Name: Wykorzystanie paska rozpuszczającego się w jamie ustnej do badań farmakologicznych i toksykologicznych: prosta i humanitarna alternatywa dla zgłębnika doustnego dla zwierząt (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Poznaj metodę podawania leków za pomocą pasków rozpuszczających się w jamie ustnej jako humanitarną alternatywę dla zgłębnika doustnego u myszy. Ta technika zmniejsza stres zwierząt w badaniach przedklinicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy pragną podziękować Jamiemu Thuyowi za pracę techniczną. Praca ta była częściowo wspierana przez granty badawcze SC CTSI NIH/NCRR/NCATS -- UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) oraz USC School of Pharmacy. Dodatkowo, szybko rozpuszczające się filmy doustne zawierające IVM zostały dostarczone przez Cure Pharmaceutical (Oxnard, CA).

Wszystkie opisane procedury zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) Uniwersytetu Południowej Kalifornii.
1. Obchodzenie się ze zwierzętami i ich habituacja
<ol>
	<li>Wprowadzenie
	<ol>
		<li>Pozwól myszom zaaklimatyzować się do warunków hodowli i techniki obchodzenia się z eksperymentem, aby zmniejszyć stres podczas kolejnych procedur podawania leku. W tym czasie zapisuj masę ciała i spożycie pokarmu przez każdą mysz; W razie potrzeby można je później wykorzystać jako nieinwazyjny punkt porównawczy do oceny toksyczności leku (opcjonalnie). Ten pierwszy może być również używany do określania dawkowania leków na podstawie masy. 
		Uwaga: Anegdotycznie, długość okresu przyzwyczajenia powinna być określona na podstawie liczby eksperymentatorów wchodzących w interakcję ze zwierzęciem. Z naszego doświadczenia wynika, że myszy szczepu C57BL/6J mają problemy z przyzwyczajeniem się do obsługi przez więcej niż ~5 osób w naszym typowym tygodniowym okresie przyzwyczajenia. Jeśli to możliwe, eksperymentatorzy są również zachęcani do powstrzymania się od używania pachnących balsamów, mydeł i perfum przed kontaktem ze zwierzętami, ponieważ poprzednie raporty wskazują, że nowe bodźce, takie jak zapachy, mogą utrudniać okres przyzwyczajenia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kroki
	<ol>
		<li>Rozpoczynając co najmniej 5 dni przed rozpoczęciem badania, przenieść zwierzęta do pomieszczenia, w którym będą miały miejsce kolejne eksperymenty.</li>
		<li>Zapisz wagę myszy, mocno chwytając środek ogona i delikatnie podnosząc zwierzę z klatki do łodzi obciążeniowej.
		<ol>
			<li>Umieść mysz na wadze, gdy tylko zostanie wyjęta z klatki, pamiętając o prawidłowym uchwyceniu przyśrodkowej/proksymalnej części ogona, aby uniknąć obrażeń w rękawicach, które mogą wystąpić podczas chwytania dystalnej części ogona12 .</li>
			<li>Zapisz wartość masy po bezpiecznym umieszczeniu myszy w łodzi wagowej.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Zapisuj wagę żywności przez zalecane 2 kolejne dni, w celu ustalenia podstawowych poziomów spożycia żywności, które pomogą uchwycić potencjalne toksyczności podczas eksperymentu13.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Przygotowanie igły do karmienia, roztworu sacharozy i indywidualnych ODS
<ol>
