Name: Sieciowanie twardówki za pomocą ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego-A w celu zapobiegania krótkowzroczności osiowej w modelu królika (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: Poznaj technikę sieciowania twardówki za pomocą ryboﬂawiny i promieniowania UVA w modelu królika. Ta metoda pozwala badać wpływ na wydłużenie osiowe oka i rozwijać strategie leczenia krótkowzroczności.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy są wdzięczni Pani Dalii Sela i Panu Emi Sharon za ich profesjonalną i doskonałą pracę techniczną w laboratorium.

Zwierzęta były traktowane zgodnie z rezolucją ARVO w sprawie wykorzystywania zwierząt w badaniach. Protokół badania został zatwierdzony przez instytucjonalny Komitet ds. Badań nad Zwierzętami Laboratoryjnymi (nr zatwierdzenia 022-4598-2; 021211).
1. Przygotowanie do operacji #1
<ol>
	<li>Zważ i znieczul 13-dniowego białego królika nowozelandzkiego za pomocą domięśniowego wstrzyknięcia chlorowodorku ketaminy 100 mg/ml (100 mg/kg) i chlorowodorku ksylazyny 25 mg/ml (12,5 mg/kg). Dawki te są stosowane ze względu na długość zabiegu chirurgicznego. Zapewnij odpowiedni poziom znieczulenia poprzez brak odruchu bólowego.</li>
	<li>Za pomocą sterylnego bawełnianego wacika nałóż niewielką ilość maści okulistycznej na nieoperowane oko, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Podczas operacji nałóż 0,9% kropli soli fizjologicznej na operowaną rogówkę oka, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.</li>
	<li>Wykonaj trzy pomiary długości osiowej w każdym oku po znieczuleniu miejscowym (chlorowodorek oksybuprokainy 0,4%) za pomocą ultrasonograficznego skanera A, a następnie uśrednij pomiary. Przyłóż sondę prostopadle do centralnej rogówki.</li>
</ol>
2. Chirurgia #1 - Etap przed sieciowaniem
<ol>
	<li>Używając chirurgicznych kleszczyków okulistycznych i nożyczek pod okulistycznym mikroskopem operacyjnym, wykonaj 360° peritomię spojówek za pomocą chirurgicznych kleszczy okulistycznych i nożyczek.</li>
	<li>Za pomocą kleszczy kątowych lub haczyka do mięśni zidentyfikuj cztery mięśnie proste zewnątrzgałkowe i odizoluj je za pomocą plecionych jedwabnych szwów nieigłowych 2-0. 
	UWAGA: Jedwabne szwy pomogą w przesuwaniu kuli ziemskiej w pożądanym kierunku. Gałka oczna jest podzielona na ćwiartki między czterema mięśniami prostymi (cztery ćwiartki).
	<ol>
		<li>Zaznacz markerem skóry dwie strefy w każdym kwadrancie, jedną na twardówce równikowej i jedną na tylnej twardówce. Są to strefy napromieniowania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotować strzykawkę o pojemności od 3 ml do 5 ml zawierającą 0,1% ryboflawino-5-fosforanu wolnego od dekstranu. Podłączyć strzykawkę do kaniuli łzowej 26 G lub hydrodelineatora stożkowego 25 G.</li>
	<li>Przygotuj urządzenie do naświetlania, które zawiera źródło światła UV A (370 nm) podłączone do skośnego, wykonanego na zamówienie światłowodu. Po pomiarze mocy energetycznej i kalibracji (patrz UWAGA poniżej), ustaw urządzenie na 57 mW/cm². 
	UWAGA: Kalibracja została przeprowadzona komercyjnie przez producenta. Metoda ta zapewnia całkowitą dawkę światła UVA wynoszącą 57 J/cm². (57 mW/cm2 na 0,2cm2 to 11,4 mW/0,2cm2 przy użyciu 11,4 mW/0,2 cm2 przez 200 sekund to skumulowane obciążenie 2,2 J na 0,2cm2 plamki)</li>
</ol>
3. Chirurgia #1 – Sieciowanie
<ol>
	<li>Poruszaj gałką oczną, pociągając jedwabne szwy w kierunku przeciwnym do wybranego kwadrantu, który ma być leczony (np. Podciągnij się i nosowy podczas leczenia dolnego kwadrantu skroniowego). Wykonaj ruch gałki ocznej za pomocą plecionego jedwabnego szwu bezigłowego 2-0, który izoluje każdy mięsień prosty</li>.
	<li>Roztwór fotouczulacza zawierający 0,1% ryboflawiny-5-fosforanu niezawierający dekstranu nanieść na strefę napromieniania na 20 sekund przed rozpoczęciem napromieniania.</li>
	<li>Naświetlić strefę napromieniania za pomocą specjalnie wykonanego światłowodu przez okres naświetlania wynoszący 200 sekund. Zmierz powierzchnię każdej strefy jako 0,2 cm² o promieniu 4 mm.</li>
	<li>Roztwór fotouczulacza zawierający 0,1% niezawierający dekstranu ryboflawiny-5-fosforanu nanosić na strefę napromieniania co 20 sekund podczas 200-sekundowego okresu napromieniania. 
	UWAGA: Napromienianie i upuszczenie ryboflawiny należy przeprowadzić jednocześnie przez dwóch chirurgów.</li>
	<li>Powtórz kroki 3.1-3.4 dla każdego z czterech kwadrantów gałki ocznej.</li>
</ol>
4. Operacja # 1 - Krok po linkowaniu
<ol>
	<li>Ogol sierść wokół oka. Przytnij brzegi powieki za pomocą chirurgicznych nożyczek okulistycznych, a następnie delikatnie zszyj górne i dolne powieki za pomocą 4-0 plecionego jedwabiu w kolorze kości słoniowej - 3/8 koła odwrotne cięcie - 13 mm długości igły C-3 (tarsorrhaphy). Pod koniec zabiegu nałóż niewielką ilość maści okulistycznej na brzeg powieki (chloramfenikol 5%).</li>
</ol>
5. Chirurgia #1 - Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Podczas rekonwalescencji zwierzęta należy trzymać pod lampą grzewczą. Nie pozostawiaj zwierzęcia bez opieki, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać pozycję leżącą na mostku.</li>
	<li>Umieść zwierzę w czystej klatce z nową ściółką, aż w pełni wyzdrowieje. Po wyzdrowieniu zwierzę zostanie zwrócone do pomieszczenia dla zwierząt. Zwróć zwierzę matce tylko wtedy, gdy nie śpi. </li>
	<li>W ciągu pierwszych 48 godzin należy zbadać zwierzęta pod kątem ogólnego stanu i objawów choroby lub infekcji. Podać analgezję zgodnie z punktem 1. W razie potrzeby podać środek przeciwbólowy, jeśli zaobserwuje się zmianę w zachowaniu królika. (Metamizol krople 50 mg/kg mc. co 6 godzin).</li>
</ol>
6. Chirurgia #2
<ol>
	<li>Pięćdziesiąt pięć dni po zabiegu #1 zważ i znieczul królika za pomocą domięśniowego wstrzyknięcia chlorowodorku ketaminy 100 mg/ml (100 mg/kg) i chlorowodorku ksylazyny 25 mg/ml (12,5 mg/kg).</li>
	<li>Za pomocą chirurgicznych nożyczek okulistycznych pod okulistycznym mikroskopem operacyjnym usuń stęp. Wykonaj trzy pomiary długości osiowej na każdym oku po znieczuleniu miejscowym (chlorowodorek oksybuprokainy 0,4%) za pomocą ultrasonograficznego skanera A, a następnie uśrednij pomiary. Przyłóż sondę prostopadle do centralnej rogówki.</li>
	<li>Poddać króliki eutanazji dootrzewnowym fenobarbitalem sodu (200 mg/1,5 kg masy ciała).</li>
</ol>

