Przezskórna ocena czynności nerek u świadomych gryzoni

Ogólnym celem tej procedury jest przezskórny pomiar czynności nerek bez konieczności pobierania próbek krwi lub dalszych analiz eksperymentalnych. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie nefrologii, takie jak: jaki jest wpływ uszkodzenia nerek lub określonych interwencji terapeutycznych na czynność nerek. Głównymi zaletami tej techniki jest to, że jest minimalnie inwazyjna i że wyniki są gotowe do analizy natychmiast po pomiarze, bez późniejszych manipulacji eksperymentalnych.

Technika ta może być stosowana do badania praktycznie każdego stanu nerek u kilku różnych gatunków. Jest również przydatny do wykonywania pomiarów sekwencyjnych w obrębie jednego zwierzęcia. Przed przystąpieniem do zabiegu należy potwierdzić prawidłowy poziom znieczulenia poprzez uszczypnięcie palca u nogi.

I użyj golarki elektrycznej, aby usunąć obszar sierści o wymiarach trzy na sześć centymetrów z tylnej dolnej części brzucha zwierzęcia. Usuń pozostałą sierść za pomocą kremu do depilacji. Po dwóch do trzech minutach dokładnie umyj ogołoconą skórę, ponieważ krem może wydzielać pewną fluorescencję tła.

Następnie umieść przyrząd optyczny do pomiaru czynności nerek po jednej stronie dwustronnego plastra samoprzylepnego. Umieszczenie części optycznej nad przezroczystym okienkiem i pozostawienie przeciwnej strony pokrytej folią ochronną. Następnie przymocuj do baterii dopasowany do rozmiaru kawałek dwustronnej łatki samoprzylepnej.

Przed zamocowaniem urządzenia zważ zwierzę. Następnie wytnij kawałek rurkowego bandaża z elastycznej gazy o około jeden centymetr dłuższego niż szerokość dwustronnego plastra samoprzylepnego. I naciągnij bandaż na głowę zwierzęcia.

Następnie ułóż zwierzę w pozycji leżącej, pozostawiając ogolony obszar odkryty. I podłącz złącze baterii do odpowiedniego portu w urządzeniu. Jeśli bateria została prawidłowo podłączona, urządzenie zacznie migać.

Usuń folię ochronną z drugiej strony łatki dołączonej do akumulatora. I zamontuj baterię na górnej powierzchni urządzenia. Teraz zdejmij osłonę ochronną z plastra urządzenia operacyjnego i przytrzymując krawędzie, aż zostanie prawidłowo zamocowana, umieść plaster na ogolonym obszarze na grzbiecie zwierzęcia.

Przykryj urządzenie rurkowym bandażem z elastycznej gazy, uważając, aby całkowicie rozciągnąć bandaż na brzuchu, upewniając się, że kończyny mogą się swobodnie poruszać. Dobre mocowanie ma kluczowe znaczenie dla uniknięcia artefaktów ruchu podczas pomiaru, dlatego przed rozpoczęciem pomiaru należy zadbać o to, aby urządzenie było prawidłowo zamocowane. Gdy bandaż jest na miejscu, nałóż na urządzenie pasek taśmy samoprzylepnej o dopasowanym rozmiarze, tak aby zakrywał przewody baterii.

I mierz odczyt tła przez jedną do trzech minut bez wywierania nacisku na urządzenie. Aby podać FITC-sinistrin, po rozgrzaniu ogona zwierzęcia w celu rozszerzenia żył ogonowych, dożylnie wstrzyknąć odpowiednią objętość roztworu podstawowego FITC-sinistrin. Następnie ostrożnie umieść zwierzę samo w jego domowej klatce bez wody i drucianej pokrywy.

Uważaj, aby nie wprowadzać artefaktów ruchu. Następnie rejestrować fluorescencję emitowaną przez FITC-sinistrin za pomocą urządzenia optycznego przez odpowiedni okres czasu doświadczalnego. Pod koniec okresu nagrywania ostrożnie usuń taśmę samoprzylepną, a następnie bandaż rurkowy.

Następnie delikatnie odklej dwustronny plaster samoprzylepny od skóry. I wróć zwierzę do jego normalnej klatki domowej. Aby odczytać dane, odłącz baterię od urządzenia i usuń łatkę samoprzylepną.

Następnie za pomocą micro USB podłącz rejestrator optyczny do komputera i pobierz dane za pomocą odpowiedniego oprogramowania. Na koniec użyj odpowiedniego oprogramowania, aby wygenerować krzywą kinetyki eliminacji zgodnie z protokołami oprogramowania. I otwórz plik CSV z kropką zawierający dane.

Gdy czynność nerek jest zaburzona, wydłuża się okres półtrwania FITC-sinistryny. Ze względu na zmniejszone wydalanie substancji i pojawienie się zmian krzywej. Zazwyczaj zmierzona krzywa nie wraca do poziomu tła i obserwuje się zwiększony obszar pod krzywą.

U tego samego zwierzęcia pomiary przed i po urazie wykazują wzrost maksymalnej intensywności fluorescencji spowodowany akumulacją markera spowodowaną jego zmniejszonym wydalaniem. Na przykład w przypadku niewydolności nerek przezskórnie mierzona krzywa FITC-sinistrin wykazuje stan stacjonarny ze względu na poważnie upośledzoną funkcję tkanki nerkowej. Co więcej, zminiaturyzowane urządzenie zostało wykorzystane do skutecznego pomiaru czynności nerek u kilku szczepów gryzoni o różnym statusie zdrowotnym.

Podkreślenie przydatności i czułości wyrobu do wykrywania zmian spowodowanych chorobami nerek i starzeniem się. Po opanowaniu eksperymentu można go całkowicie przygotować w ciągu 50 minut, przy czym co najmniej cztery zwierzęta na godzinę mogą być oceniane przez jednego eksperymentatora. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać o zabezpieczeniu urządzenia elektronicznego poprzez usunięcie dopływu wody i wszelkich wystających konstrukcji w okresie pomiaru.