Dostarczanie wewnątrzprzewodowe do gruczołu sutkowego królika

Ogólnym celem tej procedury jest dostarczenie roztworów wodnych do przewodu sutkowego królika i wizualizacja porodu wewnątrzprzewodowego za pomocą obrazowania ultradźwiękowego. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie biologii piersi, takie jak to, w jaki sposób terapie oddziałują inaczej na środowisko przewodu sutkowego w porównaniu z innymi miejscami podawania. Główną zaletą tej techniki jest to, że odczynnik kontrastowy do obrazowania lub wszelkie potencjalne środki terapeutyczne, które mają być oceniane, mogą być podawane miejscowo do tkanki, w której powstają zmiany w piersiach.

Technikę zademonstruje Amelia Clark, technik w moim laboratorium. Aby rozpocząć tę procedurę, ostrożnie ogol brzuch ogonowy znieczulonego królika w okolicy trzeciej i czwartej pary strzyków pachwinowych. Po usunięciu większości włosów nałóż krem do depilacji na ogolone miejsca i 10 minut po aplikacji usuń krem za pomocą wilgotnego ręcznika papierowego zwilżonego ciepłą wodą.

Następnie przetrzeć ten obszar gazikami nasączonymi alkoholem, aby oczyścić miejsce wstrzyknięcia. Umieść królika na jego grzbiecie w korycie w kształcie litery V wyłożonym kocem z ciepłą wodą z recyrkulacją w chłonnej podkładce. Aby przygotować środek kontrastowy, należy go rozpuścić zgodnie z instrukcjami producenta.

Następnie delikatnie kołysz fiolką, aby wymieszać. Zastosowany tutaj środek kontrastowy jest stabilny w temperaturze pokojowej przez cztery do sześciu godzin po rozpuszczeniu. W tej procedurze zlokalizuj trzecią i czwartą parę strzyków pachwinowych, które mają zostać wstrzyknięte.

Następnie załaduj 0,2 mililitra sterylnego 0,9 soli fizjologicznej do jednomililitrowej strzykawki tuberkulinowej typu luer lock za pomocą igły o rozmiarze 22. Wyrzuć igłę o rozmiarze 22, gdy sól fizjologiczna znajdzie się w strzykawce i zastąp ją sterylną igłą o rozmiarze 25. Następnie delikatnie przetrzyj obszar 85% alkoholem izopropylowym na waciku guaze.

Z ukosem igły do góry i strzykawką równolegle do ciała zwierzęcia, włóż igłę z boku smoczka i powoli wstrzyknij od 0,1 do 0,2 mililitra soli fizjologicznej, aby umożliwić lepszą wizualizację otworów kanałowych. Następnie załadować 0,2 mililitra roztworu do wstrzykiwań do jednomililitrowej strzykawki tuberkulinowej typu luer lock. Delikatnie chwyć smoczek kciukiem i palcem wskazującym, a następnie lekko go unieś w celu wstrzyknięcia przewodowego.

Utrzymując podniesioną pozycję smoczka, ostrożnie kaniuluj interesujący nas przewód za pomocą igły z końcówką o rozmiarze 25. Po kaniulacji delikatnie przekręć strzykawkę typu luer lock na piaście igły infuzyjnej z końcówką, aż zostanie zablokowana na miejscu. Podnieś smoczek i powoli wstrzykuj roztwór, aby zminimalizować potencjalne uszkodzenia spowodowane przez szybko poruszające się płyny w kanale.

Teraz nałóż dużą ilość odwirowanego żelu ultradźwiękowego na skórę obszaru zainteresowania. Upewnij się, że w żelu nie ma pęcherzyków, ponieważ pogorszą one jakość obrazu. Następnie ustaw głębokość obrazowania na sześć milimetrów.

Umieść przetwornik 21 megaherców w kontakcie z żelem i zeskanuj obszar zainteresowania w trybie B. Obserwuj środek kontrastowy w skanowanym obszarze, w tym w otworze kanałowym i w całym kanale, aby potwierdzić pomyślne dostarczenie wewnątrzprzewodowe. Następnie przechwyć i zapisz obraz.

Usuń żel ultradźwiękowy ze skóry zwierzęcia za pomocą gazików. Następnie należy sprawdzić miejsce wstrzyknięcia i upewnić się, że nie ma śladów urazu okolicy strzyka lub otaczającej tkanki. Obrzęk w okolicy smoczka prawdopodobnie wskazuje na wstrzyknięcie poduszeczki tłuszczowej do sutka, a nie na udane wstrzyknięcie doprzewodowe.

Odczynnik kontrastowy jest lokalizowany natychmiast po podaniu i jest wizualizowany 30 minut po porodzie i 45 minut po porodzie. Trwałość odczynnika w przewodzie sutkowym umożliwia wizualizację przez cały czas trwania tego procesu. To zdjęcie przedstawia wygląd zewnętrzny po doprzewodowym wstrzyknięciu 0,2 mililitra niebieskiego roztworu Evansa.

Po otwarciu skóry Evans blue pozwala na wizualizację całego drzewa sutkowego i potwierdza nienaruszoną strukturę przewodową. A ten obraz przedstawia cały okaz wierzchowca okolicy pachwinowego gruczołu sutkowego po utrwaleniu i zabarwieniu karminowym ałunem. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w około 15 minut, z wyłączeniem czasu potrzebnego do działania znieczulenia.

Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać o podniesieniu smoczka w celu wyprostowania kanalików podczas porodu wewnątrzprzewodowego. Przez cały czas postępuj zgodnie z wytycznymi dotyczącymi dobrostanu zwierząt obowiązującymi w Twojej instytucji. Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak zaawansowane obrazowanie lub analizy tkanek w punkcie końcowym, takie jak lizo lub immunohistochemia, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące farmakodynamiki lub zmian morfologicznych na poziomie tkanek wywołanych przez podanie środka terapeutycznego.

Po opracowaniu, technika ta toruje drogę naukowcom zajmującym się biologią sutka do zbadania w przyszłości dostarczania środków obrazowania, a także środków terapeutycznych w przewodzie sutkowym. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać dostawę śródprzewodową do gruczołu sutkowego królika.