Name: Mysi ortotopowy model guza pęcherza moczowego i system wykrywania guzów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Poznaj niechirurgiczną metodę generowania ortotopowych guzów pęcherza moczowego u myszy C57BL/6J, umożliwiającą łatwe monitorowanie wzrostu nowotworu i ocenę terapii wewnątrzpęcherzowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana z grantu National Medical Research Council of Singapore (NMRC/CIRG/1335/2012) przyznanego profesorowi Kesavan Esuvaranathan.

<ol><li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li>
<li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Braz+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li>
<li>Chan, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+orthotopic+bladder+tumor+implantation+in+a+syngeneic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Optimizing orthotopic bladder tumor implantation in a syngeneic mouse model.</a> J Urol. 182, 2926-2931 (2009).</li>
<li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181(2013).</li>
<li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li>
<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684(2011).</li>
<li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li>
<li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li>
<li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. A., Assouline, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnology+and+cancer%3A+improving+real-time+monitoring+and+staging+of+bladder+cancer+with+multimodal+mesoporous+silica+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanotechnology and cancer: improving real-time monitoring and staging of bladder cancer with multimodal mesoporous silica nanoparticles.</a> Cancer nanotechnology. 7, 3(2016).</li>
<li>Tanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+detection+of+bladder+cancer+in+an+orthotopic+murine+model+with+green+fluorescence+protein+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive detection of bladder cancer in an orthotopic murine model with green fluorescence protein cytology.</a> J Urol. 170, 975-978 (2003).</li>
<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li>
<li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li>
<li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model%3A+a+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li>
<li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li>
<li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li>
<li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li>
<li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172(2012).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075(2007).</li>
<li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718(2015).</li>
<li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470%2C+an+angiogenic+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+radiology%22%5BJournal%5D)">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li>
<li>Folin, O., Morris, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+determination+of+creatinine+and+creatine+in+urine%5BTitle%5D)+AND+%22JBC%22%5BJournal%5D)">On the determination of creatinine and creatine in urine.</a> JBC. 17, 469-473 (1914).</li>
<li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li>
<li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+%28II%29+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors & bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li>
<li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles%2FPAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors & bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li>
<li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+physiology+and+biochemistry+%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Najbardziej krytycznymi krokami w protokole są: 1) skuteczne utrzymanie rakotwórczości linii komórkowej; 2) zapewnienie mierzalnego wydzielania PSA przed implantacją komórek nowotworowych u myszy; 3) generowanie zawiesiny jednokomórkowej do implantacji w celu zmniejszenia zmienności wielkości guza; oraz 4) wkraplanie komórek w powolnym tempie, aby zapobiec refluksowi pęcherzykowo-moczowodowemu, co powoduje zagnieżdżenie się komórek nowotworowych w nerce.
Po przedłużonym pasażu in vitro</em...

