Name: Zabieg chirurgiczny polegający na podawaniu leków do ucha wewnętrznego u marmozety zwyczajnej (Callithrix jacchus) z rzędu naczelnych (Callithrix jacchus) (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-27T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Poznaj chirurgiczną metodę podawania leków do ucha wewnętrznego u marmozety zwyczajnej (Callithrix jacchus). Technika umożliwia bezpieczne badanie wpływu substancji na słuch bez ryzyka utraty słuchu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca jest wspierana przez granty dla M.F. od japońskiego rządu MEXT KAKENHI (24592560, 15H04991 i 15K15624) oraz Fundacji Naukowej Takeda dla M.F. oraz Jikei University Strategic Prioritizing Research Fund dla H.J.O.

Wszystkie procedury eksperymentalne zostały przeprowadzone na Uniwersytecie Jikei w Tokio w Japonii. Postępowanie ze zwierzętami i procedury eksperymentalne zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Wykorzystania Uniwersytetu Jikei (nr zezwolenia: 26-060) i przeprowadzone zgodnie z Instytucjonalnymi wytycznymi dotyczącymi wykorzystywania zwierząt laboratoryjnych na Uniwersytecie Jikei, które zgadzają się z Wytycznymi dotyczącymi prawidłowego prowadzenia doświadczeń na zwierzętach przez Radę Naukową Japonii (2006). Opiekę nad zwierzętami prowadzono zgodnie z zaleceniami Przewodnika opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych (Instytut Zasobów Zwierząt Laboratoryjnych, 1996).
1. Badanie przedoperacyjne
<ol>
	<li>Wykonaj tomografię komputerową czaszki (CT) zwierząt (marmozety) w celu ułatwienia identyfikacji poszczególnych struktur anatomicznych co najmniej miesiąc przed operacją.</li>
	<li>Badanie audiometryczne należy wykonać co najmniej miesiąc przed zabiegiem. 
	UWAGA: W tym przypadku użyliśmy ABR do oceny stanu słuchu. Krótko mówiąc, elektrodę dodatnią umieszczono podskórnie w wierzchołku, a elektrodę ujemną odniesienia u podstawy grzbietowej stymulowanego ucha. Elektrodę masową umieszczono podskórnie w grzbietowej części szyi. 17,18 ABR zostało wywołanych za pomocą tone burst (czas trwania serii tonów 1,0 ms z czasem narastania i opadania 0,1 ms). Poziom dźwięku został następnie zmniejszony o 10 dB w stosunku do maksymalnej amplitudy. Na każdym poziomie dźwięku uśredniono 512 odpowiedzi (ze zmienioną polaryzacją bodźca). Próg ABR został zdefiniowany jako najniższy poziom ciśnienia akustycznego (SPL), przy którym można wykryć dowolną falę.</li>
</ol>
2. Znieczulenie
<ol>
	<li>Zwierzęta na czczo z nocy przed zabiegiem w znieczuleniu ogólnym.</li>
	<li>Podawać 4% izofluranu i powietrze z otoczenia w tempie 5 - 6 ml / min z wentylacją typu maska do twarzy lub w komorze indukcyjnej w celu powolnej indukcji (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1A). Upewnij się, że zwierzę nie reaguje na bolesne bodźce, takie jak szczypanie palca u nogi.</li>
	<li>Znieczulenie popularnych marmozet za pomocą wstrzyknięcia domięśniowego (do mięśnia udowego) kombinacji medetomidyny (0,04 mg/kg), midazolamu (0,4 mg/kg) i butorfanolu (0,4 mg/kg).</li>
	<li>Ampicylinę (0,08 mg/g) wstrzyknąć podskórnie 30 minut lub więcej przed nacięciem skóry jako antybiotyk przedoperacyjny.</li>
	<li>Ułóż marmozetę w pozycji leżącej z głową skierowaną do góry, a następnie wyprostuj głowę i szyję. Przymocuj szczękę do stołu za pomocą nylonowej nici i pociągnij język do góry, aby uzyskać dobry widok, lub użyj laryngoskopu, aby uwidocznić nagłośnię i wejście krtani alternatywnie (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1B).</li>
	<li>Wprowadzić rurkę dotchawiczą wzdłuż powierzchni krtani nagłośni. 
	UWAGA: Możliwe jest użycie cewnika dożylnego o rozmiarze 16 lub rurki do karmienia o rozmiarze 6 French jako rurki dotchawiczej (<klasa silna = "xfig" >Rysunek 1C).</li>
	<li>Sprawdź EtCO2 z rurki dotchawiczej, aby potwierdzić, że został prawidłowo umieszczony w tchawicy. Po umieszczeniu rurki i sprawdzeniu ruchu gazów oddechowych przymocuj rurkę dotchawiczą do twarzy marmozety za pomocą taśmy.</li>
	<li>Utrzymuj znieczulenie na poziomie 1-3% izofluranu podczas operacji.</li>
	<li>Monitoruj SpO2, EtCO2, temperaturę ciała i temperaturę w odbycie podczas operacji. Wykonuj wszystkie zabiegi na macie grzewczej, aby zapobiec obniżeniu temperatury ciała.</li>
</ol>
3. Przygotowanie przedoperacyjne
<ol>
