Badanie składania proteasomu za pomocą rekombinowanych proteasomów archeonów i niedenaturujących PAGE: Argumenty przemawiające za podejściem łączonym

Ogólnym celem tego eksperymentu jest analiza składania kompleksu wielobiałkowego, takiego jak proteasom, przy użyciu rekombinowanych podjednostek i niedenaturującej elektroforezy w żelu poliakrylamidowym lub PAGE. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie proteasomów, takie jak, jakie gatunki pośrednie występują wzdłuż szlaku składania tego kompleksu białkowego. Główną zaletą tej techniki jest to, że umożliwia ona szybkie przesiewanie zespołu za pomocą dwóch równoległych podejść, co pozwala na wykrycie produktów pośrednich na ścieżce i poza nią. Procedura ta rozpoczyna się od ekspresji bakteryjnej zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Aby przeprowadzić lizę bakteryjną, rozmrażaj indukowaną paletę komórkową wyrażającą pożądaną kombinację podjednostek proteasomu na lodzie przez pięć minut. Po rozmrożeniu ponownie zawieś paletę w 600 mikrolitrach buforu do lizy. Inkubuj zawiesinę w temperaturze 30