Name: Badania wirusa grypy A w mysim modelu infekcji (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: Poznaj metodę oceny patogenezy wirusa grypy A i skuteczności szczepionek w modelu mysim. Technika ta pozwala badać odpowiedzi immunologiczne oraz testować nowe strategie leczenia przeciwwirusowego.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania nad wirusem grypy w laboratorium LM-S są częściowo finansowane przez The New York Influenza Center of Excellence (NYICE), członka NIAID Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS). Dziękujemy Wendy Bates za wsparcie w naniesieniu poprawek do rękopisu.

<ol><li>Girard, M. P., Cherian, T., Pervikov, Y., Kieny, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+vaccine+research+and+development%3A+human+acute+respiratory+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A review of vaccine research and development: human acute respiratory infections.</a> Vaccine. 23 (50), 5708-5724 (2005).</li>
<li>Arnold, S., Monto, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+Virology+of+Influenza+Illness%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Manag+Care%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and Virology of Influenza Illness.</a> Am J Manag Care. 6, Suppl 5. 255-264 (2000).</li>
<li>Palese, P., Shaw, M. L. Orthomyxoviridae: The Viruses and Their Replication. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPalese%2C+P+%22Fields+Virology%22">Fields Virology</a>. Knipe, D. M., Howley, P. M., Griffin, D. E., Lamb, R. A., Martin, M. A. , 5th ed, Lippincott Williams and Wilkins. (2007).</li>
<li>Li, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genesis+of+a+highly+pathogenic+and+potentially+pandemic+H5N1+influenza+virus+in+eastern+Asia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia.</a> Nature. 430 (6996), 209-213 (2004).</li>
<li>Nogales, A., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+Genetics+Approaches+for+the+Development+of+Influenza+Vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Reverse Genetics Approaches for the Development of Influenza Vaccines.</a> Int J Mol Sci. 18 (20), (2017).</li>
<li>Kunisaki, K. M., Janoff, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+in+immunosuppressed+populations%3A+a+review+of+infection+frequency%2C+morbidity%2C+mortality%2C+and+vaccine+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza in immunosuppressed populations: a review of infection frequency, morbidity, mortality, and vaccine responses.</a> Lancet Infect Dis. 9 (8), 493-504 (2009).</li>
<li>Belshe, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+attenuated+versus+inactivated+influenza+vaccine+in+infants+and+young+children%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Live attenuated versus inactivated influenza vaccine in infants and young children.</a> N Engl J Med. 356 (7), 685-696 (2007).</li>
<li>Cox, A., Baker, S. F., Nogales, A., Martinez-Sobrido, L., Dewhurst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse-adapted+live+attenuated+influenza+virus+that+permits+in+vivo+analysis+of+enhancements+to+the+safety+of+live+attenuated+influenza+virus+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse-adapted live attenuated influenza virus that permits in vivo analysis of enhancements to the safety of live attenuated influenza virus vaccine.</a> J Virol. 89 (6), 3421-3426 (2015).</li>
<li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+Virus+Attenuation+by+Codon+Deoptimization+of+the+NS+Gene+for+Vaccine+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Influenza A Virus Attenuation by Codon Deoptimization of the NS Gene for Vaccine Development.</a> J Virol. 88 (18), 10525-10540 (2014).</li>
<li>Nogales, A., DeDiego, M. L., Topham, D. J., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearrangement+of+Influenza+Virus+Spliced+Segments+for+the+Development+of+Live-Attenuated+Vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Rearrangement of Influenza Virus Spliced Segments for the Development of Live-Attenuated Vaccines.</a> J Virol. 90 (14), 6291-6302 (2016).</li>
