Name: Spektrometria mas do monitorowania wybranych reakcji do bezwzględnej kwantyfikacji białek (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Poznaj metodę SRM do bezwzględnej kwantyfikacji białek w złożonych próbkach biologicznych przy użyciu chromatografii cieczowej i spektrometrii mas. Technika ta umożliwia szybką analizę wielu celów jednocześnie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

To badanie było wspierane przez Intramural Research Program NIH, National Institute of Allergy and Infectious Diseases.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Bezwzględna kwantyfikacja białek ma zasadnicze znaczenie dla bardzo różnorodnych zastosowań biomedycznych, takich jak walidacja biomarkerów i modelowanie szlaku transdukcji sygnału. Ostatnio ukierunkowana proteomika z wykorzystaniem LC-SRM skorzystała z ulepszeń wielu technologii, w tym przygotowywania wzorców peptydów, HPLC, analizy danych QqQ-MS i LC-SRM. W związku z tym stał się potężną alternatywą dla testów immunologicznych. Testy immunologiczne mogą być niezwykle czułe i wysokoprzepustowe, ale opracowanie solidnego...

Eksperymenty proteomiczne wykorzystujące spektrometrię mas (MS) mogą być zaprojektowane tak, aby używały metod nieukierunkowanych (strzelba) lub ukierunkowanych. Proteomika odkrywcza zasadniczo opiera się na oddolnym stwardnieniu rozsianym, przy użyciu tradycyjnego trybu akwizycji zależnej od danych lub przy użyciu jednej z niedawno opracowanych technik niezależnych od danych (np. MSE, SWATH)1,2. Proteomika typu shotgun jest potężnym narzędziem do wysokoprzepustowej identyfikacji peptydów i względnej kwantyfikacji, ale generalnie nie nadaje się do bezwzględnej kwantyfikacji lub do celowania w małe, zdefiniowane zestawy (~dziesiątki) białek. Metodą MS najczęściej stosowaną w proteomice celowanej jest monitorowanie wybranych reakcji (SRM) ze względu na jej wysoką czułość, szybkość i zakres dynamiki3-5. Alternatywą dla SRM jest równoległe monitorowanie reakcji, które wykorzystuje pełne skanowanie MS o wysokiej rozdzielczości6.
SRM jest zwykle wykonywany przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami nano-przepływowymi (nano-RP-LC) sprzężonego ze źródłem jonów jonizacji nano-elektronowej (nano-ESI) podłączonym do potrójnego kwadrupolowego spektrometru masowego (QqQ-MS). W typowym eksperymencie białka próbki są trawione proteolitycznie, a powstałe peptydy są chromatograficznie rozdzielane, desorbowane i jonizowane. Powstałe jony prekursorowe są filtrowane m/z przez pierwszy kwadrupol (Q1) i rozdrabniane w drugim kwadrupolu (q2) poprzez zderzenie ich z gazem zderzeniowym. Powstałe jony fragmentacyjne są filtrowane m/z w trzecim kwadrupolu (Q3) i oznaczane ilościowo za pomocą dynode. Każda para jonów prekursorowych i fragmentacyjnych jest określana jako przejście, a każde przejście jest monitorowane przez określony czas (czas przebywania; zwykle 2-50 ms). Podczas LC-SRM QqQ-MS przechodzi przez predefiniowaną listę przejść (cykl pracy wynosi zwykle ≤3 sekundy) i tworzony jest chromatogram każdego przejścia.
Alternatywne strategie oznaczania ilościowego białek zazwyczaj wykorzystują testy immunologiczne, takie jak plamy punktowe, plamy zachodnie, ELISA, mikromacierze przeciwciał, mikromacierze białek w odwróconej fazie, mikroprzepływowe testy immunologiczne, cyfrowe testy ELISA i testy immunologiczne oparte na mikrosferze7. Najlepsze testy immunologiczne mogą być znacznie bardziej czułe niż LC-SRM, a przepustowość próbek testów immunologicznych może być znacznie wyższa niż w przypadku LC-SRM5. Jednak opracowanie testów immunologicznych może być kosztowne i/lub czasochłonne, a uzyskane testy mogą być podatne na reaktywność krzyżową i / lub interferencję, niezgodne z metodami lizy/homogenizacji komórek/tkanek i/lub niepodatne na multipleksowanie5,8. Niektóre z tych problemów można rozwiązać, stosując techniki sprzęgania oparte na przeciwciałach i stwardnieniu rozsianym. Na przykład białka docelowe można wzbogacić za pomocą immunoprecypitacji przed proteolizą i LC-SRM9-12. Alternatywnie, technika SISCAPA wykorzystuje immunoprecypitację po proteolizie na poziomie peptydu13,14. Oprócz strategii wzbogacania immunologicznego, zubożenie immunologiczne białek o wysokiej liczebności można zastosować w celu zwiększenia czułości LC-SRM poprzez zmniejszenie interferencji przez koelucję analitów15,16.
