Name: Test infekcji roślin: inokulacja w sprayu i za pośrednictwem ran patogenem roślinnym Magnaporthe Grisea (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Poznaj metodę inokulacji roślin patogenem Magnaporthe grisea w celu szybkiego i wielkoskalowego badania patotypów grzybów. Technika ta umożliwia badanie mechanizmów odporności roślin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Specjalny Projekt Badań Naukowych Pekińskiego Uniwersytetu Rolniczego (YQ201603) oraz Projekt Naukowy Pekińskiego Komitetu Edukacyjnego (KM201610020005).

1. Inokulacja w sprayu z zawiesiną konidiów M. grisea
<ol>
	<li>Kultura grzybów dla M.grisea
	<ol>
		<li>Przygotuj pożywkę do hodowli pomidorów owsianych (OTA) dla szczepów grzybów.</li>
		<li>Zważ 30 - 50 g płatków owsianych, dodaj je do 800 ml wody destylowanej/dejonizowanej (ddH2O) i gotuj mieszaninę przez 30 minut w garnku elektrycznym.</li>
		<li>Przefiltruj ugotowany sok owsiany do zlewki przez kawałek gazy.</li>
		<li>Dodać 150 ml soku pomidorowego i 20 g agaru do filtratu w zlewce i dodać ddH2O do 1 000 ml.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie materiałów doświadczalnych
	<ol>
		<li>Namocz około 50 nasion ryżu (Oryza sativa) odmiany Lijiangxintuan-heigu (LTH) w ddH2O przez 3 dni lub namocz około 50 nasion jęczmienia (Hordeum vulgare cv Golden Promise) w ddH2O przez około 1 d.</li>
		<li>Zawinąć nasiona ryżu lub jęczmienia w wilgotną gazę i wykiełkować je na wilgotnej bibule filtracyjnej na około 30 szalkach Petriego o średnicy 10 cm x 10 cm w temperaturze 28 °C. Czas kiełkowania nasion ryżu wynosi około 2 - 3 dni, czas kiełkowania nasion jęczmienia wynosi około 2 dni. Wilgotność względna w szklarni wynosi około 70%.</li>
		<li>Posadź sadzonki ryżu lub jęczmienia w doniczkach, używając autoklawowanej ziemi doniczkowej i podlewania, a następnie przykryj je warstwą wermikulitu.</li>
		<li>Umieść rośliny w odpowiedniej szklarni lub komorze wzrostowej w temperaturze 25 °C na około 1 ~ 2 tygodnie.</li>
		<li>Wytnij 3 warstwy bibuły filtracyjnej w kółkach sterylnymi nożyczkami chirurgicznymi (każde kółko powinno mieć średnicę 8 cm) i umieść je na sterylnych plastikowych płytkach o średnicy 100 mm.</li>
		<li>Dodaj ddH2O do każdego naczynia, aby namoczyć bibułę filtracyjną.</li>
		<li>Upewnij się, że bibuła filtracyjna jest całkowicie mokra, ale nie dodawaj dodatkowej wody.</li>
		<li>Usuń nadmiar wody za pomocą pompy próżniowej.</li>
		<li>Umieść 2 sterylne wykałaczki w naczyniu hodowlanym, aby podeprzeć liście ryżu/jęczmienia; rozmieść wykałaczki w odległości ~2 - 3 cm od siebie.</li>
		<li>Liście ryżu należy zebrać 2 tygodnie po wysianiu nasion lub pobrać liście jęczmienia 7 dni po wysianiu nasion.</li>
		<li>Używając 4- do 6-listnych sadzonek ryżu/jęczmienia, odetnij dolną część łodygi w odległości ~5 cm od góry i zbierz liście.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Protokół inokulacji w sprayu
	<ol>
		<li>Hodowla szczepu grzyba na płytkach OTA w inkubatorze termostatycznym (25 °C) przez ~4 dni.</li>
		<li>Dodaj ~2 ml ddH2O za pomocą pipety 0,5 - 5 ml do każdej 4-dniowej płytki.</li>
