Protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku

Celem tej procedury jest dostarczenie szczegółów niezbędnych do trzymania i utrzymywania zwierząt w warunkach wzbogacenia środowiska, które wywołuje silne efekty metaboliczne i przeciwnowotworowe u myszy. Osiąga się to poprzez uprzednie ustawienie wzbogaconego środowiska mieszkaniowego w dużym pojemniku z przedmiotami, takimi jak koła, źródła pracy, budki, rury, kłody i klatki. Drugim krokiem jest wprowadzenie zwierząt do nowego środowiska.

Następnie wzbogacone środowisko jest utrzymywane poprzez zmianę lokalizacji i rodzaju przedmiotów w koszu oraz regularne dostarczanie świeżego pożywienia i wody. Ostatnim krokiem jest oczyszczenie przedmiotów, które zostały wymienione w środowisku, aby były gotowe do wymiany w przyszłości. Ostatecznie, po eutanazji i analizie tkanek zwierzęcych.

Ta technika wzbogacania środowiska wykazuje zmniejszoną otyłość, zwiększoną odporność na wydatek energetyczny przeciwko otyłości wywołanej dietą oraz fenotypową zmianę koloru tłuszczu z białego na brązowy poprzez aktywację osi adipocytów nerwowych podwzgórza. Metoda ta opisuje szczegóły dotyczące stworzenia wzbogaconego środowiska dla gryzoni laboratoryjnych, które zwiększa odporność na nowotwory i choroby metaboliczne. Najpierw spryskaj i wytrzyj wnętrze dużego pojemnika wzbogacającego środkami dezynfekującymi sporicidynę.

Postępując zgodnie z instrukcjami producenta, wytrzyj kosz 30% etanolem lub papierem nasączonym wodą z kranu, ręcznikiem i suszarką ręcznikiem papierowym, aby pozbyć się zapachu poprzedniego środka dezynfekującego. Używaj igloo z plastikowymi rurkami z kółkami typu SOR i innych różnych plastikowych zabawek przypominających hutcher w wzbogaconym środowisku. Umyj te zabawki jak poprzednio, użyj metalowych kółek do biegania, które zostały umyte jak poprzednio.

Jeśli farba na kole zacznie blaknąć, tak że koło staje się głośne, gdy zwierzęta po nim biegają, nałóż niewielką ilość wazeliny na miejsce, w którym koło i oś się łączą. Używaj drewnianych bali we wzbogaconym środowisku. Oczyść kłody, ręcznie usuwając pościel lub inne zanieczyszczenia.

Następnie wysterylizuj kłody, sterylizując je w autoklawie w cyklu suchym lub cyklu tekstylnym, który osiąga temperaturę 121 stopni Celsjusza przez 15 minut. Używaj czystych klatek do karmienia o wymiarach 29 centymetrów na 18 centymetrów na 12,5 centymetra i 30,5 centymetra na 19 centymetrów na 14 centymetrów do trzymania. Ruszt do karmienia i picia wycina otwór o średnicy co najmniej pięciu centymetrów w przedniej dolnej części klatki, aby myszy mogły wchodzić i wychodzić.

Zaczynać. Na jedną ćwierć cala ściółkę dla zwierząt laboratoryjnych z kolb kukurydzy do czystego lub dużego pojemnika wzbogacającego na głębokość od dwóch do 2,5 centymetra. Następnie umieść dwie lub trzy poprzednie kłody naczyń aorty w jednym rogu pojemnika, aby sekwestrować obszar o powierzchni około 1 225 centymetrów kwadratowych.

Następnie w obszarze odizolowanym przez kłody umieść na górze trzy kleje z kołami SOR. Upewnij się, że koła mają miejsce na swobodne obracanie się. Teraz złóż plastikową rurkę tak, aby wiele ramion rozgałęziało się od środkowego elementu łączącego.

Umieść tę rurkę na środku pojemnika w dwóch rogach pojemnika. Umieść klatkę do karmienia wypełnioną tą samą ściółką co kosz. Otwór z przodu każdej klatki do karmienia powinien być skierowany w stronę środka pojemnika.

Umieść drut do jedzenia i wody zawierający karmę dla myszy na każdej klatce do karmienia. Dodaj butelkę z wodą. Umieść w koszu koło o średnicy 11.5 centymetra, koło o średnicy 20.5 centymetra i koło o średnicy 28 centymetrów.

Następnie umieść cztery do pięciu dodatkowych plastikowych klatek, takich jak zabawki lub tunele, w całym pojemniku na wzbogacanie. Przykryj pojemnik bibułą filtracyjną z mikroizolatorem i użyj spinaczy do segregatora, aby przypiąć bibułę filtracyjną do pojemnika. Umieszczając zwierzęta w pojemniku na wzbogacanie warunków urozmaicenia warunków użytkowania, należy umieścić klatkę w pojemniku na boku, tak aby zwierzęta mogły swobodnie przemieszczać się ze standardowej klatki do pojemnika wzbogacającego.