<li>Nogales, A., Huang, K., Chauché, C., DeDiego, M. L., Murcia, P. R., Parrish, C. R., Martínez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+influenza+viruses+with+modified+NS1+proteins+for+the+development+of+live-attenuated+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Canine influenza viruses with modified NS1 proteins for the development of live-attenuated vaccines.</a> Virology. 500 (2017), 1-10 (2016).</li>
<li>Garcia-Sastre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+virus+lacking+the+NS1+gene+replicates+in+interferon-deficient+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Influenza A virus lacking the NS1 gene replicates in interferon-deficient systems.</a> Virology. 252 (2), 324-330 (1998).</li>
<li>Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+interhost+transmission+of+influenza+virus+by+vaccination+in+the+guinea+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Blocking interhost transmission of influenza virus by vaccination in the guinea pig model.</a> J Virol. 83 (7), 2803-2818 (2009).</li>
<li>Mubareka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+influenza+virus+via+aerosols+and+fomites+in+the+guinea+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Transmission of influenza virus via aerosols and fomites in the guinea pig model.</a> J Infect Dis. 199 (6), 858-865 (2009).</li>
<li>Nogales, A., Baker, S. F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication-competent+influenza+A+viruses+expressing+a+red+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Replication-competent influenza A viruses expressing a red fluorescent protein.</a> Virology. 476C, 206-216 (2014).</li>
<li>Margine, I., Krammer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+for+Influenza+Viruses%3A+Implications+for+Universal+Vaccine+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Animal Models for Influenza Viruses: Implications for Universal Vaccine Development.</a> Pathogens. 3 (4), 845-874 (2014).</li>
<li>Bouvier, N., Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+for+Influenza+Virus+Pathogenesis+and+Transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal Models for Influenza Virus Pathogenesis and Transmission.</a> Viruses. 2 (8), 1530-1563 (2010).</li>
<li>Pica, N., Iyer, A., Ramos, I., Bouvier, N. M., Fernandez-Sesma, A., García-Sastre, A., Lowen, A. C., Palese, P., Steel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DBA.2+mouse+is+susceptible+to+disease+following+infection+with+a+broad%2C+but+limited%2C+range+of+influenza+A+and+B+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">The DBA.2 mouse is susceptible to disease following infection with a broad, but limited, range of influenza A and B viruses.</a> J Virol. 85 (23), 12825-12829 (2011).</li>
<li>Watanabe, H., Numata, K., Ito, T., Takagi, K., Matsukawa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+response+in+Th1-+and+Th2-dominant+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Innate immune response in Th1- and Th2-dominant mouse strains.</a> Shock. 22 (5), 460-466 (2004).</li>
<li>Srivastava, B., Blazejewska, P., Hessmann, M., Bruder, D., Geffers, R., Mauel, S., Gruber, A. D., Schughart, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+genetic+background+strongly+influences+the+response+to+influenza+a+virus+infections%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Host genetic background strongly influences the response to influenza a virus infections.</a> PLoS One. 4 (3), e4857(2009).</li>
<li>Lowen, A. C., Bouvier, N. M., Steel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+in+the+Guinea+Pig+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Transmission in the Guinea Pig Model.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 385, 157-183 (2014).</li>
<li>Schickli, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmid-only+rescue+of+influenza+A+virus+vaccine+candidates%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Plasmid-only rescue of influenza A virus vaccine candidates.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 356 (1416), 1965-1973 (2001).</li>
<li>Martinez-Sobrido, L., Garcia-Sastre, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+recombinant+influenza+virus+from+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of recombinant influenza virus from plasmid DNA.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li>
