence+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Visualization of the Posterior Vitreous with Dynamic Focusing and Windowed Averaging Swept Source Optical Coherence Tomography.</a> Am J Ophthalmol. S0002-9394 (14), 00537-00536 (2014).</li>
<li>Domalpally, A., Gangaputra, S., Danis, R. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDomalpally%2C+A+%22Diseases+of+the+Vitreo-Macular+Interface%22">Diseases of the Vitreo-Macular Interface</a>. 21, Springer. Berlin Heidelberg: Berlin, Heidelberg. 21-27 (2014).</li>
<li>Stocchino, R., Repetto, A., Cafferata, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+investigation+of+vitreous+humour+motion+within+a+human+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Experimental investigation of vitreous humour motion within a human eye model.</a> Phys Med Biol. 50 (19), 4729-4743 (2005).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Istnieją dwa krytyczne etapy, które należy dokładnie wykonać podczas rozwarstwienia ciała szklistego. Krok 3, stworzenie płata twardówki o pełnej grubości, ma kluczowe znaczenie dla całego rozwarstwienia. Należy uważać, aby nie przeciąć naczyniówki podczas tworzenia płata twardówki o pełnej grubości. Drugim krytycznym krokiem jest wypreparowanie twardówki z naczyniówki. Ten krok należy wykonać ostrożnie, aby zapobiec tworzeniu się wielu otworów w naczyniówce, z których może ciało szkliste. Istnieje sposób na modyfikację ...

Celem tej metody jest szczegółowe opisanie techniki izolowania całego, nienaruszonego ciała szklistego, z nienaruszonym rdzeniem ciała szklistego i korą, z oka zwłok, dla celów analizy witreodynamicznej. Wraz z rozwojem fizjologii ciała szklistego multidyscyplinarni naukowcy, tacy jak naukowcy zajmujący się mechaniką płynów, badają fizyczne i biomechaniczne właściwości ciała szklistego1. W tym celu konieczne jest wyszczególnienie techniki izolowania całego, nienaruszonego ciała szklistego, aby pomóc multidyscyplinarnym badaczom.
Sebag et al.2 i inni3 przeprowadzili eleganckie sekcje całego ciała szklistego na ludzkich zwłokach i pokazali ilustracje wyników. Zastosowana technika nie została jednak szczegółowo opisana, a osoby niebędące ekspertami nie byłyby w stanie samodzielnie odtworzyć tej metody. W innych badaniach pobrano ciało szkliste z oczu zwłok przy użyciu prostszych metod, takich jak aspiracja lub częściowa sekcja, z których obie nie skutkują uzyskaniem całego, nienaruszonego ciała szklistego. Gisladottis i wsp.4 oraz Xu i wsp.5 Zbadaj przepuszczalność ciała szklistego pobranego z oczu zwłok. Ponieważ jednak nie opisano żadnej metody ekstrakcji ciała szklistego, założono, że odsysają oni ciało szkliste za pomocą strzykawki. Watts i wsp.6 poszedł o krok dalej, opisując metodę izolowania ciała szklistego królika za pomocą techniki chirurgicznej. Jednak ta metoda powoduje izolację tylko rdzenia ciała szklistego, a nie kory ciała szklistego. Skeie i wsp.7 później podzielił ciało szkliste na 4 unikalne regiony i elegancko opisał metodę preparowania każdej części do analizy. Technika ta nie prowadzi jednak do powstania nienaruszonego ciała szklistego jako całości.
Obecna technika została opracowana, aby ułatwić eksperymenty biofizyczne, które obecnie są wykonywane tylko na oczach zwłok. Poprzednie metody, jak opisano powyżej, są ograniczone, ponieważ: 1) żadna z nich nie izoluje całkowicie całego ciała szklistego, 2) pobrany rdzeń i kora ciała szklistego są homogenizowane, 3) struktura anatomiczna ciała szklistego nie jest zachowana, lub 4) techniki preparacji nie są odpowiednio szczegółowe do powtórzenia przez badaczy z innych dziedzin. Ponadto, ze względu na zmętnienie twardówki i naczyniówki, wizualizacja ciała szklistego jest ograniczona w nienaruszonej gałce ocznej. Ogranicza to precyzję i wykonalność pomiarów, które można wykonać wewnątrz całego oka. Ponadto struktury anatomiczne otaczające ciało szkliste mogą zakłócić badanie właściwości biochemicznych i fizycznych ciała szklistego.
W ostatnich latach ciało szkliste ogromnie się rozrosło i istnieją powody, aby sądzić, że całe ciało szkliste ma inne właściwości niż jego poszczególne części. Rośnie zainteresowanie badaniem właściwości fizycznych, biomechanicznych i chemicznych ciała szklistego w badaniach witreodynamicznych, które mają zastosowanie w medycynie klinicznej, takiej jak dostarczanie leków, natlenianie doszklistkowe8 i witrektomia. Witreodynamika farmakologiczna, która wykorzystuje środki farmakologiczne do manipulowania ciałem szklistym, może być stosowana w celu poprawy wyników witrektomii9. Właściwości biomechaniczne są wykorzystywane do modelowania przepływu płynu w ciele szklistym, co można wykorzystać do ulepszenia technologii dostarczania leków do ciała szklistego10–12. Właściwości fizyczne różnych segmentów ciała szklistego mają kluczowe znaczenie dla zrozumienia transportu tlenu w stanie szklistym i siatkówkowym13. Proponowana technika preparacji ciała szklistego może być wykorzystana do badania różnych właściwości nienaruszonego ciała szklistego. Umożliwia przeprowadzanie eksperymentów laboratoryjnych na całych, nienaruszonych ciałach szklistych z lepszą wizualizacją.
Podsumowując, obecne metody badania ciała szklistego albo nie są odpowiednio opisane, albo skutkują niekompletną izolacją rdzenia i kory ciała szklistego. W związku z tym istnieje potrzeba przeprowadzenia eksperymentów na przezroczystym modelu oka przy zachowaniu anatomii ciała szklistego, które istnieje w oku zwłok.

