Name: Długotrwałe cewnikowanie pnia limfatycznego jelit i pobieranie limfy u nowonarodzonych świń (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Poznaj technikę cewnikowania pnia limfatycznego jelit u nowonarodzonych świń. Metoda umożliwia pobieranie dużych ilości limfy do badań metabolizmu lipidów i leków w modelu zwierzęcym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca była częściowo wspierana przez fundusze z Alberta Livestock and Meat Agency oraz grant Natural Science and Research Council Discovery dla S. D. Proctora.

Wszystkie procedury na zwierzętach doświadczalnych opisane zarówno w filmie, jak i w manuskrypcie zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i były zgodne z wytycznymi Kanadyjskiej Rady Opieki nad Zwierzętami.
1. Znieczulenie chirurgiczne i przygotowanie chirurgiczne noworodków świń
<ol>
	<li>W wydzielonym przedpokoju należy premedykować 25 kg świń w pobliżu podstawy szyi domięśniowym koktajlem leków uspokajająco-znieczulających zawierającym: azaperon (0,3 mg/kg), chlorowodorek ketaminy (10 mg/kg), deksmedetomidynę (15 μg/kg). 
	Uwaga: Dodaj buprenorfinę (0,005-0,02 mg/kg) do koktajlu leków przed znieczuleniem, aby zwiększyć śródoperacyjną kontrolę bólu.</li>
	<li>Znieczulić świnie wdychanym gazem inhalacyjnym izofluranu (4-5% izofluranu w stężeniu 500 ml-1 000 ml/minO2) za pomocą maski na twarz. Uwidocznij struny głosowe za pomocą weterynaryjnego lunety krtaniowej (proste ostrze o długości 17-25 cm) i nałóż miejscową 10% sterylizację lidokainy na struny głosowe. Pozwól, aby spray lidokainy zetknął się ze strunami głosowymi na 30-60 sekund przed intubacją, aby zmniejszyć możliwość skurczu strun głosowych i niedrożności dróg oddechowych.</li>
	<li>Zaintubować świnie, przepuszczając rurkę dotchawiczą z mankietem (średnica wewnętrzna 5,0-7,0 mm (ID)) między strunami głosowymi i utrzymuj znieczulenie gazem izofluranem (0,5-2,0% izofluranu w stężeniu 1,000-2,000 ml/minO2) przy użyciu systemu znieczulającego do oddychania w zamkniętym obiegu przez cały czas trwania operacji. Oceń poziom znieczulenia na podstawie tonu szczęki oraz reakcji odruchowych pedału i powiek. Przeterminowany gaz znieczulający jest usuwany i odprowadzany na zewnątrz sali operacyjnej.</li>
	<li>Oczyść zewnętrzną powierzchnię ucha 2,0% roztworem do szorowania chirurgicznego z chlorheksydyną, a następnie spłucz 70% alkoholem izopropylowym. Za pomocą cewnika dożylnego 20 G należy cewnikować żyłę ucha w celu dożylnego dostarczania płynów (roztwór Ringera z mleczanami; 5-10 ml/kg/godz.) podczas operacji. Przymocuj pulsoksymetr do powierzchni błony śluzowej języka za pomocą taśmy medycznej, aby monitorować tętno i nasycenie natlenienia krwi obwodowej (SpO2).</li>
	<li>Umieść znieczuloną świnię w pozycji grzbietowej leżącej i ogol brzuszny brzuch od środkowej części klatki piersiowej doogonowo do brzusznej części łona. Oczyść ten obszar za pomocą dwóch naprzemiennych peelingów chirurgicznych z 2,0% chlorheksydyną i sterylnych płynów do mycia wodą.</li>
	<li>Przenieś znieczuloną świnię na salę operacyjną i nałóż końcowy peeling chirurgiczny z 70% płukanki alkoholem izopropylowym, pozostaw do wyschnięcia, a następnie udrapuj zwierzę.</li>
	<li>Włóż sondę temperatury doodbytniczej około 2-4 cm do odbytnicy, aby monitorować temperaturę ciała. Umieść świnie na poduszce grzewczej z recyrkulacją wody, aby utrzymać normalną temperaturę ciała (38-40 °C) podczas zabiegu chirurgicznego.</li>
	<li>Ułóż świnię czterema ręcznikami, zasłonami umieszczonymi w leżącym kwadrancie wokół brzucha. Umieść pierwszą serwetkę w poprzek xiphisternum, drugą serwetkę wzdłuż bocznej części brzucha około 5 cm z boku do linii środkowej brzucha. Umieść trzecią serwetkę w poprzek grzbietu jelita krętego miednicy, a czwartą serwetę, podobnie jak drugą serwetę (choć po przeciwnej stronie), umieszcza się wzdłuż bocznej części brzucha około 5 cm z boku do linii środkowej brzucha.</li>
	<li>Umieść dużą zasłonę stołową, z otworem umożliwiającym dostęp do pola operacyjnego, na leżących pod spodem zasłonach ręcznikowych i przykryj świnię i cały stół chirurgiczny. Ostatnia serweta to jednorazowa serweta steryfikowana umieszczona nad dużą zasłoną stołową.</li>
</ol>
2. Chirurgia jamy brzusznej i cewnikowanie jelitowego pnia limfatycznego
<ol>
	<li>Wykonaj 20-centymetrowe nacięcie skóry ostrzem skalpela, aby odsłonić leżące pod spodem mięśnie brzucha. Naciąć warstwy mięśni brzucha za pomocą elektrokoagulacji monopolarnej (ustawienie 20 watów), aby odsłonić otrzewną ciemieniową. Otwórz 20 cm liniowy odcinek otrzewnej ciemieniowej nożyczkami Metzenbauma, aby uzyskać dostęp do wnętrzności brzusznych i naczynia limfatycznego.</li>
	<li>Umieść retraktor w czaszkowej części nacięcia chirurgicznego, aby jama brzuszna była otwarta na czas trwania operacji.</li>
	<li>Zwilż wszystkie tkanki ciepłą (37 °C) sterylną solą fizjologiczną na cały czas trwania zabiegu chirurgicznego. Delikatnie podnieś duży fragment jelita, w tym okrężnicę, jelito ślepe, jelito kręte i jelito czcze z jamy brzusznej i wyprowadź go na zewnątrz do lewego boku świni, aby uzyskać dostęp do górnej części brzucha, wątroby i naczynia limfatycznego. Zabezpiecz zewnętrzne jelito na miejscu za pomocą dodatkowych zasłon na ręczniki, aby utworzyć chustę, która delikatnie podeprze jelito.</li>
	<li>Zlokalizuj naczynie limfatyczne, leży ono około 4 cm czaszkowo-przyśrodkowo od prawej żyły nerkowej, 6 cm ogonowo-przyśrodkowo-brzusznej brygadzistów kawalerów i poniżej trzewnej części prawego płata wątroby w pobliżu trzustki22,36,37. Zidentyfikuj naczynie limfatyczne jako półprzezroczystą strukturę przeciwstawioną prawemu brzusznemu segmentowi żyły wrotnej36,37.</li>
	<li>Oddziel naczynie limfatyczne od otaczającej je powięzi, delikatnie usuwając przyczepioną tkankę za pomocą aplikatorów z patyczkami higienicznymi. Gdy boczne aspekty naczynia zostaną oddzielone od otaczającej tkanki, utwórz "tunel" otwierający się pod naczyniem za pomocą cienkich, kleszczyków.</li>
	<li>Przełóż trzy jedwabne szwy 2-0 pod naczyniem limfatycznym za pomocą cienkich kleszczyków. Najpierw podwiązaj najbardziej ogonowy szew, aby zatkać, rozszerzyć i wypełnić naczynie limfą. Celowo pozostaw końce tego szwu stosunkowo długie (4 cm), aby przymocować cewnik do naczynia limfatycznego. Umieść dwa inne szwy oddalone od siebie o 1,0 cm i znajdują się w odległości około 1,0-1,5 cm czaszki od zabezpieczonego szwu ogonowego. Pozostaw te dwa szwy z "pojedynczą luźną opaską ligaturową", aby umożliwić szybsze zamocowanie cewnika w naczyniu. 
	Uwaga: Odcinek naczynia limfatycznego znajdujący się między najbardziej ogonowym szwem podwiązującym a szwem środkowym (z dwóch szwów czaszkowych) jest miejscem cewnikowania. Jeśli chodzi o materiał szwów, szew poliglaktynowy 2-0 może w razie potrzeby zastąpić szwy jedwabne 2-0.</li>
	<li>Wytnij mały otwór w naczyniu nożyczkami do tęczówki i rozszerz naczynie drobnymi kleszczami. Włóż około 1,0-1,5 cm specjalistycznej rurki cewnika (4,06 średnicy zewnętrznej (OD) X 2,31 mm ID) ze ściętym końcem do naczynia i zawiąż dwa szwy czaszkowe, aby zabezpieczyć cewnik na miejscu. Użyj długich końców szwu ogonowego, aby przymocować cewnik do naczynia.</li>
	<li>Umyj zewnętrzne jelito dużą ilością ciepłej soli fizjologicznej i delikatnie włóż je z powrotem do jamy brzusznej, zapewniając prawidłowe anatomiczne ułożenie jelita.</li>
	<li>Zewnętrznie cewnik należy wykonać na lewym środkowym boku (5-10 cm brzusznie od dołu przylędźwiowego). Wykonaj nacięcie skóry skalpelem i przełóż trokar z jamy brzusznej na powierzchnię skóry, aby stworzyć otwór do zewnętrzizacji cewnika. Użyj dużych kleszczy Kelly'ego, aby wyprowadzić cewnik na zewnątrz z jamy brzusznej przez otwór trokaru.</li>
	<li>Zamknij otrzewną ciemieniową prostym ciągłym wzorem szwów 2-0 z poliglaktyny za pomocą okrągłej (stożkowej) igły. Zamknij warstwy mięśni brzucha za pomocą prostego, przerwanego wzoru szwów za pomocą szwu poliglaktynowego 2-0 na okrągłej igle.</li>
	<li>Zamknij skórę we wzór podskórny za pomocą szwu poliglaktynowego 2-0 na igle tnącej. Przymocuj zewnętrzny cewnik do skóry za pomocą wzoru szwu ze sznurka do torebki i nylonowego szwu 2-0 na igle do cięcia.</li>
	<li>Umieść specjalistyczną kurtkę na świni, gdy jest jeszcze znieczulona, aby ułatwić jej założenie i zmniejszyć stres świni podczas rekonwalescencji.</li>
</ol>
3. Rekonwalescencja pooperacyjna i pobieranie limfy
<ol>
	<li>Na około 10 minut przed przerwaniem znieczulenia wziewnego należy podać domięśniowo bupenorfinę (0,1 mg/kg) w celu natychmiastowego znieczulenia pooperacyjnego. Kontynuuj podawanie bupenorfiny (0,1 mg/kg) co 12 godzin przez 24-48 godzin, aby utrzymać analgezję pooperacyjną.</li>
	<li>Monitoruj świnie pod kątem powikłań pooperacyjnych co 8-12 godzin przez okres 7 dni.</li>
	<li>Zebrać limfę do 500 ml polipropylenowych butelek do mycia, pokrytych kwasem etylenodiaminotetraoctowym (EDTA) i uzupełnionych antybiotykami; penicyliną (6 000 j.m.), streptomycyną (6 mg) i amfoterycyną B (3 mg) co 12 godzin przez okres 7 dni.</li>
</ol>
4. Kwantyfikacja lipoprotein ApoB48, trójglicerydów, cholesterolu i całkowitego białka pobranego z limfy
<ol>
	<li>Odwirować próbkę limfy o stężeniu 1 800 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C. Zebrać supernatant i użyć go do ilościowego oznaczania triglicerydów, cholesterolu i białka całkowitego.</li>
	<li>Podzielić supernatant na trzy próbki: próbkę nierozcieńczoną, próbkę rozcieńczoną wodą destylowaną w stosunku 1:20 i próbkę końcową rozcieńczoną wodą destylowaną w stosunku 1:100.</li>
	<li>Użyj nierozcieńczonego supernatantu do pomiaru poziomu cholesterolu za pomocą dostępnego w handlu zestawu.</li>
	<li>Próbki rozcieńczone w stosunku 1:20 i 1:100 należy wykorzystać do pomiaru poziomu trójglicerydów i białka całkowitego za pomocą dostępnego w handlu zestawu i testu kwasu bicinchoninowego i białka całkowitego.</li>
</ol>
5. Kwantyfikacja lipoproteiny ApoB48, pobranej z limfy38
<ol>
	<li>Określ stężenie lipoproteiny ApoB48 za pomocą dostosowanej immunologicznej metody Western Blotting38. Oddzielić całkowitą limfę za pomocą 3-8% elektroforezy w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS-PAGE).</li>
	<li>Przenieś oddzielone białka na błonę z polifluorku winylidenu (0,45 μm) i inkubuj je z kozim przeciwciałem poliklonalnym do ApoB (1:4,000), a następnie zwiąż je z przeciwciałem drugorzędowym anty-kozy.</li>
	<li>Określ ilościowo lipoproteinę ApoB48 za pomocą chemiluminescencji, stosując liniowe porównanie densytometryczne z oczyszczonym wzorcem białka ApoB48 gryzoni.</li>
</ol>