<ol><li>McBrien, N. A., Gentle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+sclera+in+the+development+and+pathological+complications+of+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Role of the sclera in the development and pathological complications of myopia.</a> Prog. Retin. Eye Res. 22, 307-338 (2003).</li>
<li>Saw, S. M., Gazzard, G., Au Eong, K. -G., Tan, D. T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myopia%3A+attempts+to+arrest+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Myopia: attempts to arrest progression.</a> Br. J. Ophthalmol. 86, 1306-1311 (2002).</li>
<li>Bullimore, M. A., Jones, L. A., Moeschberger, M. L., Zadnik, K., Payor, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+retrospective+study+of+myopia+progression+in+adult+contact+lens+wearers%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A retrospective study of myopia progression in adult contact lens wearers.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 43, 2110-2113 (2002).</li>
<li>Rose, K., Smith, W. E., Morgan, I., Mitchell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+increasing+prevalence+of+myopia%3A+implications+for+Australia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The increasing prevalence of myopia: implications for Australia.</a> Clin. Exp. Ophthalmol. 29, 116-120 (2001).</li>
<li>Saw, S. M., Gazzard, G., Shih-Yen, E. C., Chua, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myopia+and+associated+pathological+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal.+Physiol.+Opt%22%5BJournal%5D)">Myopia and associated pathological complications.</a> Ophthal. Physiol. Opt. 25, 381-391 (2005).</li>
<li>Tano, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+myopia+-+where+are+we+now%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Pathologic myopia - where are we now.</a> Am. J. Ophthalmol. 134, 645-660 (2002).</li>
<li>Greene, P. R., Guyton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+rhesus+lid-suture+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Time course of rhesus lid-suture myopia.</a> Exp. Eye Res. 42, 529-534 (1986).</li>
<li>McBrien, N. A., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+experimental+myopia+and+ocular+component+dimensions+in+monocularly+lid-sutured+tree+shrews+%28Tupaia+belangeri%29%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">The development of experimental myopia and ocular component dimensions in monocularly lid-sutured tree shrews (Tupaia belangeri).</a> Vision Res. 32, 843-852 (1992).</li>
<li>McKanna, J. A., Casagrande, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+lens+development+in+lid-suture+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced lens development in lid-suture myopia.</a> Exp. Eye Res. 26, 715-723 (1978).</li>
<li>Shapiro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+visual+deprivation+and+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Doc.+Ophthalmol.+Proc.+Ser%22%5BJournal%5D)">Experimental visual deprivation and myopia.</a> Doc. Ophthalmol. Proc. Ser. 28, 193-195 (1981).</li>
<li>Wiesel, T. N., Raviola, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+axial+length+of+the+macaque+monkey+eye+after+corneal+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Increase in axial length of the macaque monkey eye after corneal opacification.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 18, 1232-1236 (1979).</li>
<li>Weiss, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+high+myopia%3A+optical+components%2C+associated+factors+and+visual+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Unilateral high myopia: optical components, associated factors and visual outcomes.</a> Br J Ophthalmol. 87, 1025-1031 (2003).</li>
<li>Mechanic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosslinking+of+collagen+in+a+heritable+disorder+of+connective+tissue%3A+Ehlers-Danlos+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Com%22%5BJournal%5D)">Crosslinking of collagen in a heritable disorder of connective tissue: Ehlers-Danlos syndrome.</a> Biochem. Biophys. Res. Com. 47, 267-272 (1972).</li>
<li>Curtin, B. J., Iwamoto, T., Renaldo, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+and+staphylomatous+sclera+of+high+myopia.+An+electron+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Normal and staphylomatous sclera of high myopia. An electron microscopic study.</a> Arch. Ophthalmol. 97, 912-915 (1979).</li>
<li>Liu, K. R., Chen, M. S., Ko, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopic+studies+of+the+scleral+collagen+fibre+in+excessively+high+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Formosan+Med.+Assoc%22%5BJournal%5D)">Electron microscopic studies of the scleral collagen fibre in excessively high myopia.</a> J. Formosan Med. Assoc. 85, 1032-1038 (1986).</li>
