Name: Nadmierna akumulacja żółci wywołana ileektomią w jelicie myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Poznaj model ilektomii u myszy do badania nadmiernej akumulacji żółci w jelicie. Ta metoda pozwala ocenić dynamikę kwasów żółciowych i ich toksyczność w chorobach jelitowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Te badania są wspierane przez Fundację Toma Petersona i grant NIH R01-HL119780 (Jain, MK).

Protokół dla zwierząt został sprawdzony i zatwierdzony przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Case Western Reserve University School of Medicine i został przeprowadzony zgodnie z Przewodnikiem National Institutes of Health (NIH) dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych (8th Edition, 2011). Myszy zostały poddane eutanazji metodami zgodnymi z wytycznymi Amerykańskiego Towarzystwa Lekarzy Weterynaryjnych (AVMA) dotyczącymi eutanazji zwierząt (wydanie z 2013 r.). W tym protokole wykorzystano C57BL/6J, samce, myszy w wieku 8 - 16 tygodni. Myszy trzymano w 12-godzinnym środowisku cyklu ciemności/światła.
1. Przygotowanie przedoperacyjne
<ol>
	<li>Przenieś myszy do czystej klatki na 24 godziny przed zabiegiem. Zapewnij zwierzętom swobodny dostęp do wody. Zastąp karmę karmą miękką (suplement diety w żelu) na 4 - 6 godzin przed zabiegiem, aby zmniejszyć zawartość jelita cienkiego do zabiegu.</li>
	<li>Wysterylizuj wszystkie narzędzia chirurgiczne i przygotuj sterylne materiały chirurgiczne jednorazowego użytku. Oczyść obszar operacji i znieczulający stożek nosowy 70% etanolem.</li>
	<li>Ustaw mikroskop preparacyjny, parownik znieczulający izofluranem, instrumenty i stół chirurgiczny dla małych zwierząt z kontrolowaną temperaturą do utrzymywania temperatury ciała. Uporządkuj instrumenty, szwy i strzykawki w miejscu, aby mieć do nich swobodny dostęp podczas operacji.</li>
	<li>Ustaw źródło światła, aby zapewnić wystarczającą ilość światła w obszarze operacyjnym.</li>
	<li>Przygotuj sterylną sól fizjologiczną 0,9% w strzykawce o pojemności 5 ml do oczyszczania jelit i jamy brzusznej.</li>
</ol>
2. Ileektomia i zespolenie
<ol>
	<li>Znieczulenie myszy izofluranem (2 - 3%) w komorze inkubacyjnej dla małych zwierząt. Określ odpowiednie znieczulenie za pomocą techniki szczypania palców u stóp, gdy zwierzę jest na izofluranie.</li>
	<li>Usuń owłosienie z brzucha, nakładając produkt do depilacji i zetrzyj włosy za pomocą gąbek chirurgicznych, zachowując znieczulenie. Umieść mysz na stole chirurgicznym dla małych zwierząt o kontrolowanej temperaturze (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A), aby utrzymać temperaturę ciała na poziomie 37 °C. Utrzymuj znieczulenie izofluranem (1 - 2%) przez maskę na twarz. Potraktuj oczy myszy maścią do oczu.</li>
	<li>Oczyść skórę za pomocą jodu powidonu i 70% alkoholu i przykryj operowaną powierzchnię brzucha sterylną gazą chirurgiczną (<klasa silna = "xfig">Rysunek 1B).</li>
	<li>Wykonaj nacięcie brzucha w linii środkowej za pomocą skalpela chirurgicznego, gdy znieczulenie jest już aktywne. Użyj aplikatora z bawełnianą końcówką, aby chronić jelito i pociągnij mięsień brzucha myszy za pomocą retraktorów, aby całkowicie otworzyć i odsłonić jamę brzuszną (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1C).</li>
	<li>Zlokalizuj jelito ślepe. Zaczynając od jelita ślepego, ostrożnie przesuń połączone jelito kręte i część jelita czczego z jamy brzusznej (<silna klasa="xfig">Rysunek 1D). 
	UWAGA: Jelito ślepe można łatwo zidentyfikować ze względu na jego duży rozmiar nawet po poszczeniu.</li>
