Name: Leczenie śródmózgowo-komorowe resynitrotoksyną i testy bólu u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Poznaj metodę wstrzyknięcia śródmózgowo-komorowego resynitrotoksyny u myszy w celu selektywnej desensytyzacji TRPV1 w obszarach nadrdzeniowych. Ta technika umożliwia badanie mechanizmów modulacji bólu w neurofarmakologii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wszystkie protokoły eksperymentalne użyte tutaj zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Uniwersytetu Musashino. Samce myszy ddY (SLC, Shizuoka, Japonia) były trzymane przez co najmniej 7 dni w 12-godzinnym cyklu światła / ciemności przed eksperymentami z wodą i jedzeniem ad libitum. Do eksperymentów wykorzystano 5- lub 6-tygodniowe myszy.
1. Przygotowanie leków
<ol>
	<li>RTX 
	UWAGA: Alkoholowy roztwór RTX może spowodować poważne oparzenia skóry i uszkodzenie oczu. Upewnij się, że używasz gumowych rękawic i okularów w celu ochrony podczas obsługi. Ten roztwór podstawowy może być używany przez 6 miesięcy.
	<ol>
		<li>Dodaj 500 μl etanolu do 1 mg RTX.</li>
		<li>Dodać 500 μl monooleinianu polioksyetylenosorbitolu (20) do roztworu powyżej i dobrze odwirować.</li>
		<li>Dodaj 4 ml soli fizjologicznej do mieszaniny i dobrze odwiruj.</li>
		<li>Porcję 40 μl roztworu rozlać do probówek z nakrętką o pojemności 1,5 ml i przechowywać w temperaturze -40 °C.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Paracetamol
	<ol>
		<li>Dodać 20% w/v roztworu glikolu propylenowego do paracetamolu o stężeniu 30 mg/ml i rozpuścić za pomocą sonikatora. Ponieważ paracetamol może wytrącać się w temperaturze pokojowej kilka godzin po rozpuszczeniu, należy przygotować go tuż przed użyciem lub utrzymywać roztwór w cieple do momentu użycia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Podskórne lub domózgowo-komorowe wstrzyknięcie RTX
<ol>
	<li>Rozmrozić podstawowy roztwór przygotowany w ppkt. 1.1 powyżej i rozcieńczyć go do 20 μg/ml w roztworze soli fizjologicznej lub sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym (ACSF) składającym się z (w mM): 119 NaCl, 2,5 KCl, 1 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 11 glukozy, 1,3MgSO4, 2,5 CaCl2 w równowadze z 95%O2 i 5% CO2 (pH 7,2).</li>
	<li>Znieczulić myszy solą sodową pentobarbitalu (60 mg/kg, dootrzewnowo) i sprawdzić, czy nie ma utraty odruchu prostowania.</li>
	<li>W leczeniu domięśniowym należy wstrzyknąć RTX (20 μg/ml) w tylną część szyi w objętości 0,1 ml/10 g masy ciała. W przypadku grupy kontrolnej wstrzyknąć nośnik (10% etanolu, 10% monooleinianu polioksyetylenu (20) sorbitolu i 80% soli fizjologicznej) w ten sam sposób.</li>
	<li>W przypadku leczenia dożylnego należy wstrzyknąć 5 μl RTX (20 μg/ml) do prawej komory bocznej. W przypadku grupy kontrolnej wstrzyknąć nośnik (10% etanolu, 10% monooleinianu polioksyetylenu (20) sorbitanu i 80% ACSF) w ten sam sposób.
	<ol>
		<li>Przełóż jednorazową igłę 27-G przez metalową rurkę (średnica wewnętrzna 0,8 mm), aby odsłonić końcówkę igły o średnicy 3,0-3,5 mm (<klasa silna = "xfig">Rysunek 1A).</li>