Celem tej metody jest generowanie mysich ortotopowych guzów pęcherza moczowego i monitorowanie implantowanych guzów tak dokładnie, jak to możliwe, tak aby myszy bez implantacji guza nie były uważane za wyleczone w końcowej analizie. Ogólnie rzecz biorąc, przedstawiona metoda zmniejszy zapotrzebowanie na dużą liczbę myszy do analizy eksperymentalnej i zapewni większą dokładność w określaniu wyników terapeutycznych.
Opracowanie ortotopowego modelu raka jest ważne, ponieważ podskórne wszczepianie komórek nowotworowych nie podsumowuje środowiska klinicznego choroby ani nie umożliwia rozwoju strategii terapeutycznych. Architektura pęcherza moczowego pozwala na wkraplanie terapii raka pęcherza moczowego bezpośrednio do pęcherza moczowego przy minimalnych skutkach ogólnoustrojowych. Dlatego modele zwierzęce, które podsumowują to środowisko, takie jak model ortotopowy, są ważne dla oceny nowych terapii. Wnioski wyciągnięte z dowolnej konfiguracji eksperymentalnej są zależne od ograniczeń modelu.
Opracowano kilka technik do wytwarzania ortotopowych guzów pęcherza moczowego u myszy. Polegają one na uszkodzeniu warstwy glikozaminoglikanu w pęcherzu moczowym, umożliwiając wszczepienie komórek nowotworowych. Stosowane techniki obejmują elektrokoagulację, w wyniku której powstaje pojedynczy punkt uszkodzenia w ścianie pęcherza moczowego, co prowadzi do rozwoju guza w jednym miejscu pęcherzamoczowego 1,2. Jednak wskaźnik powodzenia implantacji guza za pomocą elektrokoagulacji zależy od operatora i waha się od 10 do 90% i obejmuje niebezpieczeństwo przebicia ściany pęcherza moczowego, co prowadzi do rozwoju guzów w jamie otrzewnej. Kauteryzacja chemiczna odbywa się przy użyciu azotanu srebra, który uszkadza ścianę pęcherzamoczowego 3. Podobnie kwas został użyty do uszkodzenia ściany pęcherzamoczowego 4. Trypsyna była również stosowana do uszkadzania pęcherzamoczowego 5. Metody te mogą prowadzić do rozwoju więcej niż jednego guza pęcherza moczowego. Ponadto istnieje niebezpieczeństwo poważnego uszkodzenia pęcherza, jeśli chemikalia pozostaną w zbyt długim kontakcie ze ścianą pęcherza. Metoda opracowana przez Ninalga i wsp. wykorzystuje dodatnio naładowane cząsteczki poli-L-lizyny (PLL)6 do pokrycia ściany pęcherza moczowego; Dzięki temu ujemnie naładowane komórki nowotworowe mogą przyklejać się do warstwy glikozaminoglikanu w pęcherzu moczowym. Ta metoda na ogół powoduje rozwój więcej niż jednego guza w pęcherzu moczowym, ale implantacja guza wynosi 80 - 100%4,7. Technicznie jest to również najłatwiejsza procedura do wykonania. Aby upewnić się, że rozwijające się guzy mają dość równą wielkość, ważne jest, aby komórki nowotworowe nie były grupowane w duże grudki przed implantacją.
Aby ocenić skuteczność terapeutyczną, najlepiej przeprowadzić to badanie na myszach z guzami o dość podobnej wielkości. Dlatego ważny jest dobry system wykrywania, który może określić ilościowo wielkość guza wkrótce po implantacji. Do oceny nowotworów zastosowano kilka strategii. Należą do nich rezonans magnetyczny (MRI)8-10, fluorescencja11, bioluminescencja12,13, ultrasonografia14 i test immunoenzymatyczny (ELISA)15,16. Podczas gdy rezonans magnetyczny i ultradźwięki nie wymagają modyfikacji komórek nowotworowych, istnieje zapotrzebowanie na czuły sprzęt i środki kontrastowe do MRI. Testy oparte na fluorescencji, luminescencji i ELISA wymagają modyfikacji komórek nowotworowych w celu ekspresji białek markerowych, które można wykryć tymi metodami. Do luminescencji wymagany jest substrat do wykrywania aktywności lucyferazy; W związku z tym istnieje dodatkowy krok i zwiększony koszt. Zarówno luminescencja, jak i fluorescencja wymagają specjalistycznego sprzętu. Aby wytworzyć fluorescencję, wymagana jest cyklizacja białka zielonej fluorescencji (GFP), która jest katalizowana przez tlen cząsteczkowy. Tak więc ekspresja GFP może być zmienna w masie guza w zależności od dostępu do tlenu, co czyni go raczej niewiarygodnym markerem17. Inną strategią jest modyfikacja linii komórkowej MB49 raka pęcherza moczowego w celu wydzielania ludzkiego swoistego antygenu swoistego dla prostaty (PSA)15,16 jako markera zastępczego. Markery te stanowią również alternatywny sposób potwierdzania obecności guza po zakończeniu eksperymentu, co czyni je alternatywą dla immunohistochemii. W pracy przedstawiono metodę ortotopowej implantacji guza PLL i przedstawiono porównanie systemów wykrywania nowotworów, a mianowicie ELISA, fluorescencji i obrazowania ultradźwiękowego.