	<li>Użyj autoklawu do sterylizacji igieł do zgłębników ze stali nierdzewnej w ramach przygotowań do eksperymentu. Przygotuj 2 igły/grupę i 1 dodatkową igłę, które w razie potrzeby będą używane jako zapasowe. 
	Uwaga: W tym badaniu wykorzystano 1,5-calową, zakrzywioną, 18-gramową igłę do karmienia ze stali nierdzewnej z kulką 2,25 mm na końcu igły.</li>
	<li>Dodać 20 ml wody do 0,85 g sacharozy, aby uzyskać 4,25% (w/v) roztwór sacharozy. 
	Uwaga: W zależności od ocenianych parametrów potencjalnie można również stosować inne niskie dawki sacharozy14.</li>
	<li>Przygotuj doustny pasek do rozpuszczania (ODS) dla każdego zwierzęcia, przecinając standardowy prostokątny pasek testowy na kawałek o średnicy 0,5 cm za pomocą dostępnego w handlu dziurkacza z pojedynczym ćwierć cala. Prostokątny pasek testowy użyty w tej demonstracji został opracowany tak, aby zawierał 6 mg iwermektyny (IVM), a po przycięciu do tego rozmiaru przydziela dawkę 0,21 mg na każdy pojedynczy okrągły kawałek, co w przybliżeniu odpowiada dawce 10 mg / kg dla każdego zwierzęcia (nasza pożądana dawka / zwierzę). Dawkę tę można dostosować poprzez zagęszczenie/rozcieńczenie całego preparatu na prostokątnym pasku i/lub pocięcie paska na różne rozmiary.</li>
</ol>
3. Lek – Dostawa
<ol>
	<li>Zapisz wartości masy zgodnie z wcześniejszym opisem w krokach 1.1-1.2.</li>
	<li>Po zarejestrowaniu wagi przesuń mysz na górną część klatki z metalową siatką. Tam samym, używając kciuka dominującego, palca wskazującego i palca3-ciego, delikatnie pociągnij ogon do tyłu. Spowoduje to, że mysz nieumyślnie chwyci górną część drucianej klatki i rozciągnie grzbiet, rozciągając swoje ciało z dala od eksperymentatora.</li>
	<li>Chwyć kark szyi niedominującym kciukiem, palcem wskazującym i3-cim palcem, aby wygodnie przytrzymać zwierzę bezpiecznym uchwytem. 
	Uwaga: Eksperymentator z mniejszą ręką może również użyćczwartego palca tej samej ręki, aby odciągnąć kark grzbietu i uzyskać pewny chwyt myszy. Dodatkowo, w zależności od indywidualnych preferencji, palec serdeczny i/lub mały palec może być również użyty do zabezpieczenia ogona, jednak nie jest to konieczne12.</li>
	<li>Trzymaj mysz w pozycji pionowej.</li>
	<li>Uwaga: Obserwuj kolor błon śluzowych myszy. Fioletowo-niebieski wygląd wskazuje, że eksperymentator zbyt mocno zaciska kark i mysz nie może oddychać.
	<ol>
		<li>Jeśli tak się stanie, natychmiast połóż mysz z powrotem na metalowej klatce i pozwól jej odpocząć przez ~ 2-3 minuty przed ponowną próbą powstrzymania zwierzęcia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zanurz końcówkę gruszki igły do zgłębnika w 4,25% roztworze sacharozy, aby posłużył jako smaczny klej do substancji zubożających warstwę ozonową.</li>
	<li>Naciśnij wstępnie przycięty ODS końcówką gruszki igły do zgłębnika, aby przymocować pasek rozpuszczający się w jamie ustnej.</li>
	<li>Przedstaw ODS myszy, umieszczając ją w pobliżu nozdrzy i/lub pyska, i pozwól zwierzęciu skonsumować folię. Alternatywnie, ODS może być dostarczany miejscowo do jamy ustnej, umieszczając cienki pasek bezpośrednio na języku, aby myszy mogły go połknąć.</li>
	<li>Podczas sesji dawkowania leku należy wymienić igłę w środkowej części, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się infekcji.</li>
</ol>

