Name: Protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Poznaj protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku, który poprawia zdrowie metaboliczne i zmniejsza ryzyko nowotworów. Metoda obejmuje konfigurację, utrzymanie i monitorowanie warunków dla zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty NIH CA163640, CA166590 i AG041250 dla LC.

Procedury opisane poniżej zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) Uniwersytetu Stanowego Ohio.
1. Przygotowanie wzbogaconego środowiska przed trzymaniem myszy
<ol>
	<li>Czyszczenie i konserwacja instrumentów.
	<ol>
		<li>Przepuść duży pojemnik na wzbogacanie warunków (120 cm x 90 cm x 76 cm) przez myjkę klatkową. Typowy protokół mycia klatek w zakładach dla zwierząt obejmuje od 5 do 6 cykli prania, z których ostatni osiąga temperaturę 82 ºC. Całe mycie powinno trwać około 40 minut. Wysuszyć pojemnik na powietrzu.
		<ol>
			<li>Jeśli duży pojemnik wzbogacający i wszelkie inne instrumenty do uszlachetniania nie mogą zostać wysłane przez mycie klatkowe, należy spryskać i wytrzeć wnętrze pojemnika sporobójczymi środkami dezynfekującymi zgodnie z instrukcjami producenta. Wytrzyj kosz ręcznikiem papierowym nasączonym wodą z kranu lub 30% etanolem i osusz ręcznikiem papierowym, aby pozbyć się zapachu poprzedniego środka dezynfekującego.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Używaj plastikowych rurek, igloo z kółkami typu spodek i innych różnych plastikowych zabawek przypominających klatkę w EE. Umyj te zabawki przez mycie w klatce. Jeśli nie masz dostępu do myjni klatkowej, wykonaj krok 1.1.1.1.</li>
		<li>Używaj metalowych kół jezdnych w EE. Umyj koła przez mycie klatkowe. Jeśli farba na kołach zacznie blaknąć, tak że koło staje się głośne, gdy zwierzęta po nim biegają, nałóż niewielką ilość wazeliny na miejsce, w którym koło i oś się łączą.</li>
		<li>Używaj drewnianych kłód w EE. Oczyść kłody, ręcznie usuwając pościel lub inne zanieczyszczenia. Następnie wysterylizuj kłody poprzez autoklawowanie ich w cyklu suchym lub cyklu tekstylnym, który osiąga temperaturę 121 ºC przez 15 minut.</li>
		<li>Używaj klatek o wymiarach 29 cm x 18 cm x 12.5 cm i 30.5 cm x 19 cm x 14 cm, aby pomieścić ruszt do karmienia i picia. Wytnij otwór o średnicy co najmniej 5 cm z przodu i od dołu klatki, aby myszy mogły wchodzić i wychodzić z EE. Wyczyść te klatki do karmienia przez mycie klatek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Konfigurowanie środowiska
	<ol>
		<li>Wlej 1/4-calową ściółkę dla zwierząt laboratoryjnych z kolb kukurydzy do dużego pojemnika wzbogacającego. Całą powierzchnię podłogi kosza przykryć ściółką na głębokość 2-2,5 cm.</li>
		<li>Umieść dwie lub trzy kłody w jednym rogu pojemnika. Umieść kłody w rogu, aby sekwestrować obszar o powierzchni około 1,225 cm2. W obszarze odseparowanym przez kłody umieść na szczycie trzy igloo z kołami spodka. Upewnij się, że koła nie stykają się ze ścianami pojemnika, kłodami ani ze sobą nawzajem, aby było wystarczająco dużo miejsca, aby koła mogły się swobodnie obracać.</li>
		<li>Złóż plastikową rurkę tak, aby wiele ramion odgałęziało się od środkowego elementu łączącego. Umieść tę rurkę na środku kosza.</li>
		<li>W dwóch rogach pojemnika umieść jedną klatkę do karmienia, z której każda jest wypełniona tą samą ściółką co kosz, a otwór z przodu klatki do karmienia powinien być skierowany w stronę środka kosza. Na tych klatkach do karmienia należy umieścić czysty drut do jedzenia i wody, aby pomieścić jedzenie i wodę. Nie umieszczaj żadnej pokrywy na klatce. Umieść jedzenie i wodę w drutach klatki.</li>
		<li>Umieść trzy metalowe koła w koszu, choć nie wszystkie obok siebie. Trzy różne rodzaje kół to jedno koło 11,5 cm, jedno koło 20,5 cm i jedno koło 28 cm. Następnie umieść 4-5 dodatkowych plastikowych zabawek lub tuneli przypominających klatkę w całym pojemniku na wzbogacanie.</li>
		<li>Przykryj pojemnik bibułą filtracyjną z mikroizolatorem. Użyj spinaczy do segregatorów, aby przypiąć bibułę filtracyjną do kosza.</li>
		<li>Nowość jest ważna dla EE. Użyj tej konfiguracji jako ramy EE i zmieniaj rozmieszczenie wyżej wymienionych klatek, przedmiotów i zabawek, aby stworzyć nowe środowisko dla zwierząt.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Trzymanie zwierząt
<ol>
	<li>Hoduj zwierzęta do eksperymentów w zwykłych pomieszczeniach laboratoryjnych, a nie w EE. Opcjonalnie należy umieścić zwierzęta w EE już w wieku 21 dni po odsadzeniu. Genotyp i kolczyk w uchu zwierząt przed umieszczeniem w ośrodku EE.</li>
	<li>Umieszczając zwierzęta w pojemniku na wzbogacanie warunków urozmaicenia warunków użytkowania, należy umieścić klatkę w pojemniku na boku, tak aby zwierzęta mogły swobodnie przemieszczać się ze standardowej klatki do pojemnika wzbogacającego. Nie pozwól, aby materiały do zagnieżdżania zostały przeniesione do pojemnika na wzbogacanie.</li>
	<li>Trzymaj w domu 10-20 zwierząt w tym samym wieku, tej samej płci i szczepu genetycznym w EE.</li>
</ol>
3. Utrzymanie środowiska i obserwacja myszy podczas badań
<ol>
	<li>codzienny
	<ol>
		<li>Po cichu obserwuj zwierzęta pod kątem oznak choroby lub niepokoju. W razie potrzeby delikatnie obchodź się ze zwierzętami, aby dokładniej sprawdzić stan zdrowia. Rejestruj nietypowe obserwacje i skonsultuj się z technikiem medycznym lub personelem weterynaryjnym, jeśli zwierzę wykazuje stany wymagające usunięcia z eksperymentu.</li>
		<li>Zapewnij miejscowe leczenie potrójną maścią antybiotykową na małe rany lub strupki. Jeśli zwierzę musi zostać usunięte z powodu przewlekłej choroby lub urazu, należy usunąć zwierzę z eksperymentu w celu eutanazji. Jeśli zwierzęta spełniają kryteria wczesnego usuwania dla nadzorującego komitetu ds. opieki nad zwierzętami lub weterynarza, nie należy zwracać zwierząt z powrotem do EE.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dwa razy w tygodniu
	<ol>
		<li>Sprawdź poziom paszy i wody. Upewnij się, że pasza i woda wystarczą na następne 3-4 dni. Wyprostuj kółka do biegania i zabawki wzbogacające, aby były rozłożone i mogły być używane przez myszy. Wymień te, które są zbyt brudne.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>tygodniowy
	<ol>
		<li>Zamień butelki na wodę na butelki z czystą wodą. Przestawić urządzenia wzbogacające w sposób zgodny z konfiguracją w sekcji 1.2. jednak różni się od konfiguracji z poprzedniego tygodnia. 
		UWAGA: Jeśli eksperyment wymaga, aby zwierzęta zostały usunięte ze wzbogaconego środowiska w celu wykonania czynności (rejestrowanie masy ciała, pobieranie krwi, test zachowania itp.), najlepiej jest przeorganizować środowisko, gdy zwierzęta są z dala od pojemnika na urozmaicenie.</li>
		<li>Klatki do karmienia w EE należy czyścić ręcznie lub przepuszczać przez pranie klatek, jak opisano w sekcji 1.1.5. Zamień również ruszty, na których znajduje się żywność i woda, na czyste ruszty.</li>
		<li>Postępować zgodnie z instrukcjami zawartymi w sekcji 2.2 podczas ponownego umieszczania zwierząt w urozmaicaniu. Wyrywkowo sprawdź resztę dużego pojemnika na wzbogacanie i w razie potrzeby wyczyść, zbierając brudną ściółkę i rozkładając nową, czystą ściółkę.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Co dwa tygodnie
	<ol>
		<li>Podczas cotygodniowego chowu należy czyścić zabawki ręcznie lub przepłukiwać je klatkami, jak opisano w sekcji 1.1.2. W razie potrzeby umieść myszy w standardowej klatce z mikroizolatorem na czas potrzebny do czyszczenia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>miesięczny
	<ol>
		<li>Oczyść większość ściółki, przesuwając zabawki wzbogacające i klatki do karmienia oraz zgarniając żwirek. Wymień na świeżą ściółkę. Upewnij się, że we wszystkich obszarach klatki jest jeden cal ściółki. W razie potrzeby umieść myszy w standardowej klatce z mikroizolatorem na czas potrzebny do czyszczenia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Co trzy miesiące (lub na koniec eksperymentu)
	<ol>
		<li>Usuń całą pościel i zabawki oraz wyczyść i zdezynfekuj pojemnik na wzbogacanie zgodnie z opisem w sekcji 1.1.1. Jeśli eksperyment jest w toku, wymień je na nową ściółkę, klatki do karmienia, zestaw zabawek, a następnie zwróć myszy do kosza.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dezynfekować cały pojemnik wzbogacający częściej niż co trzy miesiące, jeśli wymaga tego instytucja badawcza, w której znajduje się EE. Jeśli jest to konieczne i dostępny jest inny duży pojemnik do wzbogacania, należy skonfigurować dodatkowy pojemnik wzbogacający zgodnie z opisem w sekcji 1.2. i przenieś zwierzęta do nowego pojemnika, podczas gdy poprzedni jest czyszczony.</li>
</ol>
4. Kontroluj warunki mieszkaniowe
<ol>
	<li>Zwierzęta domowe w grupie kontrolnej w klatkach z mikroizolatorem o wymiarach 30,5 cm x 19 cm x 14 cm. W klatce należy umieścić rusztowy stojak do przechowywania jedzenia i butelkę z wodą, jeśli klatka nie jest podłączona do automatycznego systemu pojenia.</li>
	<li>W klatce kontrolnej należy zapewnić taką samą ściółkę z kolb kukurydzy, jak w EE. Zapewnij myszom gniazdo o wymiarach 4 cm x 4 cm, z którego będą mogły zrobić gniazdo.</li>
	<li>Wymieniaj i/lub czyść klatki, przewody zasilające, karmę i wodę raz w tygodniu. Klatki i ruszty należy czyścić za pomocą mycia klatek lub w sposób opisany w sekcji 1.1.1.1. Czyść klatki częściej, jeśli zwierzęta częściej oddają mocz lub jeśli woda pitna wycieka na ściółkę.</li>
	<li>Codziennie monitoruj stan zdrowia zwierząt w pomieszczeniach kontrolnych. Upewnij się, że zwierzęta mają dużo jedzenia i wody.</li>
	<li>Trzymaj 3 ~ 5 myszy tej samej płci w zwykłej klatce dla myszy. Nie umieszczaj w klatce żadnej zabawki, rurki ani klatki.</li>
	<li>Instytucjonalne laboratoria, placówki opieki nad zwierzętami, technicy medyczni i laboratoryjni mogą zapewnić hodowlę tych myszy kontrolnych.</li>
	<li>Trzymaj zwierzęta w 12-godzinnym cyklu światła/ciemności, tak jak w przypadku myszy w EE.</li>
</ol>

