Zaporodowe wkraplanie gruczołu podżuchwowego i miejscowe frakcjonowane napromienianie w szczurzym modelu niedoczynności śliny

Niedoczynność gruczołów ślinowych, główny niekorzystny efekt radioterapii głowy i szyi obniża jakość życia pacjenta. Wykazanie skuteczności nowych terapii na modelach zwierzęcych jest warunkiem wstępnym przed przejściem klinicznym. Protokół ten opisuje podawanie wsteczne i miejscowe napromienianie gruczołów podżuchwowych szczura.

Ogólnym celem tej procedury jest retrodukcyjne podanie leków terapeutycznych do gruczołów podżuchwowych w celu oceny ich skuteczności w zwalczaniu dysfunkcji śliny. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie zaburzeń gruczołów ślinowych, takie jak to, jakie terapie mogą chronić przed promieniowaniem lub przywracać jego funkcję. Główną zaletą tej techniki jest to, że gruczoły ślinowe mogą być leczone miejscowo, zmniejszając w ten sposób ryzyko skutków ubocznych niezwiązanych z tkankami docelowymi.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby początkujące w tej metodzie będą miały trudności, ponieważ otwory kanałów nie są widoczne, a kaniula musi być manipulowana na ślepo w kanale. Przed rozpoczęciem procedury przetnij dziesięciocentymetrową rurkę z polietylenu PE 10 za pomocą skalpala, a następnie chwyć oba końce rurki między palcem wskazującym a kciukiem każdej ręki i podgrzej środkową część rurki nad delikatnym płomieniem, ostrożnie ciągnąc obie strony, aby rozciągnąć zmiękczoną rurkę do podwojenia jej długości. Następnie użyj skalpala, aby przeciąć rurkę pośrodku pod kątem 45 stopni, aby uzyskać dwie kaniule, każda ze zwężającym się końcem.

Rozciągnij niestożkowy koniec jednej z kaniuli na igle o rozmiarze 29 strzykawki insulinowej o pojemności 0,5 cm3. Następnie wyjmij kaniulę i wciągnij do strzykawki 220 mikrolitrów roztworu soli fizjologicznej. Postukać w trzon strzykawki, aby usunąć wszelkie pęcherzyki powietrza i ponownie założyć kaniulę na igłę.

Wcisnąć tłok, aby usunąć powietrze z kaniuli i zapewnić swobodny przepływ roztworu przez rurkę i dostosować objętość soli fizjologicznej w strzykawce do 200 mikrolitrów. Teraz potwierdź odpowiedni poziom uspokojenia szczura poprzez uszczypnięcie palca u nogi i wyczuwalny odruch, a następnie nałóż lubrykant do oczu na odsłonięte rogówki. Umieść amimal na specjalnie zaprojektowanej platformie przytrzymującej i zaczep górne zęby siekaczy o pręt poprzeczny.

Owiń gumkę wokół dolnych siekaczy, aby pociągnąć szczękę w dół. Zakotwiczenie go do platformy. Następnie przełóż sterylny szew przez język i podnieś go, aby podnieść dno jamy ustnej.

Następnie użyj hemostatu, aby zacisnąć szwy i przeciągnąć hemostat przez poprzeczny pręt. Następnie użyj specjalnie zbudowanego rozpieracza policzków, aby rozszerzyć policzki i mikroskopu rozwarstwiającego, aby zlokalizować brodawki podjęzykowe na dnie jamy ustnej. Za pomocą delikatnych szczęsników chwyć zwężający się koniec wstępnie uformowanej rurki PE 10 i delikatnie manipuluj końcówką kaniuli w otworze przewodowym na brodawce podjęzykowej.

Następnie wkręć kaniulę na trzy do pięciu milimetrów do kanału, upewniając się, że kaniula przechodzi przez kanał bez przeszkód. Przed wkropleniem soli fizjologicznej wstrzyknąć atrofinę podskórnie w kark szyi zwierzęcia. Dziesięć minut po wstrzyknięciu przymocuj kaniulę do otworu kanału za pomocą kropli cyjanoakrylanu.

Po wyschnięciu kleju powoli wciskaj tłok strzykawki z prędkością 50 mikrolitrów na minutę, aż do wkroplenia do gruczołu 200 mikrolitrów roztworu soli fizjologicznej. Jeśli podczas wkraplania wystąpi ciśnienie wsteczne, zatrzymaj się, a następnie wyjmij rurkę, a następnie rekanalizuj za pomocą nowej kaniuli. Następnie zacisnąć rurkę za pomocą hemostatu i ostrożnie wyjąć strzykawkę.

Pozostaw rurkę w kanale na 30 do 60 minut, aż zwierzę odzyska przytomność. Następnie usuń szew przytrzymujący język i przenieś zwierzę do osobnej klatki pod lampą grzewczą, aż w pełni wyzdrowieje. Aby miejscowo zastosować frakcjonowane napromieniowanie do gruczołu podżuchwowego.

Ustawić trzycentymetrową szczelinę pola promieniowania, która obejmuje obszar od dolnej granicy manable do górnej części mostka znieczulonego szczura w pozycji leżącej. Po umieszczeniu jednocentymetrowego bolusa równoważnego tkankowo nad regionem. Dostosuj odległość między źródłem promieniowania a górną częścią bolusa do 100 centymetrów za pomocą wiązki fotonów o mocy sześciu megawoltów na akceleratorze liniowym.

Napromieniuj zwierzę farbą 2,5 greja, aby uzyskać odpowiednią długość ekspozycji. Pod koniec okresu ekspozycji na promieniowanie należy ogrzać zwierzę podczas jego rekonwalescencji, jak właśnie pokazano. Podczas wstępnych eksperymentów potwierdzono prawidłowe umieszczenie kaniuli poprzez infuzję gruczołu roztworem hematoksyliny lub błękitu tryplana i ocenę barwienia gruczołu u zwierząt poddanych eutanazji.

Badano gruczoły podżuchwowe, ponieważ mogą być selektywnie napromieniane promieniowaniem kolumnowym na szyję, unikając poważnych skutków doustnych poza celem, które mogą mieć wpływ na zdrowie zwierząt i wyniki eksperymentalne. Analiza wpływu tego schematu frakcjonowanego promieniowania na przepływ śliny po ośmiu tygodniach od napromieniowania pokazuje, że dzienna ekspozycja na 2,5 szarego przyrostu gwałtownie zmniejsza przepływ śliny. W ciągu 10-krotnego zmniejszenia wydzielania śliny u zwierząt napromienianych w porównaniu ze zwierzętami nienapromienionymi.

Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w ciągu kilku minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Podczas wykonywania tego zabiegu należy pamiętać o zapewnieniu swobodnego przejścia kaniuli do przewodu nagrobnego gruczołu ślinowego. Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się zaburzeniami gruczołów ślinowych do zbadania metod leczenia promieniowania i autoimmunologicznych schorzeń gruczołów ślinowych.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać instalację retrodukcyjną w gruczole podżuchwowym szczura i miejscowo napromieniować gruczoły w celu oceny skuteczności terapeutycznej poprawy toksyczności promieniowania. Nie zapominaj, że praca z terapiami genowymi i białkowymi może być niezwykle niebezpieczna, a środki ostrożności, takie jak unikanie ukłuć igłami i minimalizowanie narażenia skóry na czynniki biologiczne, powinny być podejmowane podczas wykonywania tej procedury.