<ol><li>Lindsay, F. E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cisterna+chyli+as+a+source+of+lymph+samples+in+the+cat+and+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Res.+Vet.+Sci%22%5BJournal%5D)">The cisterna chyli as a source of lymph samples in the cat and dog.</a> Res. Vet. Sci. 17, 256-258 (1974).</li>
<li>Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+rodent+intestinal+lipoprotein+production+and+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism.</a> Curr. Protoc. Mouse Biol. 2, 219-230 (2012).</li>
<li>Wang, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+uptake+and+lymphatic+absorption+of+beta-carotene+in+ferrets%3A+a+model+for+human+beta-carotene+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intestinal uptake and lymphatic absorption of beta-carotene in ferrets: a model for human beta-carotene metabolism.</a> Am. J. Physiol. 263 (4 Pt 1), G480-G486 (1992).</li>
<li>Hein, W. R., Barber, T., Cole, S. A., Morrison, L., Pernthaner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+collection+and+characterization+of+afferent+lymph+from+the+ovine+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J.Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Long-term collection and characterization of afferent lymph from the ovine small intestine.</a> J.Immunol. Methods. 293 (1-2), 153-168 (2004).</li>
<li>Hartmann, P. E., Lascelles, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+flow+and+lipid+composition+of+thoracic+duct+lymph+in+the+grazing+cow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The flow and lipid composition of thoracic duct lymph in the grazing cow.</a> J. Physiol. 184 (1), 193-202 (1966).</li>
<li>Redgrave, T. G., Dunne, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chylomicron+formation+and+composition+in+unanaesthetised+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Chylomicron formation and composition in unanaesthetised rabbits.</a> Atherosclerosis. 22 (3), 389-400 (1975).</li>
<li>Binns, R. M., Hall, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paucity+of+lymphocytes+in+the+lymph+of+unanaesthetised+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Exp.+Pathol%22%5BJournal%5D)">The paucity of lymphocytes in the lymph of unanaesthetised pigs.</a> Br. J. Exp. Pathol. 47 (3), 275-280 (1966).</li>
<li>Ohlsson, L., Kohan, A. B., Tso, P., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLP-1+released+to+the+mesenteric+lymph+duct+in+mice%3A+Effects+of+glucose+and+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Regul.+Pept%22%5BJournal%5D)">GLP-1 released to the mesenteric lymph duct in mice: Effects of glucose and fat.</a> Regul. Pept. 189, 40-45 (2014).</li>
<li>Ho, H. T., Kim, D. N., Lee, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+apolipoprotein+B-48+synthesis+and+lymphatic+cholesterol+transport+are+lower+in+swine+fed+high+fat%2C+high+cholesterol+diet+with+soy+protein+than+with+casein%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Intestinal apolipoprotein B-48 synthesis and lymphatic cholesterol transport are lower in swine fed high fat, high cholesterol diet with soy protein than with casein.</a> Atherosclerosis. 77 (1), 15-23 (1989).</li>
<li>Arnold, M., Dai, Y., Tso, P., Langhans, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meal-contingent+intestinal+lymph+sampling+from+awake%2C+unrestrained+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Meal-contingent intestinal lymph sampling from awake, unrestrained rats.</a> Am. J. Physiol. Integr. Comp. Physiol. 302 (12), R1365-R1371 (2012).</li>
<li>Nguyen, T. M., Sawyer, J. K., Kelley, K. L., Davis, M. A., Kent, C. R., Rudel, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACAT2+and+ABCG5%2FG8+are+both+required+for+efficient+cholesterol+absorption+in+mice%3A+evidence+from+thoracic+lymph+duct+cannulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">ACAT2 and ABCG5/G8 are both required for efficient cholesterol absorption in mice: evidence from thoracic lymph duct cannulation.</a> J. Lipid Res. 53 (8), 1598-1609 (2012).</li>
<li>Sato, M., Kawata, Y., Erami, K., Ikeda, I., Imaizumi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LXR+agonist+increases+the+lymph+HDL+transport+in+rats+by+promoting+reciprocally+intestinal+ABCA1+and+apo+A-I+mRNA+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">LXR agonist increases the lymph HDL transport in rats by promoting reciprocally intestinal ABCA1 and apo A-I mRNA levels.</a> Lipids. 43 (2), 125-131 (2008).</li>
<li>Boyd, M., Risovic, V., Jull, P., Choo, E., Wasan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stepwise+surgical+procedure+to+investigate+the+lymphatic+transport+of+lipid-based+oral+drug+formulations%3A+Cannulation+of+the+mesenteric+and+thoracic+lymph+ducts+within+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A stepwise surgical procedure to investigate the lymphatic transport of lipid-based oral drug formulations: Cannulation of the mesenteric and thoracic lymph ducts within the rat.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49 (2), 115-120 (2004).</li>
<li>Sugawara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+absorption+of+dietary+maize+glucosylceramide+in+lymphatic+duct+cannulated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Intestinal absorption of dietary maize glucosylceramide in lymphatic duct cannulated rats.</a> J. Lipid Res. 51 (7), 1761-1769 (2010).</li>
<li>Shackleford, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+lymphatically+transported+testosterone+undecanoate+to+the+systemic+exposure+of+testosterone+after+oral+administration+of+two+andriol+formulations+in+conscious+lymph+duct-cannulated+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Contribution of lymphatically transported testosterone undecanoate to the systemic exposure of testosterone after oral administration of two andriol formulations in conscious lymph duct-cannulated dogs.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 306 (3), 925-933 (2003).</li>
<li>Lespine, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+lymphatic+transport+to+the+systemic+exposure+of+orally+administered+moxidectin+in+conscious+lymph+duct-cannulated+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Contribution of lymphatic transport to the systemic exposure of orally administered moxidectin in conscious lymph duct-cannulated dogs.</a> Eur. J. Pharm. Sci. 27 (1), 37-43 (2006).</li>
<li>Carr, J., Carr, I., Dreher, B., Betts, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+metastasis%3A+invasion+of+lymphatic+vessels+and+efflux+of+tumour+cells+in+the+afferent+popliteal+lymph+as+seen+in+the+Walker+rat+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Lymphatic metastasis: invasion of lymphatic vessels and efflux of tumour cells in the afferent popliteal lymph as seen in the Walker rat carcinoma.</a> J. Pathol. 132 (4), 287-305 (1980).</li>
<li>Bennell, M. A., Husband, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Route+of+lymphocyte+migration+in+pigs.+I.+Lymphocyte+circulation+in+gut-associated+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Route of lymphocyte migration in pigs. I. Lymphocyte circulation in gut-associated lymphoid tissue.</a> Immunology. 42 (3), 469-474 (1981).</li>
<li>Knight, J. S., Baird, D. B., Hein, W. R., Pernthaner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gastrointestinal+nematode+Trichostrongylus+colubriformis+down-regulates+immune+gene+expression+in+migratory+cells+in+afferent+lymph%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">The gastrointestinal nematode Trichostrongylus colubriformis down-regulates immune gene expression in migratory cells in afferent lymph.</a> BMC Immunol. 11, 51(2010).</li>
<li>Milling, S. W., Jenkins, C., MacPherson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collection+of+lymph-borne+dendritic+cells+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Collection of lymph-borne dendritic cells in the rat.</a> Nat. Protoc. 1 (5), 2263-2270 (2006).</li>
<li>Pernthaner, A., Cole, S. A., Gatehouse, T., Hein, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+diversity+of+antigen-presenting+cells+in+ovine-afferent+intestinal+lymph%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Phenotypic diversity of antigen-presenting cells in ovine-afferent intestinal lymph.</a> Arch. Med. Res. 33 (4), 405-412 (2002).</li>
<li>Thielke, K. H., Pabst, R., Rothkotter, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+proliferating+lymphocyte+subsets+appearing+in+the+intestinal+lymph+and+the+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Quantification of proliferating lymphocyte subsets appearing in the intestinal lymph and the blood.</a> Clin. Exp. Immunol. 117 (2), 277-284 (1999).</li>