<ol><li>Cao, L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+brain-cancer+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">What is the brain-cancer connection.</a> Annu. Rev. Neurosci. 35, 331-345 (2012).</li>
<li>Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environments%2C+experience-dependent+plasticity+and+disorders+of+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 697-709 (2006).</li>
<li>Milsum, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+the+eustress+system+for+health%2Fillness%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Sci%22%5BJournal%5D)">A model of the eustress system for health/illness.</a> Behav. Sci. 30, 179-186 (1985).</li>
<li>Selye, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSelye%2C+H+%22Stress+Without+Distress%22">Stress Without Distress</a>. , McClelland and Stewart. Toronto. (1974).</li>
<li>Krech, D., Rosenzweig, M. R., Bennett, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+complexity+and+training+on+brain+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental complexity and training on brain chemistry.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 53, 509-519 (1960).</li>
<li>Rosenzweig, M. R., Krech, D., Bennett, E. L., Diamond, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+environmental+complexity+and+training+on+brain+chemistry+and+anatomy%3A+A+replication+and+extension%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Effects of environmental complexity and training on brain chemistry and anatomy: A replication and extension.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 55, 429-437 (1962).</li>
<li>Frick, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Environmental+Enrichment+on+Spatial+Memory+and+Neurochemistry+in+Middle-Aged+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Effects of Environmental Enrichment on Spatial Memory and Neurochemistry in Middle-Aged Mice.</a> Learn. Mem. 10 (3), 187-198 (2003).</li>
<li>Dellen, A., Blakemore, C., Deacon, R., York, D., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delaying+the+onset+of+Huntington%E2%80%99s+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Delaying the onset of Huntington’s in mice.</a> Nature. 404, 721-722 (2000).</li>
<li>Spires, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+rescues+protein+deficits+in+a+mouse+model+of+Huntington%E2%80%99s+disease%2C+indicating+a+possible+disease+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment rescues protein deficits in a mouse model of Huntington’s disease, indicating a possible disease mechanism.</a> J. Neurosci. 24 (9), 2270-2276 (2004).</li>
<li>Jankowsky, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+mitigates+cognitive+deficits+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment mitigates cognitive deficits in a mouse model of Alzheimer’s disease.</a> J. Neurosci. 25 (21), 5217-5224 (2005).</li>
<li>Westood, J. A., Darcy, P. K., Kershaw, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+Enrichment+does+not+impact+on+tumor+growth+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Environmental Enrichment does not impact on tumor growth in mice.</a> F1000Research. 2, 140(2013).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF+links+hippocampal+activity+with+neurogenesis%2C+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">VEGF links hippocampal activity with neurogenesis, learning.</a> Nat. Genet. 36 (8), 827-835 (2004).</li>
<li>Young, D., Lawlor, P. A., Leone, P., Dragunow, M., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+inhibits+sponta-+neous+apoptosis%2C+prevents+seizures+and+is+neuroprotective%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment inhibits sponta- neous apoptosis, prevents seizures and is neuroprotective.</a> Nat. Med. 5 (4), 448-453 (1999).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+genetic+activation+of+a+brain-adipocyte+BDNF%2Fleptin+axis+causes+cancer+remission+and+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Environmental and genetic activation of a brain-adipocyte BDNF/leptin axis causes cancer remission and inhibition.</a> Cell. 142 (1), 52-64 (2010).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White+to+brown+fat+phenotypic+switch+induced+by+genetic+and+environmental+activation+of+a+hypothalamic-adipocyte+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">White to brown fat phenotypic switch induced by genetic and environmental activation of a hypothalamic-adipocyte axis.</a> Cell Metab. 14 (3), 324-338 (2011).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Silny wpływ EE na ekspresję genów w mózgu, zmniejszoną otyłość i wzrost raka u myszy zależy w dużej mierze od zdolności badacza do utrzymania nowego środowiska i obchodzenia się ze zwierzętami w sposób, który promuje aktywność fizyczną, interakcje społeczne i wyzwania poznawcze, ale nie stresuje zwierząt. Należy pamiętać o dwóch najważniejszych krokach proceduralnych. Po pierwsze, pamiętaj, aby co tydzień zmieniać rozmieszczenie zabawek, przedmiotów i klatek. Mimo że zabawki i przedmioty mogą być takie same jak w poprzednim tygodniu, myszy postrzegają otoczenie jako nowe. Co drugi tydzień zmieniaj zabawki i przedmioty na inne. Po drugie, pamiętaj o utrzymaniu środowiska w czystości. Jeśli zabrudzona ściółka nie zostanie usunięta, zwiększony poziom azotu może być czynnikiem stresogennym dla zwierząt.
Ponadto istnieje wiele technik, na które należy zwrócić uwagę w tym protokole EE. Zachęca się do używania różnych lub unikalnych zabawek i różnych wzorów labiryntów z plastikowych rurek. Środowisko może być trudne, ale nie powinno stanowić zagrożenia dla zdrowia zwierząt. Ponadto uważaj na zabawki, które są dysfunkcyjne, ponieważ dysfunkcyjne zabawki zwiększają ryzyko złapania kończyn myszy lub mogą być toksyczne dla zwierząt, jeśli zostaną spożyte przez żucie. Jedną ze stałych cech EE jest użycie trzech kół spodków na dachu igloo, oddzielonych od rogu lub boku kosza za pomocą 2-3 kłód. Ten układ spodków biegnących za kłodami był obecny we wszystkich naszych badaniach nad wzbogacaniem. Jeśli chodzi o użycie i rozmieszczenie innych obiektów, powyższy opis układu jest podstawowym planem konfiguracji EE. Zróżnicowanie konfiguracji z tą podstawową ramą składającą się z plastikowych rurek, kół jezdnych, spodków do biegania, klatek i kłód powinno zapewnić wystarczające nowe środowisko do odtworzenia zgłoszonych wyników.
Jeśli pracujesz ze zwierzętami transgenicznymi, które mają cukrzycę lub inne choroby metaboliczne, zwróć szczególną uwagę na spożycie pokarmu i wody, aby upewnić się, że zwierzętom nie zabraknie jedzenia i wody. Jeśli zwierzęta mają cukrzycę, będą oddawać więcej moczu, więc ściółka w pomieszczeniu EE może wymagać częstszego sprawdzania i czyszczenia. Najczęściej miejscami w obudowie EE, które wymagają usunięcia ściółki, są narożniki. Pamiętaj o wyregulowaniu kółek i innych zabawek, tak aby mogły być używane przez zwierzęta. Zwierzęta są w stanie wjechać kołami spodka w ściółkę i przewrócić koła do biegania. Jeśli zwierzęta są młode, w wieku od 3 do 5 tygodni, mogą kopać pod klatkami w EE i ukrywać się tam razem, pozostawiając badacza bez pojęcia, gdzie są zwierzęta. Podczas usuwania zabrudzonej ściółki, wymiany zabawek lub czyszczenia klatek zaleca się umieszczenie zwierząt w czystej, standardowej klatce, aby nie stresować ich podczas dostosowywania środowiska. Łatwiej jest umieścić wszystkie zwierzęta w jednej klatce, jeśli mają mniej miejsc do ukrycia się w otoczeniu. Dlatego usunięcie zabawek przed sekwestracją zwierząt w klatce ułatwia ten proces. Ponadto nie należy umieszczać więcej niż 5-6 zwierząt w jednej standardowej klatce w oczekiwaniu na czyszczenie lub dostosowanie ich środowiska EE. Samce w EE mogą być agresywne, szczególnie gdy EE jest inicjowane w wieku dorosłym. Dlatego ważne jest, aby obserwować otoczenie pod kątem rannych lub martwych zwierząt.
Ponadto typowa liczba zwierząt, które trzymamy w EE dla tego dużego rozmiaru kontenera, to 10-20 myszy. Liczba zwierząt wykorzystywanych przez innych badaczy do EE jest różna, przy użyciu około 10 lub mniej myszy, a wielkość klatki lub pojemnika powinna być brana pod uwagę przy określaniu liczby zwierząt do trzymania w EE. Posiadanie zbyt wielu zwierząt w środowisku życia może prowadzić do agresji u samców myszy. Myszy, które trzymaliśmy w EE, pochodziły z C57BL/6. Myszy innych szczepów mogą być mniej lub bardziej agresywne lub bardziej podatne na problemy zdrowotne w tej konfiguracji EE. Należy to wziąć pod uwagę przy określaniu planu hodowli myszy i wzbogaconego środowiska.
Cztery tygodnie przetrzymywania EE wystarczą, aby wywołać zmniejszenie otyłości, spadek poziomu leptyny i zahamowanie wzrostu czerniaka B16. Dłuższe EE może prowadzić do silniejszego wpływu na metabolizm i hamowanie raka. Jeśli myszy przechodzą zabiegi chirurgiczne podczas lub przed ekspozycją na EE, mogą być trzymane w pomieszczeniach z nienaruszonymi szwami. Nie badano, czy zwierzęta dobrze reagują na tę konkretną konfigurację EE z nienaruszonymi zszywkami chirurgicznymi lub cewnikami. Co więcej, obecnie badamy, w jaki sposób ta konkretna EE wpływa na długość życia lub długość zdrowia starzejących się zwierząt. Wstępne dane sugerują, że samice myszy C57BL/6 w wieku 10 miesięcy reagują na EE podobnie jak młode myszy. Jednym z ograniczeń obudowy EE jest umieszczenie tak dużego pojemnika w pomieszczeniu dla zwierząt, a najlepiej w pomieszczeniu przeznaczonym dla płci. W związku z tym przyszłe badania nad wpływem EE na mniejszą skalę, a także znalezienie zabawek, które są łatwe do czyszczenia, wytrzymują czyszczenie w wysokiej temperaturze i są bezpieczne dla zdrowia zwierząt, poprawią zastosowania EE w badaniach nad metabolizmem i rakiem.