Kwantyfikacja białek oparta na MS może być podzielona na względną i bezwzględną, a także na bezznacznikowe i stabilne izotopy (np. znakowanie metaboliczne, znakowanie chemiczne oraz ciężkie znakowane wewnętrzne standardy białek i peptydów). Techniki bezznacznikowe mogą być przydatne do względnej kwantyfikacji białek, ale nie nadają się do dokładnej bezwzględnej kwantyfikacji. Dla porównania, techniki znakowania zmniejszyły błędy związane z przygotowaniem próbki i wariancją stwardnienia rozsianego i są często stosowane do względnej kwantyfikacji białka17. Na przykład wzorce proteomu znakowanego stabilnymi izotopami (SILAP) przygotowane przy użyciu hodowlanej linii komórek ludzkich umożliwiły względną kwantyfikację potencjalnych biomarkerów za pomocą LC-SRM ludzkiej surowicy18. Dokładna bezwzględna ocena ilościowa białka przez MS wymaga, aby oczyszczone, kwantyfikowane, znakowane izotopowo wzorce wewnętrzne białek lub peptydów zostały wzbogacone w próbki biologiczne przed MS. Włączenie wzorców wewnętrznych znakowanych ciężkimi izotopami do przepływu pracy LC-SRM umożliwia bezwzględną kwantyfikację, która, jak wykazano, jest wysoce odtwarzalna i możliwa do przeniesienia między laboratoriami16,19.
Standardy wewnętrzne znakowane stabilnym izotopem do bezwzględnej kwantyfikacji białek przez MS obejmują wzorce peptydów przygotowane przy użyciu syntezy fazy stałej20, białka złożone ze skonkatenowanych standardów peptydów rozszczepialnych proteazą21 oraz standardy białek o pełnej długości22. Modyfikacja kowalencyjna białka docelowego i niepełne przygotowanie próbki (tj. niekompletna liza i homogenizacja próbki oraz niepełna solubilizacja, denaturacja, alkilowanie i proteoliza białka) mogą podważyć dokładną kwantyfikację. Wewnętrzne wzorce białkowe są najmniej narażone na większość z tych potencjalnych problemów, ale zwykle są one najtrudniejsze do przygotowania. Alternatywą jest analiza każdego białka docelowego przy użyciu wielu wewnętrznych wzorców peptydowych, które są zaprojektowane tak, aby zawierały natywne reszty flankujące amino- i karboksylowe. Niezależnie od tego, jaki rodzaj wzorca wewnętrznego zostanie zastosowany, powinien on zostać wprowadzony do próbek biologicznych na jak najwcześniejszym etapie przygotowania próbki. Należy również przetestować wiele technik przygotowania próbek (np. różne warunki denaturacji). Zastosowanie wielu ortogonalnych technik eksperymentalnych (eksperymentalna walidacja krzyżowa) jest realną strategią przezwyciężania większości potencjalnych wyzwań związanych z kwantyfikacją23-25.
Ilościowa ocena białek LC-SRM jest bardzo elastyczną techniką, która była używana w wielu różnych zastosowaniach. Warto zauważyć, że został on wykorzystany do badania biomarkerów peptydowych i białkowych w próbkach klinicznych, takich jak surowica, biopsje gruboigłowe i aspiraty cienkoigłowe5. LC-SRM został również wykorzystany do pomiaru stechiometrii kompleksów białkowych5,26, do wykrywania neurotoksyn botulinowych27, do ilościowego określenia dynamiki fosforylacji białek w szlakach sygnałowych5 oraz do ilościowego określenia zmian w konformacji białek28.
Nasze laboratorium używa LC-SRM do ilościowego oznaczania białek sygnałowych, które pośredniczą w chemotaksji makrofagów, aby wspierać rozwój symulacji szlaku chemotaksji. Ogólny schemat protokołu (ryc. 1) rozpoczyna się od uszeregowania wstępnych peptydów docelowych. Następnie syntetyzowane są surowe zewnętrzne wzorce peptydowe, które są wykorzystywane do opracowania testów LC-SRM do analiz jakościowych próbek biologicznych. W przypadku wykrycia docelowego peptydu pochodzącego z próbki biologicznej, przygotowuje się oczyszczone, znakowane ciężkim wewnętrznym wzorcem peptydowym do ilościowego LC-SRM. Protokół ten może być wykorzystany do dokładnego ilościowego oznaczania białek z szerokiej gamy próbek biologicznych oraz do wspierania badań nad szeroką gamą docelowych białek.

