Name: Wytwarzanie przeciwciał monoklonalnych przeciwko produktom naturalnym (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 15 s
Description: Poznaj protokół wytwarzania przeciwciał monoklonalnych przeciwko produktom naturalnym, obejmujący immunizację myszy, fuzję komórek i selekcję ELISA. Ta metoda poprawia czułość i dokładność immunoanaliz w badaniach biologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (granty o numerach 81573573, 81473338 i 81503344) oraz Zespół Badań Podstawowych Klasycznej Recepty na Uniwersytecie Medycyny Chińskiej w Pekinie.

Wszystkie procedury na zwierzętach przeprowadzone w tym badaniu zostały zatwierdzone przez Komitet Oceny Etyki Uniwersytetu Medycyny Chińskiej w Pekinie (numer zatwierdzenia 2016BZYYL00109).
UWAGA: Samice myszy BALB/c (8 tygodni) zostały uodpornione koniugatami białka hapten-nośnik. Mała cząsteczka (<1000 Da) stosowana samodzielnie nie jest w stanie wywołać odpowiedzi immunologicznej. Jednak sprzężenie małej cząsteczki z makrocząsteczką nośnikową powoduje syntezę antygenu. W tym kontekście mała cząsteczka jest oznaczona jako hapten. Koniugacja haptenów jest konieczną i skuteczną strategią produkcji mAb. Aby uniknąć reaktywności krzyżowej, jako immunogeny (do immunizacji zwierząt) i antygeny powlekające (do powlekania płytki) (w celu pokrycia płytki) w celu wykrycia surowicy bydlęcej (BSA) i albuminy jaja kurzego (OVA) lub hemocyjaniny przez dziurkę od klucza (KLH) i BSA należy stosować jako immunogeny (do immunizacji zwierząt) i antygeny powlekające (do pokrycia płytki w celu wykrycia surowicy). BSA i OVA są używane jako przykłady w tym protokole.
1. Przygotowanie antygenu immunologicznego i antygenu powlekającego
UWAGA: Do syntezy sztucznego antygenu użyj odpowiedniej grupy funkcyjnej (np. hydroksylu, sulfhydryl karboksylu kwasu lub aminy) jako bocznego ramienia do kowalencyjnego wiązania z białkiem nośnikowym. Metody koniugacji obejmują utlenianie periodyczne, metodę karbodiimidową, reakcję mieszanych bezwodników, reakcję aldehydu glutarowego i metodę bursztynianu. Protokół ten wykorzystuje naringinę (NAR), dobrze znany glikozyd flawanonowy, jako przykładowy związek. NAR to niewielki związek (581 Da) obecny w owocach cytrusowych, a także w różnych tradycyjnych chińskich lekach.
<ol>
	<li>Użyj procedury utleniania periodycznego do syntezy koniugatów NAR-BSA i NAR-OVA.
	<ol>
		<li>Rozpuścić 50 mg NAR w wodzie o końcowym stężeniu 1 mg/ml22.</li>
		<li>Dodać 100 μl świeżo przygotowanego roztworu periodyku sodu (0,1 M) do 5 ml roztworu NAR. Mieszaj mieszaninę w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozpuścić 4 mg BSA i OVA w 2,0 ml 50 mM buforu węglanowego (pH 9,6). Dodać ten roztwór białka do mieszaniny reakcyjnej NAR/periodynian sodu.</li>
	<li>Doprowadzić mieszaninę do pH 9 za pomocą 1 M Na2roztworu CO3 i mieszać w temperaturze pokojowej przez 6-8 godzin.</li>
	<li>Dializować mieszaninę reakcyjną w roztworze soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) za pomocą membrany dializacyjnej (MWCO 10 kDa) przez 3 dni w celu wymiany CBS.</li>
	<li>Analiza koniugatu hapten-nośnik przy użyciu czasu przelotu desorpcji/jonizacji laserowej wspomaganej matrycą (MALDI-TOF)-MS.
	<ol>
		<li>Zmieszać 1-10 pmol koniugatu z 10 3-krotnym nadmiarem molowym kwasu synapinowego w roztworze wodnym zawierającym 0,15% kwasu trifluorooctowego (TFA). Wysuszyć mieszaninę na płytce do pobierania próbek na powietrzu.</li>
		<li>Analizę należy wykonać za pomocą spektrometru mas MALDI-TOF wyposażonego w impulsowy laser azotowy pracujący przy długości fali 337 nm. Uzyskaj widma masowe MALDI jonów dodatnich w trybie liniowym w zakresie mas (m/z) 15 000-100 000, jak wcześniej opisano22.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Szczepienia ochronne
UWAGA: Użyto łącznie 5 samic myszy BALB/c (8 tygodni): 4 do immunizacji koniugatowej NAR i 1 do immunizacji kontrolnej (PBS).
<ol>
	<li>Przy pierwszym szczepieniu zmieszać 50 μg koniugatu (rozcieńczonego w 100 μl PBS) z równą objętością kompletnego adiuwantu Freunda (CFA) i całkowicie zemulgować. Każdej myszy należy podać 100 μl tej mieszaniny we wstrzyknięciu podskórnym grzbietowym.</li>
	<li>Dwa tygodnie później należy podać szczepionkę przypominającą (100 μl) we wstrzyknięciu podskórnym z taką samą ilością koniugatu zmieszanego z niekompletnym adiuwantem (IFA).</li>
	<li>Pobrać 200 μl krwi z żyły ogonowej każdej myszy 7 dni później, aby uzyskać surowicę.
	<ol>
		<li>Odwirować krew o stężeniu 3 000 x g przez 10 minut. Przenieść supernatant surowicy do świeżej probówki.</li>
		<li>Przeanalizuj surowicę za pomocą testu ELISA, jak opisano wcześniej21. Wybierz mysz o najwyższym mianie surowicy, która ma być używana do fuzji komórek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>W ramach przygotowań do fuzji komórek należy podać impulsową immunizację wybranej myszy poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie 50 μg koniugatu w 300 μl PBS bez adiuwantu 3 dni przed fuzją. 
	UWAGA: Ten krok można pominąć, jeśli miano jest wystarczająco wysokie.</li>
</ol>
3. Przygotowanie do fuzji komórek
<ol>
	<li>Przygotowanie pożywki do fuzji komórek
	<ol>
		<li>Dla selektywnej pożywki hipoksantynowo-aminoterynowo-tymidynowej (HAT): Rozpuść 50-krotny suplement HAT w 10 ml RPMI-1640 i dodaj tę mieszaninę do 500 ml RPMI-1640 zawierającego 20% FBS. 
		UWAGA: Gdy 10 ml 50-krotnego koncentratu rozcieńczy się w 500 ml pożywki hodowlanej, końcowe stężenia hipoksantyny, aminopteryny i tymidyny wynoszą odpowiednio 100 μM, 0,4 μM i 16 μM.</li>
		<li>Dla pożywki hipoksantynowo-tymidynowej (HT): Rozpuść suplement pożywki 50x HT w 10 ml RPMI-1640 i dodaj tę mieszaninę do 500 ml RPMI-1640 zawierającego 20% FBS. Końcowe stężenia hipoksantyny i tymidyny wynoszą odpowiednio 100 μM i 16 μM.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Hoduj komórki Sp2/0-Ag14.