	<li>Podwiązać górną gałąź tętnicy krezkowej górnej za pomocą jedwabnego szwu 7-0, aby zatkać krew zaopatrującą odcinek jelita krętego, który ma zostać wycięty. Kolor jelita krętego zmienia się z różowego na ciemnofioletowy po podwiązaniu. (<silna klasa="xfig">Rysunek 1E - F).</li>
	<li>W zależności od celu eksperymentu, za pomocą nożyczek należy wyciąć i usunąć 50% lub 90% jelita krętego. 
	UWAGA: W przypadku operacji pozorowanej nie należy wykonywać podwiązania tętnicy krezkowej górnej i nie usuwać jelita krętego.</li>
	<li>Przepłukać światło obu końców jelita krętego 0,9% solą fizjologiczną. 
	UWAGA: Ponieważ pozostałe nienaruszone jelito kręte nadal otrzymuje normalny dopływ krwi z tętnicy krezkowej górnej, niewielka ilość krwi zostanie wypłukana podczas procesu. Wskazuje to również, że dopływ krwi do końców jelita krętego jest prawidłowy i zapewnia brak niedokrwienia podczas procedury zespolenia (<silna klasa="xfig">Rysunek 1G).</li>
	<li>Zlokalizuj krezki po stronie obu końców jelita krętego. Wyrównaj krezki i zszyj końce jelita krętego razem za pomocą 8-0 szew (<silna klasa="xfig">Rysunek 1G - H).</li>
	<li>Zszyj przeciwległą stronę jelita krętego, aby utrzymać jelito kręte w zespoleniu w naturalny sposób (<silna klasa="xfig">Rysunek 1I).</li>
	<li>Zszyj górną i dolną stronę między dwoma oryginalnymi szwami, aby dokładnie połączyć ze sobą dwa końce jelita krętego (<silna klasa="xfig">Rysunek 1J).</li>
	<li>Upewnij się, że nie ma wycieku z miejsca zespolenia po zakończeniu trzyetapowej procedury szycia (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1G-I). Zwróć jelito ślepe i jelito cienkie do jamy brzusznej do pierwotnego położenia anatomicznego. Umyj obszar operacji ciepłą solą fizjologiczną o sile fizjologicznej 0,9% za pomocą igły. (<silna klasa="xfig">Rysunek 1K).</li>
	<li>Zamknij nacięcie warstwy mięśni brzucha szwem 6-0. Wyrównaj nacięcie skóry brzucha za pomocą kleszczy i zszyj skórę brzucha, aby ułatwić optymalne gojenie się ran (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1L).</li>
</ol>
3. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Przenieś myszy pooperacyjne na oddział intensywnej terapii w celu rekonwalescencji. Umieść je w klatce z papierowej pościeli na poduszce grzewczej o kontrolowanej temperaturze, aby kontynuować rekonwalescencję po operacji przez noc. Podawaj myszom miękki pokarm oprócz zwykłego jedzenia i wody.</li>
	<li>Podawać buprenorfinę (0,05 - 0,1 mg/kg) we wstrzyknięciu podskórnym co 8-12 godzin w celu znieczulenia. 
	UWAGA: Poddaj myszy eutanazji za pomocą CO2 w przypadku poważnego zachorowania.</li>
	<li>W punkcie końcowym należy złożyć ofiary myszy za pomocą przedawkowanego izofluranu i w razie potrzeby pobrać próbki (sekcja 4).</li>
</ol>
4. Ocena nadmiernej akumulacji żółci wywołanej ileektomią
<ol>
	<li>Zważ i wypreparuj myszy jeden dzień po resekcji 0% (pozorowane), 50% lub 90% jelita krętego.</li>
	<li>Wyjmij przewód pokarmowy i zważ go. Oblicz stosunek masy przewodu pokarmowego do masy ciała, aby ocenić nasilenie złego wchłaniania i nadmiernej akumulacji soli żółciowych.</li>
	<li>Przenieś odcinki przewodu pokarmowego do stożkowych probówek o pojemności 15 ml i pokrój je na krótkie segmenty za pomocą nożyczek. Po pokrojeniu odwirować przy 3 000 x g przez 10 min. Przenieść supernatant (płyn żołądkowo-jelitowy zawierający sole żółciowe) do czystej probówki.</li>
	<li>Zmierz całkowitą objętość i masę płynu żołądkowo-jelitowego i oblicz stosunek masy płynu do masy przewodu pokarmowego, aby dokładniej ocenić nadmierną akumulację żółci w przewodzie pokarmowym.</li>
	<li>Oznaczyć całkowitą ilość żółci w supernatancie za pomocą testu kwasów żółciowych zgodnie z opisem w odniesieniu 8.</li>
</ol>