<li>National Research Council (U.S.) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals., Institute for Laboratory Animal Research (U.S.). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals%22">Guide for the care and use of laboratory animals</a>. , 8th ed, National Academies Press (U.S.). (2011).</li>
<li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/aje/article-abstract/27/3/493/99616/A-SIMPLE-METHOD-OF-ESTIMATING-FIFTY-PER-CENT">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> The American Journal of Hygiene. 27 (3), 493-497 (1938).</li>
<li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+simple%2C+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li>
<li>Nogales, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+temperature+sensitive+live-attenuated+canine+influenza+virus+H3N8+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">A temperature sensitive live-attenuated canine influenza virus H3N8 vaccine.</a> J Virol. , (2016).</li>
<li>Eisfeld, A. J., Neumann, G., Kawaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+virus+isolation%2C+culture+and+identification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Influenza A virus isolation, culture and identification.</a> Nat Protoc. 9 (11), 2663-2681 (2014).</li>
<li>Guo, H., Baker, S. F., Martinez-Sobrido, L., Topham, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+CD8+T+cell+heterologous+protection+by+a+single+dose+of+single-cycle+infectious+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Induction of CD8 T cell heterologous protection by a single dose of single-cycle infectious influenza virus.</a> J Virol. 88, 12006-12016 (2014).</li>
<li>CDC: Centers for Disease Control and Prevention. Antigenic Characterization. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/flu/professionals/laboratory/antigenic.htm">http://www.cdc.gov/flu/professionals/laboratory/antigenic.htm</a> (2017).</li>
<li>He, W., Mullarkey, C. E., Miller, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+neutralization+potency+of+influenza+A+virus+hemagglutinin+stalk%2Fstem-binding+antibodies+in+polyclonal+preparations+by+microneutralization+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Measuring the neutralization potency of influenza A virus hemagglutinin stalk/stem-binding antibodies in polyclonal preparations by microneutralization assay.</a> Methods. , (2015).</li>
<li>Gulati, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+epitopes+on+the+neuraminidase+of+a+recent+H3N2+influenza+virus+%28A%2FMemphis%2F31%2F98%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Antibody epitopes on the neuraminidase of a recent H3N2 influenza virus (A/Memphis/31/98).</a> J Virol. 76 (23), 12274-12280 (2002).</li>
<li>Beare, A. S., Webster, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+avian+influenza+viruses+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of avian influenza viruses in humans.</a> Arch Virol. 119, 37-42 (1991).</li>
<li>Rowe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+antibody+to+avian+influenza+A+%28H5N1%29+virus+in+human+serum+by+using+a+combination+of+serologic+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of antibody to avian influenza A (H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assays.</a> J Clin Microbiol. 37 (4), 937-943 (1999).</li>
<li>Stephenson, I., Wood, J. M., Nicholson, K. G., Zambon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialic+acid+receptor+specificity+on+erythrocytes+affects+detection+of+antibody+to+avian+influenza+haemagglutinin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Sialic acid receptor specificity on erythrocytes affects detection of antibody to avian influenza haemagglutinin.</a> J Med Virol. 70 (3), 391-398 (2003).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Mysi model IAV jest szeroko stosowany do badań in vivo patogenezy IAV, immunogenności i skuteczności ochrony. Niewielki rozmiar myszy sprawia, że są one łatwe w manipulowaniu i przechowywaniu w porównaniu z innymi modelami zwierzęcymi, takimi jak fretki czy świnki morskie. Co więcej, łatwość w zakresie kosztów zwierząt, utrzymania i reprodukcji pozwala na ich wykorzystanie w przedklinicznych testach szczepień, w których potrzebna jest duża liczba zwierząt. Warto zauważyć, że ponieważ myszy były wykorzystywane w ...

