Name: Przewlekłe zwężenie nerwu podoczodołowego szczura (IoN-CCI) w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-21T15:45:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Poznaj model przewlekłego zwężenia nerwu podoczodołowego u szczura do badania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego. Metoda obejmuje ocenę zachowań bólowych i alodynii mechanicznej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy doceniają pracę, która została wykonana przez pierwszego autora modelu IoN-CCI, Barta Vosa†.

Oświadczenie etyczne: Zwierzęta są traktowane i opiekowane zgodnie z wytycznymi Komitetu ds. Badań i Zagadnień Etycznych IASP11. Protokół jest zatwierdzany przez instytucjonalny Komitet ds. Etyki.
1. Tematy
<ol>
	<li>Użyj samców szczurów Sprague-Dawley (250-300 g w dniu przybycia).</li>
	<li>Szczury trzymane w klatkach z solidnym dnem w pomieszczeniu kolonijnym o wilgotności 40-60% i temperaturze 21 ± 1 °C.</li>
	<li>Zapewnij dostęp do wody i jedzenia w libitum.</li>
	<li>Trzymaj szczury w odwróconym cyklu ciemności/światła o godzinie 12:12 (światła włączone po 20 godzinach).</li>
</ol>
2. Chirurgia
<ol>
	<li>Na szczura przygotuj dwa kawałki chromowej ligatury jelitowej (5-0) o długości około 6 cm i umieść je w sterylnej soli fizjologicznej, aby uniknąć wysuszenia i stania się sztywnym i łamliwym.</li>
	<li>Znieczulić zwierzę pentobarbitalem (60 mg/kg, i.p.) i leczyć atropiną (0,1 mg/kg, i.p.). Monitoruj poziom znieczulenia, wysuwając jedną nogę i ściskając pajęczynę skóry między palcami u stóp, aby upewnić się, że wywierany jest odpowiedni nacisk. Upewnij się, że zwierzę nie zgina kończyny. W razie potrzeby podać dodatkowy pentobarbital.</li>
	<li>Ogolić głowę szczura tak, aby można było wykonać nacięcie skóry głowy w linii środkowej o długości około 25 mm w równych odległościach do przodu i z tyłu do środka oczu.</li>
	<li>Zamocuj głowę szczura w stereotaktycznej ramie lub w inny sposób unieruchomij głowę szczura. Umieść szczura na podgrzewanej podkładce, aby utrzymać temperaturę ciała.</li>
	<li>Nałóż maść okulistyczną na oba oczy, aby zapobiec wysuszeniu uszkodzeń.</li>
	<li>Wyszoruj ogoloną głowę alkoholem, a następnie betadyną.</li>
	<li>Wykonaj nacięcie skóry głowy w linii środkowej, odsłaniając czaszkę i kość nosową.</li>
	<li>Użyj mikroskopu operacyjnego, aby wykonać kroki od 2.9 do 2.16.</li>
	<li>Wytnij krawędź oczodołu wolnego, utworzoną przez kości szczękowe, czołowe, łzowe i jarzmowe, za pomocą wacika z bawełnianą końcówką i pary kleszczy Dumonta. Użyj wacika, aby wchłonąć krew z ewentualnego krwawienia.</li>
	<li>Aby uzyskać dostęp do IoN, delikatnie odchyl zawartość oczodołu za pomocą precyzyjnego bawełnianego wacika, uważając, aby nie przeciągnąć przedniego nerwu sitowego, który przechodzi powyżej IoN. Odetnij IoN od otaczającej tkanki łącznej za pomocą precyzyjnego wacika z bawełnianą końcówką i pary kleszczy Dumonta za pomocą ruchu rozprowadzającego. Użyj wacika, aby wchłonąć krew z ewentualnego krwawienia.</li>
	<li>Aby wykonać podwiązanie, popchnij jeden koniec pojedynczego kawałka chromowego jelita w dół wzdłuż kości czołowej, przyśrodkowo do IoN i przesuń się o kilka milimetrów równolegle i niżej do IoN. Więzadło jest teraz utrzymywane na miejscu między IoN a kością czołową.</li>
	<li>Wsuń końcówkę kleszczy Dumonta pod kątem 45 stopni pod IoN, aby umieścić ją w bliskiej odległości od ligatury. Delikatnie cofnij IoN na boki, aby odsłonić ligaturę i końcówkę kleszczy. Chwyć ligaturę kleszczami i wyciągnij kleszcze bocznie spod IoN.</li>
	<li>Wyciągnij ligaturę z jamy oczodołu, aż oba końce ligatury znajdą się mniej więcej w równej odległości od IoN.</li>
	<li>Wykonaj "węzeł poślizgowy" z dwóch końców ligatury, aby umożliwić doskonałą kontrolę nad stopniem zwężenia i przesuń węzeł w kierunku IoN. Przesuń węzeł dalej, aby zwęzić IoN tak, aby średnica nerwu zmniejszyła się o zauważalną ilość. Wykonaj normalny węzeł na węźle poślizgowym, tak aby stopień zwężenia pozostał stały (tj. aby zapobiec ślizganiu się węzła szczelinowego).</li>
	<li>Odetnij ligatury, aby pozostawić około 2 mm wolnych końców węzła.</li>
	<li>Powtórzyć tę samą procedurę (kroki od 2.11 do 2.15), aby wykonać drugie podwiązanie w odległości 2 mm od pierwszego.</li>
	<li>W przypadku operacji pozorowanej wykonaj kroki od 2.2 do 2.10.</li>
	<li>Zamknij nacięcie skóry głowy za pomocą szwów poliestrowych (4-0) i pozwól szczurowi dojść do siebie na podgrzewanej podkładce. Nie pozostawiaj zwierzęcia bez opieki, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać pozycję leżącą na mostku i nie zwracaj zwierzęcia do towarzystwa innych zwierząt, dopóki w pełni nie wyzdrowieje.</li>
	<li>Aby uniknąć wyprzedzającego wpływu środków przeciwbólowych na rozwój bólu neuropatycznego, nie należy stosować środka przeciwbólowego w przypadku bólu pooperacyjnego.</li>
</ol>
3. Procedura testu behawioralnego
<ol>
	<li>Pozwól szczurom zaaklimatyzować się przez co najmniej 8 dni w warunkach inwentaryzacyjnych przed badaniami przedoperacyjnymi.</li>
	<li>Przyzwyczaj szczury do procedury testowej co najmniej raz dziennie przez trzy dni przed badaniem przedoperacyjnym.</li>
	<li>Przeprowadzenie badania w zaciemnionym pomieszczeniu ze światłem dostarczanym przez czerwoną żarówkę o mocy 60 W zawieszoną 1 m nad środkiem obszaru testowego, oświetlając środek, ale pozostawiając przyciemniony obwód i ciemną pozostałą część pomieszczenia.</li>
	<li>Upewnij się, że w tle jest wystarczająco dużo hałasu, aby zmniejszyć zakłócenia spowodowane nagłą stymulacją słuchową. W razie potrzeby zapewnij biały szum.</li>
	<li>Obserwacja zachowań związanych z pielęgnacją twarzy
	<ol>
		<li>Przetransportuj pojedynczego szczura z kolonii do pomieszczenia testowego w zakrytej plastikowej klatce bez ściółki. Uwaga: Idealnie byłoby, gdyby była to krótka wycieczka z minimalnymi bodźcami zewnętrznymi.</li>