<table><tbody><tr><td>Acetonitryl (ACN), klasa LC-MS</td><td>Fisher</td><td>A955-1</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania białek BCA (kwas bicinchoninowy)</td><td>Fisher</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>Koraliki do bicia kulek, tlenek cyrkonu-krzemionka, 0,1 mm</td><td>BioSpec Products</td><td>11079101z</td><td></td></tr><tr><td>Chlorowodorek bestatyny</td><td>Sigma</td><td>B8385-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Hodowla komórkowa DMEM (z glukozą, bez L-glutaminy)</td><td>Lonza</td><td>12-614F</td><td></td></tr><tr><td>Hodowla komórkowa EDTA, 500 mM, pH8</td><td>Gibco</td><td>15575</td><td></td></tr><tr><td>Hodowla komórkowa płodowej surowicy bydlęcej (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>Hodowla komórkowa L-glutamina</td><td>Sigma</td><td>G8540-25G</td><td></td></tr><tr><td>Hodowla komórkowa buforowana fosforanami soli fizjologicznej (PBS) pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>Plama żywotności kultur komórkowych Trypan Blue, 0,4% w/v</td><td>Lonza</td><td>17-942E</td><td></td></tr><tr><td>Celometr Auto T4 licznik komórek</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>Celometr Auto T4</td><td></td></tr><tr><td>Celometr Auto T4 jednorazowe komory liczące</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CHT4-SD100-014</td><td></td></tr><tr><td>Ditiothreitol (DTT)</td><td>Sigma</td><td>D5545-5G</td><td></td></tr><tr><td>Kwas mrówkowy, klasa LC-MS, ampułki</td><td>Fisher</td><td>A117-10X1AMP</td><td></td></tr><tr><td>Hemocytometr, ulepszony przez Neubauera, głębokość 0,1 mm</td><td>Marienfeld-Superior</td><td>0640030</td><td></td></tr><tr><td>HEPES, 1 M, pH 7,2</td><td>Mediatech</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>Kwas solny, 37% w/w</td><td>VWR</td><td>BDH3028-2,5LG</td><td></td></tr><tr><td>Jodoacetamid</td><td>Sigma</td><td>I1149-5G</td><td></td></tr><tr><td>Laserowy ściągacz do mikropipet Sutter</td><td>Instrument Co.</td>Kapilara krzemionkowa <td>pokryta P-2000</td><td></td></tr><tr><td>LC, 50 i mikro; m id</td><td>Polymicro Technologies</td><td>1068150017</td><td></td></tr><tr><td>fiolka LC, automatyczny podajnik próbek, polipropylen 12 mm x 32 mm</td><td>SUN SRI</td><td>200-268</td><td></td></tr><tr><td>LC fiolka zakrętka, autosampler, wstępnie nacięty PTFE/silikon</td><td>SUN SRI</td><td>500-061</td><td></td></tr><tr><td>Lucyferaza, z Photinus pyralis</td><td>Sigma</td><td>L9506-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatyna A</td><td>EMD Milipor</td><td>516481-25MG</td><td></td></tr><tr><td>Paski pH colorpHast (pH 0,0-6,0)</td><td>EMD Chemicals</td><td>9586-1</td><td></td></tr><tr><td>Koktajl inhibitorów fosfatazy PhosStop</td><td>Roche</td><td>04906837001</td><td></td></tr><tr><td>RapiGest SF</td><td>Waters</td><td>186001861</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak SPE, C18 1 ml kartusz 100 mg</td><td>Wody</td><td>WAT023590</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak SPE, kolektor ekstrakcyjny, 20 pozycji</td><td>Wody</td><td>WAT200609</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak SPE, gumowa żarówka o płaskiej powierzchni</td><td>Fisher</td><td>03-448-25</td><td></td></tr><tr><td>Wodorotlenek sodu (NaOH)</td><td>Fisher</td><td>S318-500</td><td></td></tr><tr><td>Koncentrator próżniowy SpeedVac</td><td>Fisher</td><td>SPD111V</td><td></td></tr><tr><td>Kwas trifluorooctowy (TFA), klasa LC-MS</td><td>Fisher</td><td>A116-50</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna, stopień sekwencjonowania, modyfikowana</td> probówka <td>Promega</td><td>V5113</td><td></td></tr><tr><td> dekapler do probówek Micronic</td><td>USA Scientific</td><td>1765-4000</td><td></td></tr><tr><td>Probówki, mikrowirówka 2 ml, nakrętka o-ring, sterylna</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.006</td><td></td></tr><tr><td>Mocznik</td><td>Sigma</td><td>U0631-500g</td><td></td></tr><tr><td>Woda, klasa LC-MS</td><td>Fisher</td><td>W6-1</td><td></td></tr></tbody></table>

