Ortotopowy przeszczep kończyn tylnych u myszy

Ogólnym celem tego filmu instruktażowego jest przedstawienie mysiego modelu ortotopowego przeszczepu kończyn tylnych przy użyciu techniki mankietu bez szwów do zespolenia supermikronaczyniowego. Modele zwierzęce mają zasadnicze znaczenie dla zrozumienia i leczenia chorób u ludzi i utorowały drogę do tego, aby przeszczepy rekonstrukcyjne stały się rzeczywistością kliniczną w ciągu ostatnich dwóch dekad. Ten konkretny model może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania związane ze ścieżką fizjologii odpowiedzi alloimmunologicznej specyficznej dla unaczynionych alloprzeszczepów kompozytowych.

Główną zaletą tej techniki jest to, że technika mankietu bez szwów znacznie zmniejsza złożoność i zwiększa wskaźnik powodzenia tej procedury supermikrokrążenia. Po potwierdzeniu odpowiedniego poziomu sedacji poprzez uszczypnięcie palca u nogi należy ogolić tylną kończynę i pachwinę zwierzęcia dawcy. Następnie zdezynfekuj skórę 10% jodowidonem i umieść mysz pod mikroskopem preparacyjnym.

Za pomocą nożyczek rozpocznij pobieranie kończyn dawcy od nacięcia skóry pachwiny proksymalnie do połowy uda. Poszlakowe połączenie nacięcia w celu odgraniczenia tylnej kończyny od reszty reszty ciała. Zidentyfikuj i wypreparuj tętnicę udową, żyłę i nerw.

Następnie użyj kleszczy i mikronożyczek, aby oddzielić trzy struktury. Zapobieganie mikrourazom ściany naczynia poprzez zastosowanie techniki bezdotykowej jest niezbędne do zapewnienia powodzenia zabiegu. Po wypreparowaniu szypułki naczyniowej użyj mikronożyczek, aby podzielić naczynia na więzadle pachwinowym.

Kontynuuj podział poszczególnych grup mięśni brzusznych i grzbietowych mniej więcej w połowie uda, aby oddzielić przeszczep od zwierzęcia dawcy. Następnie przeciąć cięcie kości udowej w środku trzonu kości udowej. Za pomocą strzykawki wyposażonej w igłę o rozmiarze 33 przepłucz pobraną kończynę dwoma ml heparynizowanego soli fizjologicznej o temperaturze czterech stopni Celsjusza.

Następnie umieść indywidualne mankiety poliimidowe na żyle udowej i tętnicy. I przechowuj przeszczep w mokrej bawełnianej gazie na szalce Petriego w temperaturze czterech stopni Celsjusza do momentu wpuszczenia. Montaż pesis na mankietach poliimidowych jest najważniejszym etapem zabiegu.

Ponieważ nieprawidłowa adnotacja może upośledzać przepływ krwi, a niewłaściwe ciśnienie może odsłonić niektóre tkanki antybiotykowe, zwiększając prawdopodobieństwo powstania zakrzepicy. Aby usunąć tylną kończynę biorcy, należy wstrzyknąć dootrzewnowo 0,3 ml ciepłej soli fizjologicznej. Wykonaj nacięcie obwodowe wokół tylnej kończyny i zidentyfikuj i wypreparuj tętnicę udową, żyłę i nerw, jak właśnie pokazano.

Po wypreparowaniu szypułki naczyniowej zaciśnij naczynia udowe na więzadle pachwinowym. I przeciąć naczynia dystalnie na powierzchownej tętnicy nadbrzusza. Kontynuuj dzielenie poszczególnych grup mięśni brzusznych i grzbietowych mniej więcej w połowie uda, aby oddzielić rodzimą kończynę tylną od zwierzęcia biorcy.

Następnie przeciąć kość udową w środku trzonu kości udowej. Następnie za pomocą igły rdzeniowej o rozmiarze 20 jako pręta śródszpikowego i wyrównaj kości udowe biorcy i przeszczep w natywnej pozycji kończyny tylnej. Połącz kości udowe dawcy i biorcy.

Użyj wchłanialnego materiału szwowego, aby połączyć brzuszne i grzbietowe grupy mięśni. Dokładne i szybkie wykonanie tego wyrównania zapobiega przedłużającej się utracie krwi z jamy kostnej. Aby połączyć naczynia udowe, przeciągnij naczynie po stronie biorczej przez mankiety poliimidowe.

I użyj nylonowego szwu 10-0, aby przymocować naczynie biorcze do mankietu za pomocą opaski obwodowej. Gdy naczynie zostanie ustabilizowane, zwolnij zaciski. I wizualnie sprawdź, czy mankiety nie są źle obrócone.

Wizualnie sprawdź homeostazę i użyj elektrokoagulacji, aby zatrzymać wszelkie źródła krwawienia. Następnie zamknij skórę niewchłanialnymi nylonowymi szwami. I monitoruj zwierzę, aż w pełni wyzdrowieje.

Wykonanie unaczynionej allotransplantacji kompozytowej w modelu mysim przy użyciu tej techniki mankietu bez szwów ułatwia osiągnięcie doskonałego i długoterminowego przeszczepu i przeżycia zwierząt. Co więcej, technika ta stanowi wiarygodną metodę uzyskiwania powtarzalnych wyników stopniowego odrzucania przeszczepu allogenicznego i unaczynionego modelu allotransplantacji złożonej, co zostało udokumentowane na obrazach. Rzeczywiście, analiza histologiczna tkanek pobranych od zwierząt poddawanych odrzuceniu dodatkowo podkreśla odtwarzalną dynamikę odrzucania przeszczepu allogenicznego w tym mysim modelu.

Po opanowaniu tej techniki można ją ukończyć w ciągu 90 do 120 minut, jeśli jest wykonywana prawidłowo. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać, aby zwrócić szczególną uwagę na obchodzenie się z tkanką i uniknąć wszelkiego rodzaju krwawienia. Po opracowaniu technika ta może utorować drogę naukowcom w dziedzinie transplantacji rekonstrukcyjnej.

Zbadanie podstawowych zagadnień mechanistycznych związanych z alloodpornością unaczynionych alloprzeszczepów kompozytowych. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać wszystkie krytyczne etapy ortotopowego przeszczepu kończyn tylnych u myszy.