<li>Funata, M., Tokoro, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scleral+change+in+experimentally+myopic+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Scleral change in experimentally myopic monkeys.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 228, 174-179 (1990).</li>
<li>McBrien, N. A., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+collagen+cross-linking+increases+form+deprivation+myopia+in+tree+shrew%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Prevention of collagen cross-linking increases form deprivation myopia in tree shrew.</a> Exp. Eye Res. 59, 475-486 (1994).</li>
<li>Iomdina, E. N., Daragan, V. A., Ilyina, E. E. Certain biomechanical properties and cross linking of the scleral shell of the eye in progressive myopia. Proceedings of XIVth Congress on Biomechanics. Paris: International Society of Biomechanics. , 616-617 (1993).</li>
<li>Wollensak, G., Spörl, E., Seiler, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Riboflavin+%2F+ultraviolet-A-induced+collagen+crosslinking+for+the+treatment+of+keratoconus%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Riboflavin / ultraviolet-A-induced collagen crosslinking for the treatment of keratoconus.</a> Am. J. Ophthalmol. 135, 620-627 (2003).</li>
<li>Wollensak, G., Spörl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagencrosslinking+of+human+and+porcine+sclera%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cataract+Refract.+Surg%22%5BJournal%5D)">Collagencrosslinking of human and porcine sclera.</a> J. Cataract Refract. Surg. 30, 689-695 (2004).</li>
<li>Wollensak, G., Iomdina, E., Dittert, D. -D., Salamatina, O., Stoltenburg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-linking+of+scleral+collagen+in+the+rabbit+using+riboflavin+and+UVA%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Cross-linking of scleral collagen in the rabbit using riboflavin and UVA.</a> Acta Ophthalmol. Scand. 83, 477-482 (2005).</li>
<li>Wollensak, G., Iomdina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+biomechanical+properties+of+rabbit+sclera+after+collagen+crosslinking+using+riboflavin+and+ultraviolet+%28UVA%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Long-term biomechanical properties of rabbit sclera after collagen crosslinking using riboflavin and ultraviolet (UVA).</a> Acta Ophthalmol. 87, 193-198 (2009).</li>
<li>Wildsoet, C. F., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+controlling+myopia+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Optom.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Toward controlling myopia progression.</a> Optom. Vis. Sci. 76, 341-342 (1999).</li>
<li>Avetisov, E. S., Tarutta, E. P., Iomdina, E. N., Vinetskaya, M. I., Andreyeva, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsurgical+and+surgical+methods+of+sclera+reinforcement+in+progressive+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Nonsurgical and surgical methods of sclera reinforcement in progressive myopia.</a> Acta Ophthalmol. Scand. 75, 618-623 (1997).</li>
<li>Thompson, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+sclera+reinforcement+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A simplified sclera reinforcement technique.</a> Am. J. Ophthalmol. 86, 782-790 (1978).</li>
<li>Whitmore, W. G., Curtin, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scleral+reinforcement%3A+two+case+reports%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Surg%22%5BJournal%5D)">Scleral reinforcement: two case reports.</a> Ophthalmic Surg. 18, 503-505 (1987).</li>
<li>Dotan, A., Kremer, I., Livnat, T., Zigler, A., Weinberger, D., Bourla, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scleral+cross-linking+using+riboflavin+and+ultraviolet-A+radiation+for+prevention+of+progressive+myopia+in+a+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Scleral cross-linking using riboflavin and ultraviolet-A radiation for prevention of progressive myopia in a rabbit model.</a> Exp Eye Res. 127, 190-195 (2014).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Przedstawiamy pierwsze badanie in vivo dotyczące zapobiegania krótkowzroczności osiowej w modelu królika z wykorzystaniem technologii sieciowania ryboflawiną i promieniowaniem UVA. Chociaż w tego typu badaniach można wykorzystać różne zwierzęta laboratoryjne, wybraliśmy króliki głównie ze względu na wielkość oczu i konieczność wykonania sieciowania na powierzchni twardówki.
Stwierdziliśmy, że odsłonięcie twardówki królika oraz zszycie powiek górnych i dolnych jest trudnymi procedurami...