<table><tbody><tr><td>0,3 kleszczyka</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E1793</td><td></td></tr><tr><td>Westcott Nożyczki do tenotomii zakrzywione w prawo</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E3320 R</td><td></td></tr><tr><td>Rękojeść skalpela nr 3</td><td>VWR</td><td>25607-947</td><td></td></tr><tr><td>Ostrze skalpela, #11, do uchwytu #3</td><td>VWR</td><td>470174-844</td><td></td></tr></tbody></table>

sekcja całego ciała szklistego do analizy witreodynamicznej

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Autorzy proponują skuteczną technikę izolowania całego, nienaruszonego rdzenia i kory ciała szklistego z pośmiertnie wyłuszczonych oczu świń. Podczas gdy poprzednie badania wykazały wyniki takich sekcji, szczegółowe etapy nie zostały opisane, co uniemożliwia badaczom spoza tej dziedziny powtórzenie ich metod. Inne badania pobierają ciało szkliste albo przez aspirację, która nie utrzymuje anatomii struktury ciała szklistego, albo przez częściową dyspreparację, która izoluje tylko rdzeń ciała szklistego. Proponowana metoda polega na izolacji całego ciała szklistego, z nienaruszonym rdzeniem i korą ciała szklistego, przy zachowaniu anatomii ciała szklistego i integralności strukturalnej. W tej metodzie najpierw tworzony jest płat twardówkowy o pełnej grubości w wyłuszczonym oku świni, dzięki czemu można oddzielić tkankę naczyniówki od twardówki. Płat twardówkowy jest następnie rozszerzany, a naczyniówka jest całkowicie oddzielona od twardówki. Na koniec tkanka naczyniówkowo-siatkówkowa jest odrywana od ciała szklistego, aby pozostawić izolowane nienaruszone ciało szkliste. Proponowana technika preparacji ciała szklistego może być wykorzystana do badania właściwości fizycznych ciała szklistego. W szczególności metoda ta ma znaczenie dla badań eksperymentalnych obejmujących dostarczanie leków, transport tlenu w ciele szklistkowo-siatkówkowym oraz konwekcję wewnątrzgałkową.

Postępowanie zgodnie z protokołem pozwoli na prawidłowe wycięcie ciała szklistego przy zachowaniu nienaruszonego rdzenia i kory (Rycina 3). Świadczą o tym pozostałe fragmenty siatkówki przylegające do kory ciała szklistego. Nienaruszone, całe ciało szkliste może być wykorzystane na kilka sposobów w specyficznych eksperymentach witreodynamicznych. W naszym przypadku badano szybkość dyfuzji tlenu w nienaruszonym ciele szklistym oraz odpowiadającą jej stałą czasową (Rycina 2). Ciało szklist...

Celem tego protokołu jest pokazanie skutecznej techniki izolowania całego, nienaruszonego rdzenia i kory ciała szklistego z pośmiertnych wyłuszczonych oczu świń.