		<li>Umieść szczura w zakrytej, przezroczystej plastikowej klatce bez ściółki (dł. x szer. x wys.: 24 cm x 14 cm x 17 cm) z lustrzanym tyłem przed kamerą wideo.</li>
		<li>Zrób 10-minutowe nagranie zachowania zwierzęcia. Podczas nagrywania upewnij się, że eksperymentator nie jest obecny w pomieszczeniu testowym.</li>
		<li>Wyczyść klatkę obserwacyjną przed umieszczeniem następnego zwierzęcia.</li>
		<li>Upewnij się, że zarejestrowane zachowanie jest analizowane przez eksperymentatora, który jest ślepy na eksperymentalne warunki szczura.</li>
		<li>Nagraj każdy epizod pielęgnacji twarzy podczas 10-minutowego nagrania. Uwaga: Pielęgnacja twarzy definiuje się jako wzorce ruchowe, w których przednie łapy stykają się z obszarami twarzy.</li>
		<li>Rozróżnij dwa rodzaje zachowań związanych z pielęgnacją twarzy. Jeśli sekwencja nie jest ani poprzedzona, ani następująca po niej pielęgnacja ciała (tj. pielęgnacja obszaru ciała innego niż twarz), należy sklasyfikować epizod jako izolowaną pielęgnację twarzy. Jeśli pielęgnacja ciała jest wykonywana bezpośrednio przed lub po pielęgnacji twarzy, skategoryzuj ten epizod jako pielęgnację twarzy podczas pielęgnacji ciała.</li>
		<li>Określ liczbę epizodów pielęgnacji twarzy.
		<ol>
			<li>Kategoryzuj okres między czynnościami związanymi z pielęgnacją twarzy, który nie przekracza 4 sekund, jako przestrzeń wewnątrz odcinka (tj. przerwa między czynnościami związanymi z pielęgnacją twarzy w ramach jednego epizodu).</li>
			<li>Kategoryzuj okres między czynnościami uwodzenia twarzy, który przekracza 4 sekundy, jako przestrzeń między odcinkami (tj. całkowite przerwanie czynności związanych z uwodzeniem twarzy między dwoma epizodami).</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Testy stymulacji mechanicznej
	<ol>
		<li>Szczury należy transportować w grupach do 6 zwierząt z kolonii do pomieszczenia testowego w zadaszonej klatce ze ściółką. Upewnij się, że jest to krótka podróż z minimalnymi bodźcami zewnętrznymi.</li>
		<li>Umieść szczury pojedynczo w przezroczystych plastikowych klatkach z pościelą (dł. x szer. x wys.: 24 cm x 14 cm x 17 cm) z pokrywą na zawiasach, aby można ją było łatwo otwierać i zamykać.</li>
		<li>Użyj stopniowanej serii pięciu włosów von Freya. Uwaga: Siła potrzebna do zgięcia włosów wynosi 0,015 g, 0,127 g, 0,217 g, 0,745 g i 2,150 g.</li>
		<li>Przyzwyczaj szczury do klatki obserwacyjnej i ruchów sięgających przez 10 minut. Co 30 sekund otwieraj pokrywę i delikatnie dotykaj ścianki klatki plastikowym prętem.</li>
		<li>Kiedy zwierzę jest w stanie węchania / braku lokomocji (tj. z czterema łapami umieszczonymi na ziemi, ani się nie poruszając, ani nie zamierając, ale wykazując zachowanie węchowe), nałóż pierwsze włosy von Freya na terytorium IoN w pobliżu środka opuszki wibrysalnej, na owłosioną skórę otaczającą wibrysy mistatyczne.</li>
		<li>Oceń reakcję zwierzęcia na stymulację, aby należeć do jednej z następujących kategorii odpowiedzi:4.
		<ol>
			<li>Całkowity brak odpowiedzi należy uznać za wynik 0.</li>
			<li>Skategoryzuj wykrycie bodźca (tj. szczur odwraca głowę w kierunku obiektu stymulującego, a obiekt bodźca jest następnie badany) jako wynik 1.</li>
			<li>Kategoryzuj reakcję odstawienia (tj. szczur powoli odwraca głowę lub energicznie ciągnie ją do tyłu po zastosowaniu stymulacji, czasami dochodzi do pojedynczego przetarcia twarzy ipsilateralnie do stymulowanego obszaru) jako wynik 2.</li>
			<li>Reakcję ucieczki/ataku (tj. szczur unika dalszego kontaktu z obiektem bodźca, albo pasywnie, odsuwając swoje ciało od obiektu stymulującego, aby przyjąć pozycję kucającą przy ścianie klatki, albo aktywnie atakując obiekt bodźca, wykonując ruchy gryzienia i chwytania) jako wynik 3.</li>
			<li>Kategoryzuj asymetryczną pielęgnację twarzy (tj. szczur wyświetla nieprzerwaną serię co najmniej trzech ruchów mycia twarzy skierowanych w stronę stymulowanego obszaru twarzy) jako wynik 4.</li>
			<li>W każdym zwierzęciu stosuj bodźce w rosnącej kolejności intensywności. Po zastosowaniu intensywności bodźca po jednej stronie, zastosuj ją po drugiej stronie, zanim przejdziesz do następnej intensywności bodźca. Losowo dobieraj kolejność, w jakiej stymulowana jest strona ipsilateralna i przeciwległa. Należy pamiętać, że zwierzę musi być w stanie wąchania/braku lokomocji przed każdą stymulacją.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Jensen, T. S., Gottrup, H., Sindrup, S. H., Bach, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+picture+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The clinical picture of neuropathic pain.</a> Eur J Pharmacol. 429 (1-3), 1-11 (2001).</li>
<li>Meyer Rosberg, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain+a+multidimensional+burden+for+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pain%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain a multidimensional burden for patients.</a> Eur J Pain. 5 (4), 379-389 (2001).</li>
<li>Meyer Rosberg, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+SF+36+and+Nottingham+Health+Profile+in+patients+with+chronic+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pain%22%5BJournal%5D)">Comparison of the SF 36 and Nottingham Health Profile in patients with chronic neuropathic pain.</a> Eur J Pain. 5 (4), 391-403 (2001).</li>
<li>Vos, B. P., Strassman, A. M., Maciewicz, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+evidence+of+trigeminal+neuropathic+pain+following+chronic+constriction+injury+to+the+rats+infraorbital+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral evidence of trigeminal neuropathic pain following chronic constriction injury to the rats infraorbital nerve.</a> J Neurosci. 14, 2708-2723 (1994).</li>