IAV to wirusy otoczkowe sklasyfikowane w rodzinie Orthomyxoviridae3. Zawierają osiem jednoniciowych cząsteczek RNA o ujemnej polarności3. U ludzi IAV wywołują sezonowe epidemie i sporadyczne pandemie o ważnych konsekwencjach, gdy nowe wirusy są wprowadzane do populacji ludzkiej4. Co więcej, sezonowe IAV są wysoce i szybko przenoszone między ludźmi, powodując co roku zwiększone straty ekonomiczne na całym świecie2,5. Objawy IAV obejmują kaszel, przekrwienie błony śluzowej nosa, gorączkę, złe samopoczucie, ból głowy, anoreksję i bóle mięśni, ale wirus może również powodować cięższą chorobę u pacjentów z obniżoną odpornością6. W rzeczywistości Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) oblicza, że wirusy grypy sezonowej powodują 300 000 - 500 000 zgonów na całym świecie każdego roku1. Obecnie istnieją tylko dwie klasy leków zatwierdzonych przez Agencję ds. Żywności i Leków (FDA) do profilaktyki i leczenia grypy u ludzi: inhibitory neuraminidazy (NA) (np. oseltamiwir) i blokery kanału jonowego M2 (np. amantadyna); Jednak pojawienie się lekoopornych wariantów wirusa stanowi coraz większy problem. Szczepienia pozostają zatem najlepszą opcją medyczną chroniącą ludzi przed zakażeniami wirusami IAV. Do tej pory dostępne są trzy rodzaje szczepionek przeciw grypie licencjonowanych przez FDA do stosowania u ludzi: rekombinowane szczepionki białkowe hemaglutyniny wirusowej (HA), inaktywowane szczepionki przeciw grypie (IIV) i żywe atenuowane szczepionki przeciw grypie (LAIV)5,7. Trzy szczepionki mają na celu wywołanie adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej przeciwko wirusowemu białku HA, głównemu celowi przeciwciał neutralizujących przeciwko IAV.
Zweryfikowany model mysi do badania infekcji IAV in vivo
Modele zwierzęce zostały wykorzystane do badania, między innymi, patogenezy IAV8,9,10,11, czynniki wirusowe, które przyczyniają się do choroby12 i/lub transmisji wirusa13,14, oraz do testowania skuteczności nowych szczepionek lub leków przeciwwirusowych9,10,15. Myszy (Mus musculus) są najszerzej wykorzystywanym modelem zwierzęcym do badań nad IAV z kilku powodów: 1) układ odpornościowy jest ewolucyjnie podobny do tego obecnego u ludzi; 2) niskie koszty, w tym zakup, trzymanie i rozmnażanie zwierząt; 3) mały rozmiar do łatwej manipulacji i przechowywania; 4) minimalna zmienność gospodarza w celu uzyskania jednorodnych odpowiedzi i wyników; 5) dużą wiedzę z zakresu biologii myszy, w tym sekwencji genomu; 6) wiele dostępnych odczynników z zakresu biologii molekularnej i/lub immunologii; 7) dostępne myszy z nokautem (KO) do badania wpływu danego białka gospodarza na infekcję wirusową; oraz 8) wiele szczepów myszy, które można wykorzystać do oceny genetycznych podstaw infekcji.
Obecnie dostępnych jest kilka szczepów myszy do badania IAV in vivo. Wiek, status immunologiczny, płeć, tło genetyczne i szczep myszy, a także drogi zakażenia, dawka i szczepy wirusa mają wpływ na wynik zakażenia IAV u myszy. Najczęstszymi szczepami myszy stosowanymi w badaniach nad IAV są myszy C57BL/6, BALB/C, a ostatnio DBA.2, ponieważ są one bardziej podatne na chorobę IAV niż dwa poprzednie szczepy16,17,18,19,20. Co ważne, odpowiedź immunologiczna może być również różna w zależności od szczepu myszy18,19,20. Dlatego bardzo ważne jest, aby odzyskać wszystkie dostępne informacje o myszy i szczepie IAV, aby wybrać najlepszą opcję dla eksperymentu, który ma zostać przeprowadzony.
Chociaż mysz jest dobrym zwierzęcym modelem infekcji do badań in vivo z IAV, mają one kilka ograniczeń, które muszą być uwzględnione w projekcie eksperymentalnym. Na przykład głównym ograniczeniem wykorzystywania myszy do badań in vivo jest to, że IAV nie przenoszą się między myszami. W związku z tym do badań nad transmisją stosuje się bardziej akceptowane modele zwierzęce (np. fretki lub świnki morskie)16,17,21. Ponadto istnieje kilka różnic między objawami IAV u myszy i ludzi. W przeciwieństwie do ludzi, myszy nie rozwijają gorączki po zakażeniu IAV; Z drugiej strony występują u nich hipotermia16,17. U myszy replikacja IAV jest skoncentrowana w dolnych drogach oddechowych (płucach), a nie w górnych drogach oddechowych. Tak więc zjadliwość IAV u myszy nie zawsze jest skorelowana z tą obserwowaną u ludzi. Podsumowując, ponieważ zalety przeważają nad ograniczonymi wadami, mysz stanowi pierwszy model zwierzęcy używany do oceny patogenezy wirusa grypy, immunogenności i skuteczności ochronnej w badaniach nad szczepionkami i lekami przeciwwirusowymi. Co więcej, nie byłoby etycznie dopuszczalne prowadzenie badań z IAV na dużych modelach zwierzęcych bez uprzednich dowodów na zakażenie IAV na małych zwierzętach. W tym manuskrypcie opisujemy, jak zakażać myszy donosowo (i.n.) wirusem IAV, jak monitorować nasilenie i postęp infekcji wirusowej oraz jak przeprowadzać eksperymenty wymagane do oceny humoralnej odpowiedzi immunologicznej i skuteczności ochrony.

