Name: Przygotowanie ziołolecznictwa: wywar z Er-Xian i surowica zawierająca Er-Xian do eksperymentów in vivo i in vitro (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Naucz się przygotowywać wywar Er-Xian zgodnie z klinicznymi metodami ekstrakcji wodnej oraz surowicę zawierającą ten preparat do badań in vivo i in vitro na modelach zwierzęcych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (81573992). Dziękujemy Emily K. Lo i Kathleen DiNapoli za pomoc w redagowaniu języków.

Protokół jest zgodny z wytycznymi Szanghajskiego Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej i jest zatwierdzony przez Szanghajską Komisję Etyki Zwierząt w Szanghaju.
1. Protokół I: Przygotowanie EXD
<ol>
	<li>kalkulacja
	<ol>
		<li>Podawaj EXD grupie leczonej 10 sześciomiesięcznych samic myszy z regionem kontrolnym imprintingu (ICR) (0,02 kg / mysz), 5 dni w tygodniu przez 12 tygodni. 
		UWAGA: Wymagane jest łącznie 1.702 EXD. Ponieważ EXD są mierzone w dyskretnych przyrostach, w rzeczywistości należy podawać 2 EXD.</li>
		<li>Obliczyć objętość EXD zastosowanej na mysz (tj. V = (0,1418 EXD/kg•dzień) * (0,02 kg/mysz) * 50 ml/EXD = 0,14 ml/mysz•dzień).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>moczenie
	<ol>
		<li>Umieścić wszystkie surowce z dwóch EXD (tj. Curculigo orchioides Gaertn (18 g), Herbaa Epimedii (18 g), Radix Morindae Officinalis (18 g), Radix Angelicae Sinensis (18 g), Cortex Phellodendri (12 g) i Rhizoma Anemarrhenae (12 g), łącznie 96 g) do pojemnika z pokrywką. 
		UWAGA: Zalecany jest pojemnik ceramiczny.</li>
		<li>Maceruj surowe zioła w 500 ml wody destylowanej przez 1 godzinę; woda powinna przykryć zioła na około cal. Niech wszystkie zioła dokładnie nasiąkną.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pierwszy wywar wodny
	<ol>
		<li>Zioła podgrzewamy w kuchence gazowej lub indukcyjnej na dużej mocy, aż woda się zagotuje (około 5 - 10 min; czas ten zależy od mocy grzewczej, naczynia oraz ilości ziół i wody). Zmniejsz moc do niskiego gotowania na wolnym ogniu przez 2 godziny.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pierwsza filtracja
	<ol>
		<li>Przykryj szklaną zlewkę o pojemności 500 ml zwykłą bibułą filtracyjną lub gazą i bawełną. Ostrożnie wylej wywar do zlewki przez filtr. Pozostaw zioła w pojemniku.</li>
		<li>Pozostałą pozostałość ziół z bibuły filtracyjnej należy włożyć z powrotem do pojemnika.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Drugi wywar wodny
	<ol>
		<li>Dodaj wodę destylowaną do pojemnika z ziołami; pozwól jej przykryć zioła na około cal.</li>
		<li>Powtórz krok 1.3.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Druga filtracja
	<ol>
		<li>Powtórz kroki 1.4.1 i 1.4.2.</li>
		<li>Wlej drugi wywar do tej samej zlewki. Wymieszaj ze sobą pierwszy i drugi wywar.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>koncentracja
	<ol>
		<li>Umieść zlewkę na kuchence gazowej z bezazbestową gazą drucianą między nimi, podgrzej wywar na małym ogniu i powoli i ciągle mieszaj szklaną pałeczką.</li>
		<li>Gdy wywar zmniejszy się do 200 ml, przenieś go do zlewki o pojemności 500 ml.</li>
		<li>Powtarzać krok 1.7.1, aż wywar zmniejszy się do 100 ml.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przechowywanie i administracja
	<ol>
		<li>Przenieś skoncentrowany wywar do sterylnej szklanej butelki. Pozwól mu ostygnąć do temperatury pokojowej (RT). Przechowywać w temperaturze 4 °C w przypadku użycia w ciągu jednego tygodnia lub w temperaturze -70 °C do długotrwałego przechowywania.</li>
		<li>Za pomocą igły do zgłębnika podawaj 0,14 ml / mysz wywaru myszom po owariektomii (OVX) raz dziennie, 5 dni w tygodniu przez 12 tygodni.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Protokół II: Przygotowanie surowicy zawierającej EXD
<ol>
	<li>kalkulacja
	<ol>
		<li>Obliczyć dawkę równoważną szczurowi (RED), przyjmując 0,15 kg jako masę ciała każdego szczura (w wieku 1 miesiąca): dB = (1/60) * (90/100) * (60/0,15)1/3 = 0,111 EXD/kg/dzień. 
		UWAGA: Do przygotowania 100 ml pożywki hodowlanej (10% surowicy zawierającej EXD) potrzeba łącznie 10 ml surowicy zawierającej EXD). Oczekuje się, że każdy szczur dostarczy 2 ml surowicy. Tak więc 6 szczurów (bierze się pod uwagę 20% straty) jest potrzebnych do podawania EXD raz dziennie przez 3 dni. Liczba EXD wynosi: (0,111 EXD/kg•dzień) * (0,15 kg/szczur) * (6 szczurów) * (3 dni) = 0,300 EXD. Ponownie, ponieważ EXD są mierzone w dyskretnych przyrostach, użyj 1 EXD.</li>
		<li>Obliczyć objętość EXD zastosowanej na szczura (tj. V = (0,111 EXD/kg•dzień) * (0,15 kg/szczur) * (50 ml/EXD) = 0,83 ml/szczur•dzień).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>moczenie
	<ol>
		<li>Włóż surowce na 1 EXD do pojemnika z pokrywką. Macerować surowe zioła w wodzie destylowanej przez 1 godzinę; Woda powinna przykryć zioła na około cal. Niech wszystkie zioła dokładnie nasiąkną.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pierwszy wywar wodny
	<ol>
		<li>Podgrzej zioła za pomocą kuchenki indukcyjnej na dużej mocy, aż woda się zagotuje (około 5 - 10 min; czas zależy od mocy grzewczej, pojemnika oraz ilości ziół i wody). Zmniejsz moc do niskiego gotowania na wolnym ogniu przez 2 godziny.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pierwsza filtracja
	<ol>
		<li>Przykryj szklaną zlewkę o pojemności 500 ml zwykłą bibułą filtracyjną lub gazą i bawełną. Ostrożnie wylej wywar do zlewki przez filtr. Pozostaw zioła w pojemniku.</li>