Krótkowzroczność jest najczęstszym z zaburzeń refrakcji. Częstość występowania krótkowzroczności w USA i Europie wynosi około 30%, a w krajach azjatyckich dotyka do 60% populacji ogólnej1,2. Progresja krótkowzroczności występuje do 50% krótkowzroczności, zwykle z szybkością około -0,5 dioptrii w odstępie dwuletnim3. Koszty zdrowotne związane z krótkowzrocznością są znaczne, w tym wydatki na okulary, soczewki kontaktowe i chirurgię refrakcyjną oraz koszty związane ze zwiększonym ryzykiem zdrowotnym jaskry, zaćmy, odwarstwienia siatkówki i upośledzenia wzroku4-6.
W badaniach na zwierzętach krótkowzroczność, zmniejszenie wzroku jest indukowane przez zszyciepowiek 7-10, umieszczenie okludera w niewielkiej odległości od oka i tatuaż rogówki11. Jednak, aby sztuczna krótkowzroczność mogła wystąpić w tych badaniach, proces okluzji musi być przeprowadzony na bardzo młodych zwierzętach, ponieważ żadne eksperymenty z deprywacją wzroku przeprowadzone na dorosłych osobnikach nie wykazały sukcesu.
Jedną z ważnych cech ciężkiej krótkowzroczności jest patologiczna zmiana twardówki z postępującym ścieńczeniem twardówki, prawdopodobnie z powodu zaburzonego mechanizmu sprzężenia zwrotnego emmetropizacji po deprywacji wzroku12 lub z powodu jakiegoś zaburzenia metabolicznego twardówki, takiego jak w zespole Ehlersa-Danlosa13. Ostatecznie oba mechanizmy prowadzą do rozciągnięcia i ścieńczenia twardówki, siatkówki i naczyniówki z powodu nieprawidłowości strukturalnych twardówki krótkowzrocznej, takich jak zmniejszona średnica włókna kolagenowego14,15 i zaburzenia fibrylogenezy16.
Kilka badań wykazało, że upośledzone sieciowanie kolagenu jest ważnym czynnikiem w procesie osłabiania krótkowzrocznej twardówki17-18. Wollensak i wsp. 19-21 indukował sieciowanie kolagenu poprzez zastosowanie fotouczulacza ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego A (UVA) (370 nm) i odnotował znaczący, 157% wzrost sztywności twardówki świń i ludzi in vitro19 oraz 465% wzrost sztywności twardówki królika in vivo (moduł Younga)20. Sieciowanie miało również długoterminowy wpływ na twardówkę królika in vivo: sztywność wzrosła o 320,4% po 3 dniach, 277,6% po 4 miesiącach i 502% po 8 miesiącach (moduł Younga)22.
Terapeutyczne próby zatrzymania postępu krótkowzroczności zostały opublikowane23-26, ale sukces tych metod jest kontrowersyjny. Do tej pory nie znaleziono skutecznych środków zapobiegania postępującej krótkowzroczności.
Etiologia krótkowzroczności jest nadal kontrowersyjna, a jej leczenie stanowi wyzwanie. Na podstawie tych ustaleń wysunięto hipotezę, że sieciowanie twardówki może służyć jako środek do leczenia progresji krótkowzroczności opartej na twardówce. Celem pracy jest zbadanie wpływu sieciowania kolagenu twardówki na rozwój krótkowzroczności osiowej wywołanej okluzją osi widzenia.