spektrometria mas do monitorowania wybranych reakcji do bezwzględnej kwantyfikacji białek

Selected Reaction Monitoring Mass Spectrometry for Absolute Protein Quantification

Bezwzględna kwantyfikacja docelowych białek w złożonych próbkach biologicznych jest kluczowa dla szerokiego zakresu badań i zastosowań klinicznych. Protokół ten zawiera instrukcje krok po kroku dotyczące opracowywania i stosowania testów ilościowych przy użyciu spektrometrii mas (MS) z monitorowania wybranych reakcji (SRM). Po pierwsze, prawdopodobne kwantyotypowe peptydy docelowe są identyfikowane na podstawie wielu kryteriów. Obejmuje to identyfikację peptydów proteotypowych, unikanie miejsc modyfikacji potranslacyjnej i analizę unikalności docelowego peptydu w stosunku do docelowego białka. Następnie syntetyzuje się surowe zewnętrzne wzorce peptydowe i wykorzystuje je do opracowania testów SRM, a uzyskane testy wykorzystuje się do przeprowadzenia analiz jakościowych próbek biologicznych. Na koniec przygotowuje się oczyszczone, ilościowe, znakowane ciężkimi izotopami wewnętrznymi wzorce peptydów i wykorzystuje się je do przeprowadzenia testów SRM z rozcieńczeniem izotopów. Przedstawiono analizę wszystkich uzyskanych danych z MS. Protokół ten został wykorzystany do dokładnego oznaczenia bezwzględnej obfitości białek szlaku sygnałowego chemotaksji w komórkach RAW 264.7 (linia komórkowa monocytów / makrofagów myszy). Szczegółowo opisano oznaczanie ilościowe Gi2 (heterotrimerycznej podjednostki α białka G).