<li>Mayrhofer, G., Fisher, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgA-containing+plasma+cells+in+the+lamina+propria+of+the+gut%3A+failure+of+a+thoracic+duct+fistula+to+deplete+the+numbers+in+rat+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">IgA-containing plasma cells in the lamina propria of the gut: failure of a thoracic duct fistula to deplete the numbers in rat small intestine.</a> Eur. J. Immunol. 9 (1), 85-91 (1979).</li>
<li>Beh, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+IgA-containing+cells+in+intestinal+lymph+of+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Aust.+J.+Exp.+Biol.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">The origin of IgA-containing cells in intestinal lymph of sheep.</a> Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 55 (3), 263-274 (1977).</li>
<li>Bennell, M. A., Husband, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Route+of+lymphocyte+migration+in+pigs.+II.+Migration+to+the+intestinal+lamina+propria+of+antigen-specific+cells+generated+in+response+to+intestinal+immunization+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Route of lymphocyte migration in pigs. II. Migration to the intestinal lamina propria of antigen-specific cells generated in response to intestinal immunization in the pig.</a> Immunology. 42 (3), 475-479 (1981).</li>
<li>Rothkotter, H. J., Huber, T., Barman, N. N., Pabst, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphoid+cells+in+afferent+and+efferent+intestinal+lymph%3A+lymphocyte+subpopulations+and+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lymphoid cells in afferent and efferent intestinal lymph: lymphocyte subpopulations and cell migration.</a> Clin. Exp. Immunol. 92 (2), 317-322 (1993).</li>
<li>Vilahur, G., Padro, T., Badimon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis+and+thrombosis%3A+insights+from+large+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis and thrombosis: insights from large animal models.</a> J. Biomed. Biotechnol. 1, (2011).</li>
<li>Getz, G. S., Reardon, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Animal models of atherosclerosis.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 32 (5), 1104-1115 (2012).</li>
<li>Skold, B. H., Getty, R., Ramsey, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+atherosclerosis+in+the+arterial+system+of+aging+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Spontaneous atherosclerosis in the arterial system of aging swine.</a> Am. J. Vet. Res. 27 (116), 257-273 (1966).</li>
<li>Reiser, R., Sorrels, M. F., Williams, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+high+levels+of+dietary+fats+and+cholesterol+on+atherosclerosis+and+lipid+distribution+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Influence of high levels of dietary fats and cholesterol on atherosclerosis and lipid distribution in swine.</a> Circ. Res. 7, 833-846 (1959).</li>
<li>Casani, L., Sanchez-Gomez, S., Vilahur, G., Badimon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pravastatin+reduces+thrombogenicity+by+mechanisms+beyond+plasma+cholesterol+lowering%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb.+Haemost%22%5BJournal%5D)">Pravastatin reduces thrombogenicity by mechanisms beyond plasma cholesterol lowering.</a> Thromb. Haemost. 94 (5), 1035-1041 (2005).</li>
<li>Romosos, D. R., McGilliard, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+thoracic+and+intestinal+lymph+duct+shunts+in+calves%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dairy+Sci%22%5BJournal%5D)">Preparation of thoracic and intestinal lymph duct shunts in calves.</a> J. Dairy Sci. 53 (9), 1275-1278 (1970).</li>
<li>Shannon, A. D., Lascelles, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intestinal+and+hepatic+contributions+to+the+flow+and+composition+of+thoracic+duct+lymph+in+young+milk-fed+calves%5BTitle%5D)+AND+%22Q.J.+Exp.+Physiol.+Cogn.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">The intestinal and hepatic contributions to the flow and composition of thoracic duct lymph in young milk-fed calves.</a> Q.J. Exp. Physiol. Cogn. Med. Sci. 5 (2), 194-205 (1968).</li>
<li>Aliev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+lymph+of+ruminants.+I.+Operative+techniques+for+collecting+intestinal+lymph+from+ruminants%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Vet.Hung%22%5BJournal%5D)">Intestinal lymph of ruminants. I. Operative techniques for collecting intestinal lymph from ruminants.</a> Acta Vet.Hung. 38 (1-2), 105-120 (1990).</li>
<li>Butterfield, A. B., Lumb, W. V., Litwak, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+preparation+of+miniature+swine+for+atherosclerosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Surgical preparation of miniature swine for atherosclerosis research.</a> Am. J. Vet. Res. 37 (12), 1519-1523 (1976).</li>
<li>Saar, L. I., Getty, R. Lymphatic system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSaar%2C+LI+%22Sisson+and+Grossman%27s%3A+The+anatomy+of+domestic+animals%22">Sisson and Grossman's: The anatomy of domestic animals</a>. 2, W. B. Saunders Company. Philadelphia PA. 1343-1358 (1975).</li>
<li>Zanchet, D. J., de Souza Montero, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pig+liver+sectorization+and+segmentation+and+virtual+reality+depiction%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Cirurgica.+Basilera%22%5BJournal%5D)">Pig liver sectorization and segmentation and virtual reality depiction.</a> Acta. Cirurgica. Basilera. 17 (6), 382-387 (2002).</li>
<li>Vine, D. F., Takechi, R., Russell, J. C., Proctor, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+postprandial+apolipoprotein-B48+metabolism+in+the+obese%2C+insulin-resistant+JCR%3ALA-cp+rat%3A+increased+atherogenicity+for+the+metabolic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Impaired postprandial apolipoprotein-B48 metabolism in the obese, insulin-resistant JCR:LA-cp rat: increased atherogenicity for the metabolic syndrome.</a> Atherosclerosis. 190 (2), 282-290 (2007).</li>
<li>Li, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+properties+of+ascending+aorta+and+pulmonary+trunk+in+pigs+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Biomechanical properties of ascending aorta and pulmonary trunk in pigs and humans.</a> Xenotransplantation. 15 (6), 384-389 (2008).</li>
<li>Arkill, K. P., Moger, J., Winlove, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+mechanical+properties+of+collecting+lymphatic+vessels%3A+an+investigation+using+multimodal+nonlinear+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">The structure and mechanical properties of collecting lymphatic vessels: an investigation using multimodal nonlinear microscopy.</a> J. Anat. 216 (5), 547-555 (2010).</li>
<li>Uwiera, R. R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmid+DNA+induces+increased+lymphocyte+trafficking%3A+a+specific+role+for+CpG+motifs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Plasmid DNA induces increased lymphocyte trafficking: a specific role for CpG motifs.</a> Cell. Immunol. 214 (2), 155-164 (2001).</li>
<li>Black, D. D., Davidson, N. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+apolipoprotein+synthesis+and+secretion+in+the+suckling+pig%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Intestinal apolipoprotein synthesis and secretion in the suckling pig.</a> J. Lipid Res. 30 (2), 207-218 (1989).</li>
<li>Heider, J. G., Pickens, C. E., Lawrence, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+acyl+CoA%3Acholesterol+acyltransferase+in+cholesterol+absorption+and+its+inhibition+by+57-118+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Role of acyl CoA:cholesterol acyltransferase in cholesterol absorption and its inhibition by 57-118 in the rabbit.</a> J. Lipid Res. 24, 1127-1134 (1983).</li>
<li>Noh, S. K., Koo, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+sphingomyelin+is+more+effective+than+egg+sphingomyelin+in+inhibiting+intestinal+absorption+of+cholesterol+and+fat+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Milk sphingomyelin is more effective than egg sphingomyelin in inhibiting intestinal absorption of cholesterol and fat in rats.</a> J. Nutr. 134, 2611-2616 (2004).</li>
<li>Brunham, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+ABCA1+directly+contributes+to+HDL+biogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Intestinal ABCA1 directly contributes to HDL biogenesis in vivo.</a> J. Clin. Invest. 116 (4), 1052-1062 (2006).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Pobieranie limfy jelitowej jest doskonałą metodą badania mechanizmów związanych z metabolizmem lipidów8-12 i leków13-15 , przerzutami raka16,17, transportem komórkowym i funkcjonowaniem układu odpornościowego18-26 w różnych eksperymentalnych modelach zwierzęcych. Rzeczywiście, zdolność do zbierania dużych ilości limfy obwodowej (aferentnej) i centralnej (odprowadzającej i dużych naczyń tułowiowych) przez dłuższy czas była szczególnie ważna dla zrozumienia zmian czasowych, które...