<table><tbody><tr><td>2-0 Jedwabne szwy plecione bezigłowe&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>W193</td><td></td></tr><tr><td>4-0 pleciony jedwab kolor kości słoniowej&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>W816</td><td></td></tr><tr><td>0,1% ryboflawino-5-fosforan bez dekstranu 1 mg:1 ml</td><td>Koncepcja dla Pharmacy Ltd</td><td>D2-5025</td><td></td></tr><tr><td>Źródło światła UV A (370 nm)&nbsp;</td><td>O/E LAND Inc</td><td>NCSU033B</td><td></td></tr><tr><td>Skośny światłowód wykonany na zamówienie&nbsp;</td><td>Prizmatix Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kaniula łzowa 26 G&nbsp;</td><td>Beaver-visitec International Sp. z o.o.&nbsp;</td><td></td><td></td>REF581276</tr><tr><td>Hydrodelineator stożkowy 25 G [Blumenthal]&nbsp;</td><td>Beaver-visitec International Sp. z o.o.&nbsp;</td><td></td><td></td>REF585107</tr><tr><td>13-dniowe króliki</td><td>Harlan&nbsp;</td><td>1NZWR40</td><td></td></tr><tr><td>Biometr ultradźwiękowy</td><td>Allergan-Humphrey</td><td>820-519</td><td></td></tr><tr><td>Marker skóry</td><td>Devon</td><td>4237101664X</td><td></td></tr></tbody></table>