<li>Clavelou, P., Pajot, J., Dallel, R., Raboisson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+formalin+test+to+the+study+of+orofacial+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Application of the formalin test to the study of orofacial pain.</a> Neurosci Lett. 103, 349-353 (1989).</li>
<li>Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+assessment+of+facial+pain+in+rats+face+grooming+patterns+after+painful+and+non-painful+sensory+disturbances+in+the+territory+of+the+rats+infraorbital+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral assessment of facial pain in rats face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rats infraorbital nerve.</a> Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).</li>
<li>Deseure, K. R., Adriaensen, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+two+types+of+behavioral+variables+of+non+evoked+facial+pain+after+chronic+constriction+injury+to+the+rat+infraorbital+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Comparison between two types of behavioral variables of non evoked facial pain after chronic constriction injury to the rat infraorbital nerve.</a> Comp Med. 52 (1), 44-49 (2002).</li>
<li>Deseure, K., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonevoked+facial+pain+in+rats+following+infraorbital+nerve+injury+a+parametric+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Nonevoked facial pain in rats following infraorbital nerve injury a parametric analysis.</a> Physiol Behav. 81 (4), 595-604 (2004).</li>
<li>Deseure, K., Hans, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+study+of+non+evoked+orofacial+pain+following+different+types+of+infraorbital+nerve+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral study of non evoked orofacial pain following different types of infraorbital nerve injury in rats.</a> Physiol Behav. 138, 292-296 (2015).</li>
<li>Deseure, K., Koek, W., Adriaensen, H., Colpaert, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+administration+of+the+5+hydroxytryptamine1A+agonist+%283-Chloro-4-fluoro-phenyl%29-%5B4-fluoro-4-%5B%5B%285-methyl-pyridin-2-ylmethyl%29+-amino%5D-methyl%5Dpiperidin-1-yl%5D-methadone+%28F+13640%29+attenuates+allodynia+like+behavior+in+a+rat+model+of+trigeminal+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Continuous administration of the 5 hydroxytryptamine1A agonist (3-Chloro-4-fluoro-phenyl)-[4-fluoro-4-[[(5-methyl-pyridin-2-ylmethyl) -amino]-methyl]piperidin-1-yl]-methadone (F 13640) attenuates allodynia like behavior in a rat model of trigeminal neuropathic pain.</a> J Pharmacol Exp Ther. 306 (2), 505-514 (2003).</li>
<li>Zimmerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethical+Guidelines+for+investigations+of+experimental+pain+in+conscious+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Ethical Guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals.</a> Pain. 16, 109-110 (1983).</li>
<li>Mogil, J. S., Crager, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+should+we+be+measuring+in+behavioral+studies+of+chronic+pain+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">What should we be measuring in behavioral studies of chronic pain in animals.</a> Pain. 112 (1-2), 12-15 (2004).</li>
<li>Backonja, M. M., Stacey, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain+symptoms+relative+to+overall+pain+rating%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain symptoms relative to overall pain rating.</a> J Pain. 5 (9), 491-497 (2004).</li>
<li>Imamura, Y., Kawamoto, H., Nakanishi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+heat+hyperalgesia+in+an+experimental+trigeminal+neuropathy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of heat hyperalgesia in an experimental trigeminal neuropathy in rats.</a> Exp Brain Res. 116, 97-103 (1997).</li>
<li>Chichorro, J. G., Zampronio, A. R., Souza, G. E., Rae, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orofacial+cold+hyperalgesia+due+to+infraorbital+nerve+constriction+injury+in+rats+reversal+by+endothelin+receptor+antagonists+but+not+non+steroidal+anti+inflammatory+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Orofacial cold hyperalgesia due to infraorbital nerve constriction injury in rats reversal by endothelin receptor antagonists but not non steroidal anti inflammatory drugs.</a> Pain. 123 (1-2), 64-74 (2006).</li>
<li>Kramer, P. R., Bellinger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meal+Duration+as+a+Measure+of+Orofacial+Nociceptive+Responses+in+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Meal Duration as a Measure of Orofacial Nociceptive Responses in Rodents.</a> J Vis Exp. (83), e50745(2014).</li>
<li>Rossi, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+bilateral+trigeminal+constriction+injury+using+an+operant+facial+pain+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characterization of bilateral trigeminal constriction injury using an operant facial pain assay.</a> Neuroscience. 224, 294-306 (2012).</li>
<li>Anderson, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+Operant+Orofacial+Pain+Assessment+Device+%28OPAD%29+to+Measure+Changes+in+Nociceptive+Behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of the Operant Orofacial Pain Assessment Device (OPAD) to Measure Changes in Nociceptive Behavior.</a> J Vis Exp. (76), 50336(2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Najciekawszym aspektem modelu IoN-CCI jest to, że zapewnia on unikalną miarę spontanicznego, niewywołanego (neuropatycznego) bólu. Większość badań na zwierzętach dotyczących bólu neuropatycznego, wykorzystujących modele nerwów rdzeniowych, dotyczy wyłącznie zachowań nocyfensywnych (np. wokalizacji i reakcji wycofania), odzwierciedlających nadwrażliwość na stymulacje mechaniczne lub termiczne12. Jednak główną dolegliwością kliniczną u pacjentów jest ciągły ból, a nie hiperalgezja czy allodynia13</...