		<li>Za pomocą pętli inokulacyjnej zeskrob grzybnię szczepu M. grisea typu dzikiego i zmutowany szczep do szczątków grzybni.</li>
		<li>Zbierz resztki grzybni i przenieś je na nową płytkę tubą optyczną. Weź resztki grzybni i wysusz je suszarką na czystej ławce.</li>
		<li>Przykryj płytkę 3 warstwami gazy, aby zapewnić wilgotność wymaganą do wzrostu konidiów w szklarni w temperaturze 25 °C w dzień (14 h) i 23 °C w nocy (10 h) przez 24 - 48 h.</li>
		<li>Dodaj 2 ml ddH2O do każdego naczynia i delikatnie zeskrob konidia sterylnymi bawełnianymi wacikami, a następnie przefiltruj przez 2 warstwy bibuły do soczewek. Uważaj, aby nie zarysować powierzchni pożywki hodowlanej.</li>
		<li>Przenieść zawiesinę konidiów do nowej probówki o pojemności 50 ml za pomocą pipety o pojemności 100 - 1 000 μl.</li>
		<li>Wirować przez 5 minut przy minimalnej sprężystości 5 000 x g w temperaturze 25 °C.</li>
		<li>Usunąć supernatant i ponownie zawiesić osad, aby uzyskać 2 x 104 konidiów na ml w 0,025% (v/v) roztworze Tween-20. Roztwór Tween-20 ma zwykle około 10 - 20 ml.</li>
		<li>Wlej zawiesinę zarodników do ręcznego opryskiwacza.</li>
		<li>Spryskać około 10 ml zawiesiny konidialnej na liście ryżowe 2-tygodniowych siewek ryżu lub liście jęczmienia 7-dniowych sadzonek jęczmienia i inkubować je w temperaturze 25 °C w ciemnej, wilgotnej komorze przez ~24 godziny. Spryskać rośliny kontrolne 0,025% (v/v) roztworem Tween-20.</li>
		<li>Przenieść liście do innej wilgotnej komory pod wpływem światła fluorescencyjnego w temperaturze 25 °C przez 12 godzin fotoperiodu.</li>
		<li>Objawy choroby należy zapisać po 5 dniach od inokulacji. Zbadaj chore źdźbła ryżu/jęczmienia o długości ~6 cm. Standard oceny jest zgodny z systemem punktacji za odporność na wybuchy Międzynarodowego Instytutu Badań nad Ryżem (IRRI). Szczegółowe informacje na temat systemu punktacji w zakresie odporności na wybuch przedstawiono w tabeli 1.</li>
		<li>Sfotografuj liście, aby ocenić infekcję badanych szczepów. Zakażenie oceniano na podstawie liczby zmian na 3,6cm2.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Ranienie Inokulacja kostkami grzybni lub kropelkami konidialnej zawiesiny M. grisea
<ol>
	<li>Za pomocą anatomicznej igły zeskrob trzy rany o długości 2-3 cm w głównych żyłach oderwanych liści ryżu/jęczmienia; uważając, aby nie przebić liści.</li>
	<li>Połóż zeskrobane liście na wykałaczkach i spryskaj liście 0,02% (v/v) roztworem Tween-20 na liście, aby utworzyć warstwę kropelek.</li>
	<li>Wytnij korek grzybni o wymiarach 0,5 cm x 0,5 cm dla każdego szczepu M. grisea (szczepy typu dzikiego, zmutowanego, dopełniacza lub innych szczepów testowych) z płytki OTA.</li>
	<li>Umieścić korki grzybniowe lub 25 μl kropelek zawiesiny konidialnej na zranionych liściach i inkubować liście w temperaturze 25 °C w wilgotnej komorze przez 3 - 8 dni.</li>
	<li>Zbadaj zmiany w 5 - 7 dniu po inokulacji. Metoda badania jest taka sama, jak w przypadku metody inokulacji w aerozolu (patrz krok 1.3.13).</li>
	<li>Zbadaj chore źdźbła ryżu/jęczmienia o długości ~6 cm i sfotografuj je, aby ocenić infekcję badanych szczepów. Zakażenie oceniano na podstawie liczby zmian na 3,6cm2.</li>
</ol>