		<li>Zdezynfekuj głowę myszy 70% alkoholem i mocno przytrzymaj kości łuskowe myszy palcami (Rysunek 1B). 
		UWAGA: Zwróć uwagę na położenie występów łuskowych, ponieważ te występy będą służyć jako punkty orientacyjne do wstrzyknięcia.</li>
		<li>Przesuń igłę na boki skóry głowy i znajdź szew strzałkowy, gdy końcówka igły jest zaczepiona o szew.</li>
		<li>Przesunąć końcówkę o około 1 mm w prawo, a następnie przesunąć końcówkę w kierunku obrotowym i znaleźć szew koronalny, jak w 2.4.3. (<silna klasa="xfig">Rysunek 1B).</li>
		<li>Wprowadź igłę powoli i pionowo, wstrzyknij roztwór RTX w około 10 sekund i przytrzymaj go przez około 10 sekund.</li>
		<li>Powoli wyjmij igłę i umieść mysz z powrotem w klatce domowej. Krwawienie jest zwykle minimalne lub nie ma go wcale. Jeśli wystąpi poważne krwawienie, należy rozważyć użycie innej myszy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przypisz wstępnie leczone myszy jako obiekty do testu RTX lub testu nacisku na ogon (odpowiednio krok 3 i 4).</li>
</ol>
3. Test RTX
UWAGA: Testy są przeprowadzane między 10:00 a 17:00. W pomieszczeniu testowym utrzymuje się natężenie 200 luksów i temperaturę 24-26 °C.
<ol>
	<li>Tydzień po wstępnym leczeniu RTX (Krok 2.) przenieś myszy do pokoju testowego co najmniej 60 minut przed rozpoczęciem testu.</li>
	<li>Zważ i umieść każdą mysz indywidualnie w klatce z pleksiglasu (29,5 × 17,5 × 13,5 cm3 wysokość) co najmniej 30 minut przed rozpoczęciem testu, aby umożliwić jej aklimatyzację w środowisku. 
	UWAGA: Kolejność testów powinna być zrównoważona we wszystkich grupach przed leczeniem.</li>
	<li>Paracetamol (300 mg/kg) należy podać myszy dootrzewnowo 20 minut przed badaniem.</li>
	<li>Trzymaj mysz luźno w małej płóciennej torbie i włóż igłę o rozmiarze 30 w piętę prawej tylnej łapy. Przesunąć igłę podskórnie w pobliże podkładek do chodzenia i wstrzyknąć 20 μl roztworu RTX (0,05 μg/ml).</li>
	<li>Zmierz okres lizania/gryzienia w nagim obszarze dotkniętej łapy w każdym 5-minutowym bloku.</li>
</ol>
4. Test ciśnienia w ogonie
UWAGA: Miernik ciśnienia typu Randall-Selitto służy do oceny progu ostrej mechanicznej nocycepcji. Testy wykonywane są w godzinach od 10:00 do 17:00. W pomieszczeniu testowym utrzymuje się natężenie 200 luksów i temperaturę 24-26 °C.
<ol>
	<li>Tydzień po wstępnym leczeniu RTX (krok 2) przenieś myszy do pokoju testowego, a następnie zważ i umieść każdą mysz indywidualnie w klatce z pleksiglasu.</li>
	<li>Zaznacz plamki w odległości 1,5 i 2,5 cm od podstawy ogona.</li>
	<li>Trzymaj mysz luźno w małej płóciennej torbie i dociśnij miejsca sondą. 
	UWAGA: Aby uniknąć uszkodzenia tkanki, narzuca się ciśnienie graniczne 250 g.</li>
	<li>Określ ciśnienie wymagane do wywołania zachowania ucieczki (trzepanie ogonem, skręcanie i piszczenie) i oblicz próg nocyceptywny, uśredniając ciśnienie określone w dwóch miejscach.</li>
	<li>Kroki od 4.3 do 4.4 powtarzać co 15 minut.</li>
	<li>Po uzyskaniu wartości wyjściowej należy podać myszowi paracetamol (300 mg/kg) dootrzewnowo. Po podaniu należy powtórzyć kroki 4.3. i 4,4 co 15 min.</li>
</ol>

