Mysi eksperymentalny model pierwotnego rozwoju guza i przerzutów do otrzewnej za pomocą ortotopowej inokulacji komórkami raka jajnika
9 grudnia 2016
Aby wyjaśnić wieloetapowy proces rozprzestrzeniania się raka jajnika w otrzewnej, obecne badanie przedstawia mysi eksperymentalny model pierwotnego rozwoju guza i przerzutów do otrzewnej poprzez ortotopową inokulację tymi komórkami nowotworowymi.
Ogólnym celem tej procedury jest obserwacja rozwoju pierwotnego i przerzutowego powstawania guza w nabłonkowym raku jajnika. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie ginekologii onkologicznej, takie jak zrozumienie biologii guza lub defemeniacja otrzewnowa. Główną zaletą tej techniki jest to, że inokulacja orospatykowa ludzkiego nabłonkowego raka jajnika lub komórek EOC jest wykonywana za pomocą dostępu zaotrzewnowego wyhodowanego z bokiem grzbietowym. Aby przygotować linię komórkową ludzkiego raka jasnokomórkowego jajnika, płytki i utrzymuj komórki ES2 w pożywce RPMI-1640 z 10% FBS i PenStrep w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% CO2. W logarytmicznej fazie wzrostu usuń starą pożywkę z kultury i użyj trzech do czterech milimetrów PBS do jednokrotnego umycia komórek. Następnie dodaj jeden milimetr trypsyny/EDTA i rozkołysaj naczynie, aby pokryć całą monowarstwę. Usuń i wyrzuć roztwór trypsyny, a następnie umieść komórki z powrotem w inkubatorze na trzy do pięciu minut. Po zbadaniu komórek pod mikroskopem, aby upewnić się, że komórki odczepiły się i unoszą się, dodaj pięć milimetrów świeżej pożywki wzrostowej zawierającej surowicę, aby dezaktywować trypsynę i ponownie zawiesić komórki przed przeniesieniem ich do 15-milimetrowej stożkowej probówki. Odwirować zawiesinę w temperaturze 300 razy G i temperaturze pokojowej
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejsze badanie przedstawia mysi model eksperymentalny służący do wyjaśnienia wieloetapowego procesu rozsiewu otrzewnowego raka jajnika. Model ten obejmuje ortotopową inokulację komórek nowotworowych w celu zbadania rozwoju pierwotnego guza oraz następujących po nim przerzutów do otrzewnej.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Onkologia
- Modele eksperymentalne
- Badania nad przerzutami
Wprowadzenie
- Rak jajnika charakteryzuje się złożonym mechanizmem przerzutowania.
- Zrozumienie rozsiewu otrzewnowego jest kluczowe dla udoskonalenia strategii leczenia.
- W badaniach nad progresją nowotworu powszechnie wykorzystuje się modele mysie.
- Celem niniejszego badania jest dostarczenie informacji na temat mechanizmów przerzutowania.
Cel badania
- W celu wyjaśnienia mechanizmów rozsiewu otrzewnowego w raku jajnika.
- W celu opracowania wiarygodnego modelu mysiego do badania zachowania guza.
- W celu zbadania roli inokulacji ortotopowej w procesie metastazy.
Zastosowane metody
- Ortotopowe wszczepianie komórek nowotworowych u myszy.
- Monitorowanie rozwoju i przerzutowania nowotworu.
- Wykorzystanie technik obrazowania do oceny rozprzestrzeniania się nowotworu.
- Analiza oddziaływań w mikrośrodowisku nowotworu.
Główne wyniki
- Skuteczne opracowanie mysiego modelu raka jajnika.
- Obserwacja przerzutów do otrzewnej po inokulacji ortotopowej.
- Zrozumienie roli mikrośrodowiska guza w procesie metastazy.
- Identyfikacja potencjalnych celów terapeutycznych dla interwencji.
Wnioski
- Model myszy skutecznie symuluje rozsiew otrzewnowy.
- Wyniki przyczyniają się do zrozumienia przerzutów raka jajnika.