		<li>Pozostałości ziół z bibuły filtracyjnej należy włożyć z powrotem do pojemnika.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Drugi wywar wodny
	<ol>
		<li>Dodaj wodę destylowaną do pojemnika z ziołami; pozwól jej przykryć zioła na około cal.</li>
		<li>Powtórz krok 2.4.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Druga filtracja
	<ol>
		<li>Powtórz kroki 2.5.1 i 2.5.2.</li>
		<li>Wlej drugi wywar do tej samej zlewki, co w kroku 2.4.1 i wymieszaj ze sobą pierwszy i drugi wywar.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>koncentracja
	<ol>
		<li>Umieść zlewkę na kuchence gazowej z bezazbestową gazą drucianą między nimi, podgrzej wywar na małym ogniu i powoli i ciągle mieszaj szklanym prętem.</li>
		<li>Gdy wywar zmniejszy się do 100 ml, przenieś go do zlewki o pojemności 100 ml.</li>
		<li>Powtarzać krok 2.7.1, aż wywar zmniejszy się do 50 ml.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przechowywanie i administracja
	<ol>
		<li>Przenieś skoncentrowany wywar do sterylnej szklanej butelki. Pozostaw do ostygnięcia do temperatury RT. Przechowuj w temperaturze 4 °C, jeśli używasz w ciągu tygodnia lub w temperaturze -70 °C do długotrwałego przechowywania.</li>
		<li>Podawać dożołądkowo 0,83 ml / szczura raz dziennie przez 3 dni.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Preparat surowicy zawierający EXD
	<ol>
		<li>Znieczulenie szczurów należy przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 300 ml/100 g ketaminy o stężeniu 80 mg/kg i 10 mg/kg ksylazyny po upływie 1 godziny od ostatniego podania EXD. Potwierdź prawidłowe znieczulenie przez uszczypnięcie palca u nogi.</li>
		<li>Naciąć skórę i otrzewną szczura od brzucha do dolnej części klatki piersiowej za pomocą skalpela (lub prostych nożyczek operacyjnych). Wykonaj nacięcie o długości i głębokości odpowiednio około 5 cm i 0,5 cm. Przesuń wnętrzności brzuszne w lewo za pomocą bibuły.</li>
		<li>Za pomocą bibuły usuń tkankę łączną aorty brzusznej, aby wyraźnie odsłonić naczynie.</li>
		<li>Powoli pobieraj krew z aorty brzusznej za pomocą strzykawki o pojemności 10 ml i rozmiarze 22. Po wyjęciu igły przenieść ją do sterylnej probówki o pojemności 15 ml; jeden szczur może wyprodukować 8-10 ml krwi. 
		UWAGA: Szczur powinien być żywy (tj. z pulsującą aortą brzuszną) w momencie rozpoczęcia pobierania krwi i martwy po zakończeniu rysowania.</li>
		<li>Skrzep krew w pozycji pionowej przez 30 - 60 minut w pomieszczeniu RT. Odwiruj przy 500-600 x g przez 20 minut. Ostrożnie umieść cały supernatant (surowicę) w jednej sterylnej probówce o pojemności 50 ml i wymieszaj ze sobą całą surowicę (od różnych zwierząt).</li>
		<li>Przeprowadzić inaktywację termiczną poprzez inkubację surowicy w łaźni wodnej o temperaturze 56 °C przez 30 minut. Przefiltrować surowicę za pomocą filtra strzykawkowego z hydrofilową membraną polieterosulfonową o wielkości porów 0,22 μm. Serum należy stosować na świeżo lub przechowywać w temperaturze -20 °C.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Preparat surowicy kontrolnej zawierający lek (stosowany w grupie kontrolnej)
	<ol>
		<li>Podawać każdemu szczurowi tę samą objętość soli fizjologicznej (0,83 ml) raz dziennie przez 3 dni. Pozostałe kroki są takie same jak w kroku 2.9.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>aplikacja
	<ol>
		<li>Dodać 10 ml surowicy zawierającej EXD lub surowicy zawierającej lek do każdych 100 ml pożywki plus 1% penicyliny-streptomycyny (PS)23.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+in+vitro+effects+and+interactions+of+active+fractions+in+a+Chinese+medicinal+formula+%28Yaotongning+Capsule%29+on+rat+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes.</a> J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).</li>
<li>Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+seven+crude+drug+components+in+the+sleep-promoting+effect+of+Yokukansan%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan.</a> J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).</li>
<li>Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Medicinal+Categorization+of+Atractylodes+japonica+Koidz.+by+Using+Internal+Transcribed+Spacer+Sequencing+Analysis+and+HPLC+Fingerprinting+Combined+with+Statistical+Tools%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819(2016).</li>
<li>Sheridan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+metabolic+fingerprinting+as+a+tool+for+the+modernisation+of+TCM+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations.</a> J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).</li>
<li>Planas, G. M., Kucacute, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17744732">Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana.</a> Science. 162 (3857), 1007(1968).</li>
<li>Tashino, S. "Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).</li>
<li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha-induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).</li>
<li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+Vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439(2016).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mechanism%3A+Erxian+Decoction%2C+a+Chinese+medicine+formula%2C+for+relieving+menopausal+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome.</a> J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Erxian+decoction%2C+a+Chinese+medicinal+formulation%2C+on+serum+lipid+profile+in+a+rat+model+of+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+Med%22%5BJournal%5D)">Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause.</a> Chin Med. 6, 40(2011).</li>