<ol><li>Li, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+natural+allele+of+a+transcription+factor+in+rice+confers+broad-spectrum+blast+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A natural allele of a transcription factor in rice confers broad-spectrum blast resistance.</a> Cell. 170 (1), 114-126 (2017).</li>
<li>Chi, M. H., Park, S. Y., Kim, S., Lee, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+pathogenicity+gene+is+required+in+the+rice+blast+fungus+to+suppress+the+basal+defenses+of+the+host%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">A novel pathogenicity gene is required in the rice blast fungus to suppress the basal defenses of the host.</a> PLoS Pathogens. 5 (4), 1000401(2009).</li>
<li>Jia, Y., Valent, B., Lee, F. N. <a target="_blank" href="https://apsjournals.apsnet.org/doi/10.1094/PDIS.2003.87.2.129">Determination of host responses to Magnaporthe grisea.on detached rice leaves using a spot inoculation method.</a> Plant Disease. 87 (2), 129-133 (2003).</li>
<li>Ebbole, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnaporthe+as+a+model+for+understanding+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Magnaporthe as a model for understanding host-pathogen interactions.</a> Annual Review of Phytopathology. 45, 437-456 (2007).</li>
<li>Hamer, J. E., Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection-related+development+in+the+rice+blast+fungus+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Infection-related development in the rice blast fungus Magnaporthe grisea.</a> Current Opinion in Microbiology. 1 (6), 693-697 (1998).</li>
<li>Howard, R. J., Valent, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+and+entering%3A+host+penetration+by+the+fungal+rice+blast+pathogen+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Breaking and entering: host penetration by the fungal rice blast pathogen Magnaporthe grisea.</a> Annual Review of Microbiology. 50, 491-512 (1996).</li>
<li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Glycosylation+of+Effector+Proteins+by+an+%CE%B1-1%2C3-+Mannosyltransferase+Is+Required+for+the+Rice+Blast+Fungus+to+Evade+Host+Innate+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">N-Glycosylation of Effector Proteins by an α-1,3- Mannosyltransferase Is Required for the Rice Blast Fungus to Evade Host Innate Immunity.</a> The Plant Cell. 26 (3), 1360-1376 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M.ARG1%2C+MoARG5%2C6+and+MoARG7+involved+in+arginine+biosynthesis+are+essential+for+growth%2C+conidiogenesis%2C+sexual+reproduction%2C+and+pathogenicity+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiological+Research%22%5BJournal%5D)">M.ARG1, MoARG5,6 and MoARG7 involved in arginine biosynthesis are essential for growth, conidiogenesis, sexual reproduction, and pathogenicity in Magnaporthe oryzae.</a> Microbiological Research. 180, 11-22 (2015).</li>
<li>Du, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+serine%2Fthreonine-protein+phosphatase+PP2A+catalytic+subunit+is+essential+for+asexual+development+and+plant+infection+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Genetics%22%5BJournal%5D)">A serine/threonine-protein phosphatase PP2A catalytic subunit is essential for asexual development and plant infection in Magnaporthe oryzae.</a> Current Genetics. 59 (1-2), 33-41 (2013).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+protein+com1+is+required+for+normal+conidium+morphology+and+full+virulence+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%22%5BJournal%5D)">A novel protein com1 is required for normal conidium morphology and full virulence in Magnaporthe oryzae.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 23 (1), 112-123 (2010).</li>
<li>Cao, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ash1-like+protein+MoKMT2H+null+mutant+is+delayed+for+conidium+germination+and+pathogenesis+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">An ash1-like protein MoKMT2H null mutant is delayed for conidium germination and pathogenesis in Magnaporthe oryzae.</a> BioMed Research International. 2016, 1575430(2016).</li>
<li>Bryan, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+difference+distinguishes+resistant+and+susceptible+alleles+of+the+rice+blast+resistance+gene+Pi-ta%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">A single amino acid difference distinguishes resistant and susceptible alleles of the rice blast resistance gene Pi-ta.</a> The Plant Cell. 12 (11), 2033-2045 (2000).</li>
<li>Zhou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+pathology%3A+a+life+and+death+struggle+in+rice+blast+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Plant pathology: a life and death struggle in rice blast disease.</a> Current Biology. 26 (18), 843-845 (2016).</li>
<li>Guo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MoGrr1%2C+a+novel+F-box+protein%2C+is+involved+in+conidiogenesis+and+cell+wall+integrity+and+is+critical+for+the+full+virulence+of+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">MoGrr1, a novel F-box protein, is involved in conidiogenesis and cell wall integrity and is critical for the full virulence of Magnaporthe oryzae.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 99 (19), 8075-8088 (2015).</li>
<li>Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+trail+of+a+cereal+killer%3A+Exploring+the+biology+of+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">On the trail of a cereal killer: Exploring the biology of Magnaporthe grisea.</a> Annual Review of Microbiology. 57, 177-202 (2009).</li>
<li>Wilson, R. A., Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Under+pressure%3A+investigating+the+biology+of+plant+infection+by+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Under pressure: investigating the biology of plant infection by Magnaporthe oryzae.</a> Nature Reviews Microbiology. 7, 185-195 (2009).</li>
<li>Jia, Y. L., Lee, F. N., McClung, A. <a target="_blank" href="https://apsjournals.apsnet.org/doi/10.1094/PDIS-93-6-0639">Determination of Resistance Spectra of the Pi-ta and Pi-k Genes to U.S. Races of Magnaporthe oryzae Causing Rice Blast in a Recombinant Inbred Line Population.</a> Plant Disease. 93, 639-644 (2009).</li>
<li>Peng, Y. L., Shishiyama, J. <a target="_blank" href="http://www.nrcresearchpress.com/doi/abs/10.1139/b88-107?journalCode=cjb1#.WvnHgogvzIU">Temporal sequence of cytological events in rice leaves infected with Pyricularia oryzae.</a> Canadian Journal of Botany. 66 (4), 730-735 (1988).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Geny odporności roślin na choroby odgrywają zasadniczą rolę w zapobieganiu zakażeniom patogenami, w tym patogenami grzybiczymi 1,12. Podmuch ryżu został wykorzystany jako model do zrozumienia natury struktur populacji patogenów i identyfikacji genów odporności roślin4. Dlatego konieczne jest zbadanie na dużą skalę genotypu odporności na choroby i genotypów wirulencji głównych odmian roślin rolniczych w celu zidentyfikowania roślin odpornyc...