sieciowanie twardówki za pomocą ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego-a w celu zapobiegania krótkowzroczności osiowej w modelu królika

Scleral Cross-linking Using Riboflavin and Ultraviolet-A Radiation for Prevention of Axial Myopia in a Rabbit Model

Osoby z krótkowzrocznością, szczególnie te z ciężką krótkowzrocznością, są narażone na wyższe niż normalnie ryzyko zaćmy, jaskry, odwarstwienia siatkówki i nieprawidłowości naczyniówkowo-siatkówkowych. Ponadto patologiczna krótkowzroczność jest częstą nieodwracalną przyczyną upośledzenia wzroku i ślepoty1-3. Nasze badanie pokazuje wpływ sieciowania twardówki za pomocą ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego-A na rozwój krótkowzroczności osiowej w modelu króliczym. Długość osiową gałki ocznej zmierzono za pomocą ultrasonografii A-scan u białych królików nowozelandzkich w wieku 13 dni (samca i samicy). Następnie oko poddano peritomii spojówek 360° z sieciowaniem twardówki, a następnie tarsorrhaphy. Wydłużenie osiowe wywołano u 13-dniowych królików nowozelandzkich poprzez zszycie ich prawych powiek (tarsorrhaphy). Oczy podzielono na ćwiartki, a każda ćwiartka miała dwie strefy napromieniowania twardówki, każda o powierzchni 0,2 cm² i promieniu 4 mm. Sieciowanie przeprowadzono poprzez upuszczenie 0,1% ryboflawiny-5-fosforanu wolnego od dekstranu na strefy napromieniania 20 sekund przed napromieniowaniem ultrafioletowym-A i co 20 sekund w czasie napromieniania 200 sekund. Promieniowanie UVA (370 nm) zastosowano prostopadle do twardówki o wartości 57 mW/cm² (całkowita dawka światła UVA, 57 J/cm²). Tarsorrhaphie usunięto w 55 dniu, a następnie powtórzono pomiary długości osiowej. Badanie to pokazuje, że sieciowanie twardówki ryboflawiną i promieniowaniem ultrafioletowym-A skutecznie zapobiega wydłużeniu osiowemu wywołanemu okluzją w modelu królika.

Rysunki 1 i 2 przedstawiają graficznie pomiary długości osiowej w dwóch grupach. Króliki z grupy 1 zostały poddane sieciowaniu twardówki i tarsorafii prawego oka, podczas gdy lewe oko nie było operowane (Rysunek 1). Króliki z grupy 2 zostały poddane jedynie peritomii i tarsorafii prawego oka, podczas gdy lewe oko nie było operowane (Rysunek 2).
W grupie 1, podda...

Pokazujemy wpływ sieciowania twardówki z ryboflawiną i UVA na osiowo wydłużone oko królika. Wydłużenie osiowe wywołano u 13-dniowych królików nowozelandzkich (samca i samicy) poprzez zszycie ich prawych powiek (tarsorrhaphy).

Sieciowanie twardówki za pomocą ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego-A w celu zapobiegania krótkowzroczności osiowej w modelu królika

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal ...