	<li>Przygotuj marmozetę w pozycji leżącej na plecach i pochyl głowę pod kątem 30 - 45 stopni w stronę nieoperacyjną (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2A).</li>
	<li>Ogolić obszar zauszny po stronie operacyjnej.</li>
	<li>Zdezynfekuj obszar operacyjny alkoholem i jodowidonem, zarówno w okolicy zausznej, jak i w przewodzie słuchowym zewnętrznym.</li>
	<li>Umieść na marmozecie arkusz serwety chirurgicznej z okrągłym otworem (<silna klasa="xfig">Ryc. 2B).</li>
</ol>
4. Zabiegi chirurgiczne
<ol>
	<li>Wstrzyknąć 1% chlorowodorku lidokainy (z epinefryną w proporcji 1:100 000, 0,1-0,2 ml) podskórnie w miejsce nacięcia skóry. Wykonaj nacięcie w skórze zausznej za pomocą okrągłego ostrza nr 15.</li>
	<li>W przypadku hemostazy należy uciskać obszar krwawienia za pomocą gazy nasączonej epinefryną rozcieńczoną w stosunku 1:5 000. Skuteczna jest również kauteryzacja dwubiegunowa (<silna klasa="xfig">Rysunek 2C).</li>
	<li>Otwórz tkankę miękką okolicy zausznej, aby można było rozpoznać chrząstkę uszną (c) i mięsień zauszny (m). Odsłoń zewnętrzną kość przewodu słuchowego, która powinna być widoczna głęboko w chrząstce (<silna klasa="xfig">Rysunek 3A).</li>
	<li>Aby potwierdzić głębokość błony bębenkowej, należy odsłonić kostną część brzegu błony bębenkowej, którą można rozpoznać jako zrost skóry i kości w najgłębszej części tylnego przewodu słuchowego. 
	UWAGA: Ten krok pozwala nam rozpoznać, jak głęboka jest boczna część jamy ucha środkowego (<silna klasa="xfig">Rysunek 3A).</li>
	<li>Obrać mięśnie zauszne (mięsień mostkowo-obojczykowo-sutkowy, mięsień splenius capitis i tylny brzuch mięśnia dwubrzuścowego) w kierunku strony ogonowej, oddzielonej od kości skroniowej. Następnie odsłoń boczną powierzchnię kości skroniowej (gwiazdka w <silna klasa="xfig">Ryc. 3B).</li>
	<li>Wykonaj otwór około 5 mm za zewnętrznym kanałem słuchowym za pomocą wiertła diamentowego o średnicy 1,0 mm. (<silna klasa="xfig">Rysunek 3C). Stosować prędkość wiercenia 1.000 - 8.000 obr./min w zależności od miejsca wiercenia. 
	UWAGA: Niska prędkość jest wystarczająca do delikatnej manipulacji w pobliżu kanału półkolistego lub nerwu twarzowego. Prawidłowo wlej sól fizjologiczną w miejsce wiercenia, aby zapobiec urazom termicznym.</li>
	<li>Powiększ otwór przez wiercenie i potwierdź położenie poziomego kanału półkolistego (HSC), który wybrzusza się w kierunku jamy wyrostka sutkowatego (<silna klasa = "xfig">Rysunek 3D).</li>
	<li>Potwierdź położenie nerwu twarzowego, którego pionowa część biegnie przed HSC. Wywierć i usuń wszystkie przegrody kostne, jeśli istnieją, aby uzyskać wyraźny widok zachyłka twarzy, który znajduje się w środku trójkątnego obszaru między nerwem twarzowym a struną bębenkową</li>.
	<li>Wykonaj mały otwór, wiercąc między pionową częścią nerwu twarzowego a krawędzią błony bębenkowej (gwiazdka w <silna klasa="xfig">Rysunek 4A) za pomocą wiertła diamentowego o średnicy 0,6 mm przy 1,000 obr./min.</li>
	<li>Przesuń wiertło równolegle do tylnej ściany kanału, aby zapobiec uszkodzeniu nerwu twarzowego, który można zobaczyć jako różową linię przez przerzedzoną kość. Przerwij wiercenie bezpośrednio przed odsłonięciem nerwu jako struktury białej linii (<silna klasa = "xfig">Rysunek 4B).</li>
	<li>Upewnij się, że okrągła wnęka okienna może być widoczna przez otwór (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 4C). Następnie podawaj leki do niszy za pomocą igły o rozmiarze 25 lub cieńszej. Aby zatrzymać leki we wnęce z okrągłym oknem, umieść lepki roztwór we wnęce (<silna klasa="xfig">Rysunek 4D).</li>
	<li>Po upewnieniu się, że hemostaza jest bezpiecznie kontrolowana, zamknij warstwy (warstwę naskórka i warstwę skórną) prostym przerywanym szwem za pomocą nici chłonnych 6-0.</li>
	<li>Przymocuj gazę do rany chirurgicznej i przymocuj bandaż.</li>
</ol>
5. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Podawać chlorowodorek atipamezolu (0,15 mg/kg) domięśniowo do mięśnia udowego w celu zantagonizowania medetomidyny.</li>
	<li>Kiedy rozpocznie się spontaniczne oddychanie, wyjmij rurkę dotchawiczą.</li>
	<li>Utrzymuj marmozetę pospolitą na oddziale intensywnej terapii w temperaturze 30%O2, 29 °C, aż znieczulenie ustąpi i nastąpi całkowite pobudzenie.</li>
	<li>Upewnij się, że nie ma wyników sugerujących dysfunkcję przedsionkową, takich jak oczopląs, i wróć do klatki hodowlanej.</li>
</ol>