<ol><li>Brown, A. P., Dinger, N., Levine, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+produced+by+gavage+administration+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress produced by gavage administration in the rat.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 39 (1), 17-21 (2000).</li>
<li>Gonzales, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+method+of+oral+administration+by+peanut+butter+pellet+formulation+results+in+target+engagement+of+BACE1+and+attenuation+of+gavage-induced+stress+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Alternative method of oral administration by peanut butter pellet formulation results in target engagement of BACE1 and attenuation of gavage-induced stress responses in mice.</a> Pharmacol Biochem Behav. 126, 28-35 (2014).</li>
<li>Walker, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+less+stressful+alternative+to+oral+gavage+for+pharmacological+and+toxicological+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A less stressful alternative to oral gavage for pharmacological and toxicological studies in mice.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 260 (1), 65-69 (2012).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+oral+administration+of+drugs+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Protocol+Exchange%3A+Nature+Publishing+Group%22%5BJournal%5D)">Voluntary oral administration of drugs in mice.</a> Protocol Exchange: Nature Publishing Group. , (2011).</li>
<li>Froehlich, J. C., Hausauer, B. J., Federoff, D. L., Fischer, S. M., Rasmussen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prazosin+reduces+alcohol+drinking+throughout+prolonged+treatment+and+blocks+the+initiation+of+drinking+in+rats+selectively+bred+for+high+alcohol+intake%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Prazosin reduces alcohol drinking throughout prolonged treatment and blocks the initiation of drinking in rats selectively bred for high alcohol intake.</a> Alcohol Clin Exp Res. 37 (9), 1552-1560 (2013).</li>
<li>Goldkuhl, R., Carlsson, H. E., Hau, J., Abelson, K. S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+subcutaneous+injection+and+oral+voluntary+ingestion+of+buprenorphine+on+post-operative+serum+corticosterone+levels+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of subcutaneous injection and oral voluntary ingestion of buprenorphine on post-operative serum corticosterone levels in male rats.</a> Eur Surg Res. 41 (3), 272-278 (2008).</li>
<li>Marx, J. O., Vudathala, D., Murphy, L., Rankin, S., Hankenson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+administration+in+the+drinking+water+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Antibiotic administration in the drinking water of mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 53 (3), 301-306 (2014).</li>
<li>Ferguson, S. A., Boctor, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+food+wafers+for+multiple+daily+oral+treatments+in+young+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Use of food wafers for multiple daily oral treatments in young rats.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (3), 292-295 (2009).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Bala, R., Pawar, P., Khanna, S., Arora, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orally+dissolving+strips%3A+A+new+approach+to+oral+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm+Investig%22%5BJournal%5D)">Orally dissolving strips: A new approach to oral drug delivery system.</a> Int J Pharm Investig. 3 (2), 67-76 (2013).</li>
<li>Potashkin, J. A., Blume, S. R., Runkle, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+animal+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">Limitations of animal models of Parkinson's disease.</a> Parkinsons Dis. 2011, (2010).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (67), e2771(2012).</li>
<li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63, 190-201 (2012).</li>
<li>Hoggatt, A. F., Hoggatt, J., Honerlaw, M., Pelus, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spoonful+of+sugar+helps+the+medicine+go+down%3A+a+novel+technique+to+improve+oral+gavage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">A spoonful of sugar helps the medicine go down: a novel technique to improve oral gavage in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 49, 329-334 (2010).</li>
<li>Yardley, M. M., Huynh, N., Rodgers, K. E., Alkana, R. L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+delivery+of+ivermectin+using+a+fast+dissolving+oral+film%3A+implications+for+repurposing+ivermectin+as+a+pharmacotherapy+for+alcohol+use+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Oral delivery of ivermectin using a fast dissolving oral film: implications for repurposing ivermectin as a pharmacotherapy for alcohol use disorder.</a> Alcohol. 49 (6), 553-559 (2015).</li>
</ol>