<ol><li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li>
<li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), New York, N.Y. 306-313 (2000).</li>
<li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li>
<li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li>
<li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+anxiety%2C+conditioned+fear%2C+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li>
<li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity%3A+Therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li>
<li>Nazıroğlu, M., Övey, İS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li>
<li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li>
<li>Barrière, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690(2013).</li>
<li>Jancsó, G., Kiraly, E., Jancsó-Gábor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li>
<li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li>
<li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li>
<li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021(2009).</li>
<li>Jancsó, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracisternal+capsaicin%3A+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li>
<li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43(2008).</li>
<li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li>
<li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452(2017).</li>
<li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li>
<li>Tjølsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formalin+test%3A+an+evaluation+of+the+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li>
<li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li>
<li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li>
<li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir%2C+an+anti-influenza+virus+drug%2C+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+%26+clinical+pharmacology+%26+toxicology%22%5BJournal%5D)">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic & clinical pharmacology & toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li>
<li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hot+flash%3A+TRPV+channels+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów

Najważniejszym krokiem w tych eksperymentach jest powodzenie wstrzyknięcia dożylnego. Zastosowana tutaj technika iniekcji dożylnej jest dość prosta, ale wymaga pewnej wprawy. Przed eksperymentami zaleca się praktykę z barwnikami (np. 0,5% błękitu trypanowego w soli fizjologicznej). Jeśli wstrzyknięcie zostanie wykonane prawidłowo, na szwie koronalnym powinien być widoczny ślad po igle, a wstrzyknięty barwnik powinien być obecny w komorze przeciwległej i trzeciej komorze. Ponadto podczas wstrzykiwania należy unikać wprowa...

Zwierzęta otrzymują różne bodźce fizyczne i chemiczne ze swojego otoczenia za pośrednictwem czujników na nerwach obwodowych. Przejściowy potencjał receptora waniloidowego typu 1 (TRPV1) jest jednym z termoczułych, nieselektywnych kanałów kationowych, które działają jak czujniki ciepła1,2, a aktywacja i/lub modulacja TRPV1 jest znana jako kluczowy krok dla nocycepcji zarówno w kontekście normalnym, jak i zapalnym3. Chociaż ogólny wzorzec ekspresji jest kontrowersyjny, ekspresja TRPV1 została również zasugerowana w regionach nadrdzeniowych, biorąc udział w różnych czynnościach mózgu (w tym nocycepcji4, termoregulacja5, anxiety6, zespół nadpobudliwości psychoruchowej z deficytem uwagi7 i epilepsy8). Co więcej, ostatnio zasugerowano, że paracetamol, szeroko stosowany środek przeciwbólowy, pośredniczy w aktywacji centralnego TRPV1 w celu wywołania jego działania przeciwbólowego9,10.
Podawanie zwierzętom nadmiaru agonisty TRPV1, w tym kapsaicyny i żywicyferatoksyny (RTX), prowadzi do śmierci neuronów TRPV1-dodatnich i długotrwałego odczulenia na agonistów TRPV111,12. W połączeniu z aplikacją lokalną (intrathecal13,14, intracisternal15,16,17 i intraganglional18), to podejście do ablacji chemicznej zapewniło alternatywny sposób badania fizjologicznych funkcji TRPV1. Niedawno informowaliśmy, że wstrzyknięcie RTX do komór mózgowych (i.c.v.) hamuje przeciwbólowe działanie paracetamolu u myszy, co sugeruje nadrdzeniowo-selektywne odczulanie TRPV119. W tym manuskrypcie przedstawiamy dokładny protokół iniekcji i.c.v. i późniejszych testów przeciwbólowych.
Bezpośrednie wstrzykiwanie leków do komór mózgu umożliwia badanie ich centralnego efektu, jednocześnie minimalizując wszelkie efekty obwodowe. Przedstawiona tutaj procedura iniekcji dożylnej jest modyfikacją metody opisanej przez Haleya i McCormick20. Metoda ta jest prosta, polega na wprowadzeniu igły iniekcyjnej do komór bocznych przez szew koronalny i nie wymaga specjalnego sprzętu ani zabiegów chirurgicznych do kaniulacji.
Obwodowe miejscowe stosowanie agonistów TRPV1 wywołuje uczucie palącego bólu i neurogenne zapalenie. Myszy, które są ogólnoustrojowo leczone RTX i myszy TRPV1-KO, są niewrażliwe na tę stymulację13. Przeprowadziliśmy iniekcję doplantacyjną RTX (test RTX), aby potwierdzić zachowanie obwodowego TRPV1 w RTX-i.c.v. Myszy. Ta metoda jest modyfikacją konwencjonalnego formaliny test21.
Doniesiono, że myszy leczone systemowo RTX i TRPV1-KO wykazują normalny próg bodźców mechanicznych11,13,22. W tym miejscu przedstawiamy procedurę próby ciśnienia w ogonie w celu zbadania zmian w działaniu przeciwbólowym paracetamolu.
Wszystkie te procedury są ortodoksyjne i wszechstronne, i mogą być stosowane do badań nad innymi lekami.

