Zastosowanie centralnej linii żylnej do podawania płynów, leków i składników odżywczych w mysim modelu choroby krytycznej

Ogólnym celem tej centralnie skategoryzowanej mysiej metody podwiązania i nakłucia jelita ślepego (CLP) jest stworzenie powtarzalnego modelu przedłużającej się choroby krytycznej z intensywnymi środkami leczenia, aby naśladować ludzkie warunki kliniczne. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie medycyny intensywnej terapii. O patogenezie zmian endokrynologicznych i metabolicznych podczas ostrych i długotrwałych chorób krytycznych.

Główną zaletą tej techniki jest to, że łączy w sobie dobrze ustandaryzowaną technikę CLP z wykorzystaniem centralnej linii żylnej do podawania płynów, leków i składników odżywczych. Procedurę zademonstruje Thomas Dufour, technik z naszego laboratorium. Aby przygotować końcówkę przewodu żylnego, szybko zanurz środkową część kawałka 60-centymetrowej rurki z mikro-renathanu w oleju sezamowym o temperaturze 220 stopni Celsjusza lub cieplejszym.

Delikatnie pociągnij za końce rurki, aby rozciągnąć środek rurki, aby uzyskać wąską średnicę środkową i użyj ostrza skalpela, aby przeciąć rurkę na dwie równe 30-centymetrowe części. Teraz podłącz rurkę do łącznika z polietylenu PE 50, krętlika i igły Luer, aby skonstruować cewnik, jak pokazano, i nałóż silny, szybko działający klej adhezyjny na wszystkie połączenia. Po utwardzeniu kleju przepłucz cewnik powietrzem, aby sprawdzić, czy nie ma wycieków, następnie wytnij 80-centymetrowy kawałek z metalowego drutu o średnicy 0,8 milimetra i złóż drut z powrotem na siebie, aby utworzyć pętlę.

Poprowadź trzy perły przez podwójny drut pętli i przeprowadź końcówkę wysterylizowanego cewnika przez trzy perły, aby przymocować cewnik do drutu. Znieczulenie ważącego od 27 do 32 gramów, 24-tygodniowego samca c57 Black Six Mouse i potwierdź sedację przez brak reakcji na szczypanie palca. Użyj kleszczy, aby delikatnie wyciągnąć język z ust, aby uniknąć połknięcia języka.

Następnie ogol obszar operacyjny, a następnie umieść mysz w pozycji leżącej na wstępnie podgrzanej poduszce grzewczej. Zdezynfekuj odsłoniętą skórę 70% etanolem i nałóż niewielką ilość lubrykantu okulistycznego. Naciekaj miejsca operacyjne środkiem przeciwbólowym i wykonaj małe nacięcie u podstawy grzbietowej strony głowy.

Odsłoń tylne mięśnie szyjki macicy i przeciągnij kawałek nylonu 3.0 pod mięśnie, aby związać pętlę drutu mocującego z mięśniem. Następnie, trzymając mysz po prawej stronie, wykonaj małe pionowe nacięcie w skórze brzusznej szyi. Przełóż igłę o rozmiarze 18 podskórnie przez to brzuszne nacięcie w kierunku nacięcia z tyłu i przeciągnij cewnik przez igłę, aby zewnętrzizować igłę po stronie brzusznej.

Trzymając mysz na plecach, przełóż nylonową nić z trzema zerami za górnymi zębami siekaczy i przyklej nylon do poduszki grzewczej. Następnie zabezpiecz ogon i kończyny przednie w pozycji rozciągniętej. Teraz skoncentruj mikroskop preparacyjny i użyj kleszczy, aby delikatnie usunąć tkankę tłuszczową i gruczoły w nacięciu brzusznym, aż będzie można uwidocznić żyłę szyjną.

Umieść końcówkę kleszczy między żyłą a tkanką łączną i wielokrotnie otwieraj kleszcze równolegle do żyły, aby tępo wyciąć żyłę szyjną z tkanki łącznej i podskórnej wokół naczynia. Gdy naczynie zostanie odizolowane, umieść kleszcze pod żyłą szyjną i wprowadź dwa kawałki trzech jedwabnych nici zero pod żyłę. Ustawienie jednego kawałka, przybliżonego do rozwidlenia żyły szyjnej dla podwiązania czaszki i jednego kawałka blisko mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowego dla podwiązania ogonowego.

Zaciśnij więzadła czaszkowe i ogonowe, aby rozciągnąć żyłę i zapobiec nadmiernemu krwawieniu podczas zakładania cewnika. Użyj trzeciej nici, aby utworzyć luźną ligatturę, a następnie za pomocą mikronożyczek wykonaj nacięcie wzdłuż żyły między ligaturami czaszkowymi i ogonowymi wystarczająco duże, aby przejść przez cewnik. Za pomocą kleszczy włóż cewnik na 11 milimetrów do żyły i luźno zabezpiecz cewnik środkową ligaturą.