Podmuch ryżu, wywołany przez M. grisea, jest jedną z najpoważniejszych chorób odmian ryżu na świecie1,2. Proces, w którym M. grisea infekuje rośliny żywicielskie, obejmuje produkcję konidiów i przyczepianie się do powierzchni, kiełkowanie konidiów i tworzenie appressorium, tworzenie kołka penetracyjnego i różnicowanie strzępek zakaźnych oraz rozprzestrzenianie się choroby3. Wszystkie te etapy są powszechne w wielu innych grzybach chorobotwórczych dla roślin i rzeczywiście, blokada dowolnego pojedynczego etapu zapobiega infekcji roślin żywicielskich. Ze względu na swoje znaczenie gospodarcze i wykonalność genetyczną, M. grisea stał się organizmem modelowym do badania mechanizmów interakcji patogenów roślinnych i grzybowych1,4. W związku z tym badanie molekularnych podstaw tych etapów rozwojowych u M. grisea pomoże wyjaśnić mechanizmy molekularne leżące u podstaw patogeniczności grzybów oraz zidentyfikować potencjalne geny docelowe do badań przesiewowych i projektowania nowych fungicydów5.
Ostatnie raporty dotyczące infekcji M. grisea skupiały się na molekularnych mechanizmach etapów poprzedzających penetrację, zwłaszcza na konidycji, tworzeniu się appressorium, kołkach penetracyjnych i wzroście zakaźnym3,6. Dlatego konieczne jest opracowanie szczegółowego protokołu testowania zakażenia M. grisea. W niniejszym artykule przedstawiamy szczegółową metodę testu infekcji, która wykorzystuje testy infekcji za pośrednictwem sprayu z zawiesiną konidialną i inokulacją ran czopami grzybni M. grisea. W tym raporcie protokół koncentruje się na hodowli szczepów, przygotowaniu roztworu do konidyacji do opryskiwania oraz inokulacji roślin M. grisea za pośrednictwem czopów grzybniowych. Kroki te zostały szczegółowo opisane poniżej, a schematyczny widok przedstawiający cały przebieg metody i typową zmianę przedstawiono odpowiednio na rysunkach 1 i 2.