Ogólnym celem tej procedury jest obserwacja efektów sieciowania twardówki przy użyciu ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego A w celu wywołania krótkowzroczności osiowej w modelu króliczym. Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie sieciowania twardówki, takie jak sposób kierowania promieniowania UVA na określone obszary twardówki. Główną zaletą tej techniki jest wykorzystanie promieniowania UVA, światłowodów oraz interwencji chirurgicznej w celu dotarcia do wybranych obszarów twardówki.W procedurze chirurgicznej asystować będzie Orly Gal-Or, rezydent z Oddziału Okulistyki w Rabin Medical Center. Przed rozpoczęciem zabiegu należy potwierdzić brak odruchu bólowego, a następnie za pomocą sterylnego patyczka nasączonego watą nanieść niewielką ilość maści okulistycznej na oko nieoperowane. Następnie należy zastosować znieczulenie miejscowe w obu oczach.Ustawiając głowicę prostopadle do centralnej części rogówki, należy przeprowadzić trzy pomiary długości osiowej oka za pomocą skanera A do ultrasonografii. Następnie, pod mikroskopem operacyjnym okulistycznym, należy użyć chirurgicznych pęset i nożyczek okulistycznych do wykonania obwodowej peritomii spojówki o kącie 360 stopni. Za pomocą haczyka do mięśni należy zlokalizować cztery proste mięśnie gałki ocznej.Następnie odizoluj mięśnie za pomocą dwóch nieigłowych szwów z jedwabiu plecionego o rozmiarze zero, aby utworzyć cztery kwadranty. Za pomocą markera do skóry wyznacz jedną strefę naświetlania na równikowej części twardówki oraz jedną strefę naświetlania na tylnej części twardówki w każdym kwadrancie. Następnie napełnij strzykawkę o pojemności od 3 do 5 ml 0,1% roztworem fotouczulacza ryboflawiny 5-fosforanu bez dekstranu i podłącz kaniulę łzową o rozmiarze 26G.Następnie włącz urządzenie do naświetlania z źródłem światła UVA o długości fali 370 nanometrów, podłączone do wykonanego na zamówienie światłowodu z ukośnym zakończeniem, i ustaw moc urządzenia na 57 miliwatów na centymetr kwadratowy. Na dwadzieścia sekund przed rozpoczęciem naświetlania przesuń gałkę oczną, pociągając za jedwabne szwy w kierunku przeciwnym do ćwiartki, która ma zostać poddana zabiegowi, i nanieś roztwór fotouczulacz na strefę naświetlania. Następnie, używając wykonanego na zamówienie światłowodu, naświetlaj wybrany obszar przez 200 sekund, aplikując roztwór fotouczulacz na tę strefę co 20 sekund.Po napromieniowaniu wszystkich czterech kwadrantów, przytnąć brzegi powiek nożyczkami. Następnie, użyć czterech nici z plecionego jedwabiu w kolorze kości słoniowej o rozmiarze zero, aby delikatnie zaszyć górne i dolne powieki. Nanieść niewielką ilość maści okulistycznej na brzegi powiek i umieścić królika pod lampą grzewczą.Gdy zwierzę całkowicie powróci do zdrowia, umieść je w czystej klatce z nową ściółką. Pięćdziesiąt pięć dni po usieciowaniu, użyj chirurgicznych nożyczek okulistycznych, aby usunąć tarsorafię. Następnie wykonaj trzy pomiary długości osiowej każdego oka, tak jak przed chwilą zaprezentowano.U zwierząt, u których wykonano sieciowanie twardówki oraz tarsorrafię, średnia długość osiowa zmniejszyła się po zaszyciu powiek w porównaniu z okiem nieoperowanym. Natomiast u zwierząt, u których wykonano jedynie peritomię i tarsorrafię, średnia długość osiowa w oku badanym wzrosła. Rzeczywiście, w oczach poddanych sieciowaniu twardówki odnotowano ogólnie mniejszy wzrost długości osiowej w porównaniu z oczami, w których wykonano wyłącznie peritomię.Różnica między grupami w średniej długości osiowej oczu, które nie zostały poddane operacji, nie była istotna statystycznie. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać o wcześniejszym przygotowaniu całego niezbędnego sprzętu. Po opracowaniu technika ta utorowała drogę badaczom w dziedzinie krótkowzroczności, którzy analizowali wpływ ryboflawiny i promieniowania UVA na siatkówkę, naczyniówkę i twardówkę.Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dobrą wiedzę na temat wizualizacji konkretnych obszarów twardówki oraz stosowania ukierunkowanych zabiegów naświetlania promieniowaniem UVA. Należy pamiętać, że przeprowadzanie operacji na tak małych oczach z delikatnymi mięśniami prostymi może być niezwykle trudne, a proces nauki dążący do perfekcji w opanowaniu tej techniki wymaga czasu i cierpliwości. Znaczenie tej metody wykracza poza sam zabieg, przyczyniając się do zapobiegania powikłaniom wynikającym z krótkowzroczności patologicznej.Choć metoda ta może dostarczyć wiedzy na temat zapobiegania krótkowzroczności osiowej, może ona zostać zastosowana również w innych stanach, takich jak cienkie obszary twardówki.

scleral-cross-linking-using-riboflavin-ultraviolet-radiation-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Sieciowanie kolagenu rogówki (CXL) jest obecnie jedynym dostępnym leczeniem zachowawczym, które hamuje postęp stożka rogówki poprzez poprawę sztywności biomechanicznej zrębu rogówki. Celem pracy jest zwrócenie uwagi na metody działania trzech różnych protokołów CXL: konwencjonalnego CXL (C-CXL), przyspieszonego CXL (A-CXL) i jonoforezy CXL (I-CXL).

Trzy różne protokoły sieciowania kolagenu rogówkowego w stożku rogówki: konwencjonalny, przyspieszony i jonoforeza

Strategie wymiany nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) i terapia oparta na genach są brane pod uwagę w przypadku kilku stanów zwyrodnieniowych siatkówki. Do translacji klinicznej wymagane są modele zwierzęce z dużymi oczami do badania technik chirurgicznych stosowanych u pacjentów. W tym miejscu przedstawiamy model królika do chirurgii podsiatkówkowej ukierunkowany na przeszczep RPE, który jest wszechstronny i opłacalny.

