Szybkie wykrywanie molekularne i różnicowanie wirusów grypy A i B
30 stycznia 2017
Opisujemy szybki, molekularny test na grypę A i B. Test grypy wykrywa każdy cel w ciągu 15 minut, stosując amplifikację izotermiczną za pomocą starterów specyficznych dla grypy, a następnie wykrywanie celu za pomocą molekularnych sond ostrzegawczych. Test na grypę A i B jest przyjazny dla użytkownika i wymaga minimalnego czasu na wykonanie.
Ogólnym celem tego testu jest zdiagnozowanie lub wykluczenie zakażenia wirusem grypy u pacjentów z układem oddechowym. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie diagnostyki klinicznej, takie jak diagnozowanie kluczowych przyczyn infekcji dróg oddechowych. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest to szybka metoda, którą można stosować w opiece mianowanej.
Procedurę zademonstruje Sam Kaplan, technik z naszego laboratorium. Aby pobrać próbkę wymazu z nosa, włóż wacik do nozdrza, które ma najbardziej widoczny drenaż lub które jest najbardziej zatłoczone. Delikatnie obracając, wepchnij wacik do nozdrza, aż napotkasz opór i obróć kilka razy o ścianę nosa, a następnie powoli wyjmij go z nozdrza.
Następnie należy przechowywać wacik i transportować go w fiolce zawierającej trzy mililitry pożywki transportowej wirusa. Następnie przed badaniem doprowadź próbkę i odbiornik niebieskiej próbki do temperatury pokojowej. Pomarańczową bazę testową można testować bez konieczności podgrzewania do temperatury pokojowej.
Pozostaw wszystkie próbki do badań w folii do momentu bezpośrednio przed użyciem. Następnie włącz instrument, wprowadź identyfikator użytkownika i naciśnij OK.To rozpocząć proces testowania, dotknij opcji Uruchom test na ekranie urządzenia. Następnie wprowadź identyfikator pacjenta za pomocą klawiatury ekranowej lub skanera kodów kreskowych i naciśnij OK. Następnie otwórz pokrywę i włóż pomarańczową probówkę z bazą testową do pomarańczowego uchwytu bazy testowej.
Upewnij się, że na ekranie wyświetlany jest prawidłowy test i naciśnij OK. Następnie włóż niebieski odbiornik próbki do niebieskiego uchwytu odbiornika próbki i poczekaj, aż odbiornik próbki się rozgrzeje. Następnie usuń foliowaną uszczelkę, kładąc dwa palce na krawędzi odbiornika próbki, aby upewnić się, że pozostaje na swoim miejscu. Następnie umieść wymazówkę pacjenta, która ma być testowana, w odbiorniku próbki.
Energicznie mieszaj wacik i płyn przez 10 sekund i dociśnij główkę wacika do boku odbiornika próbki, aby pomóc usunąć próbkę z wacika. Jeśli wymazówki testowe są przechowywane w pożywce transportowej wirusa, należy wirować pożywkę transportową wirusa przez 10 sekund i dodać 200 mikrolitrów do odbiornika próbki. Następnie naciśnij OK, aby kontynuować.
Następnie wciśnij białą kasetę transferową do niebieskiego odbiornika próbki. Kontynuuj naciskanie ampodbiornik próbki, aż pomarańczowy wskaźnik się podniesie. Następnie podnieś i podłącz wkład transferowy do podstawy testowej.
Pomarańczowy wskaźnik powinien zejść w dół, gdy transfer wkładu zostanie prawidłowo podłączony. Zamknij pokrywę i nie otwieraj, dopóki nie pojawi się ekran Wyniki. Teraz dotknij Uruchom test kontroli jakości na ekranie głównym.
Wybierz test kontroli jakości, który ma zostać uruchomiony. Następnie potwierdź typ testu, aby pasował do próbki kontroli jakości przeznaczonej do testowania, klikając OK i postępując zgodnie z instrukcjami wyświetlanymi na ekranie, aby zakończyć testowanie. Po zakończeniu badania należy obserwować wyniki testu wyświetlane na ekranie wraz z interpretacją na obecność grypy A, B lub nieznanych podtypów i powtórzyć test w przypadku nieważnych wyników.
Następnie wyczyść instrument i otaczającą go ławkę 70% etanolem lub 10% roztworem wybielacza. Rysunek ten przedstawia średnie wartości CT określone za pomocą testu RP dla próbek dodatnich i ujemnych dla każdego podtypu grypy. Wyniki pokazują, że fałszywie ujemne próbki oznaczone testem grypy A i B były spowodowane próbkami o niskim mianie wirusa.
Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w 15 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać, że podczas początkowej konfiguracji testu kaseta transferowa musi być podłączona do bazy testowej, aż zatrzaśnie się na swoim miejscu. Jeśli te dwa elementy nie zostaną odpowiednio zabezpieczone, przebieg zakończy się niepowodzeniem i będzie musiał zostać powtórzony od początku.
Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać ten test diagnostyczny na grypę. Nie zapominaj, że praca z próbkami pacjentów potencjalnie zakażonych grypą może być niezwykle niebezpieczna, a podczas wykonywania tej procedury należy zawsze podejmować środki ostrożności, takie jak noszenie odpowiednich środków ochrony osobistej.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł opisuje szybki test molekularny służący do wykrywania wirusów grypy typu A i B. Test wykorzystuje amplifikację izotermiczną oraz sondy typu molecular beacon, co pozwala na uzyskanie wyników w zaledwie 15 minut.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Diagnostyka kliniczna
- Biologia molekularna
- Choroby zakaźne
Wstęp
- Wirusy grypy są istotną przyczyną infekcji dróg oddechowych.