Uszkodzenie nerwów somatosensorycznych najczęściej prowadzi do utraty czucia. Nie jest zbyt dobrze zrozumiałe, dlaczego i w jaki sposób w niektórych przypadkach uszkodzenie nerwów obwodowych prowadzi do przewlekłego bólu. W rezultacie, bolesne neuropatie pozostają stanem trudnym do leczenia1 i powodują znaczne obniżenie jakości życia pacjentów2-3. Modele zwierzęce są ważnym narzędziem do badania skuteczności istniejących i nowo opracowanych leków oraz do identyfikacji mechanizmów patofizjologicznych zaangażowanych w rozwój i utrzymywanie się bólu neuropatycznego. Jednym z kluczowych wyzwań dla badań nad bólem translacyjnym jest identyfikacja i pomiar spontanicznego bólu u zwierząt (tj. objawów fizjologicznych, behawioralnych lub innych, które wskazują na obecność bólu u zwierząt, które nie są poddawane próbnym stymulacjom, które są ostro nałożone na stan podstawowy pacjenta). Ogólnym celem tej procedury jest chirurgiczne wywołanie uszkodzenia nerwu podoczodołowego u szczura, które prowadzi do rozwoju zarówno spontanicznych, jak i wywołanych zachowań nocyfencyjnych, które można wykorzystać do badania mechanizmów związanych z bólem neuropatycznym nerwu trójdzielnego i jego leczeniem.
Ukierunkowana, izolowana pielęgnacja twarzy jest unikalną miarą spontanicznego bólu neuropatycznego u szczurów. Po przewlekłym uszkodzeniu zwężonym (CCI) nerwu podoczodołowego (IoN) szczury wykazują zmiany w spontanicznym zachowaniu i w odpowiedzi na stymulację dotykową, które wskazują na uporczywy ból i allodynię mechaniczną4. Po IoN-CCI szczury wykazują zwiększoną i asymetryczną aktywność pielęgnacyjną twarzy, tj. z ruchami do mycia twarzy skierowanymi głównie na uszkodzone przez nerwy terytorium IoN. W przeciwieństwie do szkodliwej stymulacji twarzy (np. wstrzyknięcie formaliny)5, niebolesne zaburzenia czucia (tj. jednostronne przycinanie wibrysów, znieczulająca blokada nerwu podoczodołowego, stosowanie oleju mineralnego na wibrysy) nie powodowały znaczącej zmiany w zachowaniu związanym z pielęgnacją twarzy(tj. tylko bardzo krótko (tj. w pierwszych minutach po wystąpieniu) 6. Stwierdzono, że ta nieprawidłowa pielęgnacja po IoN-CCI jest behawioralną manifestacją spontanicznych, silnie awersyjnych odczuć w uszkodzonym obszarze nerwu. To zachowanie u szczurów IoN-CCI jest bardzo podobne do spontanicznego bólu obserwowanego u pacjentów. Dalsze badania zidentyfikowały istotną różnicę między zachowaniem związanym z pielęgnacją twarzy, które jest częścią bardziej ogólnego zachowania pielęgnacyjnego ciała (tj. "pielęgnacja twarzy podczas pielęgnacji ciała"), na które IoN-CCI pozostaje w dużej mierze nienaruszone, a nocyfenywną pielęgnacją twarzy, która nie jest ani poprzedzona, ani następująca po pielęgnacji ciała (tj. "izolowana pielęgnacja twarzy"), która jest znacznie zwiększona po IoN-CCI7-9. Z farmakologicznego punktu widzenia pielęgnacja twarzy podczas pielęgnacji ciała stanowi doskonały pomiar kontrolny dla niespecyficznych efektów działania leków (np. uspokojenia), które mogą upośledzać funkcje motoryczne. Ruchy kończyn przednich podczas obu rodzajów pielęgnacji twarzy są dokładnie takie same.
Po IoN-CCI, szczury wykazują również zmiany w odpowiedzi na stymulację dotykową, które wskazują na allodynię mechaniczną4, 10. W pierwszym tygodniu (tygodniach) po IoN-CCI szczury nie reagują już na łagodne lub umiarkowane bodźce dotykowe (tj. von Freya). Ta hiporeaktywność jest następnie nagle zastępowana przez skrajną nadreaktywność, dzięki której nawet bardzo słabe intensywności bodźców wywołują zachowania nocyfensywne. Początek nadreaktywności może się różnić u różnych szczurów, ale większość szczurów staje się nadreaktywna po trzech do czterech tygodniach po operacji.