Delikatnie przepłucz cewnik sterylnym roztworem soli fizjologicznej, aby potwierdzić jego prawidłowe umieszczenie. Następnie mocno dokręć więzadło ogonowe i środkowe. Zwiąż ze sobą końce ligatur ogonowej i środkowej, aby zabezpieczyć cewnik.

Potwierdzenie, że żyła nie jest niedrożna przez węzły, poprzez przepłukanie cewnika po każdym wiązaniu. Na koniec podwiązaj również ligaturę czaszkową. Następnie zamknij nacięcie pięcioma zerowymi szwami jedwabnymi.

W przypadku podwiązania i nakłucia jelita ślepego wykonaj jednocentymetrowe nacięcie linii środkowej przez skórę dolnej połowy brzucha, uważając, aby nie przeniknąć do jamy otrzewnej. Po zidentyfikowaniu linea alba mięśni brzucha. Wykonaj nacięcie międzymięśniowe, aby uzyskać dostęp do jamy otrzewnej.

Za pomocą kleszczy anatomicznych odizoluj i zewnętrznij jelito ślepe. Podwiązywać jelito ślepe na 50% jego długości za pomocą trzech zerowych szwów jedwabnych, uważając, aby nie zwęzić zastawki krętniczo-kątniczej, aby zachować ciągłość jelita. Następnie użyj igły o rozmiarze 18, aby przebić jelito ślepe pojedynczym nakłuciem na wylot i na wylot w połowie drogi między podwiązaniem a końcem jelita ślepego, wyciskając niewielką ilość kału z otworu, aby zapewnić drożność po wyjęciu igły.

Ułóż jelito w jamie brzusznej i zamknij otrzewną i skórę pięcioma zerowymi szwami jedwabnymi. Trzymając mysz w pozycji leżącej, przyklej cewnik do przewodu mocującego. Następnie umieść mysz w indywidualnej klatce z materiałem gniazdowym i drewnianym klockiem.

Za pomocą stojaka z regulowanym zaciskiem umieść urządzenie obrotowe w zacisku i mocno przyklej wolną część metalowego drutu mocującego do punktu obrotu krętlika. Następnie umieść klatkę w szafce dla zwierząt o temperaturze 27 stopni Celsjusza z 12-godzinnymi cyklami światła i ciemności. Podłączyć strzykawkę zawierającą odpowiednią mieszaninę zrównoważonych koloidów i krystaloidów do przewodu żylnego i użyć dokładnej pompy infuzyjnej napędzanej strzykawką, aby rozpocząć resuscytację płynem z prędkością 0,3 milimetra na godzinę.

Po sześciu godzinach wstrzyknij środek przeciwbólowy i antybiotyki. Analiza krzywych przeżycia w jednym pięciodniowym i jednym siedmiodniowym eksperymencie z podwiązaniem i nakłuciem jelita ślepego pokazuje, że wskaźniki przeżycia nie różniły się znacząco między tymi dwoma badaniami do piątego dnia, co podkreśla powtarzalność zestawu eksperymentalnego. Podwiązanie 50% jelita ślepego w połączeniu z antybiotykami, resuscytacją płynów i całkowitym żywieniem pozajelitowym za pomocą cewnika żylnego w żyle szyjnej powoduje 13% śmiertelność po jednym dniu krytycznej choroby.

24%śmiertelność po trzech dniach krytycznej choroby i 27%do 31%śmiertelność po pięciu dniach krytycznej choroby i 36%śmiertelność po siedmiu dniach krytycznej choroby. Zdrowe myszy karmione para, które były ograniczone kalorycznie do spożycia składników odżywczych przez krytycznie chore myszy, nie wykazały jednak żadnej śmiertelności w żadnym eksperymencie. Po opanowaniu techniki przez 10 do 15 zwierząt, można założyć cewnik i wykonać CLP w ciągu 45 minut, jeśli procedury są wykonywane prawidłowo.

Podczas wykonywania tego zabiegu należy pamiętać o ostrożnym wprowadzeniu cewnika do żyły. Umieszczenie cewnika zbyt głęboko w sercu spowoduje wywołanie arytmii serca. Umieszczając go niewystarczająco daleko, można go łatwo wyciągnąć.

Zawsze upewnij się, że cewnik jest umieszczony w świetle naczynia. Jeśli cewnik zostanie umieszczony w warstwach ściany naczynia, płyny będą wyciekać do otaczających tkanek. Model ten może wymagać rozległego zabiegu chirurgicznego i codziennej intensywnej opieki nad zwierzęciem.

Rezultatem jest jednak stabilny i powtarzalny model, który pozwala na badanie wielu aspektów ostrych i długotrwałych chorób krytycznych.