<ol><li>McLeod, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgery+for+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis%22%5BJournal%5D)">Surgery for inflammatory bowel diseases.</a> Dig Dis. 21, 168-179 (2003).</li>
<li>Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+bowel+disease%3A+the+view+of+the+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Colorectal+Dis%22%5BJournal%5D)">Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon.</a> Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).</li>
<li>Polle, S. W., Bemelman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgery+insight%3A+minimally+invasive+surgery+for+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Clin+Pract+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Surgery insight: minimally invasive surgery for IBD.</a> Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol. 4, 324-335 (2007).</li>
<li>Fon Tacer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+resource%3A+Comprehensive+expression+atlas+of+the+fibroblast+growth+factor+system+in+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Research resource: Comprehensive expression atlas of the fibroblast growth factor system in adult mouse.</a> Mol Endocrinol. 24, 2050-2064 (2010).</li>
<li>Pournaras, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+bile+after+Roux-en-Y+gastric+bypass+in+promoting+weight+loss+and+improving+glycaemic+control%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The role of bile after Roux-en-Y gastric bypass in promoting weight loss and improving glycaemic control.</a> Endocrinology. 153, 3613-3619 (2012).</li>
<li>Spreckley, E., Murphy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+L-Cell+in+Nutritional+Sensing+and+the+Regulation+of+Appetite%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">The L-Cell in Nutritional Sensing and the Regulation of Appetite.</a> Front Nutr. 2, 23(2015).</li>
<li>Inagaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+15+functions+as+an+enterohepatic+signal+to+regulate+bile+acid+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis.</a> Cell Metab. 2, 217-225 (2005).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+control+of+bile+acid+synthesis+by+a+KLF15-Fgf15+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Circadian control of bile acid synthesis by a KLF15-Fgf15 axis.</a> Nat Commun. 6, 7231(2015).</li>
<li>Christl, S. U., Scheppach, W. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00365521.1997.11720712?journalCode=igas20">Metabolic consequences of total colectomy.</a> Scand J Gastroenterol Suppl. 222, 20-24 (1997).</li>
<li>Helmrath, M. A., VanderKolk, W. E., Can, G., Erwin, C. R., Warner, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+adaptation+following+massive+small+bowel+resection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Surg%22%5BJournal%5D)">Intestinal adaptation following massive small bowel resection in the mouse.</a> J Am Coll Surg. 183, 441-449 (1996).</li>
<li>Tappenden, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+short+bowel+syndrome%3A+considerations+of+resected+and+residual+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parenter+Enteral+Nutr%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of short bowel syndrome: considerations of resected and residual anatomy.</a> J Parenter Enteral Nutr. 38, 14-22 (2014).</li>
<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+Acid+diarrhea%3A+prevalence%2C+pathogenesis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Liver%22%5BJournal%5D)">Bile Acid diarrhea: prevalence, pathogenesis, and therapy.</a> Gut Liver. 9, 332-339 (2015).</li>
<li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+of+bile+acid+diarrhea%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding of bile acid diarrhea.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 8, 49-61 (2014).</li>
<li>Mottacki, N., Simren, M., Bajor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+article%3A+bile+acid+diarrhoea+-+pathogenesis%2C+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Aliment+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Review article: bile acid diarrhoea - pathogenesis, diagnosis and management.</a> Aliment Pharmacol Ther. 43, 884-898 (2016).</li>
<li>Rao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organic+solute+transporter+alpha-beta%2C+Ostalpha-Ostbeta%2C+is+essential+for+intestinal+bile+acid+transport+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The organic solute transporter alpha-beta, Ostalpha-Ostbeta, is essential for intestinal bile acid transport and homeostasis.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 3891-3896 (2008).</li>
<li>Hofmann, A. F., Poley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholestyramine+treatment+of+diarrhea+associated+with+ileal+resection%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cholestyramine treatment of diarrhea associated with ileal resection.</a> N Engl J Med. 281, 397-402 (1969).</li>
<li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF19+as+a+postprandial%2C+insulin-independent+activator+of+hepatic+protein+and+glycogen+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">FGF19 as a postprandial, insulin-independent activator of hepatic protein and glycogen synthesis.</a> Science. 331, 1621-1624 (2011).</li>
<li>Kuipers, F., Bloks, V. W., Groen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+intestinal+soap--bile+acids+in+metabolic+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Beyond intestinal soap--bile acids in metabolic control.</a> Nat Rev Endocrinol. 10, 488-498 (2014).</li>
<li>Buchman, A. L., Scolapio, J., Fryer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AGA+technical+review+on+short+bowel+syndrome+and+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">AGA technical review on short bowel syndrome and intestinal transplantation.</a> Gastroenterology. 124, 1111-1134 (2003).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Aby przeprowadzić udaną ileektomię, tętnica krezkowa górna musi zostać wcześniej podwiązana, aby zablokować dopływ krwi do segmentu reekcyjnego. Niedokrwienny odcinek jelita krętego zmieni kolor na ciemnofioletowy po podwiązaniu. Odcinek jelita krętego musi zostać następnie całkowicie wycięty. Należy zapewnić normalne ukrwienie zatrzymanych końcówek. Jest to niezbędne, aby uniknąć krwawienia i niewłaściwego usunięcia, które może łatwo spowodować niepowodzenie chirurgiczne z powodu martwicy niedokrwiennej po zszyciu. Podc...