<table><tbody><tr><td>Chromowy katgut</td><td>Dynek&nbsp;</td><td>CG504</td><td></td></tr><tr><td>Nembutal&nbsp; (pentobarbital)</td><td>Apteka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atropina</td><td>Maszynki do</td><td></td><td></td></tr><tr><td>strzyżenia dla małych zwierząt - Favorita II</td><td>Aesculap</td><td>GT104</td><td></td></tr><tr><td>Instrument stereotaktyczny</td><td>Stoelting</td><td>51600</td><td></td></tr><tr><td>Maść okulistyczna (lipozyowa)</td><td>Apteka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>System monitorowania homeotermicznego</td><td>Aparat Harvarda</td><td>PY8 50-7221-F</td><td></td></tr><tr><td>Aplikator bawełniany</td><td>Apteka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Precyzyjny wacik bawełniany</td><td>Qosina</td><td>10225</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop operacyjny</td><td>Kaps</td><td>SOM 62</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Dumont #5</td><td>Narzędzia do nauki</td> precyzyjnej <td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Dumont - Mikro-końcówki (#5/45)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki - końcówki</td><td>Fine Science Tools</td><td>14574-09</td><td></td></tr><tr><td>Nici poliestrowe - Mersilene (4-0)</td><td>Ethicon</td><td>R871H</td><td></td></tr><tr><td>Cyfrowa kamera wideo</td><td>Sony</td><td>HDR-CX330E</td> Zestaw estezjometru <td></td></tr><tr><td>Semmes-Weinstein Von Frey</td><td>Stoelting</td><td>58011</td><td></td></tr></tbody></table>