<table><tbody><tr><td>Ogniwa MB49-PSA</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>ref (Wu QH, 2004)</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pożywka Modified Eagle's Medium (DMEM) firmy Dulbecco</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS) Południowoamerykańska</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS) Południowoamerykańska, Premium</td><td>Biowest</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30088.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>Hygromycyna B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>wolny zestaw PSA (ludzki) ELISA</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Odczynnik do ekstrakcji RNA&nbsp;</td><td>Zestaw</td><td></td> do odwrotnej transkrypcji cDNA o dużej pojemności Ambion 15596026 <td></td></tr><tr><td>z inhibitorem RNazy</td><td>Applied Biosystems</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>Test ekspresji genów TaqMan &ndash; Mouse Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>Test ekspresji genów Mm00607939_s1 TaqMan &ndash; Ludzkie KLK3</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>C57BL/6J samice myszy</td><td>In Vivos</td><td></td><td>4 - 6 tyg</td></tr>. <tr><td>Znieczulenie (75 mg / kg ketaminy i 1 mg / kg medetomidyny)</td><td>Lokalna apteka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lek odwracający (1 mg / kg Atipamezol)</td><td>Lokalna apteka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Uderzenie w ucho</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>72893-01</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór Hartmanna lub związek mleczan sodu</td><td>B Maść</td> okulistyczna Braun <td></td><td></td></tr><tr><td>- Duratears sterylna maść nawilżająca do oczu</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat pack - Ogrzewacze do rąk HotHands</td><td>Heatmax Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Introcan Cewnik Certo IV</td><td>B Braun</td><td>4251300</td><td>24 G x 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>Aquagel Galaretka smarująca</td><td>Lokalna apteka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Roztwór poli-L-lizyny, 0,01%,</td> <td>Sigma</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, Koktajl inhibitorów proteazy bez EDTA</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Quantichrom Zestaw do oznaczania kreatyniny Systemy</td><td>testowe</td><td>DICT-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Barwnik fluorescencyjny - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater-ICE Frozen Tissue Transition Solution</td><td>Ambion</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>Nazwa</td><td>Firma</td><td>Numer katalogowy</td><td>Komentarze</td></tr><tr><td>Sprzęt i oprogramowanie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Zastosowany system PCR w czasie rzeczywistym</td><td> Oprogramowanie Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 v2.3</td> Klatka metaboliczna <td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Tecniplast&nbsp;</td><td>Regał pionowy na 12 klatek</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto I system&nbsp;</td><td>Oprogramowanie BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva v7</td> System obrazowania <td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT in vivo&nbsp;</td><td>Suwmiarka Nauki Przyrodnicze&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie Living Image v3.1</td><td>Caliper Nauki przyrodnicze&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>System obrazowania Vevo 2100&nbsp;</td><td>Dźwięki wizualne&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mysi ortotopowy model guza pęcherza moczowego i system wykrywania guzów

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Ten protokół opisuje generowanie guzów pęcherza moczowego u samic myszy C57BL/6J przy użyciu mysiej linii komórkowej raka pęcherza moczowego MB49, która została zmodyfikowana do wydzielania ludzkiego antygenu specyficznego dla prostaty (PSA), oraz procedurę potwierdzania implantacji guza. Krótko mówiąc, myszy są znieczulane za pomocą leków do wstrzykiwań i zmuszane do leżenia w pozycji grzbietowej. Mocz jest usuwany z pęcherza moczowego i powoli wkrapla się 50 μl poli-L-lizyny (PLL) w tempie 10 μl/20 s za pomocą cewnika dożylnego 24 G. Pozostawia się go w pęcherzu moczowym na 20 minut poprzez zatkanie cewnika. Cewnik jest usuwany, a PLL jest usuwany poprzez delikatny nacisk na pęcherz. Następnie wkrapla się linię komórkową raka pęcherza moczowego myszy (1 x 105 komórek/50 μL) w ilości 10 μL/20 s. Cewnik jest zakorkowany, aby zapobiec przedwczesnej ewakuacji. Po 1 godzinie myszy są reanimowane lekiem odwracającym, a pęcherz jest opróżniany. Powolne tempo wkraplania jest ważne, ponieważ zmniejsza refluks pęcherzowo-moczowodowy, który może powodować powstawanie guzów w górnych drogach moczowych i nerkach. Linia komórkowa powinna być dobrze zawieszona, aby zmniejszyć zlepianie się komórek, ponieważ może to prowadzić do nierównych rozmiarów guza po implantacji.
Ta technika indukuje nowotwory z dużą skutecznością. Wzrost guza jest monitorowany przez wydzielanie PSA z moczem. Monitorowanie markerów PSA jest bardziej wiarygodne niż obrazowanie ultradźwiękowe lub fluorescencyjne w wykrywaniu obecności guzów w pęcherzu moczowym. Guzy u myszy na ogół osiągają maksymalny rozmiar, który negatywnie wpływa na zdrowie o około 3-4 tygodnie, jeśli nie są leczone. Monitorując wzrost guza, możliwe jest odróżnienie myszy, które zostały wyleczone, od tych, którym nie udało się wszczepić guzów. Mając do dyspozycji tylko analizę punktu końcowego, można błędnie założyć, że ten ostatni został wyleczony przez terapię.