<li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized%2C+double-blind%2C+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+%28Er-Xian+decoction%29+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women%5BTitle%5D)+AND+%22Menopause%22%5BJournal%5D)">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li>
<li>Wang, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+effect+of+Erxian+decoction+for+relieving+menopause+via+the+p-Akt%2FPKB+pathway+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo.</a> J Ethnopharmacol. , (2016).</li>
<li>Lin, L., Wu, S., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+and+experimental+study+of+the+treatment+of+aplastic+anemia+by+warming+and+tonifying+the+spleen+and+kidney%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney].</a> Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).</li>
<li>Nian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+activity+of+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats.</a> J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).</li>
<li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+chemical+constituents+from+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula.</a> J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+HNMR-based+metabonomics+study+of+postmenopausal+osteoporosis+and+intervention+effects+of+Er-Xian+Decoction+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats.</a> Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).</li>
<li>Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+of+bushen+er%27xian+decoction+in+treating+premature+ovarian+failure%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation of bushen er'xian decoction in treating premature ovarian failure].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).</li>
<li>Yu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-angiogenic+activity+of+Erxian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish.</a> Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).</li>
<li>Chu, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+and+in+vivo+investigation+of+the+antimetastatic+effects+of+a+Chinese+medicinal+decoction%2C+erxian+decoction%2C+on+human+ovarian+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models.</a> Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).</li>
<li>Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+intervening+early+in+hypothalamic-pituitary+axis+of+male+rats+with+delayed+puberty%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogn+Mag%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty.</a> Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).</li>
<li>Miao, M. S. Experimental animals and technology. 1997, Chinese Modical Publisher. Beijing. 145(1997).</li>
<li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li>
<li>Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction+Stimulates+Osteoblastic+Differentiation+of+Bone+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Ovariectomized+Mice+and+Its+Gene+Profile+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis.</a> Stem Cells International. 2016, 4079210(2016).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+seven+flavonoids+in+dog+plasma+by+ultra-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+and+its+application+to+a+bioequivalence+study+of+bioactive+components+in+Herba+Epimedii+and+Er-Xian+Decoction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction.</a> J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).</li>
<li>Hu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+major+chemical+constituents+and+their+metabolites+in+rat+plasma+and+various+organs+after+oral+administration+of+effective+Erxian+Decoction+%28EXD%29+fraction+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Chromatogr%22%5BJournal%5D)">Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+and+interaction+of+icariin%2C+curculigoside%2C+and+berberine+in+er-xian+decoction%2C+a+traditional+chinese+medicinal+formula%2C+on+osteoclastic+bone+resorption%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption.</a> Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).</li>
<li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22J+Basic+Clin+Pharm%22%5BJournal%5D)">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li>
<li>Li, Z., Wang, J. On the methods for Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).</li>
<li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors%27+expression+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).</li>
<li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BEffect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood%2C+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li>
<li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK%2FSTAT+signaling+of+HSC-T6+cells%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Gan+Zang+Bing+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells].</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li>
<li>Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263(1999).</li>
<li>Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254(2002).</li>
<li>Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