	<ol>
		<li>Co najmniej 7 dni przed fuzją należy szybko rozmrozić fiolkę z zamrożonymi ciekłym azotem komórkami szpiczaka szpiczaka SP2/0-Ag14 w ciepłej wodzie.</li>
		<li>Przenieść roztwór komórkowy do 5 ml świeżej pożywki hodowlanej (RPMI-1640) i odwirować przez 10 minut przy 1000 x g.</li>
		<li>Po odwirowaniu usunąć pożywkę hodowlaną i ponownie zawiesić komórki w świeżym RPMI-1640 uzupełnionym 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS).</li>
		<li>Przenieść komórki i pożywkę do kolby o średnicy 25cm2 i inkubować w temperaturze 37 °C w atmosferze 5% CO2 .</li>
		<li>Rozszerz komórki do 3 lub 4 kolbo długości 75 cm 2 przed fuzją.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie komórek warstwy pokarmowej w jamie brzusznej
	<ol>
		<li>Poświęć 12-tygodniową mysz ICR albinosa przez zwichnięcie szyjki macicy na 1 dzień przed fuzją komórek i zanurz ją w 75% etanolu.</li>
		<li>Po usunięciu sierści z brzucha za pomocą kleszczy hemostatycznych zdezynfekuj obszar 75% etanolem. Przetnij zewnętrzną skórę, aby odsłonić jamę brzuszną. Wstrzyknij 3 ml sterylnego podłoża RPMI-1640 do jamy brzusznej i masuj brzuch, aby odłączyć dodatkowe komórki od roztworu. Zassać zawiesinę ogniwa zasilającego do probówki wirówkowej o pojemności 15 ml.</li>
		<li>Po odwirowaniu zawiesiny komórek przez 10 minut przy 1000 x g, odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki zasilające w 20 ml pożywki selektywnej HAT.</li>
		<li>Przenieść komórki do 96-dołkowych płytek do hodowli komórkowych (100 μl/basenik). Inkubować płytki przez noc w temperaturze 37 °C, 5% CO2 .</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Fuzja komórek
<ol>
	<li>Po przygotowaniu wybranej zaszczepionej myszy do fuzji komórek (patrz krok 2.4), należy podać dootrzewnowe wstrzyknięcie 10% hydratu chloralu (środek znieczulający) i poświęcić uodpornioną mysz przez zwichnięcie szyjki macicy.</li>
	<li>Pobrać dodatkową krew z serca (1 ml) i przygotować surowicę zgodnie z opisem w kroku 2.3.1 do wykorzystania jako kontrola pozytywna podczas selekcji hybrydomy.</li>
	<li>Usuń skórę i tkankę mięśniową za pomocą nożyczek, aby odsłonić śledzionę.</li>
	<li>Ostrożnie odizoluj śledzionę pęsetą i umyj śledzionę RPMI-1640. Pokrój śledzionę na kawałki i powoli ubijaj śledzionę, aby ją rozcierać. Przygotować zawiesinę komórek śledziony, przeciskając tkankę śledziony przez sitko o siatku o siatce 800 ml do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml.</li>
	<li>Przemyć zawiesinę komórek śledziony pożywką RPMI-1640. Pobrać komórki śledziony przez odwirowanie (1000 x g, 10 min i 4 °C), a następnie odrzucić supernatant. Powtórz ten krok prania trzy razy.</li>
	<li>Wyjąć wyhodowane i amplifikowane komórki szpiczaka z inkubatora i delikatnie postukać/wstrząsnąć kolbami w celu uzyskania zawiesiny komórek. Umyj to zawieszenie medium RPMI-1640 dwukrotnie, aby usunąć FBS. 
	UWAGA: Jest to niezbędny krok, ponieważ FBS może wpływać na fuzję komórek.</li>
	<li>Policz komórki i dostosuj stężenie przed zmieszaniem z komórkami śledziony. Ostateczny stosunek komórek śledziony do komórek szpiczaka powinien wynosić od 1:5 do 1:10.</li>
	<li>Wymieszaj zawiesinę komórek śledziony i komórki szpiczaka. Odwirować mieszaninę komórek (1000 x g, 10 min i 4 °C) i usunąć supernatant.</li>
	<li>Dodać 1 ml 50% roztworu glikolu polietylenowego (PEG) do komórek i delikatnie mieszać w temperaturze 37 °C przez 1 minutę. Odstawić na 30 s. 
	UWAGA: Roztwór PEG użyty w tym etapie powinien zawierać 50% (w/v) glikolu polietylenowego 1500 i 10% (v/v) dimetylosulfotlenku (DMSO) w PBS bez wapnia (Ca2+).</li>
	<li>Dodaj 2 ml pożywki RPMI-1640 na 2 minuty, aby zakończyć reakcję. Dodaj dodatkowe 2 ml pożywki RPMI-1640 przez kolejną 1 minutę, a następnie dodaj dodatkowe 10 ml pożywki RPMI-1640.</li>
	<li>Odwirować komórki przy 800 x g przez 10 minut. Po odrzuceniu supernatantu dodać roztwór HAT i kontynuować hodowlę komórek. Następnie dodać 100 μl zawiesiny komórkowej do każdego dołka z płytek warstwy zasilającej i inkubować płytki przez 7 dni w temperaturze 37 °C, 5% CO2, 
	UWAGA: W tych warunkach niepołączone komórki szpiczaka umrą, podczas gdy komórki hybrydoma będą nadal rosły w pożywce HAT. Po 7 dniach hybrydoma monoklonalna utworzy się jako pojedyncze skupisko komórek w studzience, podczas gdy studzienki zawierające hybrydoma poliklonalnego będą miały wiele klastrów komórek.</li>
	<li>Odessać supernatant do analizy i zastąpić pożywkę pożywką HT. 
	UWAGA: Pamiętaj, aby najpierw zastąpić pożywkę HAT pożywką HT, ponieważ bezpośrednie przejście na pożywkę nieuzupełnioną jest szkodliwe dla hybrydoma.</li>
</ol>
5. Pośredni konkurencyjny test ELISA (icELISA)
<ol>
	<li>Pokryć 96-dołkową płytkę NAR-OVA (1 μg/ml, 100 μl/basenik) i inkubować przez 1 godzinę w temperaturze 37 °C lub przez noc w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Zatkać płytkę 300 μl GPBS (PBS zawierający 1% m/v żelatyny) na 1 godzinę w temperaturze 37 °C, aby zapobiec niespecyficznej adsorpcji.</li>
	<li>Umyj płytkę trzykrotnie TPBS (PBS zawierający 0,05% v/v Tween-20).</li>
	<li>Rozcieńczyć niesprzężony NAR do szeregu stężeń z 10% metanolem. Dodać 50 μl tych rozcieńczeń do oddzielnych studzienek. W pozostałych studzienkach dodać 50 μl supernatantu przeciw surowicy lub hybrydomy (zawierającego mAb). Inkubować płytkę przez 1 godzinę w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Dodać 100 μl znakowanej peroksydazą anty-mysiej IgG do każdej studzienki i inkubować przez dodatkowy 1 godzinę.</li>