przewlekłe zwężenie nerwu podoczodołowego szczura (ion-cci) w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego

Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to Study Trigeminal Neuropathic Pain

Modele zwierzęce są ważnymi narzędziami do badania patofizjologii i farmakologii bólu neuropatycznego. Ten manuskrypt opisuje procedury chirurgiczne i behawioralne w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego u szczurów. Aby sprostać specyficzności zespołów bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego, nerw podoczodołowy (IoN) jest poddawany przewlekłemu uszkodzeniu zwężeniu (CCI) poprzez luźne podwiązanie nerwu. Przedstawiono tutaj podejście wewnątrzorbitalne w celu odsłonięcia i ligacji IoN w jamie orbitalnej. Po podwiązaniu IoN szczury wykazują zmiany w spontanicznym zachowaniu i w odpowiedzi na stymulację włosów von Freya, które wskazują na uporczywy ból i allodynię mechaniczną. W rozwoju zmian behawioralnych można wyróżnić dwie fazy. W pierwszym tygodniu po IoN-CCI (faza 1) szczury wykazują zwiększoną i asymetryczną aktywność pielęgnacyjną twarzy, tj. z pociągnięciami do mycia twarzy skierowanymi głównie na uszkodzone nerwy terytorium IoN. Rozróżnia się zachowanie związane z pielęgnacją twarzy, które jest częścią bardziej ogólnego zachowania związanego z pielęgnacją ciała, na które IoN-CCI pozostaje w dużej mierze nienaruszone, a pielęgnacją twarzy, która nie jest ani poprzedzona, ani następująca po pielęgnacji ciała, która jest znacznie zwiększona po IoN-CCI. W tym okresie reakcja na mechaniczną stymulację terytorium IoN jest zmniejszona. Ta hiporeaktywność zostaje nagle zastąpiona przez skrajną nadreaktywność, w wyniku której nawet bardzo słabe natężenie bodźca wywołuje zachowanie nocyfensywne (faza 2). Fenomenologiczne podobieństwa między tymi zmianami behawioralnymi a zgłaszanymi objawami bólu twarzy (tj. reakcjami na szkodliwą stymulację twarzy) sugerują obecność dysestezji/parestezji i mechanicznej allodynii na terytorium podwiązanego IoN.