Wzbogacanie środowiska (EE) to eksperymentalny paradygmat używany do badania skutków złożonego i wymagającego środowiska, które nie stresuje zwierząt1. EE to technika trzymania zwierząt składająca się ze zwiększonej przestrzeni, aktywności fizycznej i interakcji społecznych, co z kolei zwiększa stymulację sensoryczną, poznawczą, motoryczną i społeczną2. Igloo, koła do biegania, koła do spodków, labirynty rurowe i inne obiekty w środowisku mieszkaniowym sprzyjają tej sensorycznej stymulacji poznawczej, społecznej i motorycznej, promując eksplorację i interakcję. Układ obiektów w pomieszczeniu zmienia się regularnie, tworząc nowe środowisko, do którego myszy są zmuszone się przystosować. Strategia ta oferuje łagodne i krótkie wyzwania, które wywołują korzystną, łagodną i zdrową reakcję adaptacyjną, znaną jako eustres, w przeciwieństwie do bardziej awersyjnego, wrogiego środowiska lub nieprzystosowawczego dystresu3,4. Promując eustres i ograniczając szkodliwy stres, myszy wykazują wiele korzystnych fenotypów.
EE to niezawodny model eksperymentalny o szerokim zakresie zastosowań, a jednocześnie pozbawiony elementów tradycyjnie uważanych za stresujące1. Wpływ EE na gryzonie jest badany od ponad pół wieku. Na początku lat sześćdziesiątych badania wykazały, że poziom cholinoesterazy w korze mózgowej zmniejszył się, a poziom cholinoesterazy podkorowej wzrósł u szczurów, które były trzymane w środowiskach o zwiększonej przestrzeni życiowej, zwiększonej liczbie szczurów i różnych drewnianych zabawkach, labiryntachi platformach. Ponadto EE wiąże się z wieloma zmianami adaptacyjnymi w mózgu, zachowaniu i metabolizmie u myszy w różnym wieku i o różnym pochodzeniu genetycznym. Dlatego EE jest użytecznym paradygmatem dla szerokiego zakresu eksperymentów badających wpływ środowiska na myszy. Efekty EE można zaobserwować u myszy już po tygodniowej ekspozycji i można je zaobserwować u zwierząt w wieku osiemnastu miesięcy7. EE jest często wykorzystywane w neuronauce i eksperymentach neurobehawioralnych do badania odzyskiwania funkcji, uczenia się i pamięci2. Co więcej, EE ma znaczący wpływ na fenotyp różnych indukowanych toksynami i transgenicznych modeli zwierzęcych ludzkich chorób neurologicznych, w tym choroby Huntingtona, choroby Alzheimera, choroby Parkinsona, epilepsji, udaru mózgu i innych2.
Jednak z biegiem lat pojawiły się niezgodności z projektem wzbogacenia, co utrudniało porównania między badaniami z różnych laboratoriów. Na przykład, każde z badań nad efektem EE w odniesieniu do chorób neurologicznych człowieka, o których mowa powyżej, miało różne parametry wzbogacenia. W badaniu nad chorobą Huntingtona 4-6 myszy umieszczono w dużych klatkach (44 x 28 x 12,5cm3) zawierających kartony, tunele i prześcieradła, a także drewniane i plastikowe przedmioty, które zmieniano codwa dni. W jednym z badań przeprowadzonych na chorobie Alzheimera 20 myszy umieszczono w większej klatce (1 m3) zawierającej 2 koła do biegania, plastikowe rurki, kartony i materiał do gniazdowania, które były zmieniane lub przestawiane co tydzień10. Wiele konfiguracji EE ma podobne tematy, takie jak obiekty, po których można biegać lub się chować, ale liczba myszy w obudowie EE, obszar mieszkalny i okres zmian środowiska znacznie się różnią.
Niespójne projekty EE doprowadziły do nieudanej replikacji efektów EE. Nasze dane dotyczące raka i metabolizmu sugerują, że połączenie stymulacji zapewnionych w poniższym szczegółowym protokole zakwaterowania EE prowadzi do znaczących efektów przeciwnowotworowych i przeciw otyłości14,15. Jednak różnica w ustawieniach EE przyjętych przez różne laboratoria może wpływać na wyniki EE, jak widać w jednej nieudanej próbie odtworzenia wpływu EE na wzrost określonych guzów nowotworowych wszczepionych myszom11. Różne wyniki mogą wynikać z różnych powodów, począwszy od różnych tempa wzrostu kultur komórek nowotworowych, a skończywszy na rodzaju detergentu używanego do czyszczenia sprzętu mieszkaniowego11. Aby powtórzyć wyniki zaobserwowane w naszych eksperymentach, wymagany jest szczególny projekt wzbogacania i hodowli zwierząt. Poniższa procedura szczegółowo opisuje obudowę EE, która pozwoli innym badaczom z powodzeniem odtworzyć nasz skuteczny model wzbogacania.