Układ limfatyczny jest niedostatecznie zbadanym obszarem fizjologii. Przedkliniczne modele cewnikowania limfatycznego występują u różnych gatunków zwierząt1-8 i są wykorzystywane przez przemysł farmaceutyczny i instytucje badawcze do badania mechanizmów związanych z metabolizmem lipidów8-12 i leków13-15, przerzutami raka16 z leczeniem eksperymentalnym17 i funkcją immunologiczną18-26. W tym badaniu zbadano zastosowanie cewnikowania pnia limfatycznego jelit w modelu świni domowej do pomiaru składników metabolizmu lipoprotein. Metabolizm lipoprotein bierze udział w produkcji i wydzielaniu chylomikronów, a także w zmianach w powiązanych lipidach i białku całkowitym. Są to ważne kwestie, ponieważ istnieją duże różnice w metabolizmie lipidów między powszechnie stosowanymi modelami gryzoni a ludźmi, a zatem zastosowanie modeli świń do zbierania limfy jelitowej może dostarczyć bardziej porównywalnych informacji do badania metabolizmu lipidów u osóbw wieku 27-31 lat.
Do pobierania limfy jelitowej u dużych gatunków zwierząt stosuje się kilka technik chirurgicznych: podejście czaszkowo-barkowe (tj. cewnikowanie przewodu piersiowego)5, boczne podejście górnego boku32-34 i podejście brzuszne linii środkowej lub przyśrodkowej22,35. Ten film szczegółowo opisuje zabieg chirurgiczny u świń przy użyciu brzusznego dostępu chirurgicznego do cewnikowania pnia limfatycznego jelita. Staranna technika chirurgiczna pozwala tej metodzie cewnikowania limfatycznego na gromadzenie dużych ilości limfy i jej składników przez dłuższy czas.
Ta technika otwiera niezliczone możliwości zastosowania w wielu dyscyplinach badających różne funkcje fizjologiczne. Zastosowania mogą obejmować między innymi metabolizm lipoprotein i lipidów w całym ciele, nadzór immunologiczny, genezę guza i przerzuty, funkcję jelit oraz rozwój i progresję choroby zapalnej jelit.