W nowoczesnych badaniach biomedycznych, genetycznie modyfikowane modele zwierzęce są szeroko wykorzystywane do zbierania informacji o chorobach ludzkich. W szczególności specyficzne dla tkanek lub komórek funkcje przyrostu i utraty genów wykorzystano do badania regulacji molekularnej, a także indukowanych skutków biologicznych. Pomimo postępów w manipulowaniu genami docelowymi in vivo, istnieją pewne ograniczenia. Po pierwsze, wiele delecji specyficznych dla komórek lub tkanek będzie miało wpływ na wiele narządów. Na przykład delecja genu nabłonka wyeliminuje ekspresję w nabłonku wielu tkanek. Co więcej, nawet jeśli delecja jest ograniczona do określonej tkanki, kontrola przestrzenna jest rzadko możliwa. Na przykład w tkance takiej jak jelito odrębne segmenty pełnią bardzo specyficzne funkcje, którymi nie można precyzyjnie manipulować in vivo. W takich sytuacjach resekcja tkanek zawierających gen jest uważana za bardziej efektywne podejście badawcze w celu określenia mechanistycznego i funkcjonalnego znaczenia komunikacji tkankowej.
Ileektomia jest najczęściej stosowana u pacjentów z chorobą Leśniowskiego-Crohna i chorobami zapalnymi obejmującymi dystalną część jelita krętego 1,2,3. Jelito kręte zazwyczaj wytwarza kilka hormonów magazynujących energię, takich jak czynnik wzrostu fibroblastów 15/19 (FGF15/19), peptyd YY (PYY) i peptyd glukagonopodobny 1/2 (GLP1/2); Hormony te odgrywają ważną rolę miejscową i hormonalną w wielu funkcjach biologicznych4,5,6. Wśród tych hormonów FGF15 został zidentyfikowany jako silny endokrynologiczny inhibitor syntezy kwasów żółciowych w wątrobie. Po ponownym wchłonięciu do enterocytów jelita krętego, kwasy żółciowe aktywują receptor jądrowy receptora farnezoidu X (FXR) w celu stymulacji ekspresji Fgf15, co z kolei prowadzi do zahamowania syntezy kwasów żółciowych w wątrobie 7. W niedawnym badaniu wprowadziliśmy mysi model ileektomii w celu zbadania osi sygnalizacyjnej czynnika podobnego do jelita krętego 15 (KLF15)-Fgf15, która reguluje okołodobową produkcję kwasów żółciowych w wątrobie 8. Co najważniejsze, wprowadziliśmy do biologii kwasów żółciowych nową rodzinę, czynniki podobne do kruppela, w szczególności KLF15. Na podstawie badań funkcjonalnych, w tym operacji ileektomii, ustaliliśmy, że KLF15 zwiększa syntezę kwasów żółciowych poprzez pośredni mechanizm niewątrobowy. Wreszcie, jelito kręte KLF15 jest również identyfikowane jako pierwszy endogenny ujemny regulator Fgf15.
Segmenty jelitowe schodzące z obszarów proksymalnych do dystalnych są odpowiedzialne za wchłanianie różnych składników odżywczych. Jelito kręte jest głównym segmentem odpowiedzialnym za wchłanianie kwasów żółciowych i witaminy B12 (VB12) 9. We wcześniejszym badaniu wykorzystano mysi model resekcji proksymalnego jelita w celu zbadania zespołu krótkiego jelita; Zaproponowano różne długości resekcji, diety i rodzaje szwów, aby utrzymać optymalny wskaźnik przeżycia po operacji 10. Co więcej, nowszy przegląd wskazuje, że resekcja jelita krętego zwykle powoduje cięższą chorobę niż inne resekcje odcinka przewodu pokarmowego (GI) ze względu na zmniejszoną zdolność adaptacyjną pozostałego odcinka przewodu 11. Temat ten cieszy się dużym zainteresowaniem grup badawczych zajmujących się badaniami podstawowymi i klinicznymi, natomiast wiedza na temat powrotu do zdrowia i skutecznych metod terapeutycznych jest nadal ograniczona.
Biegunka z kwasem żółciowym wynika z braku równowagi w homeostazie kwasów żółciowych w krążeniu jelitowo-wątrobowym 12,13. Może to być konsekwencja resekcji jelita krętego, choroby przewodu pokarmowego lub wynik złego wchłaniania idiopatycznych kwasów żółciowych. U ponad 80% pacjentów stwierdzono biegunkę po poddaniu się resekcji jelita krętego 14. Ileektomia może stać się ważnym modelem chirurgicznym w badaniu biegunki z kwasami żółciowymi. W tym badaniu seria resekcji jelita krętego zapewnia gradientową ocenę niedoboru FGF15, a także złego wchłaniania soli żółciowych w jelitach, nadmiernej akumulacji i uszkodzeń toksycznych.