DD złożyła wniosek o patent jako współwynalazca na tę metodę i jest zainteresowana udostępnieniem tej metody komitetowi naukowemu, aby technika ta była dobrze znana i łatwo dostępna do przewlekłych testów na zwierzętach (Oral Delivery of Drug Actives in Laboratory Animals Using Fast-Dissolving Oral Films (Davies, Co-Inventor, Zgłoszenie patentowe złożone 23.06.2014).

Nie odnotowuje się żadnych innych konkurujących ze sobą interesów finansowych.

Zgłębnik jamy ustnej wiąże się z licznymi powikłaniami, które skutkują potencjalnie zagrożonym gromadzeniem danych i wysokimi wskaźnikami wyczerpania zwierząt1. Tutaj wprowadzono prostą metodę doustnego dostarczania leku, dzięki której myszy (i potencjalnie inne zwierzęta) mogą łatwo i niezawodnie spożywać wybrany lek za pomocą paska rozpuszczającego się w jamie ustnej (ODS). Warto zauważyć, że zastosowanie tej metody stanowi bezpieczną, wygodną i humanitarną alternatywę dla zgłębnika doustnego.
<p class="...

Aby pomyślnie przenieść lek z fazy przedklinicznej (testy na zwierzętach) do rozwoju klinicznego, należy przeprowadzić serię dobrze zdefiniowanych, ostrych i przewlekłych badań farmakologicznych i toksykologicznych na modelach zwierzęcych przy użyciu zamierzonej klinicznej drogi podania (która zwykle jest drogą doustną). Aby osiągnąć ten cel, większość badań przedklinicznych wykorzystuje obecnie procedurę doustnego zgłębnika, biorąc pod uwagę, że metoda ta skutkuje spójnym i precyzyjnym dostarczaniem badanego związku zwierzęciu. Jednak w wielu przypadkach zgłębnik oralny nie jest dobrze tolerowany przez zwierzę, a coraz więcej dowodów sugeruje, że metoda ta wiąże się ze znaczną indukcją stresu1.
Jest to szczególnie prawdziwe w rozwoju metod leczenia przewlekłych chorób trwających całe życie, które wymagają długoterminowych badań przedklinicznych, jak to ma miejsce w przypadku prawie każdego zaburzenia neuropsychiatrycznego, ale nie tylko. Na przykład w transgenicznym mysim modelu choroby Alzheimera zasugerowano niedawno, że sama metoda gavage może zakłócić wyniki eksperymentalne z powodu stresu wywołanego dawkowaniem2. Podobnie, w mysim modelu konsumpcji alkoholu, niepublikowane wyniki z naszego własnego laboratorium wykazały, że powtarzające się wkładanie rurki do zgłębnika - samo w sobie - może znacznie obniżyć poziom spożycia alkoholu do punktu, w którym zagraża integralności paradygmatu eksperymentalnego (patrz Rysunek 1).
Biorąc pod uwagę wyżej wymienione ograniczenia związane z procedurą doustnego podawania przez zgłębnik, włożono znaczne wysiłki w opracowanie nowych metod przedklinicznego doustnego dostarczania leków. Obecne alternatywne podejścia obejmują włączenie badanego związku do mieszanek masła orzechowego3, galaretowatych form4-5, granulek czekolady6, wody pitnej7 i krakersów waflowych8, z których wszystkie są związane z różnym stopniem problemów, w tym niemożnością niezawodnego użycia w modelu zwierzęcym, brakiem przyjęcia badanego związku przez osobę badaną lub indywidualnymi preferencjami dotyczącymi smaku, które sprawiają, że lek jest mniej chętny do spożyciaRozdział 9.
Procedura przedstawiona tutaj opisuje metodę, w której pożądany lek jest wprowadzany do aromatyzowanego, doustnie rozpuszczającego się paska (ODS), który może być łatwo i łatwo użyty do doustnego podawania badanego związku zwierzęciu testowemu. Niniejszy artykuł koncentruje się na wykazaniu skuteczności metody ODS na myszach. Nie ma jednak powodu, aby oczekiwać, że ta sama metoda nie będzie również przydatna u innych gryzoni, a także większych ssaków. Z klinicznego punktu widzenia stosowanie ODS zaczyna być stosowane u pacjentów pediatrycznych i geriatrycznych jako sposób na przezwyciężenie trudności w połykaniu10. Sugerujemy, że ODS może być również z powodzeniem stosowany w przedklinicznych programach odkrywania leków jako bezpieczna, wygodna i humanitarna alternatywa dla doustnego zgłębnika.

<table><tbody><tr><td>Pasek rozpuszczający się w jamie ustnej&nbsp;</td><td>Cure Pharmaceutical</td><td></td><td>Dostępny na specjalne zamówienie. Alternatywnie substancje zubożające warstwę ozonową mogą być również przygotowywane we własnym zakresie.</td></tr><tr><td>Igła do karmienia zgłębnika</td><td>VWR</td><td>7912</td><td>W naszych badaniach na gryzoniach wykorzystaliśmy igłę do karmienia o rozmiarze 18. Ten rozmiar może wymagać dostosowania do stosowania u innych gatunków sutków.</td></tr><tr><td>Sacharoza</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0389-500G</td><td></td></tr></tbody></table>

wykorzystanie paska rozpuszczającego się w jamie ustnej do badań farmakologicznych i toksykologicznych: prosta i humanitarna alternatywa dla zgłębnika doustnego dla zwierząt

Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals

Przed testowaniem nowych terapii na ludziach, wymagane są krótko- i długoterminowe badania przedkliniczne (np. na zwierzętach), powtarzające się testy farmakologiczne i toksykologiczne. W większości przypadków preferowaną drogą podania jest dostawa doustna. W chwili obecnej poród doustny odbywa się głównie za pomocą procedury doustnego zgłębnika, częściowo dlatego, że można osiągnąć spójne i precyzyjne dawkowanie w modelu zwierzęcym. Chociaż ta metoda jest dobrze ugruntowana, wiąże się z komplikacjami, które mogą skutkować wysokim wskaźnikiem wyczerpania zwierząt. W tym celu przedstawiona tutaj procedura opisuje alternatywę dla metody doustnego zgłębnika, w której pożądany lek jest wprowadzany do smacznego, rozpuszczającego się w jamie ustnej paska (ODS), który można po prostu przedstawić zwierzęciu doświadczalnemu, gdzie jest następnie szybko wchłaniany przy minimalnej manipulacji badanym. W niniejszym artykule wykazujemy, że przedkliniczne, doustne podawanie leków metodą ODS stanowi bezpieczną, wygodną i humanitarną alternatywę dla podawania przez zgłębnik doustny.

W poniższych reprezentatywnych badaniach picie społeczne modelowano przy użyciu 24-godzinnego paradygmatu wyboru między dwiema butelkami (TBC), zgodnie z wcześniejszym opisem15. W skrócie, myszy miały dostęp do dwóch butelek z roztworem, z których jedna zawierała wodę, a druga 10% (v/v) roztwór etanolu. Następnie osobniki przypisano do grup traktowania lekiem w taki sposób, aby średnie spożycie 10E (10% etanolu/90% wody v/v) było zbliżone we wszystkich grupach.
<p class="jo...

Poniższy protokół opisuje nowatorską metodę przewlekłego doustnego podawania leków przy użyciu paska rozpuszczającego się w jamie ustnej (ODS) zamiast częściej stosowanej metody doustnego zgłębnika. Wykazaliśmy, że przedkliniczne, doustne podawanie leków metodą ODS stanowi bezpieczną, wygodną i humanitarną alternatywę dla doustnego podawania przez zgłębnik.

Wykorzystanie paska rozpuszczającego się w jamie ustnej do badań farmakologicznych i toksykologicznych: prosta i humanitarna alternatywa dla zgłębnika doustnego dla zwierząt

Prior to testing novel therapeutics in humans, short and long term preclinical (i.e., animal), repetitive pharmacological and toxicological testing is ...