	<li>Po trzykrotnym umyciu płytki TPBS, dodać 100 μl roztworu substratu (0,1 M buforu cytrynianowego (pH 4) zawierającego 0,015% v/vH2O2 i 2 mg/ml 3, 3', 5,5'-tetrametylobenzydyny (TMB)) do każdej studzienki i inkubować przez 15 minut.</li>
	<li>Zatrzymać reakcję, dodając 50 μl 1 M H2SO4 do każdej studzienki.</li>
	<li>Zmierzyć absorbancję za pomocą czytnika mikropłytek przy długości fali 450 nm. Wybierz hybrydomy, które wydzielały najwyższe stężenia przeciwciał NAR do swojego supernatantu w celu dalszego przygotowania.</li>
</ol>
6. Przygotowanie hybrydomy monoklonalnej
<ol>
	<li>Metodę rozcieńczenia ograniczającego należy zastosować do przygotowania hybrydomów monoklonalnych.
	<ol>
		<li>Po usunięciu pożywki HT z wybranych hybrydomów (tj. tych, które są dodatnie pod względem wydzielania przeciwciał NAR), ponownie zawieś komórki w RPMI-1640 i policz je.</li>
		<li>Rozcieńczyć komórki do stężenia 1 komórki, 2 komórek i 4 komórek na studzienkę w 100 μl RPMI-1640 na 96-dołkowej płytce. Inkubować płytkę w temperaturze 37 °C, 5% CO2 .</li>
		<li>Po 7-10 dniach wykryj przeciwciała NAR w supernatance hodowli za pomocą protokołu icELISA (krok 5). Przenieś komórki z hybrydomów, które są dodatnie na obecność przeciwciał NAR, do 24-dołkowych płytek, 25 cm2 kolb i 75 cm2 kolb do hodowli.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kriokonserwacja hybrydomy monoklonalne.
	<ol>
		<li>Zbierz komórki i przenieś je do probówek wirówkowych.</li>
		<li>Po odwirowaniu komórek (800 x g, 10 min) usunąć supernatant i ponownie zawiesić komórki w pożywce zamrażającej (RPMI-1640, 20% płodowa surowica cielęca (FCS) i 10% DMSO). Przenieś zawiesiny komórek do krioprobówek.</li>
		<li>Przechowywać krioprobówki w gradientowym pudełku chłodzącym w temperaturze -80 °C przez 24 godziny. Następnie przenieś krioprobówki do ciekłego azotu w celu długotrwałego przechowywania.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Kohler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+cultures+of+fused+cells+secreting+antibody+of+predefined+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256, 495-497 (1975).</li>
<li>De Smet, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbal+remedies%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Herbal remedies.</a> The New England journal of medicine. 347, 2046-2056 (2002).</li>
<li>Rowinsky, E. K., Donehower, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+pharmacology+of+paclitaxel+%28Taxol%29%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+oncology%22%5BJournal%5D)">The clinical pharmacology of paclitaxel (Taxol).</a> Seminars in oncology. 20, 16-25 (1993).</li>
<li>Yan, X., Zhao, Y., Zhang, Y., Qu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+Antibodies+and+Immunoassay+for+Medical+Plant-Derived+Natural+Products%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Monoclonal Antibodies and Immunoassay for Medical Plant-Derived Natural Products: A Review.</a> Molecules. 22, (2017).</li>
<li>Loungratana, P., Tanaka, H., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoclonal+antibody+against+ginkgolic+acids+in+Ginkgo+biloba+Linn%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+Chinese+medicine%22%5BJournal%5D)">Production of monoclonal antibody against ginkgolic acids in Ginkgo biloba Linn.</a> The American journal of Chinese medicine. 32, 33-48 (2004).</li>
<li>Fujii, S., Morinaga, O., Uto, T., Nomura, S., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+monoclonal+antibody-based+immunochemical+assay+for+liquiritin+and+its+application+to+the+quality+control+of+licorice+products%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+agricultural+and+food+chemistry%22%5BJournal%5D)">Development of a monoclonal antibody-based immunochemical assay for liquiritin and its application to the quality control of licorice products.</a> Journal of agricultural and food chemistry. 62, 3377-3383 (2014).</li>
<li>Ishiyama, M., Shoyama, Y., Murakami, H., Shinohara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoclonal+antibodies+and+development+of+an+ELISA+for+solamargine%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Production of monoclonal antibodies and development of an ELISA for solamargine.</a> Cytotechnology. 18, 153-158 (1995).</li>
<li>Xuan, L., Tanaka, H., Xu, Y., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+monoclonal+antibody+against+crocin+and+its+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Preparation of monoclonal antibody against crocin and its characterization.</a> Cytotechnology. 29, 65-70 (1999).</li>
<li>Leu, J. G., Chen, B. X., Schiff, P. B., Erlanger, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+polyclonal+and+monoclonal+anti-taxol+antibodies+and+measurement+of+taxol+in+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Characterization of polyclonal and monoclonal anti-taxol antibodies and measurement of taxol in serum.</a> Cancer research. 53, 1388-1391 (1993).</li>
<li>Zhu, S., Shimokawa, S., Shoyama, Y., Tanaka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+analytical+ELISA-based+methodology+for+pharmacologically+active+saikosaponins%5BTitle%5D)+AND+%22Fitoterapia%22%5BJournal%5D)">A novel analytical ELISA-based methodology for pharmacologically active saikosaponins.</a> Fitoterapia. 77, 100-108 (2005).</li>
<li>Phrompittayarat, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+pseudojujubogenin+glycosides+from+Brahmi+based+on+immunoassay+using+a+monoclonal+antibody+against+bacopaside+I%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+analysis%22%5BJournal%5D)">Determination of pseudojujubogenin glycosides from Brahmi based on immunoassay using a monoclonal antibody against bacopaside I.</a> Phytochemical analysis. 18, 411-418 (2007).</li>