Protokół krok po kroku dla chirurgii podsiatkówkowej u królików

Ten protokół opisuje techniki oceny chemicznego sieciowania twardówki królika za pomocą obrazowania drugiej generacji harmonicznej i różnicowa kalorymetria skaningowa.

Sygnały generacji drugiej harmonicznej w twardówce królika jako narzędzie do oceny terapeutycznego sieciowania tkanek (TXL) w przypadku krótkowzroczności

Komórki nabłonka barwnikowego siatkówki mogłyby służyć jako terapia zastępcza dla zaawansowanej formy suchego, związanego z wiekiem zwyrodnienia plamki żółtej. Protokół ten opisuje generowanie wielkookiego modelu atrofii geograficznej i podsiatkówkowy przeszczep ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego siatkówki pochodzących z embrionalnych komórek macierzystych do tego modelu choroby.

Przeszczep podsiatkówkowy ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego pochodzących z komórek macierzystych siatkówki do wielkookiego modelu atrofii geograficznej

Ten manuskrypt opisuje nowatorską procedurę konfiguracji i obsługi mikroskopii fotoakustycznej i optycznej koherentnej tomografii dual-modality do nieinwazyjnego, bezznacznikowego obrazowania kosmówkowo-siatkówkowego większych zwierząt, takich jak króliki.

Nowatorska mikroskopia fotoakustyczna i optyczna tomografia koherentna Obrazowanie naczyniówkowe siatkówki dwumodalnej w żywych oczach królika

Ten protokół opisuje niezawodną metodę uzyskiwania wysokiej jakości kriosekcji całych oczu królika. Szczegółowo opisuje procedury sekcji, fiksacji, osadzania i cięcia oczu królika, które można łatwo dostosować do użycia w dowolnym badaniu wykorzystującym immunohistochemię w większych oczach.

Uzyskanie wysokiej jakości kriosekcji całego oka królika

Ten artykuł przedstawia szczegółowe instrukcje dotyczące wykonywania zmiażdżenia nerwu wzrokowego w modelu królika przy użyciu standardowych technik chirurgii okulistycznej.

Chirurgiczne podejście do zmiażdżenia nerwu wzrokowego w modelu królika

Przedstawiono protokół powtarzalny do przygotowania, wzbogacania i zastosowania in situ żelu żelatynowo-ryboflawinowego krzyżowalnego światłem niebieskim do naprawy ran stromalnych rogówki u królików, w tym kroki proceduralne dotyczące postępowania chirurgicznego, częściowej tarzoraphii i opieki pooperacyjnej.

Produkcja i chirurgiczne zastosowanie wzbogaconych żeli żelatynowych przekształconych światłem i riboflawiny do naprawy ran rogówki u królików

Obrazowanie bioluminescencyjne aktywności czynnika indukowanego hipoksją-1α jest stosowane do monitorowania rozwoju hipoksji guza wewnątrzczaszkowego w mysim modelu przerzutów raka piersi do mózgu.

In vivo obrazowanie bioluminescencyjne dynamiki niedotlenienia guza w przerzutach raka piersi do mózgu w modelu mysim

Opisujemy zintegrowaną metodę precyzyjnej implantacji stereotaktycznej ludzkich komórek wielopostaciowego glejaka do mózgów myszy nago oraz następującego po niej seryjnego obrazowania in vivo w celu monitorowania wzrostu i odpowiedzi na leczenie powstałych ksenograftów.

Stereotaktyczna implantacja wewnątrzczaszkowa i obrazowanie bioluminescencyjne in vivo ksenoprzeszczepów guzów w mysim modelu glioblastoma multiforme

Poznaj technikę sieciowania twardówki za pomocą ryboﬂawiny i promieniowania UVA w modelu królika. Ta metoda pozwala badać wpływ na wydłużenie osiowe oka i rozwijać strategie leczenia krótkowzroczności.

Sieciowanie twardówki za pomocą ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego-A w celu zapobiegania krótkowzroczności osiowej w modelu królika (Wideo) | JoVE Journal

Sieciowanie twardówki za pomocą ryboflawiny i promieniowania ultrafioletowego-A w celu zapobiegania krótkowzroczności osiowej w modelu królika

Przeglądaj więcej filmów