Name: Mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Poznaj metodę indukcji uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit u myszy poprzez tymczasowe okluzję tętnicy krezkowej górnej. Technika ta umożliwia badanie mechanizmów urazu i regeneracji tkanek jelitowych w dziedzinie gastroenterologii i immunologii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Rosyjską Fundację Naukową, grant nr 14-50-00060 i LLC RUSCHEMBIO. Praca ta była również wspierana przez grant 294083 Fundacji Leśniowskiego-Crohna i Zapalenia Jelita Grubego w Ameryce (dla AVT) oraz przez grant NIH RO1 DK47700 (dla C.J.).

Badania na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Narodowego Instytutu Zdrowia i zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Instytutu Trudeau. Do badania użyto 8-12 tygodniowych myszy C57BL/6.
1. Przygotowanie do operacji
<ol>
	<li>Przygotuj i wysterylizuj narzędzia chirurgiczne.</li>
	<li>Przygotuj system znieczulenia na bazie izofluranu ze stożkiem na nos i podgrzewaną podkładką. Upewnij się, że podgrzewana podkładka nie jest przegrzana (<39 ºC).</li>
	<li>Upewnij się, że kanister z izofluranem jest prawidłowo ustawiony, aby otwory wylotowe na dnie kanistra nie były w żaden sposób zablokowane ani zasłonięte. Przed zabiegiem zważ kanister z gazem i udokumentuj wagę na kanistrze. Wyrzuć kanister, gdy waga kanistra przekracza 50 g skumulowanej wagi (~12 godzin).</li>
</ol>
2. Znieczulenie
<ol>
	<li>Znieczulić mysz 3% izofluranem w komorze indukcyjnej (1 l/minO2).
	<ol>
		<li>Oceń głębokość znieczulenia na podstawie niemożności utrzymania pozycji pionowej, utraty celowych dobrowolnych ruchów, utraty odruchu mrugania, rozluźnienia mięśni i utraty odpowiedzi na stymulację odruchową (szczypanie palca u nogi lub ogona przy silnym nacisku).</li>
		<li>Oceń częstość i wzorzec oddychania, obserwując ruchy ściany klatki piersiowej i brzucha. W optymalnym znieczuleniu częstość oddechów powinna wynosić ~ 55-65 oddechów na minutę.</li>
		<li>Wyjmij mysz z komory indukcyjnej i szybko ogol obszar brzucha myszy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aby zapobiec wysuszeniu rogówki, umieść w oczach mdłą maść okulistyczną.</li>
	<li>Umieść mysz na podgrzewanej podkładce i podłącz ją za pomocą stożka nosowego do systemu znieczulającego. Upewnij się, że lateksowa membrana stożka nosa dobrze przylega do głowy myszy i nie ma wycieku izofluranu.</li>
	<li>Należy zmniejszyć dawkę izofluranu do 1,5% i wstrzyknąć podskórnie buprenorfinę (0,1 mg/kg) i ketaminę (10 mg/kg), aby zapobiec narastaniu kaskady bólu.</li>
	<li>Przetrzyj skórę miejsca operacji sterylnym wacikiem nasączonym roztworem chirurgicznym Betadine, a następnie 70% etanolem.</li>
</ol>
3. Chirurgia
<ol>
	<li>Wykonaj laparotomię 3-5 cm w linii środkowej za pomocą nożyczek operacyjnych. Przykryj obszar operacyjny sterylną, nieprzywierającą podkładką zwilżoną solą fizjologiczną. Odizoluj jelito ślepe i jelito kręte i odsłoń tętnicę krezkową górną za pomocą wacików zwilżonych solą fizjologiczną.</li>
	<li>Aby ułatwić zakładanie klipsów, wykonaj małe nacięcia w krezce otaczającej tętnicę krezkową górną za pomocą cienkich nożyczek do tęczówki. Aby to zrobić, delikatnie podnieś jelito za pomocą kleszczy opatrunkowych i przetnij krezkę po obu stronach tętnicy krezkowej górnej w żądanej pozycji klipsa (ryc. 1A). Następnie dodaj kilka kropli sterylnej soli fizjologicznej w obszar żądanej pozycji klipsa przed nałożeniem clips. 
	Uwaga: Aby wykonać operację pozorowaną, postępuj zgodnie z procedurą chirurgiczną do kroku 3.2. Nie stosuj klisów. Zamiast tego utrzymuj tkankę wilgotną przez dodanie ciepłej soli fizjologicznej, jak opisano w ppkt 3.6 przez 1 godzinę. Następnie przejdź do kroku 4.1,</li>
	<li>Zatkaj gałęzie pierwszego rzędu tętnicy krezkowej górnej za pomocą klipsów mikronaczyniowych (siła 70 g) za pomocą aplikatora klipsowego, aby utworzyć 5-7 cm obszar niedokrwiennego jelita krętego przylegający do jelita ślepego (ryc. 1B). Chociaż położenie naczyń jest konserwatywne, mogą występować niewielkie różnice między myszami (patrz przykłady na rycinie 1). Dlatego zwykle wymagane są 2 lub 3 klipsy (patrz lokalizacja zacisków na rysunku 1A, D, E, czarne strzałki). 
	Uwaga: Używaj wysokiej jakości klipsów do naczyń. Klipsy wysokociśnieniowe mogą uszkodzić naczynia krwionośne i uniemożliwić regenerację, podczas gdy klipsy niskociśnieniowe (<30 g) mogą nie zablokować całkowicie przepływu krwi.</li>