<table><tbody><tr><td>Ostrze laryngoskopu Miller</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>Długość 182 mm</td></tr><tr><td>Doradca chirurga: Monitor parametrów życiowych</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Sonda temperatury doodbytniczej</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Monopolarny generator elektrochirurgii</td><td>Nożyczki Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Zwijacz Tuffier</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze do komarów</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Kelly-zakrzywione (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze do tkanek Allis</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze do opatrunku (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze do opatrunku-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Sterowniki igieł</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki do tęczówki</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Pompa wody obiegowej</td><td>Koc Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl Aplikatory</td> końcówek <td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Q Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Cewnikowanie&nbsp; rurki (4,06 OD X 2,31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Rurka implantacyjna Micro-Renethan</td></tr><tr><td>2-0 szew jedwabny</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 szew poliglaktynowy</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Kurtka dla dużych zwierząt</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polipropylenowe butelki do mycia</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterycyna B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Zdrowie</td><td></td> zwierząt <td>Stresnil</td></tr><tr><td>Chlorowodorek deksmedetomidyny</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&nbsp; Zdrowie</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Chlorowodorek ketaminy</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td></td></tr><tr><td>Chlorowodorek bupenorfiny</td> Ketaset <td>Champion Alstoe Zdrowie</td><td></td> zwierząt <td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Rurka dotchawicza</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% lidokaina w</td><td>sprayu AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Peeling chirurgiczny z chlorheksydyną</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Rozcieńczony: 2,0% roztwór</td></tr><tr><td>3M Serweta chirurgiczna</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS żel stronicowy</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % octan trisu</td></tr><tr><td>Membrana z polifluorku winylidenu</td><td>Milipore</td><td>IPVH00010</td><td>0,45 &mu; m wielkość porów</td></tr><tr><td>Przeciwciało ApoB&nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 rozcieńczenie</td></tr><tr><td>Osioł anty-kozy IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Odczynnik</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw trójglicerydów</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw cholesterolu całkowitego</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Białko całkowite</td><td>&nbsp; Przebijanie&nbsp;</td><td>23225</td><td>Test kwasu bicunchoninowego</td></tr></tbody></table>