<li>Limsuwanchote, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+a+monoclonal+antibody+against+notoginsenoside+R1%2C+a+distinctive+saponin+from+Panax+notoginseng%2C+and+its+application+to+indirect+competitive+ELISA%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+medica%22%5BJournal%5D)">Preparation of a monoclonal antibody against notoginsenoside R1, a distinctive saponin from Panax notoginseng, and its application to indirect competitive ELISA.</a> Planta medica. 80, 337-342 (2014).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+ginsenoside+Rb1+from+Kalopanax+pictus+by+eastern+blotting+using+anti-ginsenoside+Rb1+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+research%22%5BJournal%5D)">Isolation of ginsenoside Rb1 from Kalopanax pictus by eastern blotting using anti-ginsenoside Rb1 monoclonal antibody.</a> Phytotherapy research. 19, 255-258 (2005).</li>
<li>Morinaga, O., Nakajima, S., Tanaka, H., Shoyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoclonal+antibodies+against+a+major+purgative+component%2C+sennoside+B%2C+their+characterization+and+use+in+ELISA%5BTitle%5D)+AND+%22The+Analyst%22%5BJournal%5D)">Production of monoclonal antibodies against a major purgative component, sennoside B, their characterization and use in ELISA.</a> The Analyst. 126, 1372-1376 (2001).</li>
<li>Sakamoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+soy+isoflavone+glycosides%2C+daidzin+and+genistin+by+monoclonal+antibody-based+highly+sensitive+indirect+competitive+enzyme-linked+immunosorbent+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Food+chemistry%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of soy isoflavone glycosides, daidzin and genistin by monoclonal antibody-based highly sensitive indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay.</a> Food chemistry. 169, 127-133 (2015).</li>
<li>Shan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Fluorescence-Linked+Immunosorbent+Assay+for+Baicalin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+fluorescence%22%5BJournal%5D)">Development of a Fluorescence-Linked Immunosorbent Assay for Baicalin.</a> Journal of fluorescence. 25, 1371-1376 (2015).</li>
<li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+based+on+anti-puerarin+monoclonal+antibody+and+its+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+chromatography+B%2C+Analytical+technologies+in+the+biomedical+and+life+sciences%22%5BJournal%5D)">Development of an enzyme-linked immunosorbent assay based on anti-puerarin monoclonal antibody and its applications.</a> Journal of chromatography B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences. 953-954, 120-125 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+immunoaffinity+chromatography+for+glycyrrhizic+acid+using+an+anti-glycyrrhizic+acid+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+separation+science%22%5BJournal%5D)">Development of an enzyme-linked immunosorbent assay and immunoaffinity chromatography for glycyrrhizic acid using an anti-glycyrrhizic acid monoclonal antibody.</a> Journal of separation science. 38, 2363-2370 (2015).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Fluorescence-Linked+Immunosorbent+Assay+for+Paeoniflorin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+fluorescence%22%5BJournal%5D)">Development of Fluorescence-Linked Immunosorbent Assay for Paeoniflorin.</a> Journal of fluorescence. 25, 885-890 (2015).</li>
<li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+application+on+determination+of+ginsenoside+Re+in+human+saliva%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+medica%22%5BJournal%5D)">Establishment of an enzyme-linked immunosorbent assay and application on determination of ginsenoside Re in human saliva.</a> Planta medica. 80, 1143-1150 (2014).</li>
<li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+ELISA+for+detection+of+Rh1+and+Rg2+and+potential+method+of+immunoaffinity+chromatography+for+separation+of+epimers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+chromatography+B%2C+Analytical+technologies+in+the+biomedical+and+life+sciences%22%5BJournal%5D)">Development of ELISA for detection of Rh1 and Rg2 and potential method of immunoaffinity chromatography for separation of epimers.</a> Journal of chromatography B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences. 985, 197-205 (2015).</li>
<li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+immunoassay+and+rapid+immunoaffinity+chromatography+method+for+the+detection+and+selective+extraction+of+naringin+in+Citrus+aurantium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+separation+science%22%5BJournal%5D)">Novel immunoassay and rapid immunoaffinity chromatography method for the detection and selective extraction of naringin in Citrus aurantium.</a> Journal of separation science. 39, 1389-1398 (2016).</li>
<li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+lateral-flow+immunoassay+for+the+quantum+dot-based+detection+of+puerarin%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Rapid lateral-flow immunoassay for the quantum dot-based detection of puerarin.</a> Biosensors & bioelectronics. 81, 358-362 (2016).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W tym miejscu przedstawiamy protokół udanej produkcji mAb przeciwko małym cząsteczkom pochodzącym z naturalnych produktów. Przedstawiono podstawowe kroki w procedurze i wykazaliśmy użyteczność tego protokołu na przykładzie NAR jako przykładu małej cząsteczki. Przykładowe widma, analizy reaktywności i wyniki icELISA pokazują reprezentatywne dane eksperymentalne i kontrolne, które są uzyskiwane przy użyciu tego protokołu. Przykładowe obrazy hybrydomów stanowią wizualną reprezentację tego, na co badacz powinien zwrócić uwag...