Sekcja całego ciała szklistego do analizy witreodynamicznej

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest zaprezentowanie skutecznej techniki izolacji całych, nienaruszonych rdzeni ciała szklistego oraz kory z pośmiertnych, zjądrzanych oczu świń. Osiąga się to najpierw poprzez wycięcie spojówki okołolimbalnej i odsłonięcie twardówki. W drugim kroku tworzona jest i rozszerzana pełnowarstwowa płat twardówki.Następnie błonę naczyniówkową oddziela się od twardówki, a tkankę naczyniówkowo-siatkówkową odrywa się od ciała szklistego. Ostatecznie cała nienaruszona wycięta rdzeń i kora ciała szklistego mogą zostać wykorzystane do badania właściwości fizycznych, biomechanicznych i chemicznych ciała szklistego. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z innymi istniejącymi metodami, takimi jak częściowe wycięcia ciała szklistego, jest to, że pozwala ona na izolację całego nienaruszonego rdzenia i kory ciała szklistego przy zachowaniu jego struktury anatomicznej. Pracę rozpoczyna się od przypięcia enukleowanego oka przez otaczającą go nadmiarową tkankę do styropianowej deski sekcyjnej.Po unieruchomieniu oka należy za pomocą precyzyjnej pęsety i mikronożyczek naciąć spojówkę na wysokości limbusa i oddzielić ją od twardówki metodą tępą. W miarę postępów preparowania tępą metodą, należy przecinać spojówkę wzdłuż limbusa, aby umożliwić dalszą dyssekcję. Następnie należy usunąć niemal całą spojówkę z całego obwodu oka, pozostawiając jedynie niewielki fragment, aby odsłonić jak największą powierzchnię twardówki.Następnie za pomocą skalpela wykonaj delikatne nacięcie twardówki w odległości około pięciu milimetrów równolegle i trzech milimetrów za limbusie, aż do momentu uwidocznienia ciemno pigmentowanej błony naczyniowej, aby utworzyć płatek twardówki. Następnie ostrożnie rozdziel tkankę tępą metodą wzdłuż płaszczyzny między twardówką a błoną naczyniową, aż do momentu, gdy możliwe będzie delikatne pchnięcie błony naczyniowej do wewnątrz w celu powiększenia przestrzeni między obiema tkankami. Za pomocą ostrych mikronozyciórek wykonaj kolejne nacięcie twardówki prostopadle do pierwszego, aby utworzyć nacięcie w kształcie litery T.Następnie kontynuuj tępe rozcinanie obwodowo, aby oddzielić tkankę twardówki od leżącej pod nią błony naczyniowej, i delikatnie odsuwaj błonę naczyniową od twardówki, aby powiększyć płat. Delikatnie i tępym sposobem oddzielaj błonę naczyniową od twardówki, aż nacięcie wykonane prostopadle do limbusa dotrze do nerwu wzrokowego, a nacięcie wykonane równolegle do limbusa obejmie co najmniej 45 stopni obwodu oka. Wykorzystaj ten płat, aby powtórzyć tępe rozcinanie po drugiej stronie oka.Następnie wyciąć obie klapy twardówki, aby odsłonić duży obszar naczyniówki. Kontynuować nacięcie tępo wokół obwodu oka. Oddzielić naczyniówkę od twardówki i usunąć pozostałą tkankę naczyniówkowo-siatkówkowej w odsłoniętym obszarze.Wykonaj nacięcie ciała rzęskowego, zaczynając od nerwu wzrokowego. Następnie za pomocą pęsety delikatnie oddziel tkankę od znajdującego się pod nią ciała szklistego. Kontynuuj tępe rozcinanie i oddzielanie ciała rzęskowego, aż do uzyskania całego, nienaruszonego ciała szklistego.Następnie należy wykorzystać przymocowany do rogówki brzeg twardówki, aby ustawić całe ciało szkliste w pożądanej pozycji. Na tym etapie ciało szkliste powinno być nadal przytwierdzone do przedniej części twardówki i soczewki. Na koniec należy tępo oddzielić ciało szkliste od wewnętrznej strony twardówki oraz z okolic soczewki.Aby usunąć całą twardówkę, należy użyć tępego narzędzia, by w razie potrzeby oddzielić soczewkę od ciała szklistego. Postępowanie zgodnie z zaprezentowanym protokołem pozwoli na pomyślną dysekcję ciała szklistego z nienaruszoną rdzeniem i korą, co potwierdzają pozostałe fragmenty siatkówki przylegające do kory ciała szklistego. Na tym obrazie widać, że nienaruszone, kompletne ciało szkliste może być następnie wykorzystane na kilka sposobów w specyficznych eksperymentach viremicznych.Na przykład w tym przypadku badano szybkość dyfuzji tlenu w nienaruszonym ciele szklistym oraz odpowiadającą jej stałą czasową w obecności kory ciała szklistego. Dyfuzja tlenu zachodziła w dłuższym przedziale czasowym. Należy pamiętać, że praca z ostrymi narzędziami może być niebezpieczna, dlatego podczas wykonywania tej procedury zawsze należy przestrzegać środków ostrożności, takich jak prawidłowa obsługa i utylizacja narzędzi.

whole-vitreous-humor-dissection-for-vitreodynamic-analysis

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Kompletna Dysekcja Mokrzenicy do Analizy Witreodynamicznej

Niniejszy film przedstawia skuteczną technikę różnicowania i preparowania poszczególnych półprzezroczystych struktur ciała szklistego ludzkiego oka w materiale pośmiertnym.