<ol><li>Liberman, M. C., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+synaptopathy+in+acquired+sensorineural+hearing+loss%3A+Manifestations+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Cochlear synaptopathy in acquired sensorineural hearing loss: Manifestations and mechanisms.</a> Hear Res. 349, 138-147 (2017).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Deafness+and+hearing+loss+%28Fact+sheet+N8300%29%22">Deafness and hearing loss (Fact sheet N8300)</a>. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs300/en/">http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs300/en/</a> (2015).</li>
<li>Thompson, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Universal+newborn+hearing+screening%3A+summary+of+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Universal newborn hearing screening: summary of evidence.</a> JAMA. 286 (16), 2000-2010 (2001).</li>
<li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+coding+strategies+in+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Neural coding strategies in auditory cortex.</a> Hear Res. 229 (1-2), 81-93 (2007).</li>
<li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+cortical+coding+of+vocal+communication+sounds+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">On cortical coding of vocal communication sounds in primates.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (22), 11843-11849 (2000).</li>
<li>Bendor, D., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuronal+representation+of+pitch+in+primate+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The neuronal representation of pitch in primate auditory cortex.</a> Nature. 436 (7054), 1161-1165 (2005).</li>
<li>Bendor, D., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+coding+of+periodicity+in+marmoset+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Neural coding of periodicity in marmoset auditory cortex.</a> J Neurophysiol. 103 (4), 1809-1822 (2010).</li>
<li>Eliades, S. J., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory-motor+interaction+in+the+primate+auditory+cortex+during+self-initiated+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Sensory-motor interaction in the primate auditory cortex during self-initiated vocalizations.</a> J Neurophysiol. 89 (4), 2194-2207 (2003).</li>
<li>Eliades, S. J., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+auditory-vocal+interaction+in+monkey+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Dynamics of auditory-vocal interaction in monkey auditory cortex.</a> Cereb Cortex. 15 (10), 1510-1523 (2005).</li>
<li>Eliades, S. J., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+substrates+of+vocalization+feedback+monitoring+in+primate+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neural substrates of vocalization feedback monitoring in primate auditory cortex.</a> Nature. 453 (7198), 1102-1106 (2008).</li>
<li>Hosoya, M., Fujioka, M., Ogawa, K., Okano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+Expression+Patterns+Of+Causative+Genes+Responsible+For+Hereditary+Progressive+Hearing+Loss+In+Non-Human+Primate+Cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Distinct Expression Patterns Of Causative Genes Responsible For Hereditary Progressive Hearing Loss In Non-Human Primate Cochlea.</a> Sci Rep. 6, 22250(2016).</li>
<li>Hosoya, M., Fujioka, M., Kobayashi, R., Okano, H., Ogawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overlapping+expression+of+anion+exchangers+in+the+cochlea+of+a+non-human+primate+suggests+functional+compensation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Overlapping expression of anion exchangers in the cochlea of a non-human primate suggests functional compensation.</a> Neurosci Res. 110, 1-10 (2016).</li>
<li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+non-human+primates+with+germline+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic non-human primates with germline transmission.</a> Nature. 459 (7246), 523-527 (2009).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+Nonhuman+Primate+Model+of+Severe+Combined+Immunodeficiency+Using+Highly+Efficient+Genome+Editing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of a Nonhuman Primate Model of Severe Combined Immunodeficiency Using Highly Efficient Genome Editing.</a> Cell Stem Cell. 19 (1), 127-138 (2016).</li>
<li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+novel+embryonic+stem+cell+lines+derived+from+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Establishment of novel embryonic stem cell lines derived from the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> Stem Cells. 23 (9), 1304-1313 (2005).</li>
<li>Tomioka, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+induced+pluripotent+stem+cells+from+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29+fetal+liver+cells+using+defined+factors%2C+including+Lin28%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cells%22%5BJournal%5D)">Generating induced pluripotent stem cells from common marmoset (Callithrix jacchus) fetal liver cells using defined factors, including Lin28.</a> Genes Cells. 15 (9), 959-969 (2010).</li>
<li>Harada, T., Tokuriki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+click+intensity+and+frequency+on+the+brain-stem+auditory+evoked+potentials+in+the+common+marmoset+%28Callithrix+jacchus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of click intensity and frequency on the brain-stem auditory evoked potentials in the common marmoset (Callithrix jacchus).</a> J Vet Med Sci. 59 (7), 561-567 (1997).</li>
<li>Harada, T., Tokuriki, M., Tanioka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+the+brainstem+auditory+evoked+potentials+of+the+marmoset%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in the brainstem auditory evoked potentials of the marmoset.</a> Hear Res. 128 (1-2), 119-124 (1999).</li>
<li>Juhn, S. K., Hunter, B. A., Odland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-labyrinth+barrier+and+fluid+dynamics+of+the+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Tinnitus+J%22%5BJournal%5D)">Blood-labyrinth barrier and fluid dynamics of the inner ear.</a> Int Tinnitus J. 7 (2), 72-83 (2001).</li>
<li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disorders+of+cochlear+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Disorders of cochlear blood flow.</a> Brain Res Brain Res Rev. 43 (1), 17-28 (2003).</li>
<li>Akil, O., Rouse, S. L., Chan, D. K., Lustig, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+method+for+virally+mediated+gene+delivery+to+the+mouse+inner+ear+through+the+round+window+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Surgical method for virally mediated gene delivery to the mouse inner ear through the round window membrane.</a> J Vis Exp. (97), (2015).</li>
<li>Jero, J., Tseng, C. J., Mhatre, A. N., Lalwani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+approach+appropriate+for+targeted+cochlear+gene+therapy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">A surgical approach appropriate for targeted cochlear gene therapy in the mouse.</a> Hear Res. 151 (1-2), 106-114 (2001).</li>
<li>Iizuka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+in+vivo+delivery+of+transgene+via+adeno-associated+virus+into+supporting+cells+of+the+neonatal+mouse+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Noninvasive in vivo delivery of transgene via adeno-associated virus into supporting cells of the neonatal mouse cochlea.</a> Hum Gene Ther. 19 (4), 384-390 (2008).</li>
<li>Kilpatrick, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus-mediated+gene+delivery+into+the+scala+media+of+the+normal+and+deafened+adult+mouse+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus-mediated gene delivery into the scala media of the normal and deafened adult mouse ear.</a> Gene Ther. 18 (6), 569-578 (2011).</li>
<li>Yamasoba, T., Yagi, M., Roessler, B. J., Miller, J. M., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inner+ear+transgene+expression+after+adenoviral+vector+inoculation+in+the+endolymphatic+sac%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Inner ear transgene expression after adenoviral vector inoculation in the endolymphatic sac.</a> Hum Gene Ther. 10 (5), 769-774 (1999).</li>
<li>Kawamoto, K., Oh, S. H., Kanzaki, S., Brown, N., Raphael, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functional+and+structural+outcome+of+inner+ear+gene+transfer+via+the+vestibular+and+cochlear+fluids+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">The functional and structural outcome of inner ear gene transfer via the vestibular and cochlear fluids in mice.</a> Mol Ther. 4 (6), 575-585 (2001).</li>
<li>Praetorius, M., Baker, K., Weich, C. M., Plinkert, P. K., Staecker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+preservation+after+inner+ear+gene+therapy%3A+the+effect+of+vector+and+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22ORL+J+Otorhinolaryngol+Relat+Spec%22%5BJournal%5D)">Hearing preservation after inner ear gene therapy: the effect of vector and surgical approach.</a> ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 65 (4), 211-214 (2003).</li>
<li>Nakagawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+insulin-like+growth+factor+1+treatment+using+gelatin+hydrogels+for+glucocorticoid-resistant+sudden+sensorineural+hearing+loss%3A+a+prospective+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Med%22%5BJournal%5D)">Topical insulin-like growth factor 1 treatment using gelatin hydrogels for glucocorticoid-resistant sudden sensorineural hearing loss: a prospective clinical trial.</a> BMC Med. 8, 76(2010).</li>
<li>Piu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTO-104%3A+a+sustained-release+dexamethasone+hydrogel+for+the+treatment+of+otic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">OTO-104: a sustained-release dexamethasone hydrogel for the treatment of otic disorders.</a> Otol Neurotol. 32 (1), 171-179 (2011).</li>
<li>Plontke, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((double+blind%2C+placebo+controlled+trial+on+the+safety+and+efficacy+of+continuous+intratympanic+dexamethasone+delivered+via+a+round+window+catheter+for+severe+to+profound+sudden+idiopathic+sensorineural+hearing+loss+after+failure+of+systemic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">double blind, placebo controlled trial on the safety and efficacy of continuous intratympanic dexamethasone delivered via a round window catheter for severe to profound sudden idiopathic sensorineural hearing loss after failure of systemic therapy.</a> Laryngoscope. 119 (2), 359-369 (2009).</li>
<li>Wenzel, G. I., Warnecke, A., Stover, T., Lenarz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+extracochlear+gacyclidine+perfusion+on+tinnitus+in+humans%3A+a+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Arch+Otorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">Effects of extracochlear gacyclidine perfusion on tinnitus in humans: a case series.</a> Eur Arch Otorhinolaryngol. 267 (5), 691-699 (2010).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Objętość przepływu krwi w ślimaku jest niezwykle mała, szacuje się, że wynosi około 1/1 000 000 całkowitego rzutu serca u ludzi, a dostęp do niej jest ograniczony przez obecność bariery krew-ślimak, która oddziela ucho wewnętrzne od krążenia ogólnego19,20. Z tych powodów korzystne jest podawanie leków lub wektorów wirusowych do ucha wewnętrznego, nie poprzez podawanie ogólnoustrojowe, ale raczej przez podanie bezpośrednie. W eksperymentach na myszach i świnkach m...