Nie pozwól, aby materiały do zagnieżdżania zostały przeniesione do pojemnika na urozmaicenie. W wzbogaconym środowisku można jednocześnie trzymać od 10 do 20 zwierząt w tym samym wieku, płci i odmianie genetycznej. Należy zapewnić, aby zwierzęta były codziennie obserwowane pod kątem oznak choroby lub niepokoju.

W razie potrzeby delikatnie obchodź się ze zwierzętami, aby dokładniej sprawdzić ich stan dwa razy w tygodniu. Sprawdź poziom jedzenia i wody, upewniając się, że jedzenie i woda wystarczą na następne dwa dni. Wyprostuj również koła do biegania i zabawki wzbogacające, aby były rozłożone i można było z nich łatwo korzystać.

Wymieniaj wszystkie zabrudzone przedmioty wzbogacające raz w tygodniu, najlepiej po usunięciu myszy z otoczenia. W celach eksperymentalnych usuń klatki do karmienia i ruszty i zastąp je czystymi klatkami i stojakami wypełnionymi świeżą żywnością. Zamień butelki na wodę na butelki z czystą wodą.

Co najważniejsze, należy zmienić rozmieszczenie elementów wzbogacania w taki sposób, aby kluczowe aspekty konfiguracji zostały zachowane, ale elementy wzbogacające zostały rozmieszczone w inny sposób. Punkt. Sprawdź resztę dużego pojemnika na wzbogacanie i wyczyść w razie potrzeby. Zbierając brudną ściółkę i rozkładając nową, czystą ściółkę raz na dwa tygodnie.

Podczas cotygodniowej hodowli umyj zabawki ręcznie lub wysyłając je przez mycie w klatce. Co miesiąc usuwaj większość ściółki, usuwając zabawki wzbogacające i klatki do karmienia oraz zgarniając żwirek. Wymień na świeżą ściółkę, upewniając się, że we wszystkich obszarach klatki znajdują się dwa centymetry ściółki raz na trzy miesiące lub zgodnie z protokołem dla zwierząt, usuń całą ściółkę i zabawki, a następnie zdezynfekuj pojemnik na wzbogacanie, myjąc jak przed kontrolą domową Grupuj zwierzęta w tym samym 12-godzinnym cyklu światła i ciemności.

Podobnie jak myszy w wzbogaconym środowisku w mikroizolowanych klatkach, zapewnij taką samą ściółkę z kolb kukurydzy w klatce kontrolnej, jak w środowisku wzbogaconym, i dodaj gniazdo o wymiarach cztery centymetry na cztery centymetry oświetlone gniazdem maister maker, w którym znajduje się od trzech do pięciu myszy tej samej płci w zwykłej klatce dla myszy. Nie umieszczaj w klatce żadnej rurki na zabawki ani budki. Dołącz ruszt do klatki do przechowywania jedzenia i butelki z wodą, jeśli klatka nie jest podłączona do automatycznego systemu nawadniania.

Codziennie monitoruj stan zdrowia zwierząt, upewniając się, że zwierzęta mają dużo jedzenia i wody. Wymień lub wyczyść klatki, przewody zasilające, żywność i wodę. Raz w tygodniu czyść klatki i ruszty jak poprzednio.

Trzytygodniowe samce myszy trzymano w wzbogaconym środowisku lub klatkach kontrolnych przez pięć tygodni przed podskórnym inokulacją guza z 10 do 5 komórek na zwierzę. Wyniki pokazują, że guz czerniaka B 16 waży się 17 dni po szczepieniu. Każda grupa składała się z 10 zwierząt.

Gwiazdka reprezentuje wartość P mniejszą niż 0,05 obliczoną za pomocą testu T-score uczniów. Trzytygodniowe myszy były poddawane wzbogacaniu środowiska przez sześć dni. Sześć dni w wzbogaconym środowisku, zmniejszenie zaotrzewnowej, białej tkanki tłuszczowej, masy poduszeczki tłuszczowej.

Ten wykres pokazuje, że sześć dni we wzbogaconym środowisku zmniejszyło brązową tkankę tłuszczową, białą tkankę tłuszczową naskórka i białą tkankę tłuszczową zaotrzewnową, masę poduszeczek tłuszczowych w stosunku do masy ciała. Następne dwa wykresy przedstawiają wyniki myszy trzymanych w wzbogaconym środowisku przez cztery tygodnie, jak widać tutaj, cztery tygodnie we wzbogaceniu środowiska, zmniejszona waga poduszeczek tłuszczowych we wszystkich typach tłuszczu z wyjątkiem brązowej tkanki tłuszczowej. Cztery tygodnie wzbogacania środowiska, zmniejszenie masy poduszek tłuszczowych w stosunku do masy ciała dla wszystkich rodzajów tłuszczu z wyjątkiem brązowej tkanki tłuszczowej.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak skonfigurować i utrzymać wzbogacone środowisko, które wywołuje efekty przeciwnowotworowe i przeciw otyłości u myszy.