W ostatnich latach więcej uwagi poświęca się lekom ziołowym, jednemu z rodzajów medycyny alternatywnej, która jest stosowana w warunkach klinicznych w świecie wschodnim od tysięcy lat. W odróżnieniu od wzorca "od ławki do łóżka" współczesnej medycyny, tradycyjna medycyna ziołowa najpierw wymaga wzorca "od łóżka do ławki", aby wyjaśnić swoje mechanizmy. Następnie można przeprowadzić walidację na etapie laboratoryjnym i przetworzyć w celu opracowania nowo zoptymalizowanych leków. Do tej pory istnieje kilka metod ekstrakcji...

Zainteresowanie badaniem i zastosowaniem tradycyjnej medycyny ziołowej obecnie rośnie. W przeciwieństwie do nowoczesnych leków, w których składniki chemiczne są określone, formuły ziołowe mają pewne nieznane składniki i wymagają procesów ekstrakcji, aby umożliwić dostarczenie ich związków aktywnych. Chociaż wiele badań próbuje wybrać jeden mały związek o dobrze znanej strukturze jako reprezentatywny dla całego zioła lub formuły ziołowej, ani skuteczność farmakologiczna, ani mechanizmy nie mogą być uważane za równoważne1,2. Podczas gdy odciski palców umożliwiają analizę składników złożonych formuł ziołowych, niektóre składniki nadal nie są jasno analizowane, co prowadzi do wyzwania podczas łączenia wszystkich ekstraktów do badania3. Interakcje wielu składników/ekstraktów pośredniczą w terapeutycznym działaniu leków ziołowych. Aby zachować tę przewagę, tradycyjna forma ekstraktu - wywar - jest nadal szeroko stosowana w klinice. Ponieważ procedura ekstrakcji ma duży wpływ na skuteczność terapeutyczną, konieczny jest standardowy protokół tradycyjnego wywaru wodnego, szczególnie w przypadku badań in vivo4,5.
Z drugiej strony, podczas badania mechanizmów farmakologicznych, podawanie ziołowych wywarów podczas badań in vitro lub ex vivo jest również wyzwaniem. Koncepcja surowicy zawierającej lek została po raz pierwszy zaproponowana przez Tashino w 1988 roku6. Od tego czasu coraz więcej badaczy stosuje go w ziołolecznictwie7,8,9. Chociaż metoda surowicy zawierającej lek ma pewne ograniczenia, takie jak wpływ niektórych składników surowicy, nadal uważa się, że jest to metoda, która ściśle naśladuje warunki fizjologiczne.
Odwar er-xian został opracowany na początku lat pięćdziesiątych w celu złagodzenia objawów menopauzy10,11,12,13. Został również zastosowany w leczeniu niedokrwistości aplastycznej14, osteoporoza menopauzalna15,16,17, przedwczesna niewydolność jajników18, rak piersi19, rak jajnika20, oraz opóźnione dojrzewanie21. W tym miejscu przedstawiamy szczegółowe protokoły przygotowania zarówno wywaru er-xian (EXD), jak i jego surowicy zawierającej lek. Ponadto opisujemy zastosowanie EXD i surowicy zawierającej EXD w mysich modelach osteoporotycznych menopauzy.
EXD składa się z 9 g Curculigo orchioides Gaertn, Herbaa Epimedii, Radix Morindae Officinalis i Radix Angelicae Sinensis oraz po 6 g Cortex Phellodendri i Rhizoma Anemarrhenae na dorosłego pacjenta dziennie. Równoważna dawka dla myszy wynosi 0,1418 EXD/kg/dzień w oparciu o następujące równanie22: dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3. dA i dB odnoszą się do dawki na masę ciała (mg/kg) odpowiednio człowieka i myszy. Dawkę w mg/kg zastępuje się liczbą EXD/kg. RA i RB reprezentują odpowiednio czynnik ciała ludzkiego i czynnik ciała myszy, które są proporcjonalne do (powierzchnia ciała (m2) / masa ciała (kg))2/3 (patrz tabela 1). WA i WB wskazują masę ciała (kg) odpowiednio człowieka i myszy.