<table><tbody><tr><td>Duży pojemnik wzbogacający (120 cm x 90 cm x 76 cm)</td><td>Wykonane na zamówienie.</td><td>Wykonane na zamówienie.</td><td>Wykonany z polipropylenu. Krawędzie kosza mają grubość 1,5 cm.</td></tr><tr><td>Duży pojemnik do wzbogacania (120 cm x 110 cm x 76 cm)</td><td>Global Industrial 155202</td><td></td><td>W razie potrzeby ten kosz działa jako alternatywa dla powyższego.</td></tr><tr><td>Habitrail Mini rurki</td><td>Habitrail</td><td>62720; 62705; 62725; 62715; 62054-Plastikowe</td><td></td></tr> <tr><td>igloo z kółkami spodka</td><td>Bio Serv</td><td>K3327; K3250-Metalowe</td><td></td></tr> <tr><td>koła jezdne</td><td>Super Pet</td><td>61392; 61394; 61396-Manzanita</td><td></td></tr> <tr><td>Drewniane patyki do gryzienia, 3"</td><td>Bio Serv</td><td>W0016</td><td></td></tr><tr><td>Tunele dla myszy</td><td>Bio Serv</td><td>K3322-Klatki</td><td></td></tr> <tr><td>dla myszy, które trafiają do dużego pojemnika EE.</td><td>Lab Products Inc</td><td>10027 Klatka dla myszy</td><td></td></tr> <tr><td>Klenz 180 Alkaliczny detergent do mycia klatek, Klatka Klenz 250 Kwaśny detergent</td><td>Steris Life Sciences</td><td>1K1802; 1K2502</td><td>Te detergenty są używane do mycia klatek do zabawek, dużych pojemników na wzbogacanie warunków i klatek.</td></tr><tr><td>Sporklenz</td><td>Steris Life Sciences</td><td>6526Q8</td><td>Alternatywny środek sporobójczy/dezynfekujący do mycia zabawek, pojemników i klatek w myjni klatkowej.</td></tr><tr><td>Pościel Bed-O-Cobs 1/4"</td><td>The Andersons, Inc.</td><td>Ściółka z</td><td>kolb kukurydzy 4B ma średnicę 1/4".</td></tr><tr><td>Gniazda dla myszy kontrolnych</td><td>Ancare</td><td></td><td>Cotton squares</td></tr></tbody></table>

protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku

A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

Wzbogacanie środowiska (EE) to środowisko hodowlane dla myszy, które poprawia zdrowie psychiczne i fizyczne w porównaniu do standardowych pomieszczeń laboratoryjnych. Nasze ostatnie badania pokazują, że wzbogacenie środowiska zmniejsza otyłość, zwiększa wydatek energetyczny, przeciwdziała otyłości wywołanej dietą oraz powoduje remisję i zahamowanie raka u myszy. EE zazwyczaj składa się z większej przestrzeni życiowej, różnych "zabawek" do interakcji, kół do biegania i może zawierać szereg innych nowatorskich zmian środowiskowych. Wszystko to sprzyja bardziej złożonemu zaangażowaniu społecznemu, stymulacji poznawczej i fizycznej. Co ważne, lokalizacja i rodzaj zabawki są regularnie zmieniane, co zachęca myszy do przystosowania się do często zmieniającego się i nowego środowiska. W EE można manipulować wieloma zmiennymi, aby promować efekty zdrowotne u myszy. W związku z tym podejścia te są trudne do kontrolowania i muszą być odpowiednio zarządzane, aby skutecznie replikować powiązane fenotypy. Dlatego celem tego filmu jest pokazanie, w jaki sposób EE jest prawidłowo konfigurowana i utrzymywana, aby zapewnić złożone, wymagające i kontrolowane środowisko, tak aby inni badacze mogli łatwo odtworzyć ochronne działanie EE przed otyłością i rakiem.