Szczury z modelem IoN-CCI wykazują silny pooperacyjny wzrost czasu spędzanego na izolowanej pielęgnacji pyszczka (Rycina 1). Wzrost ten osiąga szczyt pod koniec pierwszego tygodnia po operacji, a następnie spada w kolejnych tygodniach. Większość najnowszych badań wykazała, że pielęgnacja pyszczka jest znacząco zwiększona przez okres do trzech tygodni. Zachowanie to u szczurów poddanych operacji pozorowanej pozostaje w niewielkim stopniu niezmienione.
Szczury z modelem IoN-CCI ...

Ten manuskrypt opisuje model gryzonia do badania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego. Opisane metody obejmują zabiegi chirurgiczne w celu wykonania przewlekłego zwężenia nerwu podoczodołowego szczura oraz pooperacyjne testy behawioralne w celu zmierzenia zmian w spontanicznym i wywołanym zachowaniu, które wskazują na uporczywy ból i allodynię.

Przewlekłe zwężenie nerwu podoczodołowego szczura (IoN-CCI) w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral ...

Ogólnym celem tej procedury jest badanie neuropatycznego bólu trójdzielnego u szczurów poprzez wywołanie przewlekłego uszkodzenia uciskowego nerwu podoczodołowego. Osiąga się to najpierw poprzez wykonanie cięcia w linii pośrodkowej skóry głowy i odsłonięcie nerwu podoczodołowego. Drugim krokiem jest uciśnięcie nerwu podoczodołowego poprzez założenie wokół niego dwóch luźno zawiązanych ligatur.Następnie zwierzę umieszcza się w klatce obserwacyjnej na 10 minut, a spontaniczną ból neuropatyczny ocenia się poprzez pomiar ilości izolowanego pielęgnowania pyska. Dodatkowo allodynię mechaniczną mierzy się poprzez stymulację obszaru unerwienia nerwu podoczodołowego szczura za pomocą stopniowanej serii włókien Von Frey, co ostatecznie prowadzi do zmian w zachowaniu pielęgnacyjnym i reakcji. W EPS obszary unerwienia nerwu podoczodołowego są wykorzystywane do badania leczenia neuropatycznego bólu trójdzielnego.Główną zaletą modelu nerwu podoczodołowego w porównaniu z innymi modelami, takimi jak model ligacji nerwu kulszowego lub nerwu rdzeniowego, jest fakt, że nerw podoczodołowy jest nerwem czysto czuciowym, pozbawionym komponentów ruchowych lub autonomicznych. Ponadto model ten obejmuje pom

chronic-constriction-injury-rat-s-infraorbital-nerve-ion-cci-to-study

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ze względu na prostotę zabiegu chirurgicznego oraz wyraźne efekty behawioralne, przewlekłe uciskowe uszkodzenie nerwu kulszowego jest jednym z najważniejszych modeli zwierzęcych bólu neuropatycznego. W ciągu 24 h po operacji rozwija się nadwrażliwość bólowa, którą można zmierzyć ilościowo za pomocą estezjometru von Freya (test mechaniczny) oraz urządzenia do pomiaru analgesii podeszwowej (test termiczny).

Przewlekłe uciskowe uszkodzenie nerwu kulszowego i badanie nadwrażliwości bólowej u szczurów

Ten film pokazuje indukcję bólu neuropatycznego ustno-twarzowego w modelu szczurzym poprzez podwiązanie nerwu podoczodołowego. Powoduje to uszkodzenie nerwów i stan zapalny, powodując nieprawidłową sygnalizację bólu i naśladując przewlekłe stany bólowe, które można wykorzystać do badania testu bólu ustno-twarzowego.