- Przyszłe badania mogą skoncentrować się na strategiach terapeutycznych opartych na tych spostrzeżeniach.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla Przemysłu
Ortotopowe szczepienie komórek raka jajnika w modelach mysich umożliwia bezpośrednią analizę rozwoju guza pierwotnego oraz przerzutów do otrzewnej, co pozwala wypełnić istotną lukę w zrozumieniu mechanizmów metastazy. Model ten zwiększa pewność prognostyczną na etapie wczesnego odkrywania leków poprzez odtworzenie klinicznie istotnych dróg rozprzestrzeniania się nowotworu. Jego powtarzalność oraz zbieżność translacyjna sprawiają, że jest on cenny w procesie selekcji projektów w portfolio oraz w ograniczaniu ryzyka mechanistycznego w badaniach i rozwoju onkologicznym.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Umożliwia badanie mechanizmów przerzutowania w istotnym pod kątem choroby kontekście in vivo.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów biorących udział w odrywaniu się guza i przyleganiu do otrzewnej.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka mechanistycznego poprzez modelowanie obserwowanych klinicznie wzorców rozsiewu.
- Zapewnia platformę do badań opartych na hipotezach dotyczących oddziaływań między guzem a mezotelium.
Przesiewy i opracowywanie testów
- Przygotowuje zwalidowane modele zwierzęce do późniejszego screeningu mechanistycznego i badania skuteczności.
- Wspiera standaryzację protokołów inokulacji guzów oraz oceny przerzutów.
- Umożliwia powtarzalną kwantyfikację obciążenia przerzutowego w badaniach porównawczych.
- Ułatwia ewaluację potencjalnych interwencji ukierunkowanych na ograniczanie rozprzestrzeniania się przerzutów.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Jest zgodny z progresją choroby u ludzi poprzez modelowanie rozsiewu do otrzewnej in vivo.
- Zapewnia ciągłość procesu od etapu odkryć po przedkliniczną walidację strategii antymetastatycznych.
- Umożliwia podejmowanie decyzji o dalszym rozwoju projektu z uwzględnieniem ryzyka, w oparciu o wyniki przerzutowania in vivo.
- Stanowi pomost translacyjny dla testowania hipotez dotyczących biomarkerów i terapii.
Integracja potoków i przepływów pracy
Ten ortotopowy model mysi znajduje się na styku wczesnej fazy odkrywania i walidacji przedklinicznej, umożliwiając badania mechanistyczne oraz ocenę kandydatów przed przejściem do translacji klinicznej.
- Biologia odkrywcza: Wspiera weryfikację hipotez dotyczących odrywania się komórek nowotworowych, ich migracji oraz kolonizacji otrzewnej.
- Przesiewy: Zapewnia powtarzalny system oceny skuteczności przeciwprzerzutowej i ilościowego określania rozprzestrzeniania się nowotworu.
- Analityka: Umożliwia ilościowy pomiar zmian przerzutowych i obciążenia nowotworowego w różnych grupach eksperymentalnych.
- Badania translacyjne: Modeluje klinicznie istotną dysseminację, wspierając dopasowanie biomarkerów i terapii.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje zstandaryzowaną, wielokrotnego użytku platformę in vivo dla programów rozwojowych w onkologii.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: zwiększa pewność prognostyczną w badaniach nad mechanizmami przerzutowania oraz w walidacji celów terapeutycznych.
- Wartość operacyjna: poprawia powtarzalność i standaryzację modelowania przerzutów in vivo.
- Wartość strategiczna: dostarcza podstaw do podejmowania decyzji o kontynuacji lub przerwaniu prac nad kandydatami na leki przeciwprzerzutowe i zmniejsza biologiczne ryzyko w późnych etapach badań.
- Wpływ na portfolio: wspiera priorytetyzację zasobów onkologicznych ukierunkowanych na progresję przerzutów z uwzględnieniem korekty ryzyka.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymaga doświadczenia w technikach chirurgicznych u myszy oraz ortotopowej inokulacji komórek.
- Wymaga dostępu do infrastruktury obrazowania i analiz ilościowych w celu oceny przerzutów.
- Wymaga standaryzacji obsługi zwierząt i kryteriów punktu końcowego pomiędzy zespołami.
- Może wymagać adaptacji dla różnych linii komórkowych raka jajnika lub fenotypów przerzutowych.
- Ograniczenia praktyczne obejmują zmienność specyficzną dla modelu oraz kwestie etyczne związane z wykorzystaniem zwierząt.
Najczęściej zadawane pytania dotyczące biofarmacji
Chapters in this video
0:05
Title
0:46
Preparation of Cell Suspensions
3:12
Orthotopic Inoculation with Cell Suspensions
5:12
Post-surgical Treatment and Analysis of Tumors and Metastases
5:59
Results: Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation of Ovarian Carcinoma Cells
6:48
Conclusion