Wzbogacenie środowiska (EE) wpływa na ekspresję czynników wzrostu, zwiększa neurogenezę oraz przeżywalność komórek w obrębie ośrodkowego układu nerwowego (CNS)12,13. Nowsze badania wykazały, że ta technika EE prowadzi do znacznego zahamowania wzrostu nowotworu w trzech modelach raka u myszy, w tym w czerniaku B16, raku jelita grubego MC38 oraz u myszy APCmin/+, która posiada mutację w linii zarodkowej i jest wysoce podatna na spontaniczne powstawanie gruczolaków w jelitach14. Wyniki przedstawione na Ryc. 2 potwierdzają zahamowanie wzrostu wszczepionego czerniaka B16 u myszy poddanych EE przez 5 tygodni (~80% spadku masy guza). Zahamowanie wzrostu nowotworu zaobserwowano u myszy nawet wtedy, gdy EE rozpoczęto po uformowaniu się guza14. EE doprowadziło do silniejszego zahamowania wzrostu czerniaka u myszy z otyłością wywołaną dietą wysokotłuszczową (~70% spadku masy guza) niż u myszy o prawidłowej masie ciała (~50% spadku masy guza)14. EE wywołało charakterystyczne zmiany w biomarkerach surowicy, w tym gwałtowny spadek poziomu leptyny, spadek poziomu IGF-1 oraz wzrost poziomu adyponektyny14.
Ponadto ta technika EE zmniejsza adipozycję, zwiększa wydatek energetyczny, prowadzi do odporności na otyłość wywołaną dietą oraz indukuje przełączenie fenotypowe tłuszczu białego na brunatny poprzez aktywację osi podwzgórze-układ współczulny-adipocyt15. Spadek adipozycji zaobserwowano już po sześciu dniach ekspozycji na EE (Rysunek 3A, B), co potwierdzono ponownie u zwierząt poddanych EE przez cztery tygodnie (Rysunek 3C, D). Istotne jest również to, że po pierwsze, przeciwnowotworowe i przeciwotyłościowe efekty związane z EE nie mogą być wyjaśnione samą aktywnością fizyczną, a po drugie, efekty EE mogą być odtworzone poprzez nadekspresję neurotroficznego czynnika pochodzenia mózgowego (BDNF) w podwzgórzu14,15.
<img alt="Ustawienie eksperymentu z labiryntem dla badania zachowania gryzoni; obejmuje tunele, schronienia i stacje z pokarmem." src="/files/ftp_upload/52874/52874fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Ustawienie pojemnika z wzbogaconym środowiskiem. Wzbogacone środowisko ma powierzchnię 120 cm x 90 cm i obejmuje dwie zmodyfikowane klatki, koła do biegania, igloo z kołami w kształcie spodka, plastikowe rurki, drewniane kłody oraz inne plastikowe zabawki do wzbogacenia środowiska.
<img alt="Wykres porównujący względną wagę guza; Kontrolna vs EE; wykres słupkowy z istotnością statystyczną." src="/files/ftp_upload/52874/52874fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 2"> 
Rysunek 2: Wzbogacone środowisko redukuje wzrost guza u samców myszy C57BL/6. Trzytygodniowe samce myszy były utrzymywane w klatkach EE lub kontrolnych przez 5 tygodni przed inokulacją guza. Wagi guzów czerniaka B16 w 17. dniu po podskórnej inokulacji 105 komórek na zwierzę powyżej prawego boku (n = 10 na grupę. Test t Student’a, * p &lt;0.05).
<img alt="Fat pad weight comparison chart; Ctrl vs. EE; BAT, IWAT, EWAT, RWAT; statistical analysis." src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3a.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 3a"> 
<img alt="Fat pad percentage bar chart; comparison of Ctrl vs EE in BAT, IWAT, EWAT, RWAT adipose tissues." src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3b.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 3b"> 
<img alt="Fat pad weight comparison; bar graph; control vs. experimental groups; statistical analysis." src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3c.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 3c"> 
<img alt="Comparison bar chart of fat pad percentage; BAT, IWAT, EWAT, RWAT; Ctrl vs. EE shown in blue/red." src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3d.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 3d"> 
Rysunek 3: Wzbogacone środowisko zmniejsza poziom otłuszczenia u samców myszy szczepu C57BL/6. Trzytygodniowe myszy poddano wzbogaceniu środowiskowym (EE); jedna grupa przez 6 dni, a druga przez cztery tygodnie.A) Sześć dni w środowisku wzbogaconym (EE) zmniejszyło masę podskórnych zgromadzeń tłuszczowych (n = 5 na grupę. Test t Studenta) t-test, *p &lt;0.05). (BSześciodniowy pobyt w środowisku wzbogaconym (EE) zmniejszył masę podskórnych poduszek tłuszczowych w stosunku do masy ciała (n = 5 na grupę. Test t Studenta) t-test, *p &lt;0.05). (CCztery tygodnie w środowisku wzbogaconym (EE) zmniejszyły masę podskórnych poduszek tłuszczowych (n = 5 na grupę. Test t Studenta t-test, *p &lt;0.05). (D) Cztery tygodnie w środowisku wzbogaconym (EE) zmniejszyły masę podskórnych poduszek tłuszczowych w stosunku do masy ciała (n = 5 na grupę. Test t Studenta) t-test, *p &lt;0,05). BAT: brunatna tkanka tłuszczowa, IWAT: pachwinowa biała tkanka tłuszczowa, EWAT: nadjajowodowa biała tkanka tłuszczowa, RWAT: zaotrzewnowa biała tkanka tłuszczowa.

Wzbogacenie środowiska u myszy wymaga złożonej i wymagającej konfiguracji, a także kompleksowych technik hodowli i obsługi, aby zapewnić silne efekty metaboliczne i przeciwnowotworowe u myszy. Protokół ten zawiera szczegółowe procedury mające na celu odtworzenie wyżej wymienionych efektów u myszy.

Protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent ...