Ogólnym celem tej procedury jest wykorzystanie rozpuszczalnego w jamie ustnej polimeru bioadhezyjnego jako bezpiecznej i humanitarnej metody przedklinicznego podawania leków drogą doustną. Dzięki tej procedurze wybrany lek można włączyć w skład smakowego, rozpuszczalnego w jamie ustnej paska do doustnej administracji związku testowego zwierzęciu doświadczalnemu. Główną zaletą tej techniki jest możliwość jej zastosowania w przypadkach, gdy zgłębnikowanie nie jest dobrze tolerowane.Aby zmniejszyć stres podczas następujących procedur podawania leków, należy pozwolić myszom na aklimatyzację do warunków chowu i techniki obchodzenia się ze zwierzętami stosowanej w eksperymencie. Dla każdej myszy należy określić masę przedeksperymentalną, chwytając zwierzę najpierw za środek ogona i delikatnie wyjmując je z klatki. Następnie należy niezwłocznie umieścić zwierzę w łódzce wagowej na wadze laboratoryjnej, utrzymując pewny chwyt za przyśrodkową część ogona, aby uniknąć urazu typu „degloving” (odarcia skóry), i zapisać masę ciała zwierzęcia.Zapisz wagę pokarmu przez zalecane dwa kolejne dni, aby ustalić bazowe spożycie pokarmu każdego zwierzęcia również w okresie habituacji. Po aklimatyzacji zwierząt do środowiska przenieś je do pomieszczenia, w którym będą odbywać się kolejne eksperymenty. Przed rozpoczęciem eksperymentu wysterylizuj w autoklawie dwie stalowe igły do zgłębnika na każdą grupę oraz jedną dodatkową igłę jako zapasową.Następnie, używając dostępnego w handlu dziurkacza o średnicy 1/4 cala, wytnij z prostokątnego paska testowego paski rozpuszczalne w jamie ustnej (ODS) o średnicy 0,5 cm dla każdego zwierzęcia. W dniu eksperymentu zmierz masę zwierząt w sposób zaprezentowany przed chwilą, a następnie umieść pierwszą mysz na metalowej kratce pokrywy klatki. Odciągnij ogon, trzymając go kciukiem, palcem wskazującym i środkowym dominującej ręki.Mysz uchwyci górę klatki i wyciągnie grzbiet. Chwyć skórę na karku kciukiem, palcem wskazującym i trzecim palcem niedominującej dłoni, aby wygodnie i pewnie unieruchomić zwierzę, a następnie ustaw je w pozycji pionowej. Zwróć uwagę na kolor błon śluzowych.Różowa barwa wskazuje, że mysz jest stabilnie unieruchomiona. Teraz należy zanurzyć końcówkę gruszki jednej z igieł do zgłębnikowania w świeżo przygotowanym 4,25% roztworze sacharozy, który będzie służył jako substancja adhezyjna dla ODS. Następnie należy docisnąć końcówką gruszki pasek ODS, aby przymocować go do czubka igły, a następnie umieścić pasek w pobliżu nozdrzy i pyska, umożliwiając zwierzęciu spożycie filmu.Alternatywnie pasek można umieścić bezpośrednio na języku, aby mysz go połknęła. Wymień igłę w połowie grupy podczas sesji podawania leku, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się infekcji. Tutaj przedstawiono efekty podania iwermektyny drogą zgłębnikową na preferencje w piciu.Jak zaobserwowano, iwermektyna znacznie redukuje spożycie 10% etanolu w trakcie badania w porównaniu z grupą placebo. Jednak w porównaniu z grupą kontrolną wartości spożycia etanolu w grupie placebo są zbyt niskie, przez co mogą one nieprawidłowo modelować zachowania związane z piciem społecznym. Gdy ten sam eksperyment jest przeprowadzany z wykorzystaniem systemu dostarczania ODS, nie stwierdza się istotnej różnicy w spożyciu etanolu pomiędzy myszami z grupy kontrolnej a myszami traktowanymi placebo, co wskazuje, że grupa placebo ODS stanowi właściwą kontrolę, w odniesieniu do której można przeprowadzić porównanie z grupą otrzymującą iwermektynę.W rzeczywistości, w odniesieniu do tych kontroli, iwerermektyna znacząco i konsekwentnie redukuje spożycie 10% etanolu przez zwierzęta. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo mieć dobrą wiedzę na temat wykorzystania rozpuszczalnych w jamie ustnej pasków jako bezpiecznej i humanitarnej metody doustnego podawania leków.

utilizing-an-orally-dissolving-strip-for-pharmacological

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Bezpieczna i humanitarna praca z gryzoniami laboratoryjnymi wymaga podstawowych kompetencji w zakresie metod chwytania i unieruchamiania. Niniejszy artykuł przedstawi podstawowe zasady niezbędne do bezpiecznego obchodzenia się z myszami i szczurami oraz efektywnego podawania im związków chemicznych.

Manualne unieruchamianie i powszechne drogi podawania związków u myszy i szczurów

Obecne badanie ocenia nowatorską procedurę oceny wzmacniających efektów smacznych roztworów u szczurów laboratoryjnych: samodzielne podawanie wewnątrzustne. W tym celu mierzono reakcję instrumentalną (tj. naciskanie dźwignią) na wewnątrzustne wlewy słodkich roztworów o różnych stężeniach na podstawie ciągłych i progresywnych harmonogramów współczynników wzmocnienia.

Nowatorska procedura oceny wzmacniających właściwości degustatorów u szczurów laboratoryjnych: instrumentalne samodzielne podawanie wewnątrzustne

Podczas opracowywania leków do dostarczania do płuc, konieczne jest przeprowadzenie oceny farmakokinetyki i skuteczności na modelu zwierzęcym. Przedstawiamy metodę budowy jednorazowego systemu dyspersji aerozolowej z gotowych komponentów, które mogą być wykorzystywane do podawania gryzoniom dopłucnego suchego aerozolu w proszku.