Odbiorczy ubytek słuchu (SNHL) wynika głównie z uszkodzenia lub niedoboru ślimaka. Najczęstsze przyczyny SNHL to starzenie się (np. prezbiotyka), wady genetyczne, narażenie na głośny hałas, infekcje i leki ototoksyczne1. Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) oszacowała, że ponad 360 milionów ludzi, co stanowi 5,3% światowej populacji, cierpi na ubytek słuchu2. Szacuje się również, że 1 na 900 do 1 na 2500 noworodków ma umiarkowany, ciężki i głęboki wrodzony trwały ubytek słuchu, a około jedna na trzy osoby dorosłe w wieku powyżej 65 lat ma pewien stopień ubytku słuchu3. Nie ma jednak skutecznego klinicznego leczenia ubytku słuchu u tych pacjentów.
Badania słuchu od dawna prowadzone są przy użyciu modeli gryzoni lub świnek morskich, a wiele podejść, takich jak terapia genowa i terapia regeneracyjna, zostało zasugerowanych jako nowe metody leczenia ubytku słuchu. Istnieje jednak duża różnica między ludźmi a gryzoniami pod względem układu słuchowego i bardzo trudno jest przełożyć modele zwierzęce na zastosowania u ludzi. Marmozeta zwyczajna (C. jacchus), małpa z Nowego Świata pochodząca z Amazonii, stała się atrakcyjnym modelem naczelnych dla różnych podstawowych badań naukowych z kilku powodów. Po pierwsze, jego anatomia i fizjologia są bardziej podobne do anatomii i fizjologii ludzi niż gryzoni. Po drugie, podstawowe informacje biologiczne o tym gatunku, w tym choroby, sieci neuronowe, zachowanie i genom, są dobrze scharakteryzowane. Zgłoszono również przetwarzanie słuchowe i wokalne, korowe kodowanie okresowości, reprezentację wysokości dźwięku oraz interakcje słuchowo-głosowe popularnych marmozet4,5,6,7,8,9,10. W ostatnich badaniach histologicznych naukowcy zidentyfikowali charakterystyczne wzorce ekspresji 20 genów głuchoty i wymieniaczy anionowych w ślimaku marmozety zwyczajnej i odkryli, że pięć genów, które są przyczyną postępującej głuchoty, oraz trzy wymieniacze anionowe, miały inne wzorce ekspresji niż u gryzoni11,12. Profile te skłaniają nas do przekonania, że marmozeta pospolita jest potężnym narzędziem do badań nad słuchem.
Najbardziej charakterystyczne cechy marmozety pospolitej jako zwierzęcia doświadczalnego są następujące:
<ul>
	<li>Łatwa obsługa przy niewielkich rozmiarach ciała w porównaniu z niektórymi gatunkami małp Starego Świata: Dorosłe marmozety ważą 300 - 400 g i mają około 60 cm wysokości, co jest podobne do szczurów.</li>
	<li>Wysoce reprodukcyjne naczelne: Marmozety osiągają dojrzałość płciową w wieku 18 miesięcy i są w stanie rodzić dwa razy w roku i rodzić od 4 do 6 potomstwa rocznie.</li>
	<li>Dostępne są modyfikacje genetyczne: Sasaki E i in. udało się stworzyć transgeniczne13 i knock-out14 naczelnych wykorzystujących marmozety za pomocą modyfikacji genetycznych związanych z zaburzeniami neurologicznymi (np. chorobą Parkinsona i chorobą Alzheimera).</li>
	<li>Ustalono zarówno embrionalne komórki macierzyste (ES), jak i indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (iPS)15,16. Chociaż raczej trudno jest utrzymać taką samą liczbę marmozet w porównaniu z gryzoniami, dostępność komórek macierzystych lub komórek iPS zapewnia testy in vitro, które zmniejszą liczbę wymaganych testów in vivo.</li>
</ul>
Aby ułatwić lepsze badania translacyjne w dziedzinie głuchoty i jej potencjalnej terapii, ustaliliśmy protokół badania obrazowego z wykorzystaniem tomografii komputerowej i rezonansu magnetycznego, znieczulenia ogólnego i testów słuchu z wykorzystaniem słuchowych odpowiedzi pnia mózgu (ABR). Te systemy eksperymentalne mogą zapewnić nam lepsze możliwości uzyskania przedklinicznych badań potwierdzających słuszność koncepcji, które są niezbędne do wypełnienia luk między badaniami na gryzoniach a badaniami klinicznymi. W tym miejscu przedstawiamy metodę chirurgiczną polegającą na podawaniu leków do ucha wewnętrznego marmozety pospolitej przez okrągłą błonę okienną. Aby uzyskać wyraźny widok wokół okrągłego okna, bez manipulowania błoną bębenkową, która może spowodować przewodzeniowy ubytek słuchu, warto podejść od strony jamy wyrostka sutkowatego. Klinicznie to podejście, określane jako "tympanotomia tylna", jest dobrze ugruntowane i zwykle stosowane do implantacji ślimakowej i chirurgii cholesteatoma. Wierzymy, że tympanotomia tylna pozwala nam na dokładne podawanie leków bez wywoływania ubytku słuchu.