Opracowanie predykcyjnych modeli obliczeniowych szlaków transdukcji sygnału jest jednym z fundamentalnych celów biologii systemów53. Niestety, nawet w przypadku szlaków sygnałowych, które zostały obszernie zbadane i mają duże znaczenie kliniczne, nadal nie jest możliwe ogólne ilościowe przewidywanie zachowania szlaku w odpowiedzi na perturbacje (np. dotyczy to szlaku MAPK/ERK54). Niedawno w badaniu wykorzystano ukierunkowaną proteomikę, transkryptomikę oraz modelowanie i symulacje obliczeni...

Ten protokół opisuje, jak przeprowadzać bezwzględne testy kwantyfikacyjne docelowych białek w złożonych próbkach biologicznych przy użyciu monitorowania wybranych reakcji. Wykorzystano go do dokładnego ilościowego określenia białek szlaku sygnałowego chemotaksji makrofagów myszy. Szczegółowo opisano wybór peptydów docelowych, opracowywanie testów oraz testy jakościowe i ilościowe.

Spektrometria mas do monitorowania wybranych reakcji do bezwzględnej kwantyfikacji białek

Absolute quantification of target proteins within complex biological samples is critical to a wide range of research and clinical applications. This ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest wykorzystanie chromatografii cieczowej z monitorowaniem wybranych reakcji lub L-C-S-R-M do ilościowego oznaczenia bezwzględnej zawartości białek docelowych w złożonych próbkach biologicznych. Po wybraniu peptydów docelowych syntetyzowane są surowe zewnętrzne standardy peptydowe, które służą do opracowania testów SRM z wykorzystaniem chromatografii cieczowej, spektrometrii mas lub LCM ms. Otrzymane testy są następnie wykorzystywane do przeprowadzenia jakościowej analizy lc-SRM przygotowanych próbek biologicznych.Jeśli wykryty zostanie peptyd docelowy pochodzący z próbki biologicznej, próbki biologiczne analizuje się za pomocą ilościowych analiz lc SRM poprzez dodanie serii rozcieńczeń izotopowych stabilnych wewnętrznych standardów peptydowych. Ostatecznie lc SRM może być wykorzystywane do dokładnego oznaczania ilości białek z szerokiej gamy próbek biologicznych oraz do wspierania badań nad różnorodnymi białkami docelowymi. Główną zaletą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak testy immunoenzymatyczne, jest fakt, że opracowanie analizy jest stosunkowo szybkie i niedrogie, a uzyskane metody nadają się do multipleksowania i nie są poda

selected-reaction-monitoring-mass-spectrometry-for-absolute-protein

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Metoda SISCAPA (Stable Isotope Standards and Capture by Anti-Peptide Antibodies) łączy wzbogacanie peptydów metodą powinowactwa z masową spektrometrią z rozcieńczeniem izotopem stabilnym (MRM-MS), aby zapewnić ilościowe pomiary peptydów jako substytutów odpowiadających im białek. W niniejszym opracowaniu opisujemy protokół z wykorzystaniem cząstek magnetycznych w formacie częściowo zautomatyzowanym.

Ilościowe oznaczanie białek z wykorzystaniem immunoafinityjnego wzbogacania peptydów sprzężonego ze spektrometrią mas

Przedstawiamy protokół identyfikacji i ilościowego określania składników w mieszaninach gatunków o podobnych białkach. Spektrometria mas wykrywa peptydy w celu identyfikacji i podaje względną ocenę ilościową za pomocą stosunków powierzchni pików. Jako narzędzie do wykrywania oszustw, metoda ta może wykryć 1% koniny w wołowinie.

Oznaczanie gatunków i oznaczanie ilościowe w mieszaninach z zastosowaniem spektrometrii mas MRM peptydów stosowanych do weryfikacji autentyczności mięsa

Tutaj opisujemy test chromatograficzny połączony z separacją ruchliwości jonów prekursorów peptydów, po której następuje detekcja MS w wysokiej rozdzielczości (~30 000) MS dla kwantyfikacji wzorców peptydów wzbogaconych w trawieniu przeciwciał monoklonalnych.

