Wsteczne wstrzyknięcie nanocząstek do mysiego gruczołu podżuchwowego

Ogólnym celem tej procedury jest podanie nanomateriałów bezpośrednio do mysiego gruczołu podżuchwowego. Główną zaletą tej techniki jest to, że pozwala ona na bezpośrednie dostarczanie związków do gruczołu podżuchwowego z pominięciem krążenia ogólnoustrojowego. Implikacje tej techniki rozciągają się na terapię dysfunkcji gruczołów ślinowych po radioterapii nowotworów głowy i szyi.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają stosować tę metodę, mogą być prowokowane przez zlokalizowanie i kaniulację przewodu podżuchwowego, podczas gdy zwierzę jest uspokojone. Aby rozpocząć tę procedurę, odetnij trzy centymetry rurki cewnika wewnątrzczaszkowego o rozmiarze 32 z wkładką drucianą, aby utworzyć skośny koniec pod kątem około 45 stopni do długiej osi. Upewnij się, że drut jest co najmniej o jeden centymetr dłuższy niż rurka.

Stworzenie skośnej krawędzi rurki ułatwi kaniulację przewodową. Jeśli rurka zostanie wygięta podczas zabiegu, należy przyciąć świeżą skośną krawędź. Następnie załaduj 50 mikrolitrów roztworu nanocząstek PSMA lub innego materiału iniekcyjnego do strzykawki Hamiltona.

Aby zmniejszyć prawdopodobieństwo urazu nory podczas wstrzykiwania, należy przymocować rurkę cewnika do strzykawki i usunąć martwą objętość. Sprawdzić roztwór do wstrzykiwań, aby upewnić się, że nanocząstka jest w pełni rozpętniona, aby zapobiec niedrożności przewodów. Następnie przygotuj roztwór atropiny w ilości 0,1 miligrama na mililitr.

Aby zobrazować kanałowy punkt wejścia, umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej na niestandardowym stoliku. Następnie nałóż maść na oczy, aby zapobiec wysuszeniu podczas zabiegu. Następnie zabezpiecz siekacze szczęki na metalowej belce i użyj elastycznej opaski, aby zastosować napięcie w dół za siekaczami żuchwy.

Ustaw mysz pod mikroskopem preparacyjnym, aby uwidocznić podstawę szczęki. Aby poszerzyć usta, użyj niestandardowego zakrzywionego stalowego zwijacza, aby obustronnie napiąć błonę śluzową policzka. Aby uwidocznić brodawkę podżuchwową, chwyć i delikatnie unieś język z dna jamy ustnej za pomocą kleszczy

Umieść kawałek bawełny między językiem a błoną śluzową policzka, aby umożliwić dalszą manipulację w obrębie jamy ustnej. Aby wykonać kaniulację przewodową i umieszczenie linii, chwyć rurkę cewnika za pomocą wkładki drucianej. Aby uzyskać optymalną kontrolę ręczną podczas kaniulacji, dopasuj rurkę do krzywizny kleszczy.

Za pomocą mikroskopu preparacyjnego przesuń kleszcze i drut w pole view. Za pomocą wkładki drucianej delikatnie dociśnij podstawę jednej brodawki podżuchwowej, aby uzyskać małe powierzchowne nakłucie błony śluzowej, które ułatwi późniejsze wprowadzenie rurki cewnika. Jeśli napotkasz opór, odetnij świeże skośne końcówki zarówno na rurce, jak i na wstawce drutu ostrymi nożyczkami do preparowania.

Po wprowadzeniu należy wyjąć sztyft, a następnie za pomocą mikroskopu preparacyjnego potwierdzić obecność śliny w miejscu nakłucia. Następnie wsuń trzpień do dalszej części rurki. Unikaj mocnych lub nagłych ruchów trzpienia, które mogą spowodować krwawienie lub zagrozić integralności przewodowej.