Przeciwciała monoklonalne (mAb), znane również jako przeciwciała monospecyficzne, są wytwarzane z pojedynczego klonu limfocytów B i składają się z przeciwciał monowalentnych, które wszystkie wiążą się z tym samym epitopem1. W ostatnich latach wiele naturalnych produktów leczniczych pochodzenia roślinnego było stosowanych w leczeniu różnych chorób2. Rzeczywiście, wiele małych związków molekularnych pierwotnie pochodzących z produktów naturalnych jest obecnie stosowanych jako leki pierwszego rzutu, takie jak artemizynina na malarię i paciltaksel (taksol) na raka2,3. Badania nad produktami naturalnymi poczyniły szybkie postępy, głównie dzięki ogromnemu rozwojowi i optymalizacji konwencjonalnych technik analizy, w tym wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) i spektrometrii mas (MS). Jednak nadal istnieją pewne ograniczenia związane z tymi metodami, takie jak złożone protokoły obróbki wstępnej i związane z tym koszty w odniesieniu do czasu, pracy/wiedzy specjalistycznej i wymaganych instrumentów4.
Ostatnio, testy immunoenzymatyczne (ELISA) oparte na mAb zostały zastosowane do jakościowej i ilościowej analizy żywności i produktów naturalnych. W rzeczywistości metoda ta została zastosowana zarówno do analizy próbek biologicznych, jak i do testów klinicznych i wykazano, że jest dokładna, czuła i wysoce wydajna, a jednocześnie pozwala uniknąć żmudnych etapów obróbki wstępnej związanych z innymi analizami5,6.
Podczas korzystania z testów ELISA opartych na mAb do badania złożonych produktów naturalnych, przygotowanie przeciwciał monoklonalnych jest jednym z głównych etapów. Niestety, mAb specyficzne dla małych składników bioaktywnych obecnych w tego typu substancjach6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 są często ograniczone w porównaniu z antygenami białkowymi. Aby obejść ten problem, opracowaliśmy protokół do specyficznego generowania mAb przeciwko małym związkom. Przedstawiony tutaj protokół obejmuje sztuczną syntezę antygenu, immunizację myszy, fuzję komórek, pośredni kompetycyjny ELISA i preparat hybrydoma monoklonalnego.
Warto zauważyć, że nasza grupa badawcza od lat bada powstawanie mAb przeciwko małym związkom bioaktywnym z tradycyjnych chińskich leków i rozwija ich zastosowania. W naszych trwających badaniach opracowaliśmy mAb przeciwko bajkalinie16, puerarin17, kwas glicyryzynowy18, paeoniflorin19, ginsenozyd Re20, ginsenozyd Rh121 i wiele innych małych cząsteczek. Nasze protokoły ELISA oparte na tych przeciwciałach zostały wykorzystane w wielu badaniach w celu oceny farmakokinetyki tych małych cząsteczek, a także ich interakcji z innymi związkami bioaktywnymi. Ponadto, korzystając z tych mAb, opracowaliśmy również metody chromatografii immunopowinowactwa do rozdzielania analogów strukturalnych, w tym epimerów. Niedawno przygotowaliśmy test immunologiczny z przepływem bocznym przy użyciu naszego mAb anty-pueraryny, który został następnie wykorzystany do szybkiego wykrywania tego związku na miejscu. Nasze wyniki wskazują, że nasze testy oparte na mAb są niezbędnymi i wygodnymi narzędziami do badania biologii i jakości związków pochodzenia naturalnego, szczególnie tych stosowanych w tradycyjnej medycynie chińskiej.