<table><tbody><tr><td>Curculigo orchioides Gaertn (9&thinsp; g), Herbaa Epimedii (9&thinsp; g), Radix Morindae Officinalis (9&thinsp; g), Radix Angelicae Sinensis (9&thinsp; g), Cortex Phellodendri (6&thinsp; g) i Rhizoma anemarrhenae (6&thinsp; g)</td> <td>Kang-qiao Medycyna Chińska Yinpian Co. Ltd (Szanghaj, CN)</td><td>160922</td><td>Komponenty EXD</td></tr><tr><td>Bibuła filtracyjna</td><td>GElifesciences</td><td>99-103-952</td><td>Filtr wywaru EXD przed zatężeniem</td></tr><tr><td>Myszy z regionu kontrolnego imprinting (ICR)</td><td>Shanghai Laboratory Animal Center</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>Badanie in vivo</td></tr><tr><td>Szczury Sprague Dawley</td><td>Shanghai Laboratory Animal Center</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>Preparat surowicy zawierający EXD</td></tr><tr><td>Filtr strzykawkowy</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RB</td><td>0,22 &micro; </td></tr><tr><td>M Igły do zgłębników (10 ml)</td><td>Szanghaj BO Ge dział sprzedaży handlowej</td><td>59104274</td><td>Podawanie ketaminy EXD</td></tr><tr><td>(80 mg/kg)&nbsp;</td><td>Fujian Gutian Pharma Co. Ltd</td><td>H35020148</td><td>Znieczulenie</td></tr><tr><td>Ksylazyna (10 mg/kg)</td><td>Sunway Pharma Co. Ltd</td><td>CB07591</td><td>Znieczulenie</td></tr><tr><td>Dulbecco" s modyfikacja Eagle' s pożywka Dulbecco (DMEM) pożywka hodowlana</td><td>Gibco</td><td>12800-116</td><td>DMEM z 2 mM L-glutaminą i bez rybonukleozydów i rybonukleotydów</td></tr><tr><td>Streptomycyna</td><td>Sigma</td><td>1277</td><td>100 &mikro; g / ml</td></tr><tr><td>Penicylina</td><td>Sigma</td><td>4687</td><td>100 &mikro; g / ml</td></tr></tbody></table>

przygotowanie ziołolecznictwa: wywar z er-xian i surowica zawierająca er-xian do eksperymentów in vivo i in vitro