<table><tbody><tr><td>Żywica</td><td>LKT Laboratories</td><td>R1774</td><td>stosowana do wstępnej obróbki s.c./i.c.v. i testu RTX</td></tr><tr><td>Paracetamol</td><td>IWAKI SEIYAKU</td><td></td><td>podarowany przez IWAKI SEIYAKU</td></tr><tr><td>Sól sodowa pentobarbitalu</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>P0776</td><td>używany do znieczulenia</td></tr><tr><td>Etanol (99,5)</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>057-00456</td><td>używany do rozpuszczania RTX</td></tr><tr><td>Polioksyetylen(20) Monooleinian Sorbitanu</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>161-21621</td><td>stosowany do rozpuszczania RTX</td></tr><tr><td>25 i #956; L mikrostrzykawka</td><td>Hamilton</td><td>1702LT</td><td>używana do iniekcji dożylnych</td></tr><tr><td>100 &#956; L mikrostrzykawka</td><td>Hamilton</td><td>1710LT</td><td>używana do iniekcji wewnątrzpodeszwowej</td></tr><tr><td>Jednorazowa igła o rozmiarze 26</td><td>TERUMO</td><td>NN-2613S</td><td>używana do iniekcji dożylnej</td></tr><tr><td>Igła jednorazowa 30 G</td><td>NIPRO</td><td>01134</td><td>używana do iniekcji wewnątrzzakładowej</td></tr><tr><td>Miernik ciśnienia</td><td>Ugo Basile</td><td>Analges-Meter Typ 7200</td><td>używany do próby ciśnienia ogonowego</td></tr></tbody></table>

leczenie śródmózgowo-komorowe resynitrotoksyną i testy bólu u myszy

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Wiadomo, że przejściowy potencjał receptora waniloidowego typu 1 (TRPV1), termoczuły kanał kationowy, wywołuje ból w nerwach obwodowych. Oprócz funkcji obwodowej sugeruje się również jego udział w funkcjach mózgu. Wiadomo, że resyferatoksyna (RTX), ultrapotencjalny agonista TRPV1, indukuje długotrwałą desensytyzację TRPV1, a ta desensytyzacja była alternatywnym podejściem do badania fizjologicznego znaczenia komórek wykazujących ekspresję TRPV1. Tutaj opisujemy protokół leczenia śródmózgowo-komorowego (i.c.v.) za pomocą RTX u myszy. Opisano procedury testowania nocycepcji do obwodowej stymulacji TRPV1 (test RTX) i stymulacji mechanicznej (test nacisku na ogon), a następnie następują. Chociaż reakcje nocyceptywne myszy, którym podano RTX i.c.v., były porównywalne z tymi w grupach kontrolnych, myszy podawane przez RTX-i.c.v. były niewrażliwe na przeciwbólowe działanie paracetamolu, co sugeruje, że leczenie i.c.v. RTX może indukować nadrdzeniowo-selektywne odczulanie TRPV1. Ten mysi model może być używany jako wygodny system eksperymentalny do badania roli TRPV1 w funkcji mózgu/nadrdzeniowej. Techniki te mogą być również stosowane do badań nad centralnym działaniem innych leków.