<table><tbody><tr><td>Mikroskop preparacyjny</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td>Do zabiegów chirurgicznych&nbsp;</td></tr><tr><td>Regulator temperatury zwierząt</td><td>Physitemp Instruments, Inc.</td><td>TCAT-2LV</td><td>Do kontroli temperatury ciała</td></tr><tr><td>Waporyzator anestezjologiczny Isofluran</td><td>VetEquip</td><td>&nbsp; 911104</td><td>Do znieczulenia Kleszcze</td></tr><tr><td>preparacyjne</td><td>&nbsp; Narzędzia Fine Science Tools, Inc.</td><td>11274-20</td><td>Do zabiegów chirurgicznych&nbsp;</td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>&nbsp; Narzędzia Fine Science Tools, Inc.</td><td>14084-08</td><td>Do zabiegów chirurgicznych&nbsp;</td></tr><tr><td>Uchwyt igły</td><td>&nbsp; Narzędzie chirurgiczne Roboz Co.</td><td>RS-7882</td><td>Do chirurgii&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikro noże - ostrze igły</td><td>Fisher Scientific</td><td>10318-14</td><td>Do operacji&nbsp;</td></tr><tr><td>6-0 szew monofilamentowy</td><td>Ethicon</td><td>1698G</td><td>Do zamykania skóry brzucha</td></tr><tr><td>7-0 szew jedwabny</td><td>Ethicon</td><td>766G</td><td>Do podwiązania</td></tr><tr><td>8-0 szew monofilamentowy</td><td>Ethicon</td><td>1714G</td><td>Do zespolenia</td></tr><tr><td>Gąbki chirurgiczne</td><td>Dynarex Corp.</td><td>3333</td><td>Do zabiegów chirurgicznych&nbsp;</td></tr><tr><td>Małe aplikatory z bawełnianą końcówką&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td>Do zabiegów chirurgicznych&nbsp;</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>66794-013-25</td><td>Do znieczulenia</td></tr><tr><td>Chlorowodorek buprenorfiny</td><td>Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td><td>12496-0757-1</td><td>Do znieczulenia</td></tr><tr><td>0,9% chlorek sodu do wstrzykiwań</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>0264-7800-10</td><td>Do mycia/wstrzykiwania</td></tr><tr><td>roztworu do przygotowania jodu powidonu</td><td>Dynarex Corp.</td><td>1413</td><td>Do przygotowania skóry</td></tr><tr><td>Maść weterynaryjna Puralube</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td>Do pielęgnacji oczu</td></tr><tr><td>Płyn do depilacji</td><td>Church & Dwight Co., Inc.</td><td></td><td>Do przygotowania skóry</td></tr><tr><td>Oddział intensywnej terapii</td><td>ThermoCare</td><td>FW-1</td><td>Do rekonwalescencji pooperacyjnej</td></tr><tr><td>DietGel recovery</td><td>ClearH2O</td><td>72-06-5022</td><td>Do rekonwalescencji pooperacyjnej</td></tr><tr><td>Aurum total RNA zestaw tkanki tłuszczowej i włóknistej</td><td>Bio-Rad</td><td>7326830</td><td>Do izolacji RNA</td></tr><tr><td>iScript odwrotna transkrypcja supermix do RT-qPCR</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td>Dla test odwrotnej transkrypcji</td></tr><tr><td>TaqMan szybka zaawansowana mieszanka główna</td><td>Applied Biosystems/Life Technologies</td><td>4444965</td><td>Do analizy QPCR</td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania całkowitych kwasów żółciowych</td><td>Genzyme</td><td>Diagnostic DZ042A-K01</td><td>Do oznaczania kwasów żółciowych</td></tr><tr><td>C57BL/6J&nbsp;</td><td>Laboratorium</td><td></td><td></td> Jacksona</tr></tbody></table>