<table><tbody><tr><td>Komórki nabłonkowe nerki Madin-Darby Canine Kidney (MDCK)</td><td>ATCC</td><td>CCL-34</td><td></td></tr><tr><td>Sześcio- do ośmiotygodniowa samica myszy C57BL/6</td><td>National Cancer Institute (NCI)</td><td>01XBE</td><td></td></tr><tr><td>Czerwone komórki blod Turckey</td><td>Biolink Inc</td><td></td><td>Sklep pod adresem 4 &deg; C</td></tr><tr><td>Dulbecco' s zmodyfikowany Orzeł" s medium (DMEM)</td><td>Corning Cellgro</td><td>15-013-CV</td><td>Przechowywać w 4 & stopni; C</td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>Seradigm</td><td>1500-050</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C</td></tr><tr><td>Penicylina/Streptomycyna/L-Glutamina (PSG) 100x</td><td>Corning</td><td>30-009-CI</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C</td></tr><tr><td>Penicylina/Streptomycyna (PS) 100x</td><td>Corning</td><td>30-00-CI</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni; C</td></tr><tr><td>Roztwór albuminy Bovin (BA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7409</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & stopni; C</td></tr><tr><td>Albumina surowicy Bovin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td>Przechowywać w 4 & stopni; C</td></tr><tr><td>Trypsyna traktowana tosylsulfonylem fenyloalanylem chlorometylowym (TPCK)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8802</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 &; C</td></tr><tr><td>Neutralna buforowana formalina 10%</td> <td>EMD</td><td>65346-85</td><td>Przechowywać w RT</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>J.T.Baker</td><td>X198-07</td><td>Przechowywać w RT</td></tr><tr><td>Przeciwciało monoklonalne anty-NP Wirus grypy A HB-65</td><td>ATTC</td><td>H16-L10-4R5</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 &; C</td></tr><tr><td>Poliklonalne królicze immunoglobuliny przeciw myszym/FITC</td><td>Dako</td><td>F0261</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & stopni; C</td></tr><tr><td>ECL Anty-mysie IgG, całe przeciwciało połączone z peroksydazą chrzanową</td><td>GE Healthcare</td><td>LNA931V/AG</td><td>Przechowywać w temperaturze 4 & stopni; C</td></tr><tr><td>Zestaw podłoży TMB</td><td>BioLegend</td><td>421101</td><td>Przechowywać w 4 stopniach; C</td></tr><tr><td>Vmax Czytnik płytek kinetycznych</td> Urządzenia <td></td><td></td><td>molekularne</td></tr><tr><td>Młynki do tkanek z odcinka</td><td>Thomas Scientific</td><td>7722-7</td><td></td></tr><tr><td>Enzym niszczący receptory, RDE (II)</td> <td>Denka Seiken Co.</td><td>370013</td><td>Przechowywać w temperaturze -20 stopni C</td></tr><tr><td>Crystal Violet</td><td>Fisher Scienctific</td><td>C581-100</td><td>Przechowywać w RT</td></tr><tr><td>96-dołkowa płytka do hodowli komórkowych</td><td>Greiner Bio-one</td><td>655-180</td><td></td></tr><tr><td>Naczynia do hodowli komórkowych 100 mm</td><td>Greiner Bio-one</td><td>664-160</td><td></td></tr><tr><td>Nunc MicroWell 96-dołkowe mikropłytki</td><td>Thermo Fisher Scienctific</td><td>269620</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 96-dołkowe płytki polistyrenowe MicroWell ze stożkowym dnem</td><td>Thermo Fisher Scienctific</td><td>249570</td><td></td></tr><tr><td>Puralub Maść weterynaryjna</td><td>Dechra</td><td>9N-76855</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop fluorescencyjny</td><td>Olympus Olympus</td><td>IX81</td><td></td></tr></tbody></table>