Dozowniki jednorazowego użytku do wdmuchiwania do płuc środków leczniczych małym zwierzętom

Ogólnym celem tej procedury jest opisanie metody samodzielnego podawania leków, które mogą być używane w mysich modelach żywienia i otyłości.

Samodzielne podawanie leków w mysich modelach żywienia i otyłości

Tutaj opisujemy podawanie leków za pomocą mikropipet (MDA) jako alternatywną metodę do doustnego podawania leków, która zachęca zwierzę badawcze do łatwego przyjmowania leków przy minimalnym stresie i dyskomforcie.

Stosowanie podawania leków pod kontrolą mikropipet jako metody alternatywnej dla doustnego podawania przez zgłębnik w modelach gryzoni

Doustne podanie za pomocą gavage u gryzoni może wywoływać niepokój związany z unieruchamianiem. Badaliśmy podawanie ekstraktu konopnego wzbogaconym CBD w formie oromukozalnej/policzkowej, gdzie szczury były traktowane przez 15 dni ekstraktem w dawce 3 mg/kg/dzień. Leczenie podawano doustnie za pomocą mikropipety, przy użyciu techniki dotyku czułego do obsługi zwierząt.

Oromucosal jako alternatywna metoda podawania produktów konopnych u gryzoni

W tym artykule opisano: (1) dostarczanie cząsteczek testowych do noworodków już od DOL 6; oraz (2) ocenę ex vivo funkcji bariery nabłonkowej okrężnicy w biopsjach od DOL 10 do młodych odstawianych od odstawienia (DOL 20) poprzez ocenę przepuszczalności parakomórkowej i transkomórkowej za pomocą komór Ussinga.

Oralna gavacja u noworodkowych myszy i funkcjonalna ocena integralności bariery jelitowej za pomocą komór

Niniejsze badanie przedstawia metodę karmienia opartą na żelatynie, która umożliwia precyzyjne, nieinwazyjne podawanie leków doustnych u dorosłych rybek zebra z uwzględnieniem masy ciała. Protokół wykazuje niezawodną akceptację pokarmu i, jako dowód zasady, pomyślne podanie MK-801, które zaowocowało oczekiwanymi efektami behawioralnymi.

Proste i precyzyjne podejście oparte na karmieniu doustnego podawania leków rybom

Ten protokół opisuje platformę przesiewową wykorzystującą świeżo izolowane śluzówki błony śluzowej tkanki nabłonkowej policzka świń do oceny permeacji peptydów. Metoda integruje permeację GLP-1RA w obecności zwiększacza permeacji z roztworów, komór Hilltop oraz folii w komórkach dyfuzyjnych Franza i 3D-drukowanych wkładkach, wraz z histologiczną oceną śluzówki.

Zstandardyzowany ex vivo model świńskiej błony śluzowej jamy ustnej do oceny przepływów peptydów

Przedstawiono kompleksowy przegląd technik wykorzystywanych w tworzeniu mysiego modelu raka jamy ustnej oraz ilościowego monitorowania inwazji nowotworowej w obrębie języka za pomocą mikroskopii wielofotonowej komórek znakowanych. System ten może służyć jako użyteczna platforma do oceny molekularnej oraz skuteczności leków w przypadku związków przeciwinwazyjnych.

Obrazowanie wielofotonowe inwazji komórek nowotworowych w ortotopowym modelu mysim dla raka płaskonabłonkowego jamy ustnej

Poznaj metodę podawania leków za pomocą pasków rozpuszczających się w jamie ustnej jako humanitarną alternatywę dla zgłębnika doustnego u myszy. Ta technika zmniejsza stres zwierząt w badaniach przedklinicznych.

Wykorzystanie paska rozpuszczającego się w jamie ustnej do badań farmakologicznych i toksykologicznych: prosta i humanitarna alternatywa dla zgłębnika doustnego dla zwierząt (Wideo) | JoVE Journal

Wykorzystanie paska rozpuszczającego się w jamie ustnej do badań farmakologicznych i toksykologicznych: prosta i humanitarna alternatywa dla zgłębnika doustnego dla zwierząt

Przeglądaj więcej filmów