<table><tbody><tr><td>marmozeta pospolita</td><td>CLEA Japonia</td><td>EDM:C. Marmozet(Jic)</td><td></td></tr><tr><td>izofluran</td><td>Phizer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>medetomidyna</td><td>ZENOAQ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>midazolam</td><td>astellas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>butorfanol</td><td>Meiji Seika</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ampicylina</td><td>Meiji Seika</td><td></td><td></td></tr><tr><td>chlorowodorek lidokainy</td><td>Szczepionka AstraZeneca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 6-0 nić absorpcyjna</td><td>ETHICON</td><td>RD-1</td><td></td></tr><tr><td>chlorowodorek atipamezolu</td><td>ZENOAQ</td><td></td><td></td></tr> sól <tr><td>fizjologiczna buforowana fosforanem</td><td>Wako</td><td>045-29795</td><td></td></tr><tr><td>Surge Wave</td><td>Morita</td><td>TR-900-OR</td><td></td></tr><tr><td>Sztabka diamentowa 006</td><td>Morita</td><td>14070057</td><td></td></tr><tr><td>Sztabka diamentowa 010</td><td>Morita</td><td>14070081</td><td></td></tr><tr><td>oddział intensywnej terapii</td><td>Menix</td><td>P-100</td><td></td></tr></tbody></table>