długotrwałe cewnikowanie pnia limfatycznego jelit i pobieranie limfy u nowonarodzonych świń

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Cewnikowanie jelitowego pnia limfatycznego u nowonarodzonych świń jest techniką pozwalającą na długotrwałe gromadzenie dużych ilości jelitowej (centralnej) limfy odprowadzającej. Co ważne, pobranie centralnej limfy z jelita umożliwia naukowcom badanie zarówno mechanizmów i składników lipidowych związanych z metabolizmem lipidów, stanem zapalnym jelit i przerzutami raka, jak i komórek zaangażowanych w funkcje odpornościowe i nadzór immunologiczny. Brzuszne podejście chirurgiczne w linii środkowej pozwala na doskonałą ekspozycję chirurgiczną jamy brzusznej czaszki i stosunkowo łatwy dostęp do naczynia pnia limfatycznego jelita, które leży w pobliżu trzustki i prawego brzusznego odcinka żyły wrotnej poniżej trzewnej części prawego płata wątroby. Naczynie jest skrupulatnie wycinane i uwalniane z otaczającej powięzi, a następnie rozszerzane szwami umożliwiającymi wprowadzenie i późniejsze zamocowanie cewnika w naczyniu. Cewnik jest eksterioryzowany i pobiera się około 1 l/24 godzinę limfy w ciągu 7 dni. Chociaż technika ta umożliwia pobieranie dużych ilości centralnej limfy przez dłuższy czas, sukces zależy od starannego rozwarstwienia chirurgicznego, obchodzenia się z tkankami i zwrócenia szczególnej uwagi na właściwą technikę chirurgiczną. Jest to szczególnie ważne w przypadku operacji u młodych zwierząt, ponieważ naczynia limfatyczne mogą łatwo pękać, co może prowadzić do niepowodzenia chirurgicznego i eksperymentalnego. Film przedstawia doskonałą technikę chirurgiczną pobierania limfy jelitowej.