- Szybka diagnostyka ma kluczowe znaczenie dla skutecznego leczenia pacjentów.
- Obecne metody mogą wymagać dłuższego czasu przetwarzania próbek.
- Celem niniejszego testu jest zapewnienie szybkich wyników w przyjaznej dla użytkownika formie.
Cel badania
- Opracowanie szybkiego testu do diagnostyki zakażeń wirusem grypy.
- Poprawa wydajności diagnostyki klinicznej w chorobach układu oddechowego.
- Ułatwienie podejmowania terminowych decyzji terapeutycznych w placówkach ochrony zdrowia.
Zastosowane metody
- Amplifikacja izotermiczna z użyciem starterów specyficznych dla grypy.
- Detekcja celów za pomocą sond typu molecular beacon.
- Pobieranie próbek za pomocą wymazu z nosa.
- Minimalny czas pracy manualnej wymagany do przeprowadzenia analizy.
Główne wyniki
- Test zapewnia wyniki w ciągu 15 minut.
- Intuicyjna procedura odpowiednia do warunków klinicznych.
- Skutecznie wykrywa wirusy grypy typu A i B.
- Zaprezentowano przez technika laboratoryjnego.
Wnioski
- Test ten jest szybkim i wydajnym narzędziem do diagnostyki grypy.
- Może on znacząco poprawić opiekę nad pacjentami z infekcjami dróg oddechowych.
- Dalsze badania mogą rozszerzyć jego zastosowanie w diagnostyce klinicznej.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Szybka detekcja molekularna wirusów grypy wspiera wczesne podejmowanie decyzji diagnostycznych w zarządzaniu chorobami układu oddechowego. 15-minutowy czas uzyskania wyniku testu umożliwia szybką segregację pacjentów w punktach opieki (point-of-care), co zmniejsza opóźnienie diagnostyczne. Możliwość ta pomaga w ograniczaniu ryzyka w rozwoju leków przeciwwirusowych na wczesnym etapie poprzez dostarczanie wiarygodnych danych o statusie infekcji.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Wartość naukowa: Umożliwia potwierdzenie statusu zakażenia grypą w modelach przedklinicznych, wspierając badania nad walidacją celów terapeutycznych.
- Wartość operacyjna: Zapewnia szybki odczyt w układzie zamkniętym, co skraca czas pracy manualnej i zmniejsza ryzyko kontaminacji.
Przesiewanie i opracowywanie testów
- Wartość naukowa: Generuje ilościowe sygnały detekcyjne za pomocą sond typu molecular beacon w celu optymalizacji testu.
- Wartość operacyjna: Zapewnia powtarzalne wyniki w zamrożonych, zarchiwizowanych próbkach z nosogardzieli, co potwierdza odporność testu.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Wartość naukowa: Umożliwia podłużne monitorowanie miana wirusa w systemach istotnych dla przebiegu choroby, wspierając redukcję ryzyka mechanistycznego.
- Wartość operacyjna: Pozwala na zapewnienie spójności międzyzespołowej pomiędzy zespołami wirusologicznymi a toksykologicznymi dzięki standaryzacji wyników.
Integracja potoku i przepływu pracy
Test ten wpisuje się w wczesne etapy procesów odkrywania leków, w których wymagane jest szybkie potwierdzenie statusu infekcji przed przejściem do optymalizacji związku wiodącego.
- Biologia odkrywcza: Wspiera testowanie hipotez poprzez rozróżnianie infekcji grypą typu A i B w kohortach eksperymentalnych.
- Przesiewanie: Umożliwia przygotowanie zestandaryzowanych próbek biologicznych do późniejszych badań przesiewowych leków przeciwwirusowych.
- Analityka: Dostarcza wyników jakościowych i półilościowych, które pomagają porównać skuteczność przeciwwirusową w różnych warunkach.
- Badania translacyjne: Łączy wczesne wykrywanie infekcji z ciągłością przedkliniczną dzięki spójnej detekcji wirusów.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Stanowi wielokrotnego użytku moduł diagnostyczny do badań nad wirusami układu oddechowego w wielu projektach.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: Zmniejsza niejednoznaczność mechanistyczną w modelach infekcji poprzez zapewnienie wyraźnego rozróżnienia podtypów grypy.
- Wartość operacyjna: Zapewnia standaryzację i powtarzalność dzięki pracy w zamkniętym systemie bez użycia pipet.
- Wartość strategiczna: Usprawnia podejmowanie decyzji o kontynuacji lub przerwaniu badań (go/no-go) w programach przeciwwirusowych dzięki możliwości szybkiego potwierdzenia infekcji.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację związków z uwzględnieniem ryzyka w oparciu o terminowe dane dotyczące oddziaływania z celem.
Wskazówki dotyczące wdrożenia
- Wymaga przeszkolenia w zakresie pobierania wymazów z nosogardzieli oraz obchodzenia się z próbkami w medium transportowym do wirusów.
- Zależność od konserwacji instrumentów i stabilności odczynników w celu zapewnienia spójnych wyników.
- Konieczność uzgodnienia protokołów między zespołami w celu śledzenia próbek i interpretacji wyników.
- Należy uwzględnić obniżoną czułość w próbkach o niskim ładunku wirusa, co zaobserwowano podczas porównań z zamrożonymi materiałami.
- Wymaga kontroli środowiskowej w celu zapobiegania kontaminacji amplikonami w warunkach wysokoprzepustowych.