nadmierna akumulacja żółci wywołana ileektomią w jelicie myszy

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Resekcja jelit jest powszechnym podejściem terapeutycznym w chorobach ludzkich, takich jak otyłość, nieswoiste zapalenie jelit, choroba Leśniowskiego-Crohna i rak jelita grubego, które często powodują poważne działania niepożądane podobne do zespołu krótkiego jelita, w tym biegunkę kwasów żółciowych, odwodnienie, zaburzenia elektrolitowe i złe wchłanianie składników odżywczych. Tutaj wprowadzamy mysi model resekcji jelita krętego, zwany ileektomią, w celu oceny komunikacji tkankowej i utrzymania homeostazy układowej. Po resekcji jelita krętego krążąca krew jest trwale pozbawiona specyficznego dla jelita krętego hormonu endokrynnego czynnika wzrostu fibroblastów 15 (FGF15), który uwalnia jego endokrynne hamowanie syntezy kwasów żółciowych w wątrobie. W połączeniu ze zwiększoną produkcją i zniesionym wchłanianiem zwrotnym kwasów żółciowych po usunięciu jelita krętego, myszy, które przeszły operację, cierpią z powodu nadmiernej akumulacji soli żółciowych w jelicie i związanej z tym biegunki, zachorowalności i śmiertelności. Nowatorskie zastosowanie modelu chirurgicznego wprowadzone w tym badaniu może dostarczyć mechanistycznego i funkcjonalnego wglądu w kontrolę jelita krętego nad ogólnoustrojową regulacją metaboliczną w fizjologii i chorobie.

Procedury ileektomii przedstawiono na Rysunku 1. Pierwszy krok obejmuje przygotowanie skóry brzucha myszy, wykonanie nacięcia brzusznego i użycie rozwieraczy w celu pełnego odsłonięcia jelit (Rysunek 1A-C). Następnie zlokalizowano kątnicę myszy (Rysunek 1D); ze względu na jej rozmiar i kształt jest ona łatwo identyfikowalnym punktem orientacyjnym. Kątnica, jelito cie...

Zależne od jelita cienkiego wchłanianie zwrotne kwasów żółciowych i hamowanie syntezy kwasów żółciowych w wątrobie jest ważne dla homeostazy i zdrowia całego organizmu. W tym badaniu opisujemy mysi model resekcji jelita krętego w celu oceny złego wchłaniania żółci wywołanego przez ileektomię, nadmiernej akumulacji i toksyczności w jelicie myszy.