<table><tbody><tr><td>800 oczek (40 &mu; m nylon) filtr&nbsp;</td><td>FALCON</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>24-dołkowa płytka hodowlana</td><td>NUNC</td><td>119567</td><td></td></tr><tr><td>25 cm2 Kolba</td><td>Labserv</td><td>310109016</td><td></td></tr><tr><td>3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine(TMB)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>860336 1G</td><td></td></tr><tr><td>75 cm2 Kolba</td><td>Corning</td><td>430720</td><td></td></tr><tr><td>96-dołkowa płytka hodowlana</td><td>NUNC</td><td>117246</td><td></td></tr><tr><td>albumina surowicy bydlęcej</td><td>AMRESCO</td><td>332</td><td></td></tr><tr><td>sitko do komórek</td><td>FALCON</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>probówka wirówkowa 15 ml</td><td>Corning</td><td>430645</td><td></td></tr><tr><td>probówka wirówkowa 50 ml</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>krioprobówki, 1 ml&nbsp;</td><td>Kultywator Sigma Aldrich</td><td>V7384-1CS</td><td></td></tr><tr><td></td><td>DRP-9082&nbsp;</td><td>Membrana</td> dializacyjna Samsung <td></td></tr><tr><td>(10kDa)</td><td>Heng Hui</td><td>45-10000D</td><td></td></tr><tr><td>dimetylosulfotlenek</td><td>Sinopharm Chemical Waga</td> elektroniczna <td>DH105-10</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Zobacz materiał BS124-S&nbsp;</td><td>Płytki ELISA Sartorius</td><td></td></tr><tr><td>, 96-dołkowy</td><td>655101</td><td></td><td>NUNC</td></tr><tr><td>etanol, 96%</td> <td>Sinopharm Chemical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>płodowa surowica cielęca</td><td>Invitrogen</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>Freund&acute; s adiuwant, kompletny</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SLBM2183V</td><td></td></tr><tr><td>Freund&acute; s adiuwant, niekompletny</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SLBL0210V</td><td></td></tr><tr><td>Żelatyna</td><td>AMRESCO</td><td>9764-500g</td><td></td></tr><tr><td>Gradientowy pojemnik chłodzący</td><td>Nalgene</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Suplement pożywki HAT</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0262-10VL</td><td></td></tr><tr><td>HRP-sprzężone kozie przeciwciało anty-mysie IgG</td><td>applygen</td><td>C1308</td><td></td></tr><tr><td>HT suplement</td> <td>podłożaMikroskop odwrócony Sigma Aldrich</td><td>H0137-10VL</td><td></td></tr><tr><td></td><td>IX73</td><td>Olympus&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>dziurka od klucza hemocyjanina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H8283</td><td></td></tr><tr><td>MALDI-TOF-MS&nbsp;</td><td>Axima-CFR&nbsp; plus&nbsp; &nbsp;</td><td>Aksyma&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Czytnik mikropłytek</td><td>BioTex</td><td>ELX-800&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>mysz</td><td>Vital River&nbsp;</td><td>BALB/c</td><td></td></tr><tr><td>albumina jaja kurzego</td><td>Pekin BIODEE</td><td>5008-25g</td><td></td></tr><tr><td>PEG</td><td>Sigma Aldrich</td><td>RNBC6325</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina& Roztwór streptomycyny</td> Pipeta <td>do SV30010</td><td></td><td>hyklonu</td></tr><tr><td>10 ml</td><td>COSTAR</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta 25 ml</td><td>FALCON</td><td>357525</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Corning</td><td>10-040-CVR</td><td></td></tr><tr><td>mleko odtłuszczone</td><td>applygen</td><td>P1622</td><td></td></tr><tr><td>periodynian sodu</td><td>Sinopharm Chemical</td><td>BW-G0008</td><td></td></tr><tr><td>Sulfo-GMBS</td><td>Perbio Science Niemcy</td><td>22324</td><td></td></tr><tr><td>TipOne Końcówki 1,000 &mikro; L</td><td>Starlab</td><td>S1111-2021</td><td></td></tr></tbody></table>