	<li>Zablokuj przepływ krwi obocznej przez jelito za pomocą dwóch klipsów mikronaczyniowych w poprzek naczyń (siła 40 g), wyznaczając obszar niedokrwionego jelita (ryc. 1). Niedrożność naczyń pobocznych jest wymagana, aby zapobiec dopływowi krwi z sąsiednich naczyń krwionośnych (patrz lokalizacja klipsów na rysunku 1A, D, E, zielone strzałki).</li>
	<li>Opcjonalnie: Dodaj roztwór heparyny (6 jednostek USP/ml), aby zapobiec krzepnięciu krwi. Kroplami dodawać 0,5 ml roztworu heparyny do izolowanego jelita.</li>
	<li>Zwilż sterylną, nieprzywierającą podkładkę, delikatne chusteczki z solą fizjologiczną podgrzaną do temperatury 37 °C i nałóż na obszar operacyjny. Upewnij się, że chusteczki pozostają mokre podczas całej procedury.</li>
	<li>Utrzymuj niedokrwienie przez 60 minut, stosując 1-1,5% znieczulenia izofluranem przez cały czas. Jeśli zabieg niedokrwienia zostanie wykonany prawidłowo, obszar niedokrwienny zmieni kolor na winnoczerwony w ciągu około 30 minut. Należy pamiętać, że naczynia krwionośne dystalnie do pozycji zacisku są powiększone podczas niedokrwienia (ryc. 1, prawe panele), co wskazuje na udaną okluzję.</li>
	<li>Uważnie monitoruj mysz w fazie niedokrwienia. Kontynuuj nakładanie roztworu soli fizjologicznej na nieprzylegającą podkładkę pokrywającą miejsce operacji.</li>
	<li>Zaznacz krawędzie obszaru niedokrwiennego, pipetując 20 μl hematoksyliny 3 Gilla na tkankę, aby ułatwić pobranie niedokrwionej tkanki i sąsiedniej zdrowej tkanki od tej samej myszy w celu porównania (ryc. 1E, prawy panel).</li>
</ol>
4. Etap reperfuzji
<ol>
	<li>Pod koniec niedokrwienia dodaj kilka kropel soli fizjologicznej na obszar klipsa i delikatnie usuń klipsy mikronaczyniowe za pomocą aplikatora do klipsów. Następnie delikatnie wepchnij jelito z powrotem do jamy brzusznej za pomocą zwilżonych solą fizjologiczną bawełnianych końcówek. Usuń nieprzylegającą podkładkę i zamknij ścianę brzucha i skórę za pomocą klipsów ze stali nierdzewnej o średnicy 9 mm. Jeśli reperfuzja jest wykonywana dłużej niż 3 godziny, użyj wchłanialnego szwu vicryl, aby zamknąć ścianę brzucha przed założeniem klipsów na ranę na skórze.</li>
	<li>Trzymaj myszy w ogrzewanej, czystej klatce przez żądany czas (30 min, 60 min, 120 min lub 180 min) dla fazy reperfuzji.</li>
	<li>Sprawdzaj zwierzęta co najmniej co 30 minut, aby upewnić się, że są stabilne.</li>
</ol>
5. Sekcja zwłok i pobieranie jelita cienkiego
<ol>
	<li>Poddaj myszy eutanazji przez przedawkowanie CO2, a następnie zwichnięcie szyjki macicy w pożądanym czasie po reperfuzji.</li>
	<li>Otwórz jamę brzuszną i zbierz niedokrwioną tkankę jelitową do dalszej analizy. Zbierz zdrową, normalną tkankę przylegającą do uszkodzonej tkanki jako kontrolę wewnętrzną, aby uwzględnić wszelkie ogólnoustrojowe reakcje na uraz. 
	Uwaga: Ta kontrola jest bardziej odpowiednia niż myszy kontrolne operowane pozorowane, ponieważ myszy pozorowane nie przechodzą reakcji ogólnoustrojowej na uraz wywołany podczerwienią.</li>
	<li>Treść jelitową wypłukać za pomocą strzykawki o pojemności 30 ml z dołączoną igłębnikiem wypełnioną solą fizjologiczną, a następnie przeciąć jelito wzdłużnie. Jeśli do analizy ekspresji genów potrzebna jest próbka jelita, należy wyciąć fragment o średnicy 1,5 mm wzdłużnie, a pozostały fragment wykorzystać do analizy histologicznej.</li>
	<li>Do analizy histologicznej przygotuj szwajcarską bułkę za pomocą kleszczy, aby zwinąć jelito.</li>
	<li>Aby utrzymać zwiniętą formę, umieść kawałki jelita między podkładkami piankowymi do biopsji w kasetach na tkanki (ryc. 2). Umieść kasety w 10% buforowanej formalinie.</li>
	<li>Utrwal tkankę w formalinie na co najmniej 24 godziny. Zastąp formalinę 70% etanolem na dodatkowe 24 godziny. Przechowuj tkankę w 70% etanolu na czas nieokreślony w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Zanurz w parafinie, wytnij skrawki 5 μm i zabarwij hematoksyliną i eozyną przy użyciu standardowego protokołu (ryc. 3).</li>
</ol>
6. Punktacja
<ol>
	<li>Oceń mysie uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne, jak podsumowano w tabeli 2. Wybierz odpowiednią metodę punktacji.</li>
	<li>Opcjonalnie: Podziel pole widzenia na cztery sekcje, ponieważ stopień urazu jest różny w całym przekroju.</li>
	<li>Oblicz średnią ocenę z każdej sekcji na podstawie wyników uzyskanych w ciemno.</li>
	<li>Porównaj stopień uszkodzonej tkanki między przypadkami i kontrolą, a także z nieuszkodzoną tkanką za pomocą testu Kruskala-Wallisa, a następnie testu wielokrotnych porównań Dunna.</li>
</ol>