Nadmierna akumulacja żółci wywołana ileektomią w jelicie myszy

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

Ogólnym celem tego zabiegu jest ocena malabsorpcji żółci, nadmiernej akumulacji oraz toksyczności w jelicie myszy indukowanych ileektomią. Choroby jelita krętego, objawiające się takimi schorzeniami jak choroba Crohna, nowotwory, zaburzenia autoimmunologiczne lub infekcje, stanowią istotne źródło zachorowań i śmiertelności. Wierzymy, że opracowanie tego modelu, polegającego na segmentowej resekcji jelita krętego, może zostać wykorzystane do pogłębienia wiedzy na temat biologii, jak i terapii.Zastosowania tej techniki obejmują terapię biegunek kwasochłonnych, ponieważ ileektomia może potencjalnie indukować nadprodukcję kwasów żółciowych przez wątrobę oraz ich zaburzone wchłanianie i nadmierną akumulację w jelitach. Zazwyczaj osoby początkujące w tej metodzie będą miały trudności z anastomozą jelitową, która jest najbardziej krytycznym i najtrudniejszym etapem tego zabiegu. Pracę należy rozpocząć od potwierdzenia odpowiedniego poziomu sedacji poprzez uciśnięcie palca u nogi oraz nałożenie kremu depilacyjnego na brzuch myszy.Usuń sierść za pomocą gąbek chirurgicznych i umieść zwierzę na stole chirurgicznym dla małych zwierząt z kontrolą temperatury ustawioną na 37 °C. Nałóż maść do oczu i zdezynfekuj odsłoniętą skórę, stosując sekwencyjną procedurę mycia z użyciem powidonu jodowego oraz 70% etanolu. Przykryj obszar chirurgiczny brzucha sterylną gazą chirurgiczną, a następnie za pomocą skalpela wykonaj cięcie w linii środkowej brzucha i przetnij warstwę mięśniową.Używając aplikatora z bawełnianym końcem w celu ochrony jelit, w pełni rozchyl mięśnie brzucha myszy za pomocą rozieraczy, aby odsłonić jamę brzuszną. Zaczynając od kątnicy, ostrożnie wysuń z jamy brzusznej połączone jelito cienkie (część końcową – ileum oraz część początkową – jejunum) i użyj nici jedwabnej 7-0 do podwiązania górnej gałęzi tętnicy krezkowej górnej. Gdy kolor tkanki zmieni się z różowego na ciemny, co wskazuje na całkowite zamknięcie naczynia, użyj nożyczek, aby wyciąć 50 lub 90% jelita cienkiego (ileum), zależnie od parametrów eksperymentu.Przepłucz światło obu końców jelita krętego 0,9% solą fizjologiczną. Po zlokalizowaniu krezki po stronie obu końców jelita krętego, wyrównaj krezki na obu końcach wycięcia tkanki i użyj szwy 8-0, aby połączyć końce ze sobą. Zszyj przeciwległą stronę jelita krętego, aby zachować naturalny sposób anastomozy jelita, a następnie zszyj strony górną i dolną pomiędzy dwiema pierwotnymi szwami, aby dokładnie połączyć oba końce jelita krętego.Po potwierdzeniu braku wycieku z miejsca anastomozy, wprowadź kątnicę i jelito cienkie z powrotem do ich pierwotnych lokalizacji anatomicznych i użyj tępej igły, aby przemyć obszar operacyjny ciepłym 0,9% roztworem soli fizjologicznej. Zamknij warstwę mięśni brzucha szwem 6-0 i wyrównaj nacięcie skóry brzucha, aby zamknąć skórę i zapewnić optymalne gojenie rany. Następnie przenieś mysz do jednostki intensywnej opieki do klatki z papierową ściółką, na podgrzewaną podkładkę z kontrolą temperatury w celu nocnej rekonwalescencji, zapewniając miękki pokarm oprócz standardowej karmy i wody.Jeden dzień po operacji zważ całe zwierzę. Następnie pobierz przewód pokarmowy (GI) i zważ tkankę jelitową. Przenieś tkankę GI do 15-mililitrowej probówki stożkowej i za pomocą nożyczek potnij tkankę na krótkie segmenty.Następnie należy odwirować fragmenty tkanki, aby uzyskać osad, a nadsącz zawierający sole żółciowe przenieść do nowej probówki. Ilościowa analiza polimerazy łańcuchowej w czasie rzeczywistym wykazuje obfitą ekspresję mRNA czynnika wzrostu fibroblastów 15, apikalnego transportera sodowo-kwasów żółciowych, jelitowego białka wiążącego kwasy żółciowe oraz transportera solutów organicznych beta w jelicie krętym, przy niskiej lub bardzo niskiej ekspresji w jelicie czczym i pozostałej części jelita. Poziomy mRNA dla adenomatozowej polipozy coli, mierzone jako kontrola negatywna, pozostają podobne w całym jelicie.Po 24 godzinach jelito z grupy operacji pozorowanej jest prawidłowe, wykazując rozmiar i morfologię podobne do tych u zwierząt nieoperowanych. Objętości płynów wykazują gradientowy wzrost od 0% do 90% ilektomii, co odpowiada znacznemu zwiększeniu stosunku masy przewodu pokarmowego do masy ciała obserwowanemu po resekcji 90%. Płyn z przewodu pokarmowego pobrany z traktów pokarmowych po operacji oraz stosunek masy płynu z przewodu pokarmowego do masy traktu pokarmowego również wykazują gradientowy wzrost po resekcji.Ponadto analiza kwasów żółciowych potwierdza, że ilość kwasów żółciowych wykrytych w supernatancie wzrasta wraz ze zwiększeniem zakresu resekcji jelita krętego, co sugeruje, że resekcja 50% jelita krętego jest bardziej odpowiednim modelem ileektomii u myszy ze względu na stosunkowo łagodniejsze działania niepożądane. Po opanowaniu tej techniki, jej wykonanie przy zachowaniu prawidłowej procedury zajmuje 30 minut. Opracowanie tej metody otwiera przed badaczami w dziedzinie mikrochirurgii drogę do zgłębiania biologii jelita krętego, a także zespołu kwasów żółciowych u małych zwierząt.Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dokładną wiedzę na temat tego, jak prawidłowo zidentyfikować i usunąć segment jelita krętego oraz jak przeprowadzić anastomozę jelitową.

ileectomy-induced-bile-overaccumulation-in-mouse-intestine

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film opisuje szczegółowy protokół resekcji jelita w modelu mysim. Technika ta zapewnia wgląd w zaburzenia wchłaniania żółci wywołane ileektomią, nadmierną akumulację i toksyczność w jelicie myszy.