zabieg chirurgiczny polegający na podawaniu leków do ucha wewnętrznego u marmozety zwyczajnej (callithrix jacchus) z rzędu naczelnych (callithrix jacchus)

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Badania słuchu od dawna ułatwiają modele gryzoni, chociaż w niektórych chorobach nie można podsumować objawów u ludzi. Marmozeta zwyczajna (Callithrix jacchus) to mała, łatwa w obsłudze małpa z Nowego Świata, która ma podobną anatomię kości skroniowej, w tym łańcuchów kosteczek słuchowych ucha środkowego i ucha wewnętrznego do ludzi, niż u gryzoni. W tym artykule przedstawiamy powtarzalne, bezpieczne i racjonalne podejście chirurgiczne do wnęki okrągłego okienka ślimaka w celu dostarczania leku do ucha wewnętrznego marmozety zwyczajnej. Przyjęliśmy tympanotomię tylną, procedurę stosowaną klinicznie w chirurgii człowieka, aby uniknąć manipulacji błony bębenkowej, która może powodować przewodzeniowy ubytek słuchu. Ten zabieg chirurgiczny nie doprowadził do żadnego znaczącego ubytku słuchu. Takie podejście było możliwe ze względu na dużą budowę pęcherza marmozety zwyczajnej, chociaż należy dokładnie rozważyć boczny kanał półkolisty i pionową część nerwu twarzowego. Ta metoda chirurgiczna pozwala nam na bezpieczne i dokładne podawanie leków bez utraty słuchu, co ma ogromne znaczenie w uzyskaniu przedklinicznego dowodu słuszności koncepcji dla badań translacyjnych.

Tympanotomię tylną przeprowadzono bez żadnych powikłań, takich jak zakażenie miejsca operowanego, krwawienie z uszkodzeniem naczyń czy dysfunkcja przedsionkowa, która zdarza się niekiedy podczas manipulacji w uchu środkowym. Wykonaliśmy tympanotomię tylną w prawym uchu 7-letniego sajemistki zwyczajnej i podaliśmy 1 µL soli fizjologicznej w buforze fosforanowym do niszy okna owalnego. ABR mierzono przed operacją oraz dwa miesiące po jej zakończeniu (Rysunek 5<...

Opisujemy metodę chirurgiczną polegającą na podawaniu leków do ucha wewnętrznego naczelnego, marmozety zwyczajnej (Callithrix jacchus), przez okrągłą błonę okienną.

Zabieg chirurgiczny polegający na podawaniu leków do ucha wewnętrznego u marmozety zwyczajnej (Callithrix jacchus) z rzędu naczelnych (Callithrix jacchus)

Hearing research has long been facilitated by rodent models, although in some diseases, human symptoms cannot be recapitulated. The common marmoset ...