Test HS-MRM do oznaczania ilościowego białek komórek gospodarza w biofarmaceutykach białkowych za pomocą chromatografii cieczowej Mobilność jonów Spektrometria mas QTOF

Przedstawiono protokół kompleksowej ekstrakcji lipidów, metabolitów i białek z tkanek biologicznych przy użyciu jednej próbki.

Prosta metoda ekstrakcji frakcjonowanej do kompleksowej analizy metabolitów, lipidów i białek z pojedynczej próbki

Przedstawiamy protokół do dokładnego oznaczania ilościowego białek za pomocą znakowania izobarycznego, intensywnego frakcjonowania, narzędzi bioinformatycznych i etapów kontroli jakości w połączeniu z chromatografią cieczową połączoną ze spektrometrem masowym o wysokiej rozdzielczości.

Głębokie profilowanie proteomu za pomocą znakowania izobarycznego, rozległej chromatografii cieczowej, spektrometrii mas i kwantyfikacji wspomaganej programowo

Prezentujemy metodę oczyszczania, wykrywania i identyfikacji peptydów diGly, które pochodzą z ubikwitynowanych białek ze złożonych próbek biologicznych. Przedstawiona metoda jest powtarzalna, solidna i przewyższa opublikowane metody pod względem poziomu szczegółowości analizy wszechobecności.

Wykrywanie miejsc ubikwitynacji białek za pomocą wzbogacania peptydów i spektrometrii mas

Tutaj prezentujemy solidny protokół do ilościowego oznaczania 40 związków biorących udział w centralnym metabolizmie węgla i energii w reakcjach syntezy białek bez komórek. Bezkomórkowa mieszanina syntezy jest derywatyzowana aniliną w celu skutecznego rozdzielania za pomocą chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami, a następnie oznaczana ilościowo za pomocą spektrometrii mas przy użyciu izotopowo znakowanych wzorców wewnętrznych.

Bezwzględna kwantyfikacja metabolizmu syntezy białek bezkomórkowych za pomocą chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami i spektrometrią mas

Opisany protokół zapewnia zoptymalizowaną ilościową analizę proteomiczną próbek tkanek przy użyciu dwóch podejść: ilościowego opartego na znacznikach i bez etykiety. Podejścia oparte na znacznikach mają tę zaletę, że zapewniają dokładniejszą ocenę ilościową białek, podczas gdy podejście bez znaczników jest bardziej opłacalne i służy do analizy setek próbek kohorty.

Kompleksowy przepływ pracy proteomiki próbek tkanek opartej na spektrometrii mas

Protokół ma na celu wprowadzenie użycia potrójnego kwadrupolowego spektrometru masowego do monitorowania wielu reakcji (MRM) białek z próbek klinicznych. Zapewniliśmy systematyczny przepływ pracy, począwszy od przygotowania próbki po analizę danych dla próbek klinicznych, z zachowaniem wszystkich niezbędnych środków ostrożności, które należy podjąć.

Ilościowy przebieg proteomiki z wykorzystaniem wykrywania białek z ludzkiej tkanki mózgowej w oparciu o monitorowanie wielu reakcji

Przedstawiono protokół do oznaczania biomarkerów o niskiej obfitości z wysuszonych próbek surowicy, czego przykładem jest biomarker peptydu uwalniającego progastrynę (ProGRP). Kulki magnetyczne pokryte przeciwciałami są używane do selektywnego oczyszczania i wzbogacania proteotypowego peptydu ProGRP. Wychwycony peptyd jest następnie analizowany za pomocą chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas.

Mikropróbkowanie w ukierunkowanej analizie białek o niskiej liczebności opartej na spektrometrii mas

Poznaj metodę SRM do bezwzględnej kwantyfikacji białek w złożonych próbkach biologicznych przy użyciu chromatografii cieczowej i spektrometrii mas. Technika ta umożliwia szybką analizę wielu celów jednocześnie.

Spektrometria mas do monitorowania wybranych reakcji do bezwzględnej kwantyfikacji białek

Przeglądaj więcej filmów