wytwarzanie przeciwciał monoklonalnych przeciwko produktom naturalnym

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Analiza składników bioaktywnych obecnych w żywności i produktach naturalnych stała się popularnym obszarem badań w wielu dziedzinach, w tym w tradycyjnej medycynie chińskiej i bezpieczeństwie żywności/toksykologii. Wiele klasycznych technik analizy wymaga drogiego sprzętu i/lub specjalistycznej wiedzy. Warto zauważyć, że testy immunoenzymatyczne (ELISA) stały się nową metodą analizy żywności i produktów naturalnych. Metoda ta opiera się na wykrywaniu składników docelowych za pośrednictwem przeciwciał. Ponieważ jednak wiele składników bioaktywnych w produktach naturalnych jest małych (<1000 Da) i nie indukuje odpowiedzi immunologicznej, wytworzenie przeciwciał monoklonalnych (mAb) przeciwko nim jest często trudne. W tym protokole przedstawiamy szczegółowe wyjaśnienie kroków wymaganych do wygenerowania mAb względem cząsteczek docelowych, a także tych potrzebnych do utworzenia powiązanego pośredniego konkurencyjnego testu ELISA (ic) do szybkiej analizy związku w wielu próbkach. Procedura opisuje syntezę sztucznego antygenu (tj. koniugatu hapten-nośnik), immunizację, fuzję komórek, preparat hybrydoma monoklonalnego, charakterystykę mAb oraz zastosowanie mAb w oparciu o ELISA. Koniugat hapten-nośnik zsyntetyzowano metodą periodyanu sodu i oceniono za pomocą MALDI-TOF-MS. Po immunizacji splenocyty wyizolowano od uodpornionej myszy o najwyższym mianie przeciwciał i połączono z wrażliwą na hipoksantynę-aminopterynę-tymidynę (HAT) linią komórkową szpiczaka mysiego Sp2/0 -Ag14 przy użyciu metody opartej na glikolu polietylenowym (PEG). Hybrydomy wydzielające mAb reaktywne na docelowy antygen poddano badaniom przesiewowym za pomocą icELISA pod kątem swoistości i reaktywności krzyżowej. Ponadto zastosowano metodę rozcieńczenia ograniczającego do przygotowania hybrydomów monoklonalnych. Końcowe przeciwciała monoklonochłonne zostały następnie scharakteryzowane za pomocą icELISA, a następnie wykorzystane w aplikacji opartej na teście ELISA do szybkiego i wygodnego wykrywania przykładowego haptenu (naringiny (NAR)) w produktach naturalnych.

Generowanie monoklonalnych hybrydomów
Masę cząsteczkową koniugatu hapten-nośnik potwierdzono za pomocą analizy MALDI-TOF-MS. Ponieważ znane są masy cząsteczkowe zarówno BSA, jak i NAR, można było obliczyć liczbę małych cząsteczek sprzężonych z BSA. Rysunek 1 przedstawia reprezentatywne wyniki spektralne dla NAR-BSA22, które wykazują szeroki ...

Ten artykuł zawiera szczegółowy protokół przygotowania i oceny przeciwciał monoklonalnych przeciwko naturalnym produktom do wykorzystania w różnych testach immunologicznych. Procedura ta obejmuje immunizację, fuzję komórek, pośredni kompetycyjny test ELISA do dodatniego badania przesiewowego klonów oraz przygotowanie hybrydoma monoklonalnego. Podano również specyfikacje dotyczące charakterystyki przeciwciał za pomocą analiz MALDI-TOF-MS i ELISA.

Wytwarzanie przeciwciał monoklonalnych przeciwko produktom naturalnym

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...

Przeciwciała monoklonalne są znane jako przeciwciała monospecyficzne, które są wytwarzane z pojedynczego klonu limfocytów B, oraz przeciwciała monowalentne, które wiążą się z tym samym epitopem. W ostatnim czasie test ELISA oparty na przeciwciałach monoklonalnych stał się naszą nową platformą do analizy jakościowej lub ilościowej żywności bądź produktów naturalnych. Metoda ta jest dokładnym, czułym i skutecznym sposobem analizy, który nie wymaga żmudnych etapów wstępnego przygotowania próbek.W związku z tym jest to kluczowe dla próbek biologicznych i przyszłych zastosowań klinicznych. Przygotowanie przeciwciał monoklonalnych (mAB) dla TCM jest istotnym etapem w badaniach nad charakterystyką złożonych systemów formuł TCM. Opracowaliśmy protokół generowania mAB przeciwko małocząsteczkowym związkom, obejmujący syntezę sztucznych antygenów, immunizację myszy oraz fuzję komórek.Hapten zostaje połączony z białkiem nośnikowym w celu syntezy sztucznego antygenu. Sztuczny antygen i pełne adiuwanty są mieszane i emulgowane. Myszy zaszczepiono poprzez wstrzyknięcie podskórne.Pobierz śledzionę z immunizowanej myszy i przygotuj zawiesinę pojedynczych komórek. Wymieszaj komórki szpiczaka. Spleno

generation-of-monoclonal-antibodies-against-natural-products

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ten film demonstruje metodę generowania przeciwciał z komórek ssaków poprzez wprowadzenie wektorów plazmidowych z ciężkimi i lekkimi genami łańcuchowymi. Wektory te oddziałują z polietyleneniną i wnikają do komórek, tworząc polipleksy; Później są one przekształcane w pojedyncze białka i składane w kompletne przeciwciała, które są wydzielane do podłoża zewnątrzkomórkowego.