Aby upewnić się, że rurka iniekcyjna będzie pasować do otworu kanału Whartona, należy włożyć rurkę zawierającą trzpień jako sztywną prowadnicę do wcześniej wykonanego nakłucia. Aby zapobiec przedłużającej się niedrożności ciśnienia wstecznego do przeszkody kanałowej, należy wyciągnąć wężyk. Pod mikroskopem upewnij się, że w brodawce podżuchwowej widoczny jest otwór.

Jeśli wystąpi widoczne krwawienie, zdejmij sztyft i ponów próbę wykonania zabiegu na przeciwległej brodawce podżuchwowej. Następnie, nie ruszając myszą, podawaj dootrzewnowo jeden miligram roztworu atropiny na kilogram, aby zmniejszyć uniesienie podczas zabiegu. Następnie odczekaj od pięciu do 10 minut.

Pod mikroskopem preparacyjnym włożyć rurkę strzykawki do otworu. Jeśli napotkasz opór, odetnij świeży skośny koniec rurki i spróbuj ponownie. Gdy rurka znajdzie się na miejscu w brodawce podżuchwowej, powoli wsuń się od trzech do pięciu milimetrów w głąb kanału.

Następnie zwolnij rurkę z kleszczy. Aby poprawić szczelność między rurką a brodawką podżuchwową, osusz interfejs, delikatnie osuszając gazą przez jedną minutę. Sprawdź, aby upewnić się, że pozycja rurki nie zmieniła się podczas suszenia.

W tej procedurze wstrzykuje się materiał z szybkością 10 mikrolitrów na minutę. Upewnij się, że mysz pozostaje pod wpływem środków uspokajających i nie wykazuje oznak niepokoju. Po wstrzyknięciu należy utrzymać ciśnienie w strzykawce przez pięć minut, aby poprawić zatrzymywanie materiału w przewodzie Whartona i gruczole podżuchwowym.

Okresowo sprawdzaj brodawkę podżuchwową, aby upewnić się, że rurka nie wychodzi z otworu przewodowego. Utrzymanie ciśnienia wtrysku zwiększy skuteczność dostarczania wstecznego. Za pomocą cienkich kleszczyków chwyć i delikatnie wyjmij rurkę z brodawki podżuchwowej.

Wyjmij retraktor i bawełnę z jamy ustnej przed odsunięciem myszy od stolika. Aby zweryfikować dostarczanie nanocząstek, system obrazowania in vivo pokazuje lateralizację sygnału czerwonej fluorescencji do leczonej strony myszy godzinę po wstrzyknięciu. To zdjęcie pokazuje, że sygnał nanocząstek znacznie się zmniejszył 24 godziny po wstrzyknięciu.

Aby potwierdzić trwałość nanocząstek w gruczołach podżuchwowych 24 godziny po wstrzyknięciu, zostały one pocięte i obejrzane za pomocą obrazowania fluorescencyjnego. Pokazano tutaj niewstrzyknięte kontrolne gruczoły podżuchwowe barwione na obecność akwaporyny 5 i kerityny 5, oznaczające odpowiednio komórki wydzielnicze acini i przewodowe. W retroductal nanoparticle injected subdibu gruczoły akwaporyna pięć i kerytyna pięć plamy wykazują normalną morfologię gruczołu i nanocząstki wchłonięte zarówno w acini, jak i przewodach.

Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w 20 minut, jeśli jest wykonywana prawidłowo. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać, aby unikać wszelkich zewnętrznych ruchów, które mogłyby przesunąć kaniulę lub zakłócić uszczelnienie utworzone między rurką a brodawką podżuchwową. Po procedurze można wykonać inne metody, takie jak barwienie immunologiczne, ekstrakcja RNA lub cytometria przepływowa, w celu oceny ekspresji genów lub lokalizacji nanomateriału w gruczole podżuchwowym.

Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę badaczom gruczołów ślinowych do badań przesiewowych i testowania związków w celu zapobiegania kserostomii. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak podawać nanomateriały bezpośrednio do mysiego gruczołu podżuchwowego poprzez kaniulację przewodu Whartona.