Nowatorskie zastosowanie trójwymiarowej ultrasonografii o wysokiej częstotliwości do charakteryzowania wczesnej ciąży u myszy

Ogólnym celem tej procedury obrazowania ultrasonograficznego jest wykrycie, monitorowanie i scharakteryzowanie wczesnej ciąży u myszy. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie biologii rozrodu myszy oraz ustalić wzrost, rozwój i żywotność wczesnych ciąż myszy. Główną zaletą tej techniki jest to, że ciąże te można scharakteryzować i fenotypować in vivo, bez przerywania ciąży myszy, co pozwala na długotrwałe gromadzenie danych.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, będą miały trudności z uzyskaniem wszystkich obrazów w jednej płaszczyźnie. Wynika to z niewielkich przyrostowych ruchów sondy ultradźwiękowej, które są konieczne. Zacznij od przygotowania aparatu USG.

Włącz przetwornik, a następnie podłącz stopień silnika 3D do przetwornika. Następnie przymocuj sondę do zacisku przetwornika. Teraz ustaw mysz na wznak na platformie monitorującej.

Zapewnij mu znieczulenie przez stożek nosowy i delikatnie przyklej wszystkie jego łapy do podkładek monitorujących tętno na platformie. Następnie wetrzyj około jednego lub dwóch mililitrów żelu do transmisji ultradźwięków w brzuch. Następnie umieść sondę ultradźwiękową na dolnej części brzucha za pomocą manualnego stopnia motorycznego.

Za pomocą ultradźwięków zlokalizuj pęcherz moczowy, który powinien wyglądać jak wypełnione jedzeniem ciemne koło tuż po głowie do otworu pochwy. Po zlokalizowaniu pęcherza moczowego bardzo powoli przesuwaj sondę w głowowie, aby uwidocznić macicę w ciąży, która powinna wyglądać jak cylindryczny kształt z okrągłymi obszarami w miejscach ciąży. Można to opisać jako wyglądające jak perły na łańcuszku.

Teraz przejdź do obrazowania 2D. Po zidentyfikowaniu macicy w ciąży zacznij od miejsca ciąży znajdującego się najbliżej pęcherza moczowego i powoli i sekwencyjnie przesuwaj głow, aby określić lokalizację wszystkich miejsc ciąży. Zapisz obraz.

Jeśli widać nerkę, śledzionę lub wątrobę, oznacza to, że skan jest zbyt daleko od głowodu. Umieść sondę bliżej pęcherza moczowego i zapisz obraz. Następnie wyobraź sobie przeciwległy róg macicy w ten sam sposób.

Zamrożenie obrazu, gdy ramka ultrasonograficzna znajduje się w środku miejsca ciąży lub implantacji i zapisz obraz do analizy. Teraz lub później użyj zapisanych obrazów do pomiaru pozycji implantacji, używając hiperechoicznej reakcji decydualizacji jako markera. Ręcznie kliknij narzędzie do pomiaru i kliknij lokalizację miejsca implantacji.

Następnie przeciągnij kursor do następnego miejsca implantacji i kliknij ponownie, aby narysować linię. Następnie oprogramowanie podaje długość linii. Po zmierzeniu wszystkich miejsc implantacji użyj tej samej techniki i przystąp do pomiaru rozmiaru worka ciążowego i rozmiaru słupa płodu.

Po obrazowaniu 2D umieść sondę w obszarze, który znajduje się w przybliżeniu w środku żądanego obrazu 3D. Na przykład, jeśli ktoś obrazuje jabłko w 3D, umieść sondę w rdzeniu. Po prawidłowym ustawieniu sondy uzyskaj akwizycję 3D.

Etap motoryczny 3D pokona tę odległość przez macicę w serii kroków lub ramek. Po uzyskaniu skanowania upewnij się, że zamierzone struktury są całkowicie uchwycone w skanowaniu. Po pobraniu skanu załaduj go do przetwarzania obrazu.

Wybierz metodę przetwarzania równoległego i obrotowego, która spowoduje załadowanie wszystkich ramek obrazu 3D do jednego pola 3D. Następnie wybierz rozmiar kroku 0,08 milimetra, a następnie zacznij od jednego końca bloku obrazu i przewiń wszystkie klatki, aby zapoznać się z danymi. Następnie zacznij od jednego końca stosu i ręcznie prześledź kontur interesującego Cię obiektu.

Następnie przejdź do następnej klatki i ponownie ręcznie obrysuj kontur obiektu. Kontynuuj ten proces, aż wszystkie klatki zostaną ręcznie oznaczone. Po zakończeniu kliknij przycisk Zakończ, aby uzyskać obraz 3D i obliczenie objętości obiektu.

W przypadku obrazu wybierz między siatką a pełną nakładką. Następnie wybierz, czy chcesz zachować lub usunąć otaczające informacje o obrazie, aby uzyskać przejrzystość. Ultradźwięki o wysokiej częstotliwości mogą wykryć rozwój miejsca implantacji już 5,5 dnia po zapłodnieniu.

Używając jaśniejszego hiperechogenicznego dziesiętnego endometrium jako markera miejsc implantacji, liczbę miejsc implantacji i odstępy między tymi miejscami, do ilościowego określenia po 6,5 dniu po zapłodnieniu. W miarę postępu ciąży do 7,5 dnia po zapłodnieniu, ciemniejszy, hipoechogeniczny worek ciążowy i biegun płodu są łatwe do zidentyfikowania. Trójwymiarowe rekonstrukcje macicy myszy po 6,5 dnia od zapłodnienia, wykonano zarówno w formatach siatkowych, jak i nakładek litych.

Po 7,5 dnia od zapłodnienia skan 3D był równie odkrywczy. Po obejrzeniu tego filmu powinnaś dobrze zrozumieć, jak uzyskać dokładne obrazy ultrasonograficzne zarówno w 2D, jak i 3D, aby scharakteryzować ciążę bez przerwy. Całkowity czas potrzebny na akwizycję ultrasonograficzną, zarówno w 2D, jak i 3D, wynosi około 10 do 20 minut w rękach doświadczonego użytkownika.

Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać, aby ruchy były małe i przyrostowe. Technika ta utorowała naukowcom drogę do zbadania normalnych i nieprawidłowych fenotypów ciąży u myszy.