Myszy poddane podaniu i.c.v. nie wykazują widocznych nieprawidłowości w wyglądzie, aktywności spontanicznej, masie ciała19 oraz temperaturze wewnętrznej ciała (grupa traktowana wehikułem, 38,4 ± 0,3 °C, n = 6; grupa traktowana RTX, 38,7 ± 0,2 °C, n = 6).
Rysunek 2A-B przedstawia reakcję myszy traktowanych s.c. lub i.c.v. na wewnątrzplantarne wstrzyknięcie RTX...

Sugeruje się, że przejściowy potencjał receptora waniloidowego typu 1 (TRPV1) w okolicy nadrdzeniowej odgrywa pewne role w funkcjonowaniu mózgu. Opisano tutaj protokół wstrzykiwania domózgowo-komorowego resyferatoksyny w celu odczulania TRPV1 nadrdzeniowego u myszy. Przedstawiono również procedury niektórych testów bólowych.

Leczenie śródmózgowo-komorowe resynitrotoksyną i testy bólu u myszy

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

Ogólnym celem tego wstępnego leczenia jest wygenerowanie myszy i odczulenie kanałów TRPV1 w regionach nadrdzeniowych. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie neurofarmacji. Główną zaletą tej techniki jest to, że nadrdzeniową selektywną desensytyzację TRPV1 można wywołać w dość prosty sposób.Aby rozpocząć tę procedurę, znieczulij mysz pentobarbitalem sodu dootrzewnowo i sprawdź, czy nie ma utraty odruchu prostowania. W przypadku leczenia podskórnego należy wstrzyknąć RTX w dawce 20 mikrogramów na mililitr w tylną część szyi w objętości 0,1 mililitra na 10 gramów masy ciała. W przypadku grupy kontrolnej wstrzyknąć pojazd w ten sam sposób.Przełóż jednorazową igłę o rozmiarze 27 przez metalową rurkę, aby odsłonić od 3 do 3,5 milimetra końcówki igły. Następnie mocno przytrzymaj palcami kości łuskowe myszy. Przesuń igłę bocznie na skórę głowy i znajdź szew strzałkowy, gdy końcówka igły jest zaczepiona o szew.Przesuń końcówkę o około jeden milimetr w prawo, a następnie przesuń końcówkę w kierunku obrotowym, aby znaleźć szew koronalny. Następnie należy wprowadzać igłę powoli i pionowo. Wstrzyknij roztwór RTX przez 10 sekund, a następnie przytrzymaj go przez kolej

intracerebroventricular-treatment-with-resiniferatoxin-pain-tests

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Ten film demonstruje metodę tworzenia modelu neuropatii małych włókien u myszy przy użyciu agonisty TRPV1 resiniferatoksyny (RTX). Przedstawiono w nim etapy związane z podawaniem RTX myszom i wyjaśniono, w jaki sposób RTX indukuje śmierć neuronów w neuronach czuciowych o małej średnicy, ustanawiając w ten sposób model neuropatii.

Ustalenie mysiego modelu neuropatii małych włókien przy użyciu resiniferatoksyny

Źródło: Fukushima, A., et al. Leczenie śródmózgowo-komorowe resynitrotoksyną i testy bólu u myszy. J. Vis. Exp. (2020)Ten film pokazuje procedurę wstrzykiwania do komory mózgowej resiniferatoksyny u myszy w celu odczulania receptorów TRPV1 w mózgu.

Leczenie śródmózgowo-komorowe resyferatoksyną w celu odczulenia TRPV1 w mózgu myszy

Źródło: Martinez, E., et al. Farmakoterapia wewnątrzczaszkowa i testy przeciwbólowe u gryzoni. J. Vis. Exp. (2019).Ten film pokazuje wewnątrzczaszkowe podawanie leku przeciwbólowego znieczulonemu szczurowi z wstępnie wszczepioną kaniulą prowadzącą w korze przedczołowej. Dodatkowy lek przeciwbólowy jest podawany jednocześnie dootrzewnowo. Po wyzdrowieniu reakcja termiczna szczura na ból jest oceniana za pomocą aparatu Hargreave'a, w którym mierzy się opóźnienie wycofania łapy w celu oceny...