Kaniulacja pnia chłonnego jelit u noworodków świń umożliwia pobranie około 1 L/24 hr limfy centralnej w okresie 7 dni. Limfa pobrana w tych eksperymentach zawierała składniki metabolizmu lipidów, a mianowicie całkowite białka limfy, lipoproteiny ApoB48, triglicerydy, białko całkowite oraz cholesterol. Tablica 1 przedstawia reprezentatywne ilości tych składników lipidowych z połączonych próbek limfy od trzech świń. Co istotne, przepływ limfy i składniki lipidowe są zgodne z wartościami dla...

Przedstawiamy zabieg chirurgiczny polegający na cewnikowaniu jelitowego pnia limfatycznego u nowonarodzonych świń w celu pobrania dużych ilości składników metabolizmu lipidów z odprowadzającej limfy.

Długotrwałe cewnikowanie pnia limfatycznego jelit i pobieranie limfy u nowonarodzonych świń

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

Kanulacja naczyń limfatycznych jest istotną techniką wykorzystywaną do badania mechanizmów zaangażowanych w metabolizm lipidów i leków, przerzutowanie nowotworów oraz funkcje odpornościowe, a pobieranie dużych ilości limfy z różnych modeli zwierzęcych umożliwia naukowcom badanie tych procesów. Film szczegółowo prezentuje procedurę chirurgiczną stosowaną w celu kanulacji pnia chłonnego jelit u noworodków świń z wykorzystaniem dostępu przez linię pośrodkową brzucha. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt Uniwersytetu Alberta.W celu uzyskania dostępu do naczynia limfatycznego otwarto jamę brzuszną. Do rozcięcia warstwy mięśniowej wykorzystano elektrokoagulator w trybie cięcia. Aby utrzymać ścianę brzuszną w pozycji otwartej przez cały czas trwania procedury, zastosowano rozieracz.Kluczowe narządy jamy brzusznej zostają zidentyfikowane, aby ułatwić lokalizację naczynia limfatycznego. W celu lepszego dostępu do naczynia limfatycznego, segmenty jelita cienkiego i jelita grubego zostają wyprowadzone na lewą stronę ciała. Naczynie limfatyczne zostaje wyznaczone poprzez identyfikację wątroby oraz prawego brzusznego segmentu żyły wrotnej.U noworodków prosiąt naczynia limfatyczne są delikatne i łatwo ulegają przerwaniu, dlatego wymagana jest skrupulatna dyssekcja z użyciem tamponów i narzędzi tępych. Oto naczynie limfatyczne jelita. Obecnie za pomocą tępych pincetekt przechodzi szew pod naczyniem limfatycznym.Obecnie pod naczyniem limfatycznym znajdują się trzy jedwabne szwy 2-0. Najbardziej guzowy szew służy do rozszerzenia naczynia i przymocowania do niego cewnika. Szwy głowowe służą do stabilizacji cewnika wewnątrz naczynia.Niewielkie nacięcie w naczyniu limfatycznym umożliwia rozszerzenie naczynia za pomocą kleszczyków tępych. Następnie do naczynia wprowadza się cewnik. Czynność tę należy wykonywać ostrożnie, aby zapobiec rozerwaniu naczynia limfatycznego.Kaniulę należy wprowadzić poza najbardziej kranialny szew, aby zapewnić jej prawidłowe osadzenie. Trzy szwy z jedwabiu 2-0 służą do zamocowania kaniuli w naczyniu limfatycznym. Co istotne, dwa kranialne szwy są wykorzystywane w pierwszej kolejności do zabezpieczenia kaniuli w naczyniu, a następnie szew najbardziej kaudalny służy do przymocowania kaniuli, co zwiększa jej stabilność.Przed zamknięciem jamy brzusznej ważne jest upewnienie się, że przepływ limfy jest prawidłowy. Cewnik zostaje wyprowadzony na zewnątrz w okolicy środkowej części lewego boku świni. Do wyciągnięcia cewnika z jamy brzusznej na zewnętrzną powierzchnię boku świni używa się dużych szczypiec.Warstwy mięśniowe zamyka się szwem 2-0 vicryl na igle stożkowej, stosując prosty szew przerywany. Skórę zamyka się szwem 2-0 vicryl na igle tnącej, stosując ciągły szew podskórny. W miejscu nacięcia wyjścia cewnik przechodzi przez skórę, a miejsce to zamyka się szwem 2-0 nylon na igle tnącej, stosując szew typu „marszczącego” (purse-string).Takie zamknięcie pomaga zapobiegać infekcjom wstępującym, które mogłyby przedostać się wzdłuż cewnika do wnętrza organizmu. Osłona utrzymująca butelki do zbierania limfy jest zakładana na świnię, gdy zwierzę znajduje się jeszcze pod wpływem anestezji. Cewnik jest wprowadzany do butelki zbiorczej, a przed wybudzeniem świni upewnia się, że przepływ limfy jest prawidłowy.Świnie dobrze regenerują się po zabiegu, a przez cały czas trwania eksperymentu utrzymywany jest doskonały przepływ limfy. W tabeli przedstawiono składniki limfy pobranej z naczynia limfatycznego. Składniki te obejmują apolipoproteinę B48, trójglicerydy oraz cholesterol.Rysunek Western blot wykazuje obecność zarówno apolipoproteiny B48, jak i niewielkich ilości pochodzącej z osocza apolipoproteiny B100 w pobranej próbce chłonki. Chociaż kanulacja naczyń chłonnych u młodych świń może być trudna technicznie, ponieważ naczynia chłonne są delikatne i kruche, niniejszy film demonstruje, że zastosowanie właściwej i starannej techniki chirurgicznej u młodych świń może zapewnić badaczom doskonały model pobierania chłonki jelitowej.

long-term-catheterization-intestinal-lymph-trunk-collection-lymph

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Opisujemy nową metodę chirurgiczną kaniulacji „pętli jelitowych” w jelicie krętym owiec. Po powrocie zwierząt do zdrowia po operacji oraz całkowitym usunięciu z organizmu antybiotyków i leków przeciwbólowych, za pomocą kaniul można wprowadzać wiele dawek terapeutycznych bezpośrednio do pętli.

