Długotrwałe cewnikowanie pnia limfatycznego jelit i pobieranie limfy u nowonarodzonych świń

Cewnikowanie limfatyczne jest ważną techniką stosowaną do badania mechanizmów związanych z metabolizmem lipidów i leków, przerzutami raka i funkcją immunologiczną, a pobieranie dużych ilości limfy z różnych modeli zwierzęcych umożliwia naukowcom badanie tych procesów. Film szczegółowo przedstawia procedurę chirurgiczną zastosowaną do cewnikowania jelitowego pnia limfatycznego u nowonarodzonych świń przy użyciu dostępu brzusznej linii środkowej. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Alberty.

Aby uzyskać dostęp do naczynia limfatycznego, otwarto jamę brzuszną. Elektrokoagulacja na ustawieniu cięcia została wykorzystana do otwarcia warstwy mięśniowej. Założono retraktor, który utrzymywał otwartą ścianę brzucha na czas zabiegu.

Zidentyfikowano kluczowe narządy jamy brzusznej, które pomagają w lokalizacji naczynia limfatycznego. Aby zapewnić lepszy dostęp do naczyń limfatycznych, segmenty jelita cienkiego i okrężnicy są zewnętrznie wykonane na lewą stronę ciała. Naczynie limfatyczne jest oznaczone jako punkt orientacyjny, identyfikując wątrobę i prawy brzuszny odcinek żyły wrotnej.

U nowonarodzonych świń naczynia limfatyczne są delikatne i łatwo się rozrywają, dlatego wymagana jest skrupulatna sekcja za pomocą wacików i narzędzi. Oto jelitowe naczynie limfatyczne. Teraz szew jest wprowadzany pod naczyniem limfatycznym za pomocą kleszczy.

Teraz pod naczyniem limfatycznym przechodzą trzy jedwabne szwy 2-0. Najbardziej ogonowy szew służy do rozszerzenia naczynia i przymocowania cewnika do naczynia. Szwy czaszkowe służą do zabezpieczenia cewnika w naczyniu.

Małe nacięcie w naczyniu limfatycznym pozwala kleszczom rozszerzyć naczynie. Cewnik wprowadza się do naczynia. Należy to zrobić delikatnie, aby naczynie limfatyczne nie pękło.

Cewnik musi być wysunięty poza najbardziej czaszkowy szew, aby upewnić się, że jest dobrze osadzony. Trzy jedwabne szwy 2-0 mocują cewnik w naczyniu limfatycznym. Co ważne, dwa szwy czaszkowe są najpierw używane do zamocowania cewnika w naczyniu, a najbardziej ogonowy szew jest następnie używany do wiązania cewnika, zwiększając stabilność.

Ważne jest, aby upewnić się, że jest dobry przepływ limfy przed zamknięciem jamy brzusznej. Cewnik jest zewnętrznie umieszczony na lewym środkowym boku świni. Duże kleszcze służą do przeciągania cewnika z jamy brzusznej na zewnętrzną powierzchnię boku świni.

Warstwy mięśniowe są zamykane szwem vicryl 2-0 na stożkowej igle w prostym przerywanym wzorze szwów. Skórę zamyka się szwem vicryl 2-0 na igle tnącej w biegnącym wzorze szwów podskórnych. Po nacięciu wyjściowym cewnik przechodzi przez skórę i jest zamykany nylonowym szwem 2-0 na igle tnącej w układzie szwu torebkowo-sznurkowego.

To zamknięcie pomaga zapobiegać wstępowaniu infekcji do wewnątrz wzdłuż cewnika. Kurtkę zawierającą butelki do pobierania limfy umieszcza się na świni, gdy świnia jest jeszcze pod narkozą. Cewnik wprowadza się do butelki zbiorczej i zapewnia się dobry przepływ limfy przed obudzeniem świni.

Świnie dobrze wracają do zdrowia po zabiegu, a doskonały przepływ limfy jest utrzymywany przez cały czas trwania eksperymentu. W tabeli przedstawiono składniki limfy pobranej z naczynia limfatycznego. Składniki te obejmują apolipoproteinę B48, trójglicerydy i cholesterol.

Rysunek Western Blot pokazuje obecność zarówno apolipoproteiny B48, jak i niewielkich ilości apolipoproteiny B100 pochodzącej z osocza w pobranej próbce limfy. Chociaż cewnikowanie limfatyczne u młodych świń może być technicznie trudne, ponieważ naczynia limfatyczne są zarówno delikatne, jak i kruche, ten film pokazuje, że zastosowanie właściwej i starannej techniki chirurgicznej u młodych świń może zapewnić naukowcom doskonały model do pobierania limfy jelitowej.