Stwierdzono, że sekrecja PSA z komórek MB49 różni się w zależności od zastosowanej pożywki wzrostowej. Komórki MB49-PSA hoduje się w pożywce DMEM, ponieważ prowadzi to do zwiększonej sekrecji PSA (Rycina 1A). W celu określenia czułości testu PSA ELISA oraz real-time PCR, różne liczby komórek MB49 wydzielających PSA zmieszano z komórkami rodzicielskimi MB49. PSA ELISA wykrywa minimum 1 x 105 komórki wydzielające PSA/1 x 106 komórki (Rysunek 1B...

Ten protokół opisuje powstawanie mysich ortotopowych guzów pęcherza moczowego u samic myszy C57BL/6J oraz monitorowanie wzrostu guza.

Mysi ortotopowy model guza pęcherza moczowego i system wykrywania guzów

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

Ogólnym celem tej niechirurgicznej metody jest konsekwentne indukowanie ortotopowych nieinwazyjnych nowotworów pęcherza moczowego u myszy, które można łatwo monitorować w celu oceny terapii wewnątrz pęcherza. Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie raka pęcherza moczowego, takie jak ocena nowych terapii wewnątrz pęcherza.Główną zaletą tej techniki jest łatwość implantacji guzów u myszy oraz możliwość monitorowania ich wzrostu, co pomaga w dokładnym określeniu odpowiedzi na zastosowane terapie. Na dzień przed implantacją, gdy komórki osiągną około 80% konfluencji, należy przeprowadzić pasaż komórek guza MB49 PSA w pełnej pożywce DMEM w rozcieńczeniu od jeden do dwóch. W dniu zabiegu należy zebrać i policzyć komórki, upewniając się, że są one w wystarczająco dobrym stanie zdrowotnym.Wymieszać równą objętość zawiesiny komórkowej i 4% Trypan Blue, a następnie policzyć nieprzefarbowane żywe komórki za pomocą hemocytometru. Żywalność komórek powinna wynosić co najmniej 80%. Następnie resuspender komórki w stężeniu dwóch milionów na mililitr w 15 mililitrowej probówce wirówkowej i przemyć je trzykrotnie w DMEM.Następnie przechowywać je w niskiej temperaturze aż do momentu wstrzyknięcia. Po znieczuleniu myszy żeńskiej należy nawodnić zwierzę poprzez podanie wewnątrzbrzuszne roztworu Hartmanna w dawce 1 milliliters na 10 gramów masy ciała. Powtarzać tę procedurę co jedną lub dwie godziny w trakcie trwania znieczulenia.Następnie na oba oczy nanieś sterylną maść okulistyczną, powtarzając czynność w razie potrzeby. Następnie ułóż mysz na plecach na ręcznikach papierowych, na podkładce grzewczej, aby utrzymać temperaturę ciała. Na koniec unieruchom tylne kończyny za pomocą taśmy.Następnie wywrzyj delikatny nacisk na dolny region brzucha i zbierz mocz do probówki o pojemności 1,5 ml, aby zmierzyć podstawowy poziom PSA w moczu. Potem napełnij strzykawkę o pojemności 1 ml sterylnym PLL i podłącz cewnik do wkłuć dożylnych o rozmiarze 24 G po usunięciu prowadnika. Nałóż lubrykant na końcówkę cewnika.Następnie wprowadź cewnik do cewki moczowej i za pomocą pęsety skieruj go do pęcherza. Przerwij wprowadzanie po wyczuciu oporu. Następnie powoli wstrzyknij 50 µL PLL w tempie 10 µL co 20 sekund, aby uniknąć refluksu moczowodzowego.Następnie pozostaw cewnik w pęcherzu na 20 minut, stosując korek, aby zapobiec odpływowi. Po 20 minutach usuń cewnik i opróżnij