Synergiczny wpływ wewnątrzczaszkowego i dootrzewnowego podawania leków przeciwbólowych na termiczną reakcję bólową u szczura

Przedstawiamy protokół do pomiaru [14C]-jodoantypiryny (IAP) i oceny aktywacji substratów nerwowych, które są zaangażowane w centralny ból poudarowy (CPSP) w modelu gryzoni.

Pomiary autoradiograficzne [14C]-jodoantypiryny w mózgu szczura po centralnym bólu poudarowym

To badanie ustanawia eksperymentalny model czystej neuropatii małych włókien z resiniferatoksyną (RTX). Unikalna dawka RTX (50 μg/kg) jest optymalna do opracowania modelu neuropatii małowłóknistych, który naśladuje charakterystykę pacjenta i może pomóc w zbadaniu nocyceptywnego znaczenia molekularnego leżącego u podstaw bólu neuropatycznego.

Ustalenie mysiego modelu czystej neuropatii drobnowłóknistej z ultrasilnym agonistą przejściowego potencjału receptora waniloidowego typu 1

W tym artykule podajemy szczegóły dotyczące metod produkcji i kontroli jakości rekombinowanego białka fuzyjnego IL4-10. Pokazujemy również, jak przetestować skuteczność tego białka w rozwiązywaniu bólu w mysim modelu bólu zapalnego.

Opracowanie białek rekombinowanych w leczeniu bólu przewlekłego

Tutaj prezentujemy protokół do przeprowadzania wewnątrzczaszkowych eksperymentów farmakologicznych, a następnie testów zachowania bólu u gryzoni. Protokół ten pozwala naukowcom na dostarczanie celów molekularnych i komórkowych w mózgu, dla środków farmakologicznych w leczeniu bólu.

Farmakoterapia wewnątrzczaszkowa i testy bólu u gryzoni

Najbardziej zauważalnym objawem migreny jest silny ból głowy, a przypuszcza się, że jest on spowodowany przez neurony czuciowe unerwiające opony mózgowe. W tym miejscu przedstawiamy metodę miejscowego nakładania substancji na oponę twardą w sposób minimalnie inwazyjny, przy jednoczesnym wykorzystaniu nadwrażliwości twarzy jako wyjścia.

Stymulacja opony twardej i okołooczodołowe testy von Freya u myszy jako przedkliniczny model bólu głowy

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego wywołuje długotrwały przewlekły ból neuropatyczny, charakteryzujący się przesadnymi reakcjami na bodźce termiczne i mechaniczne. Ten mysi model bólu neuropatycznego jest powszechnie stosowany do badania innowacyjnych terapii leczenia bólu. W tym artykule szczegółowo opisano procedurę chirurgiczną w celu poprawy standaryzacji i odtwarzalności.

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego: mysi model przewlekłego bólu neuropatycznego w celu zbadania antynocyceptywnego działania nowych terapii

Testy manipulacji Vermicelli i Capellini służące do oceny sprawności przednich łap wykorzystują naturalną skłonność gryzoni do manipulowania produktami spożywczymi za pomocą precyzyjnych ruchów przednich łap i palców. Zwierzęta są nagrywane podczas manipulowania krótkimi nitkami surowego, suchego makaronu. Odtwarzanie wideo w zwolnionym tempie umożliwia ilościową ocenę korekt ułożenia przednich łap.

Testy manipulacji nitkami vermicelli i capellini: proste ilościowe pomiary sprawności chwytnej przedniej łapy u szczurów i myszy

Poznaj metodę wstrzyknięcia śródmózgowo-komorowego resynitrotoksyny u myszy w celu selektywnej desensytyzacji TRPV1 w obszarach nadrdzeniowych. Ta technika umożliwia badanie mechanizmów modulacji bólu w neurofarmakologii.

Leczenie śródmózgowo-komorowe resynitrotoksyną i testy bólu u myszy

Przeglądaj więcej filmów