Disekcja elementów ludzkiego ciała szklistego do analizy proteomicznej

Technika sekcji ilustruje proces usuwania ciała szklistego, siatkówki oraz soczewki z oka myszy, ich rozdzielenie za pomocą wirowania oraz charakterystykę z wykorzystaniem analiz białkowych.

Ewisceracja ciała szklistego i siatkówki myszy do analiz proteomicznych

Naczelny (NHP) jest idealnym modelem do badania terapii komórkowej ludzkiej siatkówki ze względu na podobieństwa anatomiczne i genetyczne. W artykule opisano metodę podplamkowego przeszczepu komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w oku NHP oraz strategie zapobiegania powikłaniom śródoperacyjnym związanym z manipulacją plamki żółtej.

Przeszczep nabłonka barwnikowego siatkówki w modelu naczelnych innych niż człowiek w chorobach zwyrodnieniowych siatkówki

Ten artykuł przedstawia protokół mikropreparacji oka u gryzoni. Proces ten polega na wyłuszczeniu gałki ocznej wraz z błoną naszywkową (tj. Trzecią powieką). Następnie następuje oddzielenie tylnej i przedniej części gałki ocznej.

Mikrodysekcja oka gryzonia

Procedura ekstrakcji bezkomórkowego DNA z ciała szklistego i cieczy wodnistej w celu przeprowadzenia badań molekularnych w celu diagnozowania chłoniaka szklistego jest tutaj. Metoda ta daje możliwość jednoczesnej ekstrakcji DNA ze składnika komórkowego próbki lub zarezerwowania go do badań pomocniczych.

Bezkomórkowa ekstrakcja DNA z próbek ciała szklistego i cieczy wodnistej w diagnostyce i monitorowaniu chłoniaka szklistkowo-siatkówkowego

Ten protokół przedstawia zintegrowaną platformę biorepozytorium do standaryzowanego zbierania, opisywania i biobankowania wysokiej jakości ludzkich biopsji cieczy wodnistej i płynu szklistego do dalszych analiz molekularnych, w tym proteomiki, metabolomiki i glikomiki.

Biobankowanie płynnych biopsji ludzkich roztworów wodnych i ciała szklistego do analiz molekularnych

Test ochronny został opracowany do monitorowania odporności układu krwionośnego siatkówki na śmierć z powodu urazów związanych z cukrzycą/retinopatią cukrzycową, takich jak stres oksydacyjny i cytokiny.

Test do wykrywania ochrony naczyń krwionośnych siatkówki przed śmiercią związaną z cukrzycą u myszy

Dokładne ubruttowienie i standaryzowane przekroje kul nienowotworowych są ważne dla uzyskania wysokiej jakości powtarzalnych przekrojów histopatologicznych. Wytyczne dotyczące standaryzowanego ubruttowienia kul nienowotworowych dla dorosłych i płodów są podane w niniejszym dokumencie. Zademonstrowano i omówiono różne opcje podziału na kule ziemskie, w tym kryteria podejmowania decyzji w oparciu o konkretne przypadki.

Ubruttowienie kul nienowotworowych, w tym oczu płodu

Tutaj przedstawiamy szczegółową metodologię izolowania siatkówki od oka myszy w celu przeprowadzenia rozszerzonych eksperymentów ex vivo. Protokół ten kładzie nacisk na udostępnienie tego wymagającego technicznie podejścia badaczom, którzy chcieliby skorzystać z możliwości badawczych, jakie daje utrzymanie gleju siatkówki in situ w żywej tkance.

Model eksplantatu ex vivo do badania interakcji glejowych w siatkówce myszy

Metoda ta wizualizuje rodzimą strukturę włókien kolagenowych w ciele szklistym za pomocą mikroskopii konfokalnej refleksji.

Przygotowanie oczu wieprzi do mikroskopii refleksyjnej konfokalnej w celu wizualizacji sieci włókien kolagenowych szklistych

Poznaj technikę izolacji całego, nienaruszonego ciała szklistego z oczu świń pośmiertnych. Metoda zachowuje strukturę anatomiczną i umożliwia badanie właściwości fizycznych oraz chemicznych ciała szklistego.

Sekcja całego ciała szklistego do analizy witreodynamicznej

Przeglądaj więcej filmów