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Tradycyjna medycyna ziołowa, alternatywna medycyna w warunkach klinicznych, zyskała w ostatnich latach coraz większą uwagę. Przed dostarczeniem do organizmu często wymagana jest dodatkowa procedura ekstrakcji w celu uwolnienia aktywnych składników z surowych ziół. Odwar wodny to klasyczna procedura ekstrakcji, która jest nadal szeroko stosowana w warunkach klinicznych. W tym miejscu proponujemy szczegółowy protokół dla wywaru er-xian (EXD) w celu zastosowania wywarów ziołowych do badań eksperymentalnych. Opisano obliczanie dawki odpowiedniej dla zwierząt, a także cztery główne etapy EXD: moczenie, wywar wodny, filtracja i zatężanie. Ponadto EXD zawierająca surowicę jest wprowadzana do szczurów w celu walidacji in vitro. Tutaj szczurom podawano doustnie EXD przez trzy dni. Następnie pobrano próbki krwi, które zostały dezaktywowane, odwirowane i przefiltrowane. Surowica rozcieńczona pożywką hodowlaną może być stosowana do leczenia komórek lub tkanek in vitro. Na przykład EXD zastosowano zarówno w badaniach in vivo, jak i in vitro i wykazano, że EXD nasila osteogenezę. Protokół ten może być stosowany jako odniesienie do przygotowywania i stosowania leków ziołowych.

Wpływ EXD na gęstość kości u myszy OVX
Barwienie hematoksyliną i eozyną (H&amp;E) przekroju kręgu lędźwiowego wykazuje zwiększenie beleczek kostnych po leczeniu EXD in vivo (Rycina 1A, prawy panel) w porównaniu z grupą OVX (Rycina 1A, lewy panel). Rycina 1B przedstawia reprezentatywne obrazy µCT 4go kręgu lędźwiowego u myszy OVX (Rycina 1B, lewy...

Tutaj prezentujemy przygotowanie wywaru er-xian (EXD) w czterech krokach - moczenie, wywar, filtracja i zagęszczenie - oraz demonstrujemy podawanie przygotowanej surowicy zawierającej EXD szczurom. Metody te mają zastosowanie do badań in vivo i in vitro wywarów ziołowych, takich jak tradycyjne leki chińskie.

Przygotowanie ziołolecznictwa: wywar z Er-Xian i surowica zawierająca Er-Xian do eksperymentów in vivo i in vitro

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Ogólnym celem tej procedury jest przygotowanie wywaru er-xian, tradycyjnego chińskiego leku ziołowego, do zastosowań in vivo i in vitro. Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie medycyny ziołowej dotyczące przygotowania i zastosowania tradycyjnego chińskiego leku. Główną zaletą tej techniki jest to, że etapy ekstrakcji wodnej są analogiczne do tych stosowanych w warunkach klinicznych.Umieść surowce do pojedynczego wywaru er-xian w pojemniku z pokrywką i dodaj wystarczającą ilość wody destylowanej, aby zioła były przykryte warstwą o grubości około cala. Zamknij pojemnik pokrywką i maceruj surowe zioła przez jedną godzinę. Następnie, używając kuchenki gazowej na wysokiej mocy, podgrzewaj zioła do momentu zagotowania wody.Zmniejsz moc palnika do wolnego gotowania i gotuj zioła w celu przygotowania odwaru przez dwie godziny. Po zakończeniu pierwszego gotowania, przykryj zlewkę szklaną o pojemności 500 ml gazą i watą, a następnie ostrożnie wlej sam płyn z odwaru do zlewki przez filtr. Pozostałości ziół na papierze filtracyjnym przełóż z powrotem do naczynia i dolej odpowiednią ilość świeżej wody destylowanej, aby zioła były przykryte warstwą wody o grubości oko

preparation-herbal-medicine-er-xian-decoction-er-xian-containing

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten artykuł zawiera szczegółowy protokół przygotowania roztworu roboczego granulatu Gushukang do badań na zwierzętach oraz granulatu GSK zawierającego surowicę do eksperymentów in vitro. Protokół ten może być stosowany do badań farmakologicznych leków ziołowych, a także do recept zarówno na eksperymenty in vivo, jak i in vitro.