pęcherz z całej zawartości, delikatnie uciskając podbrzusze. Następnie, używając strzykawki o pojemności 1 ml, wypłucz pozostałą zawartość z cewnika.Następnie dokładnie wymieszaj komórki MB49 PSA poprzez pipetowanie i pobierz je do strzykawki o pojemności 1 mL. Podłącz cewnik i nasmaruj go w taki sam sposób jak poprzednio. Wprowadź cewnik do pęcherza moczowego w taki sam sposób jak poprzednio.Następnie należy przystąpić do wstrzykiwania komórek, stosując stopniowe podawanie w ilości 10 µL co 20 sekund. Następnie należy odczekać jedną godzinę. Po upływie godziny należy usunąć cewnik i opróżnić pęcherz z jego zawartości.Następnie wypuść mysz, kładąc ją na brzuchu i wybudź za pomocą iniekcji atipamezolu. Teraz monitoruj mysz, aż odzyska zdolność do utrzymania pozycji brzusznej, a następnie przenieś ją z powrotem do klatki macierzystej. Stwierdzono, że sekrecja PSA w komórkach MB49 różni się w zależności od zastosowanej pożywki wzrostowej.Do hodowli wykorzystano pożywkę DMEM, ponieważ zapewniała ona najwyższą sekrecję PSA. Aby określić czułość testu PSA ELISA, zmieszano różną liczbę komórek MB49 wydzielających PSA z komórkami rodzicielskimi MB49. Analiza pozwoliła na wykrycie co najmniej 100 000 komórek wydzielających PSA na milion komórek.Metoda implantacji guza PLL prowadzi do rozwoju wielu guzów w pęcherzu moczowym. Do pomiaru poziomu PSA metodą ELISA można wykorzystać zarówno próbki moczu zbierane przez noc w klatkach metabolicznych, jak i pojedyncze próbki moczu. We wszystkich badaniach na zwierzętach masę ciała myszy rejestrowano jako wskaźnik stanu zdrowia.Poziom PSA w moczu monitorowano w odstępach tygodniowych jako miarę wzrostu guza. U każdej myszy zastosowano inne terapie, co doprowadziło do uzyskania różnej wielkości guzów. Dwa tygodnie po implantacji pobrano i poddano obróbce pęcherze moczowe.Wielkości guzów były zróżnicowane, co zostało przewidziane na podstawie pomiarów PSA. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać wiedzę na temat tego, jak wywołać ortotopowe guzy pęcherza moczowego u myszy oraz jak monitorować ich wzrost. Po opanowaniu tej techniki procedura ta może być wykonana w ciągu dwóch godzin na jedną mysz.Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby upewnić się, że komórki zostały wymieszane przed implantacją, oraz aby przeprowadzać implantację powoli. Po wykonaniu tej procedury można zastosować inne metody, takie jak analiza cytometryczna Uvm lub test ELISA, w celu zbadania aktywacji układu odpornościowego po terapii.

a-murine-orthotopic-bladder-tumor-model-and-tumor-detection-system

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Guzy pęcherza moczowego u myszy żeńskich indukuje się w sposób małoinwazyjny poprzez cewnikowanie, lokalną kauteryzację oraz następującą po niej adhezję komórek raka do miejsc oparzeń.

Ortotopowy model mysiego raka pęcherza moczowego

Ustanowienie ortotopowego modelu nowotworu pęcherza moczowego w celu oceny efektów przeciwnowotworowych wewnątrz pęcherzowo podanego saRNA oraz monitorowanie wzrostu guza za pomocą ultradźwięków i obrazowania bioluminescencyjnego.