Celem niniejszej procedury jest przedstawienie szczegółów niezbędnych do utrzymywania zwierząt w warunkach wzbogacenia środowiskowego, które wywołują silne efekty metaboliczne i przeciwnowotworowe u myszy. Jest to realizowane poprzez przygotowanie wzbogaconego środowiska w dużym pojemniku z przedmiotami takimi jak koła, urządzenia do biegania, budki, rurki, polana i klatki, a następnie wprowadzenie zwierząt do tego nowego środowiska.Następnie środowisko wzbogacone jest utrzymywane poprzez zmianę lokalizacji i rodzaju przedmiotów w pojemniku oraz regularne dostarczanie świeżej karmy i wody. Ostatnim krokiem jest oczyszczenie przedmiotów, które zostały usunięte ze środowiska, aby były gotowe do ponownego użycia w przyszłości. Ostatecznie przeprowadzana jest eutanazja oraz analiza tkanek zwierząt.Ta technika wzbogacania środowiska wykazuje zmniejszenie adipozycji, zwiększenie wydatku energetycznego, odporność na otyłość indukowaną dietą oraz fenotypową zmianę tłuszczu białego w brunatny poprzez aktywację podwzgórzowej sympatycznej osi neuronowo-adipocytowej. Niniejsza metoda opisuje szczegóły dotyczące przygotowania wzbogaconego środowiska dla gryzoni laboratoryjnych, które zwiększa odporność na nowotwory i choroby metaboliczne. W pierwszej kolejności spryskać i przetrzeć wnętrze dużego pojemnika do wzbogacania środowiska środkami dezynfekcyjnymi na bazie sporycidyny.Zgodnie z instrukcjami producenta, przetrzyj pojemnik papierowym ręcznikiem nasączonym 30% etanolem lub wodą z kranu, a następnie osusz go papierowym ręcznikiem, aby usunąć wszelki zapach poprzedniego środka dezynfekcyjnego. W środowisku wzbogaconym zastosuj plastikowe tunele z kołami typu SOR oraz inne różnorodne plastikowe zabawki w formie kryjówek. Zabawki te należy umyć w sposób opisany wcześniej; należy również użyć metalowych kół biegowych, które zostały umyte w ten sam sposób.Jeśli farba na kołowrotku zacznie blaknąć, co spowoduje jego hałasowanie podczas biegu zwierząt, należy nałożyć niewielką ilość wazeliny w miejscu połączenia kołowrotka z osią. W wzbogaconym środowisku należy zastosować drewniane kłody. Kłody należy oczyścić, usuwając ręcznie ściółkę lub inne zanieczyszczenia.Następnie wysterylizuj kłody w autoklawie, stosując cykl suchy lub cykl dla tekstyliów, który osiąga temperaturę 121 °C przez 15 minut. Do ich przechowywania użyj czystych klatek karmiących o wymiarach od 29 cm x 18 cm x 12,5 cm do 30,5 cm x 19 cm x 14 cm. W dolnej przedniej części klatki wykonaj otwór o średnicy co najmniej 5 cm, aby myszy mogły swobodnie wchodzić i wychodzić, a następnie zamocuj drucianą kratkę do karmienia i pojenia.Na początek należy wsypać do czystego, dużego pojemnika na wzbogacenie ściółkę dla zwierząt laboratoryjnych z kolb kukurydzy o frakcji 1/4 cala, tak aby utworzyła warstwę o grubości od 2 do 2,5 cm. Następnie w jednym rogu pojemnika należy umieścić dwa lub trzy z wcześniej przygotowanych kloców z kory dębowej, aby wydzielić obszar o powierzchni około 1225 cm².Następnie w obszarze wydzielonym przez klocki umieść trzy elementy klejące z kołami SOR na górze. Upewnij się, że koła mają miejsce, aby swobodnie się obracać. Teraz połącz rurki plastikowe w taki sposób, aby z centralnego elementu łączącego odchodziło wiele ramion.Umieść te rurki w środku pojemnika, w dwóch jego narożnikach. Wstaw klatkę karmąca wypełnioną takim samym ściółką jak w pojemniku. Otwór z przodu każdej klatki karmącej powinien być skierowany w stronę centrum pojemnika.Umieść drut z pokarmem i wodą zawierający karmę dla myszy na górze każdej klatki karmiącej. Dodaj butelkę z wodą. Umieść kołowrotek o średnicy 11,5 centymetra, kołowrotek o średnicy 20,5 centymetra oraz kołowrotek o średnicy 28 centymetrów w pojemniku.Następnie umieść w pojemniku z wzbogaceniem od czterech do pięciu dodatkowych plastikowych zabawek przypominających kryjówki lub tuneli. Przykryj pojemnik papierem filtracyjnym do mikroizolatorów i przymocuj go do krawędzi pojemnika za pomocą klipsów biurowych. Przenosząc zwierzęta ze standardowej klatki do pojemnika z wzbogaceniem, ustaw klatkę wewnątrz pojemnika na boku, aby zwierzęta mogły swobodnie przejść ze standardowej klatki do pojemnika z wzbogaceniem.Należy dopilnować, aby materiały do budowy gniazd nie przedostały się do pojemnika z wzbogaceniem środowiskowym. W wzbogaconym środowisku można jednocześnie trzymać od 10 do 20 zwierząt w tym samym wieku, o tej samej płci i z tej samej linii genetycznej. Należy zapewnić codzienną obserwację zwierząt pod kątem objawów choroby lub stresu.W razie potrzeby należy delikatnie obchodzić się z zwierzętami, aby dwa razy w tygodniu dodatkowo kontrolować ich stan. Należy sprawdzić poziom pokarmu i wody, upewniając się, że ich zapas wystarczy na kolejne dwa dni. Należy również uporządkować koła do biegania oraz zabawki wzbogacające, tak aby były rozłożone i łatwo dostępne.Raz w tygodniu wymieniaj wszelkie zabrudzone elementy wzbogacenia środowiskowego, najlepiej w momencie wyjmowania myszy z klatek. W celach eksperymentalnych usuń klatki z karmidłami oraz druciane półki i zastąp je czystymi klatkami i półkami wypełnionymi świeżą karmą. Wymień butelki z wodą na czyste butelki z wodą.Kluczowe jest przeorganizowanie elementów wzbogacenia środowiska w taki sposób, aby zachować główne aspekty ustawienia, ale umieścić elementy wzbogacenia w innych miejscach. Należy sprawdzić resztę dużego pojemnika do wzbogacenia i w razie potrzeby go wyczyścić. Odbywa się to poprzez usuwanie brudnej ściółki i rozsypywanie nowej, czystej ściółki raz na dwa tygodnie.Podczas cotygodniowej pielęgnacji należy umyć zabawki ręcznie lub w myjce do klatek. Raz w miesiącu należy wyczyścić większą część ściółki, usuwając zabawki do wzbogacenia środowiska oraz klatki karmiące, a następnie wybierając ściółkę. Należy ją zastąpić świeżą, dbając o to, aby we wszystkich obszarach klatki znajdowało się 2 cm ściółki. Raz na trzy miesiące lub zgodnie z protokołem dotyczącym zwierząt, należy usunąć całą ściółkę oraz zabawki i zdezynfekować pojemnik z wzbogaceniem środowiska, myjąc go w sposób opisany wcześniej. Zwierzęta z grupy kontrolnej utrzymuje się w tym samym 12-godzinnym cyklu światło-ciemność.Podobnie jak w przypadku myszy w środowisku wzbogaconym w mikroizolowanych klatkach, w klatce kontrolnej należy zapewnić taką samą ściółkę z kolb kukurydzy jak w środowisku wzbogaconym oraz dodać gniazdo o wymiarach 4 cm na 4 cm wykonane z materiału gniazdowego. W zwykłej klatce dla myszy należy umieścić od trzech do pięciu myszy tej samej płci. W klatce nie należy umieszczać żadnych rurek-zabawek ani budek. W klatce należy zamieścić drucianą półkę na pokarm oraz butelkę z wodą, jeżeli klatka nie jest podłączona do automatycznego systemu pojenia.Codziennie monitoruj stan zdrowia zwierząt, zapewniając im obfitą ilość pożywienia i wody. Wymieniaj lub czyść klatki, druty do karmienia, pokarm oraz wodę. Raz w tygodniu wyczyść klatki i kratki druciane w sposób opisany wcześniej.Trzytygodniowe samce myszy przebywały w środowisku wzbogaconym lub w klatkach kontrolnych przez pięć tygodni przed podskórnym wszczepieniem guza w dawce 10⁵ komórek na zwierzę. Wyniki przedstawiają masę guza czerniaka B 16 w 17. dniu po inokulacji. Każda grupa składała się z 10 zwierząt.Gwiazdka oznacza wartość P mniejszą niż 0,05, obliczoną przy użyciu testu t-Studenta. Trzytygodniowe myszy poddano wzbogaceniu środowiskowemu przez sześć dni. Sześć dni w wzbogaconym środowisku zmniejszyło masę białej tkanki tłuszczowej w obszarze zaotrzewnowym.Ten wykres pokazuje, że sześć dni w wzbogaconym środowisku zmniejszyło masę poduszek tłuszczowych w stosunku do masy ciała dla brunatnej tkanki tłuszczowej, białej tkanki tłuszczowej nad skórną oraz białej tkanki tłuszczowej zaotrzewnowej. Kolejne dwa wykresy przedstawiają wyniki myszy utrzymywanych we wzbogaconym środowisku przez cztery tygodnie; jak widać tutaj, cztery tygodnie wzbogacenia środowiskowego zmniejszyły masę poduszek tłuszczowych we wszystkich typach tłuszczu z wyjątkiem brunatnej tkanki tłuszczowej. Cztery tygodnie wzbogacenia środowiskowego spowodowały spadek masy poduszek tłuszczowych w stosunku do masy ciała we wszystkich typach tłuszczu z wyjątkiem brunatnej tkanki tłuszczowej.Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać gruntowną wiedzę na temat tego, jak przygotować i utrzymywać wzbogacone środowisko, które wywołuje efekty przeciwnowotworowe i przeciwotyłościowe u myszy.