Wywoływanie bólu neuropatycznego ustno-twarzowego w modelu szczurzym za pomocą podwiązania nerwów podoczodołowych

Źródło: Deseure, K.,  i wsp. Przewlekłe uszkodzenie zwężenia nerwu podoczodołowego szczura (IoN-CCI) w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego. J. Vis. Exp. (2015). Ten film pokazuje metodę wywoływania bólu neuropatycznego w modelu szczurzym poprzez zwężenie nerwu podoczodołowego. Po odsłonięciu nerwu podoczodołowego i zawiązaniu ligatur w celu jego zwężenia, odpowiedź immunologiczna w miejscu urazu zwiększa pobudliwość sąsiednich neuronów, które przekazują sygnały bólowe do...

Indukcja bólu neuropatycznego w modelu szczurzym poprzez zwężenie nerwu podoczodołowego

Dostarczony jest tutaj protokół, który szczegółowo opisuje kroki prowadzące do stworzenia zwierzęcego modelu przewlekłego bólu po niedokrwieniu (CPIP). Jest to dobrze rozpoznawalny model naśladujący ludzki złożony zespół bólu regionalnego typu I. Dalej oceniane są nadwrażliwości mechaniczne i termiczne, a także zachowania nocyfensywne wywołane kapsaicyną obserwowane w modelu szczurzym CPIP.

Model przewlekłego bólu po niedokrwieniu złożonego zespołu bólu regionalnego typu I u szczurów

Ten protokół opisuje ocenę mechanicznej nadwrażliwości w modelu szczura neuropatycznego bólu ustno-twarzowego przy użyciu instrumentalnego urządzenia do oceny bólu ustno-twarzowego.

Ocena nadwrażliwości mechanicznej wywołanej uszkodzeniem nerwów u szczurów za pomocą operacyjnego testu bólu ustno-twarzowego

Genetycznie kodowane wskaźniki wapnia (GECI) umożliwiają solidną analizę na poziomie populacji sygnalizacji neuronów czuciowych. W tym miejscu opracowaliśmy nowatorskie podejście, które pozwala na wizualizację in vivo GECI aktywności neuronów zwojów nerwu trójdzielnego szczurów.

In-vivo (in vivo) Obrazowanie wapnia neuronów czuciowych w zwoju trójdzielnym szczura

Przewlekłe uszkodzenie zwężenia dystalnego nerwu podoczodołowego u myszy wywołuje zmiany w spontanicznym zachowaniu (zwiększona aktywność pielęgnacji twarzy) i zachowaniu nocyfensyjnym w odpowiedzi na stymulację dotykową (nadreaktywność na stymulację włosów von Freya), które są oznakami trwającego bólu i allodynii oraz służy jako model dla trójdzielnego bólu neuropatycznego.

Przewlekłe uszkodzenie zwężenia dystalnego nerwu podoczodołowego (DIoN-CCI) u myszy w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego

W niniejszym filmie zaprezentowano model ortotopowego przeszczepu aorty jako prosty model do badania rozwoju waskulopatii przeszczepu (TVP) u szczurów. <br...

Ortotopowy przeszczep aorty: model szczurzy do badania rozwoju przewlekłej waskulopatii

Celem jest przedstawienie nowej metody, stymulacji elektrycznej kontroli oddechu (BreEStim) do leczenia bólu neuropatycznego i spastyczności.

Stymulacja elektryczna sterowana oddychaniem (BreEStim) w leczeniu bólu neuropatycznego i spastyczności

Około 3-8 milionów ludzi w Stanach Zjednoczonych cierpi na śródmiąższowe zapalenie pęcherza moczowego/zespół bólu pęcherza moczowego (IC/BPS), wyniszczający stan charakteryzujący się częściowo bólem miednicy. W celu zbadania udziału układu nerwowego w tym stanie, stosuje się fizjologiczny model bólu pęcherza moczowego u myszy i szczurów.

Wzdęcie pęcherza moczowego wywołało reakcje trzewnomotoryczne jako model bólu pęcherza moczowego u myszy

Poznaj model przewlekłego zwężenia nerwu podoczodołowego u szczura do badania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego. Metoda obejmuje ocenę zachowań bólowych i alodynii mechanicznej.

Przewlekłe zwężenie nerwu podoczodołowego szczura (IoN-CCI) w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego

Przeglądaj więcej filmów