Model resekcji jelita krętego u myszy: badanie metabolizmu żółci wywołanego ileektomią w modelu mysim

Resekcja jelitowo-kolkowa jest powszechnie wykonywana w wielu chorobach ludzkich; jednak niewiele wiadomo na temat wpływu resekcji jelita na choroby chirurgiczne. Niniejszy artykuł zawiera instrukcje dotyczące wykonywania zabiegu na myszach z dużym powodzeniem, zapewniając środki do badania skutków resekcji krętniczo-okrężnicy w modelach choroby.

Mysia resekcja jelita krętniczo-okrężniczego z zespoleniem pierwotnym

Zakłócenie przepływu żółci powoduje ciężkie zapalne cholestatyczne uszkodzenie wątroby z charakterystyczną, zależną od czasu sekwencją zmian morfologicznych. W tym miejscu przedstawiamy protokół chirurgicznego podwiązania przewodu żółciowego wspólnego u myszy, który pozwala na wywołanie silnej odpowiedzi zwłóknieniowej po 21 do 28 dniach.

Podwiązanie dróg żółciowych u myszy: indukcja zapalnego uszkodzenia wątroby i zwłóknienia przez chalestazę obturacyjną

Tutaj prezentujemy częściowe podwiązanie dróg żółciowych jako chirurgiczny model uszkodzenia i regeneracji wątroby u gryzoni.

Częściowe podwiązanie dróg żółciowych u myszy: kontrolowany model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej

Niedrożność jelit to częściowe lub całkowite zablokowanie jelita, które może powodować silne bóle brzucha, nudności, wymioty i uniemożliwiać oddawanie stolca. Ta procedura tworzenia częściowych zatkań jelit u myszy jest wiarygodna w badaniu mechanizmów leżących u podstaw patologicznego wzrostu i śmierci komórek w jelicie.

Mysi model częściowej niedrożności jelit

Prezentowany protokół opisuje łatwe chirurgiczne usunięcie wyrostka robaczkowego (łaty kątniczej) u myszy, a następnie indukcję raka jelita grubego związanego z chorobą jelit grubego. Ten mysi model wyrostka robaczkowego umożliwia badanie biologicznej roli wyrostka robaczkowego w patogenezie chorób przewodu pokarmowego u ludzi.

Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej

Jednoczęściowe obejście dwunastnicy i jelita krętego (SADI-S) to nowa procedura bariatryczna o ważnych efektach metabolicznych. W tym artykule przedstawiamy wiarygodny i powtarzalny model SADI-S u myszy.

Pomostowanie dwunastnicy i jelita krętego z pojedynczym zespoleniem z rękawowym modelem resekcji żołądka u myszy

Opisujemy mysi model pooperacyjnej niedrożności jelit generowany przez manipulację jelitową. Funkcję pasażu pokarmowego, zmiany patologiczne i aktywację komórek odpornościowych oceniano 24 godziny po zabiegu.

Pooperacyjny model mysiej niedrożności jelit

Clamp hiperinsulinemiczno-euglikemiczny, lub clamp insulinowy, jest złotym standardem w ocenie działania insuliny in vivo. Opisano metodę przeprowadzania clampów insulinowych u myszy. Obejmuje ona metodę cewnikowania tętniczego, która pozwala na wykonywanie eksperymentów na świadomych, nieskrępowanych myszach przy minimalnym stresie.

Zaciski hiperinsulinemiczno-euglikemiczne u świadomych, nieunieruchomionych myszy

Opisano metodę wizualizacji i kwantyfikacji trójwymiarowej struktury żyły wrotnej wątroby myszy lub wewnątrzwątrobowych przewodów żółciowych. Tę technikę odlewu żywicznego można zastosować również do innych układów przewodowych lub naczyniowych, co umożliwia wizualizację lub kwantyfikację nienaruszonej architektury komunikacyjnej układu in situ.

Trójwymiarowe odlewanie w żywicy i obrazowanie żyły wrotnej myszy lub wewnątrzpasączniczego systemu przewodów żółciowych

Poznaj model ilektomii u myszy do badania nadmiernej akumulacji żółci w jelicie. Ta metoda pozwala ocenić dynamikę kwasów żółciowych i ich toksyczność w chorobach jelitowych.

Nadmierna akumulacja żółci wywołana ileektomią w jelicie myszy

Przeglądaj więcej filmów