badania wirusa grypy a w mysim modelu infekcji

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Wirusy grypy powodują ponad 500 000 zgonów na całym świecie1 i wiążą się z rocznym kosztem 12 - 14 miliardów USD w samych Stanach Zjednoczonych, biorąc pod uwagę bezpośrednie wydatki na leczenie i hospitalizację oraz absencję w pracy2. Modele zwierzęce mają kluczowe znaczenie w badaniach nad wirusem grypy A (IAV) w celu oceny patogenezy wirusa, interakcji gospodarz-patogen, odpowiedzi immunologicznej oraz skuteczności obecnych i/lub nowatorskich podejść do szczepionek, a także leków przeciwwirusowych. Myszy są korzystnym modelem małych zwierząt, ponieważ ich układ odpornościowy jest ewolucyjnie podobny do tego, który występuje u ludzi, są dostępne u komercyjnych dostawców jako genetycznie identyczne podmioty, istnieje wiele szczepów, które można wykorzystać do oceny genetycznych podstaw infekcji i są stosunkowo niedrogie i łatwe do manipulowania. Aby podsumować zakażenie IAV u ludzi przez drogi oddechowe, myszy są najpierw znieczulane przed inokulacją donosową zakaźnymi wirusami IAV pod warunkiem odpowiedniego zabezpieczenia biologicznego. Po zakażeniu patogenezę IAV określa się poprzez codzienne monitorowanie zachorowalności (utraty masy ciała) i śmiertelności (przeżycia). Ponadto patogenezę wirusa można również ocenić, oceniając replikację wirusa w górnych (błona śluzowa nosa) lub dolnych (płuca) drogach oddechowych zakażonych myszy. Reakcje humoralne po zakażeniu IAV można szybko ocenić za pomocą nieinwazyjnych testów krwawienia i wtórnego wykrywania przeciwciał, mających na celu wykrycie obecności przeciwciał całkowitych lub neutralizujących. W tym miejscu opisujemy powszechne metody stosowane do donosowego (i.n) zakażenia myszy IAV i oceniamy patogenezę, humoralne odpowiedzi immunologiczne i skuteczność ochrony.

Charakterystyka patogenezy wirusowej u myszy
Patogeneza IAV jest powiązana z zachorowalnością i śmiertelnością spowodowaną infekcją tym wirusem. Te dwa parametry można łatwo ocenić u myszy: zachorowalność na IAV wiąże się z utratą masy ciała u zakażonych myszy, a odsetek przeżywalności wskazuje stopień śmiertelności (Rysunek 1). Masę ciała oraz przeżywalność myszy zakażonych IAV zazwyczaj monitoruje si...