Kaniulacja pętli jelitowych u przeżuwaczy

Ten film demonstruje technikę kanniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów. Metoda ta umożliwia bezpośredni dostęp do całej objętości składników obecnych w płynie limfatycznym.

Kaniulacja krezki limfatycznej w modelu szczura w celu pobrania płynu limfatycznego

Tutaj opisujemy technikę kannuacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów, która umożliwia ilościowe określenie transportu lipidów i leków przez układ limfatyczny po porodzie jelitowym. Technika ta może być dostosowana do oceny stężenia limfy krezkowej i/lub transportu płynu, komórek odpornościowych, peptydów, białek i cząsteczek lipofilowych.

Model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach

Tutaj opisujemy dokładną metodę pobierania limfocytów przewodu piersiowego i obserwacji migracji limfocytów tropikalnych jelitowych w plamach Peyera szczura przez 3 godziny za pomocą fotografii poklatkowej. Ta technika może wyjaśnić, w jaki sposób dynamika limfocytów wpływa na stan zapalny.

Obserwacja mikroskopowa dynamiki limfocytów w szczurzych łatach Peyera

Obecny protokół opisuje szczegółowy protokół chirurgiczny izolowania przepływającej limfy jelitowej w odpowiedzi na infuzje składników odżywczych dodwunastnicy u myszy. Pozwala to na fizjologiczne określenie całkowitego wchłaniania lipidów w jelitach oraz syntezy i wydzielania chylomikronu w odpowiedzi na różne eksperymentalne składniki odżywcze.

Izolacja przepływającej limfy krezkowej u myszy w celu ilościowego określenia in vivo kinetyki wchłaniania lipidów w diecie i wydzielania chylomikronu

Opisano niezawodne i powtarzalne podejście do wprowadzania i konserwacji tunelizowanego cewnika Hickmana do długoterminowego dostępu naczyniowego u świń. Umieszczenie centralnego cewnika żylnego pozwala na wygodne codzienne pobieranie próbek krwi pełnej od obudzonych zwierząt oraz dożylne podawanie leków i płynów.

Zastosowanie cewnika Hickmana do długotrwałego dostępu naczyniowego w przedklinicznym modelu trzody chlewnej

Protokół ten opisuje opracowanie modelu noworodkowego prosięta ostrego urazu płuc, który modeluje wczesne zdarzenia patogenne występujące w przedwczesnym płucu, w tym niewystarczającą ilość surfaktantu, hiperoksję, wentylację pod wysokim ciśnieniem oraz stan zapalny, aby ułatwić zrozumienie molekularnych czynników wyzwalających dysplazję oskrzelowo-monową oraz poprawić terapeutyczne tłumaczenie.

Opracowanie modelu ostrego uszkodzenia płuc u prosiatka noworodkowego, odtwarzającego wczesne środowisko przedwcześniackich płuc

Ten eksperymentalny protokół demonstruje głęboki model szczura z kaniulowaniem przewodów wędrowych szyjnych, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę drenażu limfatycznego z okolic głowy. Model umożliwia szczegółową analizę substancji rozpuszczonych pochodzących z ośrodkowego układu nerwowego (OUN), populacji komórek odpornościowych oraz dystrybucję i oczyszczanie terapii ukierunkowanych na OUN.

Model szczura z kanulacją przewodu limfatycznego szyjnego do oceny transportu limfatycznego z głowy i mózgu

Ten protokół eksperymentalny opisuje model szczura z kanalikiem limfatycznym wątroby, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę limfatycznego i naczyniowego drenażu wątroby. Model pozwala na jednoczesne pobieranie limfy wątrobowej i krwi ogólnoustrojowej w celu zbadania transportu, metabolizmu i sygnalizacji odpornościowej wątroby, wspierając badania farmakokinetyki leków i biologii specyficznej dla wątroby.

Kompleksowy model szczura do oceny dróg transportu wątrobowego poprzez jednoczesne pobieranie próbek limfatycznych i krwionośnych

Obrazowanie fluorescencyjne jest obiecującą, innowacyjną metodą chirurgii sterowanej obrazem w onkologii chirurgicznej. W niniejszym materiale wideo opisujemy procedurę techniczną wykrywania węzła chłonnego wartowniczego z wykorzystaniem obrazowania fluorescencyjnego, zaprezentowaną na przykładzie onkologii ginekologicznej. Zastosowano wielospektralny system kamer fluorescencyjnych wraz z kontrastem fluorescencyjnym w postaci zieleni indocyjaninowej.

Wielospektralne obrazowanie fluorescencyjne w czasie rzeczywistym do śródoperacyjnego wykrywania węzła chłonnego strażnika w onkologii ginekologicznej

Poznaj technikę cewnikowania pnia limfatycznego jelit u nowonarodzonych świń. Metoda umożliwia pobieranie dużych ilości limfy do badań metabolizmu lipidów i leków w modelu zwierzęcym.

Długotrwałe cewnikowanie pnia limfatycznego jelit i pobieranie limfy u nowonarodzonych świń

Przeglądaj więcej filmów