Ortotopowy model nowotworu pęcherza moczowego oraz ocena leczenia wewnątrz pęcherzowego za pomocą saRNA

W tym filmie opisujemy ortotopową transplantację hodowanych organoidów guza pęcherza moczowego do mysiego pęcherza moczowego, aby zbadać rolę środowiska narządu w rozwoju nowotworów.

Model organoidów guza pęcherza moczowego: metoda ortotopowego przeszczepu organoidów pęcherza moczowego do mysiego pęcherza biorcy

W tym filmie opisujemy dopęcherzową procedurę dostarczania komórek rakowych do pęcherza moczowego modelu mysiego. Procedura ta pomaga wygenerować ortotopowy model guza pęcherza moczowego, który można wykorzystać do opracowania strategii terapeutycznych.

Modelowanie ortotopowego guza pęcherza moczowego w modelu mysim: procedura dopęcherzowego podawania komórek rakowych do mysiego pęcherza moczowego

Implantacja komórek nowotworowych do narządu pochodzenia może służyć jako użyteczny model przedkliniczny do oceny nowych terapii. Komórki raka pęcherza moczowego MB49 mogą być hodowane w pęcherzu moczowym po wkropleniu dopęcherzowym. Protokół ten demonstruje cewnikowanie pęcherza myszy w celu implantacji guza i dostarczenia adenowirusa.

Ortotopowy model raka pęcherza moczowego do badań nad dostarczaniem genów

Sprawdzona technika szczepienia pierwotnych inwazyjnych ksenoprzeszczepów raka ortotopowego pęcherza moczowego wymaga laparotomii i mobilizacji pęcherza. Procedura ta powoduje znaczną zachorowalność u myszy, jest technicznie trudna i czasochłonna. W związku z tym opracowaliśmy wysoce precyzyjne, przezskórne podejście wykorzystujące kontrolę ultrasonograficzną.

Małoinwazyjne założenie mysich ortotopowych ksenoprzeszczepów pęcherza moczowego

Guzy pęcherza moczowego u myszy są wywoływane przez rakotwórczy N-butyl-N-(4-hydroksybutylo)nitrozoaminowy czynnik rakotwórczy (BBN). Wytwarzanie guzów pęcherza moczowego jest niejednorodne; Dlatego konieczna jest dokładna ocena obciążenia guzem przed randomizacją do leczenia eksperymentalnego. Tutaj przedstawiamy szybki, niezawodny protokół MRI do oceny wielkości i stadium guza.

Rezonans magnetyczny Ocena rakotwórczych guzów pęcherza moczowego myszy

Ten protokół dostarcza szczegółowych kroków eksperymentalnych w celu ustanowienia trójwymiarowej hodowli in vitro organoidów guza pęcherza moczowego pochodzących z wywołanego przez czynnik rakotwórczy mysiego raka pęcherza moczowego. Opisano metody hodowli, w tym pasażowanie, inżynierię genetyczną i ortotopowe przeszczepianie organoidów nowotworowych.

Hodowla, manipulacja i ortotopowe przeszczepienie organoidów guza pęcherza moczowego myszy

Aby wyjaśnić wieloetapowy proces rozprzestrzeniania się raka jajnika w otrzewnej, obecne badanie przedstawia mysi eksperymentalny model pierwotnego rozwoju guza i przerzutów do otrzewnej poprzez ortotopową inokulację tymi komórkami nowotworowymi.<br...

Mysi eksperymentalny model pierwotnego rozwoju guza i przerzutów do otrzewnej za pomocą ortotopowej inokulacji komórkami raka jajnika

Opisujemy metodę wykorzystującą ukierunkowane promieniowanie obwodowe do wywołania u myszy zachowania przypominającego zmęczenie. Wybrana, nieśmiertelna dawka napromieniania prowadzi do tygodniowego ograniczenia dobrowolnej aktywności związanej z bieganiem po kółkach.

Mysi model zmęczenia wywołanego promieniowaniem obwodowym

Poznaj niechirurgiczną metodę generowania ortotopowych guzów pęcherza moczowego u myszy C57BL/6J, umożliwiającą łatwe monitorowanie wzrostu nowotworu i ocenę terapii wewnątrzpęcherzowych.

Mysi ortotopowy model guza pęcherza moczowego i system wykrywania guzów

Przeglądaj więcej filmów