<ol><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia+and+reperfusion--from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation.</a> Nat Med. 17, 1391-1401 (2011).</li>
<li>Lenaerts, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+in+intestinal+ischemia-reperfusion+injury%3A+implications+for+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">New insights in intestinal ischemia-reperfusion injury: implications for intestinal transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18, 298-303 (2013).</li>
<li>Yasuhara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+mesenteric+ischemia%3A+the+challenge+of+gastroenterology%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Today%22%5BJournal%5D)">Acute mesenteric ischemia: the challenge of gastroenterology.</a> Surg Today. 35, 185-195 (2005).</li>
<li>Perez-Chanona, E., Muhlbauer, M., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiota+protects+against+ischemia%2Freperfusion-induced+intestinal+injury+through+nucleotide-binding+oligomerization+domain-containing+protein+2+%28NOD2%29+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The microbiota protects against ischemia/reperfusion-induced intestinal injury through nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 2 (NOD2) signaling.</a> Am J Pathol. 184, 2965-2975 (2014).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+the+relationships+among+the+formation+of+reactive+oxygen+species%2C+cell+membrane+instability+and+innate+autoimmunity+in+intestinal+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Delineating the relationships among the formation of reactive oxygen species, cell membrane instability and innate autoimmunity in intestinal reperfusion injury.</a> Mol Immunol. 58, 151-159 (2014).</li>
<li>Yoshiya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+gut+commensal+bacteria+attenuates+intestinal+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Depletion of gut commensal bacteria attenuates intestinal ischemia/reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 301, G1020-G1030 (2011).</li>
<li>Wu, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+receptor+for+complement+component+C3a+mediates+protection+from+intestinal+ischemia-reperfusion+injuries+by+inhibiting+neutrophil+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The receptor for complement component C3a mediates protection from intestinal ischemia-reperfusion injuries by inhibiting neutrophil mobilization.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 9439-9444 (2013).</li>
<li>Muhlbauer, M., Perez-Chanona, E., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell-specific+MyD88+signaling+mediates+ischemia%2Freperfusion-induced+intestinal+injury+independent+of+microbial+status%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell-specific MyD88 signaling mediates ischemia/reperfusion-induced intestinal injury independent of microbial status.</a> Inflamm Bowel Dis. 19, 2857-2866 (2013).</li>
<li>Gonzalez, L. M., Moeser, A. J., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemia-reperfusion-induced+intestinal+injury%3A+progress+and+promise+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemia-reperfusion-induced intestinal injury: progress and promise for translational research.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 308, G63-G75 (2015).</li>
<li>Megison, S. M., Horton, J. W., Chao, H., Walker, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+for+intestinal+ischemia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A new model for intestinal ischemia in the rat.</a> J Surg Res. 49, 168-173 (1990).</li>
<li>Goldsmith, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cell-derived+mu-opioid+signaling+protects+against+ischemia+reperfusion+injury+through+PI3K+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cell-derived mu-opioid signaling protects against ischemia reperfusion injury through PI3K signaling.</a> Am J Pathol. 182, 776-785 (2013).</li>
<li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+synthase+kinase-3beta+inhibition+attenuates+the+development+of+ischaemia%2Freperfusion+injury+of+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Glycogen synthase kinase-3beta inhibition attenuates the development of ischaemia/reperfusion injury of the gut.</a> Intensive Care Med. 33, 880-893 (2007).</li>
<li>Farber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+specific+inhibitor+of+apoptosis+decreases+tissue+injury+after+intestinal+ischemia-reperfusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">A specific inhibitor of apoptosis decreases tissue injury after intestinal ischemia-reperfusion in mice.</a> J Vasc Surg. 30, 752-760 (1999).</li>
<li>Ben, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4+mediates+lung+injury+and+inflammation+in+intestinal+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">TLR4 mediates lung injury and inflammation in intestinal ischemia-reperfusion.</a> J Surg Res. 174, 326-333 (2012).</li>
<li>Watson, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+ischemia%2Freperfusion+injury+triggers+activation+of+innate+toll-like+receptor+4+and+adaptive+chemokine+programs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Intestinal ischemia/reperfusion injury triggers activation of innate toll-like receptor 4 and adaptive chemokine programs.</a> Transplant Proc. 40, 3339-3341 (2008).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+MyD88+signaling+pathway+inhibits+ischemia-reperfusion+injury+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Activation of the MyD88 signaling pathway inhibits ischemia-reperfusion injury in the small intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G324-G334 (2012).</li>
<li>Murayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNK+%28c-Jun+NH2+terminal+kinase%29+and+p38+during+ischemia+reperfusion+injury+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">JNK (c-Jun NH2 terminal kinase) and p38 during ischemia reperfusion injury in the small intestine.</a> Transplantation. 81, 1325-1330 (2006).</li>
<li>Park, P. O., Haglund, U., Bulkley, G. B., Falt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sequence+of+development+of+intestinal+tissue+injury+after+strangulation+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">The sequence of development of intestinal tissue injury after strangulation ischemia and reperfusion.</a> Surgery. 107, 574-580 (1990).</li>
<li>Jilling, T., Lu, J., Jackson, M., Caplan, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+apoptosis+initiates+gross+bowel+necrosis+in+an+experimental+rat+model+of+neonatal+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial apoptosis initiates gross bowel necrosis in an experimental rat model of neonatal necrotizing enterocolitis.</a> Pediatr Res. 55, 622-629 (2004).</li>
<li>Aprahamian, C. J., Lorenz, R. G., Harmon, C. M., Dimmit, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+2+is+protective+of+ischemia-reperfusion-mediated+small-bowel+injury+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 2 is protective of ischemia-reperfusion-mediated small-bowel injury in a murine model.</a> Pediatr Crit Care Med. 9, 105-109 (2008).</li>
<li>Tatum, P. M., Harmon, C. M., Lorenz, R. G., Dimmitt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+is+protective+against+neonatal+murine+ischemia-reperfusion+intestinal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 is protective against neonatal murine ischemia-reperfusion intestinal injury.</a> J Pediatr Surg. 45, 1246-1255 (2010).</li>