Ogólnym celem tej procedury chirurgicznej jest ocena wpływu określonych leków będących przedmiotem zainteresowania na funkcję słuchu marmozety naczelnych poprzez ich bezpieczne podawanie do ucha wewnętrznego bez wywoływania ubytku słuchu. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące dostarczania leków do ucha wewnętrznego, w tym jak otworzyć jamę główną i gdzie podać lek. Główną zaletą tej techniki jest to, że ucho wewnętrzne może być plusem bez powikłań, co ma kluczowe znaczenie dla oceny skuteczności leczenia ucha wewnętrznego u naczelnych.Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku badania potencjalnych terapii głuchoty u ludzi, ponieważ układ słuchowy marmozety jest dość podobny do ludzkiego. Opanowanie tej metody ma kluczowe znaczenie, a postawa i anatomia są trudne do nauczenia i wymagają stworzenia małego okienka w wąskiej przestrzeni bez uszkodzenia gałki twarzowej lub łańcucha kosteczek słuchowych. Potwierdź odpowiedni poziom sedacji poprzez uszczypnięcie palca u nogi i ułóż zwierzę w pozycji leżącej na macie grzewczej z wyciągniętą głową i szyją.Przymocuj szczękę do stołu nylonową nicią i wyciągnij język. Wprowadzić rurkę dotchawiczą wzdłuż powierzchni krtani nagłośni. Sprawdź odpowiedni poziom dwutlenku węgla w rurce dotchawiczej, aby upewnić się, że rurka została prawidłowo umieszczona w tchawicy i przymocuj rurkę do twarzy zwierzęcia.Nachylić głowę pod kątem od 30 do 45 stopni w kierunku strony nieoperacyjnej i ogolić obszar zauszny po stronie operacyjnej zwierzęcia Następnie zdezynfekuj okolicę zauszną i zewnętrzny przewód słuchowy jodem powidonu i przykryj zwierzę prześcieradłem chirurgicznym z okrągłym otworem nad obszarem operacyjnym. Przed otwarciem skóry wstrzyknąć podskórnie 1% chlorowodorku lidokainy w miejsce nacięcia. Następnie, za pomocą mikroskopu chirurgicznego i okrągłego ostrza o kształcie 15, wykonaj nacięcie w skórze zausznej i uciskaj obszar krwawienia gazą nasączoną od jednego do 5 000 rozcieńczonych epinefryny.Otwórz tkankę miękką okolicy postusznej, aby można było zidentyfikować chrząstkę uszną i mięsień zauszny i odsłonić zewnętrzną kość przewodu słuchowego głęboko w chrząstce. Aby potwierdzić głębokość błony bębenkowej, odsłoń kostną część brzegu błony bębenkowej i oderwij mięśnie zauszne w kierunku części ogonowej, aby oddzielić mięśnie od kości skroniowej. Odsłoń boczną powierzchnię kości skroniowej i użyj diamentowego zadzioru o średnicy jednego milimetra, aby zrobić otwór około pięciu milimetrów za zewnętrznym kanałem słuchowym.Wywierć dalej, aby odpowiednio powiększyć otwór i zlokalizować poziomy półkolisty kanał, który wybrzusza się w kierunku jamy wyrostka sutkowatego. Następnie wywierć i usuń wszelkie przegrody kostne w razie potrzeby, aby uzyskać wyraźny widok zagłębienia twarzy, znajdującego się w środku trójkątnego obszaru między nerwem twarzowym a błoną bębenkową. Używając diamentowego zadzioru o średnicy 0,6 milimetra przy 1,000 obr./min, wywierć mały otwór między pionową częścią nerwu twarzowego, który pojawia się jako różowa linia przez cienką kość a brzeg błony bębenkowej.Przerwij wiercenie tuż przed tym, jak nerw zostanie odsłonięty jako biała struktura liniowa i upewnij się, że okrągła wnęka okienna może być widoczna przez uchwyt. Za pomocą igły o rozmiarze 25 lub cieńszej należy dostarczyć interesujące Cię leki do niszy i pokryć niszę odpowiednim roztworem miscues, aby zapewnić zatrzymanie leku. Upewnij się, że hemostaza jest bezpiecznie kontrolowana i użyj sześciu chłonnych nici, aby zamknąć warstwy naskórka i skóry za pomocą prostych, przerywanych szwów.Następnie umieść kawałek gazy na ranie pooperacyjnej, przymocuj gazę bandażem i pozwól marmozety dojść do siebie na oddziale intensywnej terapii w temperaturze 37 stopni Celsjusza w 30% tlenu, aż do całkowitego pobudzenia. Na tych wykresach pokazano słuchowe reakcje pnia mózgu siedmioletniej marmozety zwyczajnej przed i dwa miesiące po dostarczeniu jednego mikrolitra PBS do wnęki z okrągłym oknem, jak właśnie pokazano. Porównanie tych kształtów fal i progów z poprzednim badaniem nie wykazało żadnych zmian w tych parametrach przed lub po operacji, potwierdzając, że tympanotomia tylna jest bezpieczną i użyteczną procedurą podawania leku do niszy okrągłego okna marmozety zwyczajnej.Po opanowaniu tej techniki można wykonać w ciągu godziny, łącznie ze znieczuleniem i indukcją, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać, aby nie uszkodzić kosteczki słuchowej ani guzka twarzowego, co może skutkować odpowiednio przewodzeniowym ubytkiem słuchu lub paraliżem twarzy. Po opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się badaniami nad tłumaczeniami do testowania potencjalnych nowych terapii ubytku słuchu.Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak bezpiecznie podejść do ucha wewnętrznego marmozety zwyczajnej i prawidłowo podać lek do wnęki z okrągłym okienkiem.

a-surgical-procedure-for-administration-drugs-to-inner-ear-non-human

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film prezentuje kantostomię, procedurę, która umożliwia miejscowe dostarczanie leku do ucha wewnętrznego myszy przez kanał półkolisty przy minimalnym uszkodzeniu słuchu i funkcji przedsionkowej. Metoda ta umożliwia inokulację wektorów wirusowych, farmaceutyków i małych cząsteczek do ucha wewnętrznego myszy.