<table><tbody><tr><td>Bibuła filtracyjna</td><td>marki GE Healthcare (Szwecja)&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td>10311387</tr><tr><td>Probówka 50 ml</td><td>CORNING(Amercia)</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka</td><td>Eppendorf(Amercia)</td><td>5804R</td><td></td></tr><tr><td>Naczynie hodowlane</td><td>Thermofisher(Amercia)</td><td>150326</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta 0,5-5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp; </td><td></td>4920000105</tr><tr><td>Pipeta 100-1000uL</td><td>Eppendorf</td><td>4920000083</td><td></td></tr><tr><td>Pompa próżniowa</td><td>Leybold</td><td>D25B</td><td></td></tr><tr><td>Igła preparcyjna</td><td>FST</td><td>26000-35</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>MEMMERT</td><td>PYX313</td><td></td></tr><tr><td>Pierścień do zaszczepiania</td><td>Greiner Bio One</td><td>731175</td><td></td></tr></tbody></table>

test infekcji roślin: inokulacja w sprayu i za pośrednictwem ran patogenem roślinnym magnaporthe grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Rośliny posiadają potężny system obrony przed potencjalnymi zagrożeniami ze strony chorobotwórczych grzybów. Jednak w przypadku roślin ważnych z rolniczego punktu widzenia obecne środki zwalczania takich patogenów okazały się zbyt konserwatywne, a tym samym niewystarczająco skuteczne, a ponadto mogą potencjalnie stanowić zagrożenie dla środowiska. Dlatego niezwykle konieczne jest zidentyfikowanie czynników odporności gospodarza, aby pomóc w naturalnym zwalczaniu chorób roślin poprzez identyfikację opornej plazmy zarodkowej, izolację i charakterystykę genów odporności oraz hodowlę molekularną odpornych odmian. W związku z tym istnieje potrzeba ustanowienia dokładnej, szybkiej i zakrojonej na szeroką skalę metody inokulacji w celu rozmnażania i rozwijania genów odporności roślin. Patogen grzybowy zatruwki ryżu Magnaporthe grisea powoduje poważne objawy chorobowe i straty w plonach. Ostatnio M. grisea pojawił się jako organizm modelowy do badania mechanizmów interakcji patogenów roślinnych i grzybowych. W związku z tym informujemy o opracowaniu metody badania wirulencji roślin, która jest specyficzna dla M. grisea. Metoda ta przewiduje zarówno inokulację w sprayu zawiesiną konidialną, jak i inokulację raniącą kostkami grzybni lub kropelkami zawiesiny konidialnej. Kluczowym etapem metody inokulacji zranień dla oderwanych liści ryżu jest wykonanie ran na liściach roślin, co pozwala uniknąć wszelkich zakłóceń spowodowanych odpornością na penetrację żywiciela. Ten protokół rozpylania/ranienia przyczynia się do szybkiego, dokładnego i zakrojonego na szeroką skalę badania przesiewowego patotypów izolatów M. grisea. Ta zintegrowana i systematyczna metoda infekcji roślin będzie doskonałym punktem wyjścia do uzyskania szerokiej perspektywy zagadnień z zakresu patologii roślin.