<li>Fleming, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-phospholipid+antibodies+restore+mesenteric+ischemia%2Freperfusion-induced+injury+in+complement+receptor+2%2Fcomplement+receptor+1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-phospholipid antibodies restore mesenteric ischemia/reperfusion-induced injury in complement receptor 2/complement receptor 1-deficient mice.</a> J. Immunol. 173, 7055-7061 (2004).</li>
<li>Fleming, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+deficient+in+complement+receptors+1+and+2+lack+a+tissue+injury-inducing+subset+of+the+natural+antibody+repertoire%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mice deficient in complement receptors 1 and 2 lack a tissue injury-inducing subset of the natural antibody repertoire.</a> J. Immunol. 169, 2126-2133 (2002).</li>
<li>Lapchak, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+orchestrate+remote+tissue+damage+after+mesenteric+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Platelets orchestrate remote tissue damage after mesenteric ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G888-G897 (2012).</li>
<li>Rehrig, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+inhibitor%2C+complement+receptor+1-related+gene%2Fprotein+y-Ig+attenuates+intestinal+damage+after+the+onset+of+mesenteric+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Complement inhibitor, complement receptor 1-related gene/protein y-Ig attenuates intestinal damage after the onset of mesenteric ischemia/reperfusion injury in mice.</a> J. Immunol. 167, 5921-5927 (2001).</li>
<li>Hoffman, S. M., Wang, H., Pope, M. R., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+infection+alters+MyD88+and+Trif+signalling+in+response+to+intestinal+ischaemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Helicobacter infection alters MyD88 and Trif signalling in response to intestinal ischaemia-reperfusion.</a> Exp Physiol. 96, 104-113 (2011).</li>
<li>Moses, T., Wagner, L., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4-mediated+Cox-2+expression+increases+intestinal+ischemia%2Freperfusion-induced+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">TLR4-mediated Cox-2 expression increases intestinal ischemia/reperfusion-induced damage.</a> J Leukoc Biol. 86, 971-980 (2009).</li>
<li>Feinman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIF-1+mediates+pathogenic+inflammatory+responses+to+intestinal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">HIF-1 mediates pathogenic inflammatory responses to intestinal ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 299, G833-G843 (2010).</li>
<li>Lapchak, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelet+factor+4+in+local+and+remote+tissue+damage+in+a+mouse+model+of+mesenteric+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">The role of platelet factor 4 in local and remote tissue damage in a mouse model of mesenteric ischemia/reperfusion injury.</a> PloS one. 7, e39934(2012).</li>
<li>Wen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+postconditioning+during+reperfusion+attenuates+intestinal+injury+and+mucosal+cell+apoptosis+by+inhibiting+JAK%2FSTAT+signaling+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Ischemic postconditioning during reperfusion attenuates intestinal injury and mucosal cell apoptosis by inhibiting JAK/STAT signaling activation.</a> Shock. 38, 411-419 (2012).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+variations+of+the+ileal+microbiota+in+intestinal+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Temporal variations of the ileal microbiota in intestinal ischemia and reperfusion.</a> Shock. 39, 96-103 (2013).</li>
<li>Zou, L., Attuwaybi, B., Kone, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+NF-kappa+B+inhibition+on+mesenteric+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of NF-kappa B inhibition on mesenteric ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284, G713-G721 (2003).</li>
<li>Hassoun, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-melanocyte-stimulating+hormone+protects+against+mesenteric+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alpha-melanocyte-stimulating hormone protects against mesenteric ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 282, G1059-G1068 (2002).</li>
<li>Stallion, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia%2Freperfusion%3A+a+clinically+relevant+model+of+intestinal+injury+yielding+systemic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Ischemia/reperfusion: a clinically relevant model of intestinal injury yielding systemic inflammation.</a> J Pediatr Surg. 40, 470-477 (2005).</li>
<li>Blikslager, A. T., Roberts, M. C., Rhoads, J. M., Argenzio, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+reperfusion+injury+an+important+cause+of+mucosal+damage+after+porcine+intestinal+ischemia%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Is reperfusion injury an important cause of mucosal damage after porcine intestinal ischemia?</a> Surgery. 121, 526-534 (1997).</li>
<li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+stem+cells+in+small+intestine+and+colon+by+marker+gene+Lgr5%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5.</a> Nature. 449, 1003-1007 (2007).</li>
<li>Victoni, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+remote+tissue+injury+upon+intestinal+ischemia+and+reperfusion+depends+on+the+TLR%2FMyD88+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Local and remote tissue injury upon intestinal ischemia and reperfusion depends on the TLR/MyD88 signaling pathway.</a> Med Microbiol Immunol. 199, 35-42 (2010).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+2+mediates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+small+intestine+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 2 mediates ischemia-reperfusion injury of the small intestine in adult mice.</a> PloS one. 9, e110441(2014).</li>
<li>Pope, M. R., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+modulates+antibodies+required+for+intestinal+ischemia%2Freperfusion-induced+damage+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 modulates antibodies required for intestinal ischemia/reperfusion-induced damage and inflammation.</a> J. Immunol. 194, 1190-1198 (2015).</li>
<li>Leung, F. W., Su, K. C., Passaro, E. Jr, Guth, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+differences+in+gut+blood+flow+and+mucosal+damage+in+response+to+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regional differences in gut blood flow and mucosal damage in response to ischemia and reperfusion.</a> Am J Physiol. 263, G301-G305 (1992).</li>
<li>Chiu, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Arch Surg. 101, 478-483 (1970).</li>
<li>Quaedackers, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evaluation+of+methods+for+grading+histologic+injury+following+ischemia%2Freperfusion+of+the+small+bowel%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">An evaluation of methods for grading histologic injury following ischemia/reperfusion of the small bowel.</a> Transplant Proc. 32, 1307-1310 (2000).</li>
<li>Bianciardi, P., Scorza, R., Ghilardi, G., Samaja, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xanthine+oxido-reductase+activity+in+ischemic+human+and+rat+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Res%22%5BJournal%5D)">Xanthine oxido-reductase activity in ischemic human and rat intestine.</a> Free Radic Res. 38, 919-925 (2004).</li>
<li>Yandza, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+as+a+preclinical+model+for+intestinal+ischemia-reperfusion+and+transplantation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">The pig as a preclinical model for intestinal ischemia-reperfusion and transplantation studies.</a> J Surg Res. 178, 807-819 (2012).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów

Opracowanie mysich modeli uszkodzenia jelit w podczerwieni znacznie poprawiło zrozumienie mechanizmów uszkodzenia tkanek i pomogło w opracowaniu potencjalnych strategii terapeutycznych w celu zminimalizowania uszkodzeń tkanek 7,9,11,34. Krytycznymi etapami tego protokołu są prawidłowe ustawienie klipsów mikronaczyniowych, prawidłowy czas niedokrwienia i właściwa ocena histologiczna uszkodzenia IR.
Czas trwania niedokrwienia ma kluczowe znaczenie dla późniejszego uszkodzenia nabłonka...

Jelito jest bardzo wrażliwe na zakłócenia przepływu krwi, co powoduje niedokrwienie i uszkodzenie nabłonka. Reperfuzja po niedokrwieniu zapewnia ponowne dotlenienie tkanki i może dodatkowo sprzyjać patologii. Dlatego niedokrwienie jelit i uszkodzenie reperfuzyjne wiąże się z szerokim zakresem patologii, w tym martwiczym zapaleniem jelit, odrzuceniem przeszczepu allogenicznego po przeszczepie jelita cienkiego, powikłaniami operacji tętniaka aorty brzusznej, pomostowaniem krążeniowo-oddechowym i nieswoistymi zapaleniami jelit 1,2. Uszkodzenie jelit w podczerwieni, zwłaszcza ostre niedokrwienie krezki, jest stanem zagrażającym życiu, powodującym zachorowalność i śmiertelność 3.
Chociaż słabo zrozumiane, uważa się, że uszkodzenie niedokrwienia i reperfuzji jelit (IR) jest związane ze zmianami w mikrobiocie jelitowej, jak również z produkcją reaktywnych form tlenu oraz cytokin i chemokin zapalnych 1,4-6. Prowadzi to do aktywacji zarówno wrodzonych, jak i adaptacyjnych mechanizmów immunologicznych, które sprzyjają stanowi zapalnemu i uszkodzeniu tkanek 1,7,8.
Modele zwierzęce są kluczowe dla zrozumienia mechanizmów uszkodzeń spowodowanych przez IR, ponieważ pozwalają na łatwe eksperymenty genetyczne dotyczące zysków i strat funkcji. Opracowano kilka zwierzęcych modeli IR, które obejmują całkowitą okluzję naczyń krwionośnych, niedokrwienie o niskim przepływie i segmentową okluzję naczyń (podsumowane w niedawnym kompleksowym przeglądzie 9). Niedokrwienie jelit spowodowane całkowitym zamknięciem naczyń tętnicy krezkowej górnej (SMA) jest łatwym i powszechnie stosowanym modelem IR u dużych zwierząt i gryzoni 9-11. Jednak różne obszary jelita mają różną podatność na urazy. Ponadto różnorodna gama środków znieczulających, przeciwbólowych, technik zamykania tętnic, a także niespójność w czasie trwania urazu niedokrwiennego i rekonwalescencji skutkują różnym stopniem urazu zakłócającym nasze rozumienie biologii IR w wielu badaniach. Tabela 1 pokazuje te niespójności w badaniach IR u myszy. Największą wadą stosowania krótszych czasów niedokrwiennych (30-45 min) jest ukierunkowanie na okno powrotu do zdrowia, w którym można zaobserwować dostrzegalne różnice między przypadkami i kontrolami. Łagodne uszkodzenie nabłonka może ustąpić w godzinę po reperfuzji, dlatego mogą być wymagane specjalistyczne wskaźniki patologiczne w celu znalezienia różnic w restytucji nabłonka. Natomiast nadmierne uszkodzenie, widoczne po 100 minutach urazu niedokrwiennego, może skutkować całkowitym ogołoceniem nabłonka, w którym restytucja nie jest już możliwa, zwiększając śmiertelność i czas rekonwalescencji. Dlatego tutaj opisujemy szczegółową procedurę jelitowego IR u myszy, która skutkuje powtarzalnym urazem bez śmiertelności, aby zachęcić do standaryzacji tej techniki w naszej dziedzinie. Ten model uszkodzenia jelit w podczerwieni może być wykorzystany do badania komórkowych i molekularnych mechanizmów urazu i regeneracji.