Kanatotomia do miejscowego dostarczania leku do ucha wewnętrznego dorosłej myszy

Opisano tutaj i porównano dwa podejścia mikrochirurgiczne do miejscowego dostarczania leków do ucha wewnętrznego pod względem wpływu na parametry słuchu, cytoarchitekturę ślimaka i ekspresję markerów stanu zapalnego.

Badanie porównawcze metod dostarczania leków ukierunkowanych do ucha wewnętrznego myszy: pęcherzyk a wstrzyknięcie przezbębenkowe

W tym badaniu opisujemy dostęp do tylnego kanału półkolistego jako niezawodną metodę dostarczania genów do ucha wewnętrznego u noworodków myszy. Pokazujemy, że dostarczenie genu przez tylny kanał półkolisty jest w stanie przeniknąć do całego ucha wewnętrznego.

Dostęp do tylnego kanału półkolistego do dostarczania genów do ucha wewnętrznego u nowonarodzonych myszy

Tutaj opisujemy procedurę kanasitomii, która umożliwia miejscowe dostarczanie leku do uszu wewnętrznych dorosłych i noworodków myszy przez kanał półkolisty przy minimalnym uszkodzeniu słuchu i funkcji przedsionkowej. Ta metoda może być stosowana do inokulacji wektorów wirusowych, farmaceutyków i małych cząsteczek w uchu wewnętrznym myszy.

Kanostomia jako chirurgiczne podejście do miejscowego dostarczania leków do uszu wewnętrznego myszy dorosłych i noworodków

Zwierzęce modele implantów ślimakowych mogą poszerzyć wiedzę na temat technologicznych podstaw leczenia trwałego odbiorczego ubytku słuchu za pomocą stymulacji elektrycznej. W badaniu przedstawiono protokół chirurgiczny ogłuszenia i implantacji ślimakowej zestawu elektrod u myszy, a także ocenę funkcjonalną z odpowiedzią słuchową pnia mózgu.

Operacja wszczepienia implantu ślimakowego i elektrycznie wywołane nagrania słuchowej odpowiedzi pnia mózgu u myszy C57BL/6

Opracowaliśmy całokorową matrycę elektrokortykograficzną dla marmozety pospolitej, która nieprzerwanie pokrywa prawie całą boczną powierzchnię kory, od bieguna potylicznego do bieguna skroniowego i czołowego. Protokół ten opisuje przewlekłą procedurę implantacji matrycy w przestrzeni zewnątrzoponowej mózgu marmozety.

Przewlekła implantacja całej korowej matrycy elektrokortykograficznej u marmozety zwyczajnej

Tutaj pokazujemy wspomagane dostarczanie wektorów wirusowych do kory mózgowej za pomocą rezonansu magnetycznego (MR) jako skuteczne i uproszczone podejście do osiągnięcia ekspresji optogenetycznej w dużych obszarach korowych w mózgu makaka.

Konwekcja wzmocniła dostarczanie optogenetycznego wektora wirusowego związanego z adenowirusem do kory mózgowej makaka rezusa pod nadzorem obrazów MRI online

Ta praca przedstawia protokół do przeprowadzenia stereotaktycznego, neurochirurgicznego wszczepienia matryc mikroelektrod u marmozety pospolitej. Metoda ta umożliwia zapisy elektrofizjologiczne u swobodnie zachowujących się zwierząt, ale może być łatwo dostosowana do każdej innej podobnej interwencji neurochirurgicznej u tego gatunku (np. kaniula do podawania leków lub elektrody do stymulacji mózgu).

Chirurgia stereotaktyczna do implantacji układów mikroelektrod w marmozecie zwyczajnej (Callithrix jacchus)

Specjalnie zbudowane mikronapędy umożliwiają submilimetrowe celowanie w miejsca zapisu kory mózgowej za pomocą liniowych układów krzemowych.

Elektrofizjologia aktywności kory laminarnej u marmozety zwyczajnej

Aby zbadać ewolucję języka, ważne jest porównanie mechanizmów mózgowych u ludzi z tymi u naczelnych. Opracowaliśmy metodę nieinwazyjnego pomiaru elektroencefalografii (EEG) obudzonych zwierząt. Pozwala nam to na bezpośrednie porównywanie danych EEG między ludźmi i zwierzętami w dłuższej perspektywie, bez szkody dla nich.

Pomiary elektroencefalograficzne u obudzonych marmozet słuchających wokalizacji współgatunkowych

Poznaj chirurgiczną metodę podawania leków do ucha wewnętrznego u marmozety zwyczajnej (Callithrix jacchus). Technika umożliwia bezpieczne badanie wpływu substancji na słuch bez ryzyka utraty słuchu.

Zabieg chirurgiczny polegający na podawaniu leków do ucha wewnętrznego u marmozety zwyczajnej (Callithrix jacchus) z rzędu naczelnych (Callithrix jacchus) (Wideo) | JoVE Journal

Zabieg chirurgiczny polegający na podawaniu leków do ucha wewnętrznego u marmozety zwyczajnej (Callithrix jacchus) z rzędu naczelnych (Callithrix jacchus)

Przeglądaj więcej filmów