Wirusy grypy typu A (IAV) są ważnymi ludzkimi patogenami układu oddechowego. Aby zrozumieć patogenność wirusów IAV i przeprowadzić badania przedkliniczne nowych metod szczepień, potrzebne są modele zwierzęce naśladujące ludzką fizjologię. W tym miejscu opisujemy techniki oceny patogenezy IAV, odpowiedzi humoralnych i skuteczności szczepionki przy użyciu mysiego modelu infekcji.

Badania wirusa grypy A w mysim modelu infekcji

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Ogólnym celem niniejszej procedury eksperymentalnej jest ocena patogenezy, odpowiedzi humoralnych oraz skuteczności ochrony indukowanej przez wirusy grypy A typu dzikiego lub szczepionki przeciw grypie z wykorzystaniem mysiego modelu infekcji. Metoda ta pozwala na udzielenie odpowiedzi na pytania dotyczące biologii wirusów grypy A, takich jak patogeneza wirusowa, odpowiedzi immunologiczne i skuteczność szczepionek przeciw grypie, a także leków przeciwwirusowych. Główną zaletą tej techniki jest fakt, że myszy posiadają układ odpornościowy podobny do ludzkiego, a dostępność wielu szczepów pozwala na badanie podstaw genetycznych infekcji wirusem grypy A.Ponieważ metoda ta pozwala na ocenę skuteczności nowych szczepionek przeciwko grypie, może ona zostać zastosowana również do systemów starszych, takich jak ocena potencjalnych terapii przeciwwirusowych, w tym przeciwciał lub leków. Po hodowli i znakowaniu myszy C57B6 w wieku od sześciu do ośmiu tygodni w warunkach wolnych od patogenów oraz przygotowaniu rozcieńczeń wirusa grypy A (IAV) w warunkach aseptycznych, należy zważyć myszy za pomocą wagi i zapisać ich masę ciała.Po znieczuleniu myszy i zweryfikowaniu głębokości znieczulenia zgo

influenza-a-virus-studies-in-a-mouse-model-of-infection

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Współistnienie infekcji wirusem grypy A jest jednym z czynników uwikłanych w indukcję inwazyjnej choroby pneumokokowej podczas bezobjawowego nosicielstwa Streptococcus pneumoniae. W niniejszej pracy opisujemy metodę infekcji mieszanej z wykorzystaniem myszy noworodkowych w celu zbadania synergizmu między tymi dwoma patogenami dróg oddechowych.

Wykorzystanie obrazowania bioluminescencyjnego do badania synergizmu pomiędzy Streptococcus pneumoniae a wirusem grypy typu A u młodych myszy

Źródło: Lenhard, A. i in. Model myszy przedstawiający przejście Streptococcus pneumoniae z kolonizatora do patogena po współinfekcji wirusowej powtarza chorobę zaostrzoną przez wiek. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje model współinfekcji myszy, w którym wirus grypy wywołuje przejście Streptococcus pneumoniae z kolonizatora do patogenu. Opisuje etapy związane z kolonizacją bakteryjną, infekcją wirusową i postępem choroby.

Model myszy do badania patogennej przejścia paciorkowca pneumoniae po współinfekcji wirusowej

Source: Wang, M., et al, Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates intranasal infection of a mouse with a pathogenic influenza virus to establish a respiratory tract infection. The procedure outlines the administration of the virus into the nasal cavity. The virus enters host cells, replicates, and activates the immune system.

Intranasal Infection of a Mouse with a Pathogenic Influenza Virus

Ten film demonstruje metodę śledzenia infekcji wirusowych w modelach mysich przy użyciu rekombinowanego wirusa grypy A z ekspresją białka rekombinowanego i fluorescencji, wyrażającego bi-reporter. Metoda ta umożliwia prowadzenie badań zarówno in vivo, jak i ex vivo, umożliwiając naukowcom uzyskanie wglądu w dynamikę wirusa i efekty interwencji.

