Mysi przeszczep skóry o pełnej grubości

Ogólnym celem niniejszego artykułu wideo jest przeprowadzenie pełnowarstwowego przeszczepu skóry oraz opisanie kluczowych kroków niezbędnych do pomyślnego wykonania tego zabiegu. Pełnowarstwowy przeszczep skóry u myszy jest ugruntowanym modelem do badania odpowiedzi alloimmunologicznych oraz odrzucania przeszczepów. Procedura ta jest łatwa do wykonania i nie wymaga zaawansowanych technik mikrochirurgicznych.

Odrzucenie przeszczepu w tym modelu przebiega w ramach bardzo powtarzalnej reakcji immunologicznej i jest łatwo monitorowane poprzez bezpośrednią inspekcję oraz palpację. Dodatkowo, w bardziej złożonych modelach transplantacyjnych można przeprowadzić wtórny przeszczep skóry z dawcy dopasowanego lub od osoby trzeciej jako alternatywną i prostą metodę oceny tolerancji swoistej dla dawcy. Po znieczuleniu myszy dawcy zgodnie z protokołem tekstowym, należy użyć maszynki elektrycznej do ogolenia grzbietu zwierzęcia.

Następnie odkaż skórę 10% roztworem powidon-jodu. Za pomocą nożyczek i tępej dyssekcji pobierz skórę grzbietową od biodra do karku na poziomie tkanki łącznej rozpływistej. Umieść skórę grzbietową pod mikroskopem i użyj precyzyjnych nożyczek do tenotomii, aby oddzielić tkankę łączną oraz panniculus carnosus od skóry.

Wytnij przeszczepy o wymiarach 15 na 15 milimetrów ze skóry grzbietu, przygotowując łoże pod przeszczep o rozmiarze od 10 na 10 do 15 na 15 milimetrów. Przeszczepy przechowuj w czarce Petriego na gazie nasączonej PBS, a następnie umieść naczynie w lodzie. Znieczul mysz biorcę zgodnie z protokołem opisanym w tekście.

Wygolić bok grzbietu zwierzęcia w miejscu, w którym zostanie umieszczony przeszczep, a następnie podać 0,02 mg/kg buprenorfiny w celu przeciwbólowego leczenia pooperacyjnego. Do dezynfekcji obszaru użyć 10% jodyny (povidone-iodine). Za pomocą nożyczek, tak powierzchownie jak to możliwe, wyciąć kwadrat skóry o wymiarach od 10 × 10 do 15 × 15 mm.

Należy zadbać o zachowanie panniculus carnosus oraz naczyń krwionośnych przebiegających powierzchownie względem tej warstwy. Następnie ułożyć przeszczep na łożysku przeszczepu, unikając powstawania fałdów wzdłuż krawędzi. Potem nałożyć osiem szwów na narożnikach przeszczepu oraz w połowie każdej krawędzi, przerowadzając igłę przez przeszczep, a następnie przez panniculus carnosus łożyska przeszczepu, poniżej otaczającej skóry biorcy.

Połóż złożoną gazę na podwójnym bandażu, a następnie umieść zwierzę na bandażu stroną z przeszczepem do dołu, zdejmując maskę anestezjologiczną, aby zwierzę mogło częściowo dojść do siebie. Następnie owiń zwierzę bandażem. Najbardziej krytycznym czynnikiem w procesie przyjmowania przeszczepu jest rewaskularyzacja tkanki przeszczepionej poprzez wrastanie naczyń gospodarza do przeszczepu.

Najważniejszymi etapami są sekcja panniculus carnosus oraz prawidłowe nałożenie opatrunku. Bezpośrednio po operacji podaj enrofloksacynę w dawce 5 mg/kg w celu profilaktyki przeciwzakaźeniowej. Umieść przeszczepioną mysz w czystej klatce do czasu pełnego wybudzenia z narkozy.

Obserwuj mysz przez jedną godzinę po operacji, przed powrotem do klatki. Monitoruj uważnie mysz podczas rekonwalescencji, aby upewnić się, że bandaż nie ogranicza ruchomości klatki piersiowej i oddychania. Osiem dni później obejrzyj i zbadaj palpacyjnie przeszczep pod kątem obecności strupów, kurczenia się lub twardnienia.

Jeśli wystąpi którykolwiek z tych objawów, może to oznaczać, że przeszczep nie uzyskał prawidłowej unaczynienia i należy go uznać za niepowodzenie techniczne. Codziennie monitoruj przeszczep pod kątem objawów odrzucenia. Przeszczepy uznaje się za odrzucone, gdy 90% lub więcej tkanki przeszczepionej ulegnie martwicy.

W modelach całkowitego niedopasowania pełnowarstwowe przeszczepy skóry są zazwyczaj odrzucane w ciągu od ośmiu do 12 dni. W modelach częściowego niedopasowania reakcje odrzucenia są wolniejsze, bardziej zmienne, a wygląd przeszczepu skóry charakteryzuje się mniej wyraźnymi zmianami, takimi jak obkurczanie się lub utrata włosów. Ostre odrzucenie przeszczepu zazwyczaj rozpoczyna się od obrzęku i rumienia w obrębie przeszczepu.

Po tych zdarzeniach następuje wysychanie przeszczepu, tworzenie się strupa i kurczenie, co widać tutaj. W zależności od stopnia niezgodności MHC oraz zastosowanego protokołu immunosupresji, odrzucenie może nastąpić w procesie podostrym, charakteryzującym się subtelnymi zmianami, takimi jak utrata owłosienia, pigmentacji, linii papilarnych oraz objętości przeszczepu. W takich przypadkach odrzucony przeszczep wydaje się błyszczący, biały i pozbawiony włosów, z nierównymi krawędziami.

Przy zastosowaniu myszy BALB/c jako dawców i C57 black 6 jako biorców zaobserwowano, że hamowanie glikolizy i fosforylacji oksydacyjnej lub samego metabolizmu glutaminy przedłuża przeżycie przeszczepu skóry. Jednak jednoczesne zablokowanie tych trzech szlaków doprowadziło do znaczącego zwiększenia przeżywalności przeszczepu. Co więcej, potrójna terapia metaboliczna okazała się skuteczniejsza niż konwencjonalna cyklosporyna lub rapamycyna.

Ponadto histologia przeszczepów skóry z grupy leczonej metabolicznie wykazała bardziej zachowaną strukturę tkanki oraz mniejszy naciek zapalny limfocytarny w porównaniu z tkanką nieleczoną. Wyniki transplantacji narządów znacznie się poprawiły dzięki postępowi w procedurach chirurgicznych i protokołach immunosupresji. Jednakże długotrwała immunosupresja wiąże się ze znacznymi skutkami ubocznymi, a opracowanie nowych strategii promujących tolerancję pozostaje celem współczesnych badań nad transplantacją.

Znana jest istotna rola metabolizmu w regulacji limfocytów T. Poprzez hamowanie glikolizy, fosforylacji oksydacyjnej oraz metabolizmu glutaminy udało nam się znacząco zwiększyć przeżywalność allograftu. To nowatorskie podejście okazało się bardziej skuteczne niż terapia konwencjonalna i stanowi zmianę paradygmatu w potencjalnym podejściu do regulacji odporności i transplantacji.