Wytwarzanie rekombinowanych przeciwciał monoklonalnych z kultur komórkowych ssaków

Film demonstruje technikę generowania przeciwciał monoklonalnych z limfocytów B specyficznych dla antygenu. Eukariotyczne wektory ekspresyjne kodujące ciężkie i lekkie łańcuchy przeciwciał, sklonowane z izolowanych komórek B specyficznych dla antygenu, wprowadza się do komórek ssaków za pomocą polipleksów. Po wejściu do komórek wektory te ulegają translacji, a powstałe peptydy o ciężkich i lekkich łańcuchach łączą się w przeciwciała, które są następnie wydzielane przez komórki.

Technika wytwarzania przeciwciał monoklonalnych z limfocytów B specyficznych dla antygenu

Synteza ludzkich przeciwciał monoklonalnych jest pierwszym krokiem w badaniach mających na celu rozwikłanie patofizjologicznych mechanizmów odpowiedzi immunologicznej za pośrednictwem autoprzeciwciał. Opracowaliśmy protokół wytwarzania rekombinowanych przeciwciał monoklonalnych ludzkiej immunoglobuliny G (IgG) z komórek B posortowanych krwią, w tym izolację komórek B, klonowanie przeciwciał i syntezę in vitro.

Wytwarzanie rekombinowanych ludzkich przeciwciał monoklonalnych IgG z unieśmiertelnionych sortowanych komórek B

Przedstawiono zoptymalizowany protokół generowania przeciwciał monoklonalnych opartych na technologii hybrydomy. Myszy uodporniono immunokoniugatem. Komórki śledziony zostały połączone za pomocą PEG i impulsu elektrycznego z nieśmiertelnymi komórkami szpiczaka. Komórki hybrydoma wytwarzające przeciwciała wybrano za pomocą HAT i badania przesiewowego ELISA swoistego dla antygenu.

Wytwarzanie mysich przeciwciał monoklonalnych za pomocą technologii Hybridoma

Opisujemy metodę produkcji ludzkich przeciwciał specyficznych dla interesującego nas antygenu, zaczynając od rzadkich limfocytów B krążących w ludzkiej krwi. Wytwarzanie tych naturalnych przeciwciał jest wydajne i szybkie, a uzyskane przeciwciała mogą rozróżniać wysoce spokrewnione antygeny.

Wytwarzanie dyskryminujących ludzkich przeciwciał monoklonalnych z rzadkich limfocytów B specyficznych dla antygenu B krążących we krwi

Białko rekombinowanego przeciwciała wyrażone w komórkach pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO oraz przeciwciała monoklonalne wytworzone przy użyciu tradycyjnej technologii hybrydoma mogą rozpoznawać i wiązać się z białkiem N (APN) aminopeptydazy świni.

Wytwarzanie przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko aminopeptydazie N w nabłonku błony śluzowej jelit świń

Do badania patogenezy Hc wykorzystano myszy C57BL/6, które stanowią najlepszy model. Badamy potencjalne korzyści z odporności humoralnej przeciwko temu grzybowi i wytworzyliśmy kilka przeciwciał monoklonalnych (mAbs) [przeciwko histonie H2B oraz białku szoku termicznego 60kDa], których skuteczność ochronną przetestowano po podaniu domięśniowym.

Pasywna administracja przeciwciał monoklonalnych przeciwko H. capsulatum oraz innym patogenom grzybiczym

Opracowano prostą metodę slot blot do ilościowego oznaczania hemaglutyniny i neuraminidazy wirusa grypy przy użyciu uniwersalnych przeciwciał skierowanych przeciwko ich najbardziej konserwatywnym sekwencjom, zidentyfikowanym za pomocą analiz bioinformatycznych. To innowacyjne podejście może stanowić przydatną alternatywę dla ilościowego określania wszystkich hemaglutynin i neuraminidaz wirusowych.

Analizy ilościowe wszystkich hemaglutynin i neuraminidaz wirusa grypy typu A z wykorzystaniem uniwersalnych przeciwciał w prostych testach slot blot

Opracowano zoptymalizowany test ratowania i transformacji pasożytów z komórek THP1 zainfekowanych in vitro za pomocą Leishmania donovani w celu przesiewania leków przeciwleiszmaniowych. Test ten obejmuje różnicowanie komórek THP1, infekcję promastigotami, traktowanie badanymi lekami, kontrolowaną lizę zainfekowanych makrofagów, ratowanie amastigot, ich transformację w promastigoty oraz monitorowanie wzrostu i proliferacji promastigot za pomocą testu fluorometrycznego.

Test ratowania i transformacji pasożytów do przesiewania leków przeciwleiszmaniowych przeciwko wewnątrzkomórkowym amastigotom Leishmania donovani w ludzkiej linii komórkowej ostrej białaczki monocytycznej THP1

Warunki przechowywania produktów płytkowych tworzą idealne środowisko do namnażania się zanieczyszczeń bakteryjnych do niebezpiecznych poziomów.  Celem tego badania było wykorzystanie testu tworzenia kolonii do oceny procesu redukcji patogenów opartego na ryboflawinie w stosunku do zanieczyszczenia bakteryjnego o wysokim mianie w ludzkich produktach płytkowych.

Leczenie produktów płytkowych ryboflawiną i światłem UV: skuteczność w walce z wysokim mianem bakterii

Poznaj protokół wytwarzania przeciwciał monoklonalnych przeciwko produktom naturalnym, obejmujący immunizację myszy, fuzję komórek i selekcję ELISA. Ta metoda poprawia czułość i dokładność immunoanaliz w badaniach biologicznych.

Wytwarzanie przeciwciał monoklonalnych przeciwko produktom naturalnym

Przeglądaj więcej filmów