<table><tbody><tr><td>Podgrzewana podkładka</td><td>Sunbeam</td><td>E12107-819</td><td>Alternatywa: Podgrzewana podkładka Braintree Scientific</td></tr><tr><td>Stołowa maszyna do znieczulenia badawczego</td><td>Vasco</td><td>UCAP 0001-0000171</td><td>Alternatywa: Parkland Scientific,</td></tr><tr><td>stożek V3000PS nosa</td><td>Parkland Scientific</td><td>ARES500</td><td></td></tr><tr><td>Kanister i wymienny wkład</td><td>Parkland Scientific</td><td>80000, 80120</td><td></td></tr><tr><td>Komora indukcyjna</td><td>Surgivet</td><td>V711802</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-10</td><td>Substancja kontrolowana, skontaktuj się z IACUC</td></tr><tr><td>Maszynka do strzyżenia zwierząt&nbsp;</td><td>Oster&nbsp;</td><td>Oster Golden A5 078005-050-003</td><td></td></tr><tr><td>Maść oftalmiczna</td><td>Webster</td><td>8804604</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>McKesson</td><td>562766</td><td>Substancja kontrolowana, skontaktuj się z IACUC</td></tr><tr><td>Ketaset (Ketamina HCl)</td><td>Pfizer</td><td>NADA 45-290</td><td>Substancja kontrolowana, skontaktuj się z IACUC</td></tr><tr><td>Bawełniane końcówki</td><td>Puritan produkty medyczne</td><td>806-WC</td><td>Autoklaw przed użyciem</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue Products</td><td>67618-150-17</td><td>10% Powidon-Jod</td></tr><tr><td>Sterylny roztwór soli</td><td>Aspen</td><td>46066-807-60</td><td>Przed użyciem dostosuj temperaturę pokojową</td></tr><tr><td>Termometr na podczerwień dla gryzoni</td><td>BIOSEB</td><td>BIO-IRB153</td><td></td></tr><tr><td>Klipsy mikronaczyniowe, 70 g</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS5424, RS5435</td><td>Alternatywa: WPI 14121, do okluzji SMA</td></tr><tr><td>Klipsy mikronaczyniowe, 40 g</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS6472</td><td>Alternatywa:WPI 14120, do okluzji naczyń bocznych</td></tr><tr><td>Klips do nakładania kleszczyków</td><td>World Precision Instruments</td><td>14189</td><td>Alternatywa: Roboz #RS-5410 lub&nbsp; #RS-5440</td></tr><tr><td>Gill's 3 hematoksylina</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-390-17</td><td></td></tr><tr><td>Zszywki chirurgiczne, Reflex 9 mm</td><td>Cell Point Scientific</td><td>201-1000</td><td></td></tr><tr><td>Aplikator Autoclip</td><td>Beckton Dickinson</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>Podkładka piankowa Byopsy</td><td>Simport</td><td>M476-1</td><td></td></tr><tr><td>Kaseta na chusteczki</td><td>Fisher Healthcare</td><td>15182701A</td><td>Histosette II kombinowana pokrywka i podstawa</td></tr><tr><td>10% buforowana formalina</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgiczne nożyczki do tęczówki</td><td>World Precision Instruments</td><td>501263-G SC</td><td>Alternatywa: Roboz RS6816</td></tr><tr><td>Nożyczki operacyjne</td><td>World Precision Instruments</td><td>501219-G</td><td>Alternatywa: Roboz RS6814</td></tr><tr><td>Kleszcze opatrunkowe</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS-5228, RS-8122</td><td>Alternatywa: World Precision Instruments 1519-G</td></tr><tr><td>Heparyna, bez endotoksyn, 300 jednostek USP/fiolkę, 50 mg</td><td>Sigma</td><td>2106</td><td></td></tr><tr><td>Odruchowe szczypce do usuwania ran</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS-9263</td><td>Alternatywa: World Precision Instruments:</td></tr><tr><td>500347 Myszy C57BL/6J&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Nr magazynowy 0664</td><td></td></tr><tr><td>Nieprzylegające opatrunki Telfa, 3 x 4, sterylne</td><td>Pipety transferowe Coviden</td><td>1050</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand</td><td>Fischer Scientific</td><td>13-711-5AM</td><td>Użyj pipet, aby kroplami dodać sól fizjologiczną</td></tr></tbody></table>

mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Niedokrwienie jelit to stan zagrażający życiu, związany z szerokim zakresem stanów klinicznych, w tym miażdżycą, zakrzepicą, niedociśnieniem, martwiczym zapaleniem jelit, przeszczepem jelit, urazami i przewlekłymi stanami zapalnymi. Uszkodzenie jelit spowodowane niedokrwieniem i reperfuzją (IR) jest konsekwencją ostrego niedokrwienia krezki, spowodowanego niewystarczającym przepływem krwi przez naczynia krezkowe, co prowadzi do uszkodzenia jelit. Reperfuzja po niedokrwieniu może jeszcze bardziej nasilić uszkodzenie jelita. Mechanizmy powstawania uszkodzeń spowodowanych podczerwienią są złożone i słabo poznane. W związku z tym eksperymentalne modele małych zwierząt mają kluczowe znaczenie dla zrozumienia patofizjologii uszkodzeń spowodowanych podczerwienią i opracowania nowych terapii.
Tutaj opisujemy mysi model ostrego uszkodzenia jelit IR, który zapewnia powtarzalne uszkodzenie jelita cienkiego bez śmiertelności. Osiąga się to poprzez wywołanie niedokrwienia w okolicy dystalnego odcinka jelita krętego poprzez czasowe zamknięcie obwodowych i końcowych gałęzi pobocznych tętnicy krezkowej górnej przez 60 minut za pomocą klipsów mikronaczyniowych. Reperfuzja przez 1 godzinę lub 2 godziny po urazie powoduje powtarzalne uszkodzenie jelita badane za pomocą analizy histologicznej. Prawidłowe ułożenie klipsów mikronaczyniowych ma kluczowe znaczenie dla zabiegu. Dlatego klip wideo zawiera szczegółowy wizualny opis tej techniki krok po kroku. Ten model uszkodzenia jelit w podczerwieni może być wykorzystany do badania komórkowych i molekularnych mechanizmów urazu i regeneracji.

Zoptymalizowaliśmy protokół eksperymentalny operacji IR, aby uzyskać powtarzalne uszkodzenia jelita krętego indukowane niedokrwieniem i reperfuzją u myszy. Reprezentatywne wyniki przedstawiono w tej sekcji.
Rycina 1 przedstawia przykłady rozmieszczenia klipsów naczyniowych w celu wywołania niedokrwienia jelita cienkiego. Czarne strzałki wskazują położenie głównych klipsów zamykających gałęzie pierwszego rzędu tę...

Tutaj opisujemy szczegółową procedurę niedokrwienia jelit u myszy, która prowadzi do powtarzalnego uszkodzenia bez śmiertelności, aby zachęcić do standaryzacji tej techniki w całej dziedzinie. Ten model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit może być wykorzystany do badania komórkowych i molekularnych mechanizmów uszkodzenia i regeneracji.

Mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie powtarzalnego uszkodzenia w wyniku niedokrwienia i reperfuzji jelit w obrębie dystalnej części jelita cienkiego u myszy poprzez tymczasowe zamknięcie obwodowych i końcowych odgałęzień tętnicy krezkowej górnej. Metoda ta może pomóc w zrozumieniu podstawowych zagadnień z zakresu gastroenterologii i immunologii, takich jak mechanizmy uszkodzeń i regeneracji tkanek. Zaletą tej techniki jest możliwość jej wykonania przez każdą przeszkoloną osobę w laboratorium.Kolejną zaletą jest fakt, że sama procedura nie powoduje śmiertelności u myszy. Przygotuj miejsce operacyjne zgodnie z instrukcjami zawartymi w protokole tekstowym. Następnie, używając nożyczek chirurgicznych, wykonaj laparotomię w linii środkowej o długości od trzech do pięciu centymetrów.Następnie należy przykryć pole operacyjne sterylną podkładką nieprzywierającą, zwilżoną solą fizjologiczną. Wyizolować kątnicę i jelito cienkie, a następnie za pomocą nasączonych solą fizjologiczną patyczków bawełnianych odsłonić tętnicę krezkową górną. Aby ułatwić założenie klipsa, należy użyć kleszczyków do delikatnego uniesienia jelita, a następnie nożyczkami irydowymi przeciąć krezkę po obu stronach

murine-model-of-intestinal-ischemia-reperfusion-injury

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Uraz chirurgiczny wywołuje odpowiedź zapalną. Wiadomo, że cytokiny i ligandy endogenne modulują wielkość zawału mięśnia sercowego po niedokrwieniu i reperfuzji. Przedstawiamy zmodyfikowany model niedokrwienia i reperfuzji u myszy z zamkniętą klatką piersiową, wykorzystujący obciążniki wiszące w celu zminimalizowania efektów torakotomii.