Przygotowanie granulatu Gushukang (GSK) do eksperymentów in vivo i in vitro

Ten protokół zapewnia strategię kombinacji dwóch ziół do leczenia uszkodzonych komórek PC12. Protokół stanowi odniesienie do optymalizacji najlepszego trybu aplikacji tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM).

Badanie strategii łączenia dwóch ziół w leczeniu uszkodzonych komórek PC12

W tym protokole, technologia przetwarzania oleju baraniego w Epimedii folium (EF) została zoptymalizowana poprzez zastosowanie eksperymentalnej metodologii projektowania i odpowiedzi Box-Behnken, a wpływ prymitywnego i zoptymalizowanego EF ekstrahowanego wodą na rozwój embrionalny danio pręgowanego został wstępnie zbadany.

Optymalizacja technologii przetwarzania oleju baraniego Epimedii folium i badanie jego wpływu na rozwój embrionalny danio pręgowanego

Opisujemy ogólny protokół śledzenia komórek in vivo za pomocą MRI w modelu mysim z komórkami oznaczonymi ex vivo. Dołączony jest typowy protokół do znakowania komórek, przetwarzania akwizycji obrazu i kwantyfikacji.

Rezonans magnetyczny in vivo 19F do śledzenia komórek

Ta metoda została opracowana w celu dostarczenia stałego roztworu leku przez tętnicę szyjną, aby ocenić farmakokinetykę nowych leków w modelach mysich.

Wlewy z tętnic szyjnych do analizy farmakokinetycznej i farmakodynamicznej taksanów u myszy

Tutaj, monitorowanie metabolizmu komórek nowotworowych w czasie rzeczywistym, w połączeniu z modelem przerzutów in vivo błony kosmówkowo-omocznikowej (CAM) zarodka kurczaka, są wykorzystywane do oceny nowych celów/środków przeciwnowotworowych pod kątem ich zdolności do uwrażliwiania komórek nowotworowych na chemoterapeutyki uszkadzające DNA.

Ocena skuteczności uczulenia na leki przeciwnowotworowe in vitro i in vivo

Ten protokół określa kroki wymagane do przeprowadzenia walidacji ex vivo eksperymentów obrazowania ksenoprzeszczepów w bliskiej podczerwieni in vivo na myszach przy użyciu nanociał znakowanych fluoroforem i konwencjonalnych przeciwciał.

Walidacja eksperymentów obrazowania NIRF in vivo na podstawie ksenoprzeszczepu nowotworowego na myszach przy użyciu cytometrii przepływowej i mikroskopii ex vivo

Ksenoprzeszczepy ludzkich nowotworów są unaczyniane i infiltrowane przez komórki pochodzenia mysiego podczas fazy wzrostu in vivo. Aby obejść odchylenia spowodowane przez te zanieczyszczające komórki podczas dalszej analizy, opracowaliśmy metodę pozwalającą na kompleksowe zubożenie wszystkich komórek myszy poprzez magnetyczne sortowanie komórek.

Zubożenie komórek myszy z ludzkich ksenoprzeszczepów nowotworowych znacznie poprawia dalszą analizę komórek docelowych

Tutaj opisane są zoptymalizowane metody generowania in vivo i in vitro modeli stłuszczenia wątroby oraz analizy fenotypów stłuszczeniowych i związanych z nimi parametrów fizjologicznych.

Zoptymalizowana analiza stłuszczenia wątroby in vivo i in vitro

Ten manuskrypt opisuje efektywne, niewirusowe dostarczanie miR do komórek śródbłonka przez wektor PEI/MNP i ich namagnesowanie. Tak więc, oprócz modyfikacji genetycznej, podejście to pozwala na magnetyczne prowadzenie komórek i wykrywalność MRI. Technika ta może być stosowana w celu poprawy właściwości terapeutycznych produktów komórkowych.

Przygotowanie i charakterystyka in vitro namagnesowanych komórek śródbłonka zmodyfikowanych miR

Naucz się przygotowywać wywar Er-Xian zgodnie z klinicznymi metodami ekstrakcji wodnej oraz surowicę zawierającą ten preparat do badań in vivo i in vitro na modelach zwierzęcych.

Przygotowanie ziołolecznictwa: wywar z Er-Xian i surowica zawierająca Er-Xian do eksperymentów in vivo i in vitro

Przeglądaj więcej filmów