a-protocol-for-housing-mice-in-an-enriched-environment

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Kopanie nor, budowanie gniazd i gromadzenie zapasów to typowe dla gatunku czynności, które myszy chętnie wykonują w warunkach laboratoryjnych. Niniejszy artykuł opisuje, w jaki sposób można je w prosty i niedrogi sposób ocenić. Protokoły te są niezwykle wrażliwe na szczep myszy, uszkodzenia mózgu oraz choroby. Co więcej, stanowią one „wzbogacenie środowiskowe” dla myszy i ucieleśniają aspekt „Udoskonalenia” (Refinement) zasady „3R”18.

Ocena kopania nor, budowy gniazd i gromadzenia zapasów u myszy

Ten protokół opisuje dwie różne manipulacje środowiskowe oraz równoległy protokół infuzji mózgu do badania wywołanych przez środowisko zmian w mózgu, leżących u podstaw adaptacyjnego zachowania i naprawy mózgu u dorosłych myszy.

Środowiskowe modulacje liczby neuronów dopaminowych śródmózgowia u dorosłych myszy

Wzbogacenie środowiska (EE) to środowisko przetrzymywania zwierząt, które służy do ujawniania mechanizmów leżących u podstaw powiązań między stylem życia, stresem i chorobami. Protokół ten opisuje procedurę, która wykorzystuje mysi model nowotworzenia jelita grubego i EE w celu szczegółowego zdefiniowania zmian w różnorodności biologicznej mikrobioty, które mogą mieć wpływ na śmiertelność zwierząt.

Metoda określania wpływu wzbogacania środowiska na bioróżnorodność biomu mikrobiomu jelita grubego w mysim modelu guza jelita grubego

Ten artykuł zawiera szczegółowy opis nowego protokołu błędu oceny myszy. Przedstawiono również dowody na wrażliwość tego zadania węchowego na stan afektywny i omówiono jego użyteczność w różnych dziedzinach badawczych.

Ocena błędu oceny myszy za pomocą zadania kopania węchowego

Modele gryzoni są cennymi narzędziami do badania podstawowych zachowań związanych z zaburzeniami ze spektrum autyzmu (ASD). W tym artykule wyjaśniamy dwa testy behawioralne do modelowania podstawowych cech ASD u myszy: samopielęgnację, który ocenia powtarzające się zachowanie, oraz trzykomorowy test interakcji społecznych, który dokumentuje upośledzenia społeczne.

Strategie oceny zachowań podobnych do autystycznych u myszy

Ten protokół opisuje model zwierzęcy do badania, jak przeciwności losu we wczesnym okresie życia, sprowokowane przez zubożałe środowisko i nieprzewidywalną opiekę matki we wczesnym okresie poporodowym, wpływają na rozwój mózgu i przyszłe ryzyko zaburzeń psychicznych.

Ograniczone ściółkowanie i gniazdowanie jako model przeciwności losu we wczesnym okresie życia u myszy

Tutaj opisujemy procedury eksperymentalne związane z dwufotonowym obrazowaniem kory myszy podczas zachowania w środowisku wirtualnej rzeczywistości.

Dwufotonowe obrazowanie wapnia u myszy poruszających się w środowisku rzeczywistości wirtualnej

Ten protokół opisuje zmodyfikowaną tablicę do dołków, która jest zestawem testów behawioralnych, który zawiera cechy otwartego pola i tradycyjnej tablicy do dołków. Układ ten umożliwia analizę różnicową nieuwarunkowanych zachowań małych ssaków laboratoryjnych, a także analizę zdolności poznawczych.

Zmodyfikowana tablica z otworami - pomiar zachowania, funkcji poznawczych i interakcji społecznych u myszy i szczurów

Ten manuskrypt opisuje protokół Morrisa wodnego labiryntu (MWM) dostosowany do użycia z powszechnie używanym mysim modelem choroby Alzheimera. MWM jest szeroko stosowany w transgenicznych modelach myszy. Implementacja procedury wrażliwej na odkształcenie tła modelu myszy jest niezbędna do wykrywania różnic grupowych.

Test labiryntu wodnego Morrisa: optymalizacja pod kątem obciążenia myszy i środowiska testowego

Ustandaryzowana metoda oceny została opracowana dla Wearable Mobility Monitoring Systems (WMMS), która obejmuje ciągłe działania w realistycznym codziennym środowisku życia. Testowanie z serią codziennych czynności życiowych może zmniejszyć czułość rozpoznawania aktywności; w związku z tym zachęca się do stosowania realistycznych obwodów testowych w celu prawidłowej oceny wydajności WMMS.

Ocena systemu rozpoznawania aktywności człowieka opartego na smartfonach w codziennym środowisku życia

Poznaj protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku, który poprawia zdrowie metaboliczne i zmniejsza ryzyko nowotworów. Metoda obejmuje konfigurację, utrzymanie i monitorowanie warunków dla zwierząt.

Protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku

Przeglądaj więcej filmów