Mysi model zamkniętoklatkowy niedokrwienia i reperfuzji mięśnia sercowego

Wprowadzamy metodę chirurgiczną do wywoływania eksperymentalnego uszkodzenia niedokrwienia/reperfuzji (I/R) symulującego zawał mięśnia sercowego (MI) w modelach mysich, co pozwala na większą przejrzystość w umiejscowieniu podwiązania na lewej tętnicy zstępującej przedniej (LAD) w celu zwiększenia powtarzalności eksperymentów MI u myszy.

Mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego mięśnia sercowego poprzez podwiązanie lewej tętnicy zstępującej przedniej

Ten protokół umożliwi czytelnikom pomyślne stworzenie świńskiego modelu segmentowego niedokrwienia jelit, a następnie izolację i hodowlę jelitowych komórek macierzystych do badania naprawy nabłonka po urazie.

Izolacja i hodowla jelitowych komórek macierzystych w świńskim modelu segmentowego niedokrwienia jelita cienkiego

Mysi model niedokrwienia i reperfuzji mózgu został stworzony w celu zbadania patofizjologii udaru. Podwiązujemy dystalnie prawą środkową tętnicę mózgową i prawą tętnicę szyjną wspólną i przywracamy przepływ krwi po 10 lub 40 minutach niedokrwienia.

Mysi model zamknięcia dwóch naczyń niedokrwienia mózgu-reperfuzji

Tutaj opisujemy zabieg chirurgiczny pokazujący, jak osiągnąć trwałe podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej u myszy. Model ten ma duże znaczenie dla badania patofizjologii zawału mięśnia sercowego i towarzyszących mu procesów biologicznych.

Mysi model zawału mięśnia sercowego z wykorzystaniem trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej

Szczegółowo opisujemy klinicznie istotny model raka jelita grubego z przerzutami do wątroby (CRLM) oraz wpływ reperfuzji niedokrwienia wątroby (I/R) na wzrost guza i przerzuty. Model ten może pomóc w lepszym zrozumieniu mechanizmów leżących u podstaw indukowanego przez operację wzrostu przerzutów do wątroby.

Mysi model przerzutowych guzów wątroby w warunkach uszkodzenia reperfuzyjnego niedokrwiennego

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne nerek wiąże się z wysoką zachorowalnością i śmiertelnością u hospitalizowanych pacjentów. W tym miejscu przedstawiamy prosty i skuteczny mysi model jednostronnego uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego nerek i zapewniamy sekwencyjny przegląd reprezentatywnych zmian patologicznych obserwowanych w nerkach.

Skuteczny mysi model jednostronnego uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego nerek

Tutaj opisujemy prostą i powtarzalną metodę, która może wywołać zawał mięśnia sercowego lub uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne mięśnia sercowego u myszy poprzez precyzyjne podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej za pomocą mikromanipulacji.

Indukcja zawału mięśnia sercowego i uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego mięśnia sercowego u myszy

Opisujemy, jak wygenerować powszechnie stosowany model chirurgiczny uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit (IRI) u gryzoni. Zabieg polega na zamknięciu tętnicy krezkowej górnej, a następnie przywróceniu przepływu krwi. Model ten jest przydatny w badaniach nad okluzyjnymi przyczynami jelitowego IRI zarówno w medycynie weterynaryjnej, jak i ludzkiej.

Model gryzoni uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit poprzez niedrożność tętnicy krezkowej górnej

Protokół przedstawia wykonalną, niezawodną i powtarzalną metodę zaciskania wnęki lewej płucy, która może być wykorzystana do badania uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego płuc w modelach mysich.

Mysi lewy klamra płucny Hilar Clamp Urazu Reperfuzyjnego Niedokrwienia Płuc

Ten protokół przedstawia metodę wywoływania uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego krezki i wizualizacji pułapek zewnątrzkomórkowych neutrofili (NET) w żyłkach krezkowych za pomocą mikroskopii przyżyciowej. Przepływ krwi w tętnicy krezkowej górnej był ograniczony przez 1 godzinę, po czym nastąpiła reperfuzja, co umożliwiło bezpośrednie ilościowe określenie adhezji leukocytów i NETozy.

Wizualizacja pułapek zewnątrzkomórkowych neutrofili w żyłkach krezkowych po uszkodzeniu niedokrwienno-reperfuzyjnym krezki za pomocą mikroskopii przyżyciowej

Poznaj metodę indukcji uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit u myszy poprzez tymczasowe okluzję tętnicy krezkowej górnej. Technika ta umożliwia badanie mechanizmów urazu i regeneracji tkanek jelitowych w dziedzinie gastroenterologii i immunologii.

Mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit

Przeglądaj więcej filmów