Wirus wirusa grypy reporterowej lucyferazy-fluorescencji do śledzenia infekcji wirusowych

Istnieje ogólny brak wiedzy na temat działania szczepionek. W tym miejscu proponujemy połączone zastosowanie genetyki odwrotnej i chimerycznych myszy szpiku kostnego w celu uzyskania wglądu we wczesną odpowiedź immunologiczną gospodarza na szczepionki, ze szczególnym uwzględnieniem komórek dendrytycznych i odporności limfocytów T.

Donosowe podawanie rekombinowanych szczepionek przeciw grypie w chimerycznych modelach mysich w celu zbadania odporności błony śluzowej

Pokazano systemiczne i zlokalizowane modele infekcji wirusa grypy A u ludzi. Korzystając z modelu infekcji ogólnoustrojowej, danio pręgowany może być używany do badań przesiewowych leków przeciwwirusowych. Korzystając z modelu infekcji zlokalizowanej, danio pręgowany może być wykorzystany do scharakteryzowania odpowiedzi komórek odpornościowych gospodarza.

Wykorzystanie modeli wirusa grypy pręgowanej u ludzi do badań przesiewowych leków przeciwwirusowych i scharakteryzowania odpowiedzi komórek odpornościowych gospodarza

W tym badaniu prezentujemy protokół do przeprowadzenia dwufotonowego obrazowania intravital i analizy interakcji komórkowych w mysiej błonie śluzowej tchawicy po zakażeniu wirusem grypy. Protokół ten będzie istotny dla naukowców badających dynamikę komórek odpornościowych podczas infekcji dróg oddechowych.

Obrazowanie interakcji komórkowej w błonie śluzowej tchawicy podczas zakażenia wirusem grypy za pomocą dwufotonowej mikroskopii przyżyciowej

Wirusy grypy A (IAV) są zakaźnymi patogenami układu oddechowego, które powodują coroczne epidemie i sporadyczne pandemie. W tym miejscu opisujemy protokół śledzenia infekcji wirusowych in vivo przy użyciu nowej rekombinowanej lucyferazy i bi-reporterowego IAV z ekspresją fluorescencji (BIRFLU). Takie podejście zapewnia naukowcom doskonałe narzędzie do badania IAV in vivo.

Lucyferazy-fluorescencyjny wirus reporterowy grypy do obrazowania na żywo i ilościowego oznaczania infekcji wirusowej

Ten artykuł opisuje protokoły oceny odpowiedzi Tfh i GC B w mysim modelu infekcji wirusem grypy.

Ocena komórek pomocniczych pęcherzyków T i odpowiedzi centrum rozrodczego podczas infekcji wirusem grypy A u myszy

Ten artykuł opisuje nowy model myszy do przejścia pneumokoków z bezobjawowego kolonizatora w patogen chorobotwórczy podczas infekcji wirusowej. Model ten można łatwo zaadaptować do badania interakcji wielodrobnoustrojowych i gospodarz-patogen w różnych fazach progresji choroby i u różnych gospodarzy.

Mysi model przejścia Streptococcus pneumoniae z kolonizatora w patogen po koinfekcji wirusowej podsumowuje chorobę zaostrzoną wiekiem

Protokół ten zawiera instrukcje dotyczące podawania IAV w ciągu nosa oraz dalszej analizy uszkodzeń płuc myszy i związanych z tym zmian transkrypcyjnych typów komórek płucnych.

Modelowanie dysplastycznej i funkcjonalnej naprawy płuc pęcherzyków płucnych po zakażeniu grypą

Poznaj metodę oceny patogenezy wirusa grypy A i skuteczności szczepionek w modelu mysim. Technika ta pozwala badać odpowiedzi immunologiczne oraz testować nowe strategie leczenia przeciwwirusowego.

Badania wirusa grypy A w mysim modelu infekcji

Przeglądaj więcej filmów