Cały schemat postępowania dla tej techniki przedstawiono na Rysunku 1. Testy infekcji roślin przeprowadzono na 14-dniowych podatnych siewkach ryżu (O. sativa cv CO-39) lub podatnych 7-dniowych liściach jęczmienia (H. vulgare cv Golden Promise)7,8,9. Aby przetestować infekcję liści ryżu, przygotowano zawiesinę konidiów (1,0 x 105 zarodnikó...

Tutaj prezentujemy protokół do testowania zjadliwości roślin z patogenem roślinnym Magnaporthe grisea. Raport ten przyczyni się do zakrojonych na szeroką skalę badań przesiewowych patotypów izolatów grzybów i posłuży jako doskonały punkt wyjścia do zrozumienia mechanizmów oporności roślin podczas hodowli molekularnej.

Test infekcji roślin: inokulacja w sprayu i za pośrednictwem ran patogenem roślinnym Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Ten film może pomóc w instruktażu kluczowych metod w dziedzinie infekcji roślin, takich jak wolna i pożądana inokulacja patogenem roślinnym Magnaporthe grisea. Główną zaletą tej techniki jest to, że protokół opryskiwania i ranienia przyczynia się do szybkiego, dokładnego i zakrojonego na szeroką skalę badania przesiewowego patotypów izolatów grzybów. Implikacje tej techniki odnoszą się do badania fizjologii w celu zwalczania patogenów roślin, ponieważ jest ona bardzo ważna w zapobieganiu i kontroli chorób roślin na dużą skalę.Metoda ta może dostarczyć informacji na temat mechanizmu patogenezy konserwującej u grzybów. Może być również stosowany do głównych odmian roślin rolniczych, takich jak ryż czy jęczmień. Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które są nowe w tej metodzie, będą miały trudności, ponieważ trudno jest delikatnie zeskrobać konidia sterylnymi wacikami.Demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ zbieranie ran skrobanych bez penetracji liści jako głównego sposobu usuwania oderwanych liści ryżu lub jęczmienia jest trudne. Na początek odważ od 30 do 50 gramów płatków owsianych. Dodaj płatki owsiane do 800 mililitrów destylowanej wody dejonizowanej i gotuj mieszaninę p

the-plant-infection-test-spray-wound-mediated-inoculation-with-plant

Research

JoVE Journal

Environment

Środowisko

Opisano test oparty na śmierci komórek w celu badania PTI u roślin Nicotiana benthamiana.

Analiza odporności wywołanej przez wzorce molekularne związane z patogenami (PTI) u roślin

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

Ten film demonstruje technikę wykrywania infekcji chorobotwórczego grzyba Magnaporthe grisea w liściach roślin ryżu. Zawiesinę konidiów grzybowych rozpyla się na odcinki liści ryżu, a postęp choroby ocenia się poprzez ocenę powstawania zmian martwiczych.

Technika inokulacji w sprayu w celu wywołania infekcji grzybiczej w liściach roślin ryżu

Ten film pokazuje zapoczątkowanie infekcji liści ryżu poprzez zranienie szczepionki grzybnią Magnaporthe grisea. Rurka zarodkowa pochodząca z zarodników grzybów przenika do warstwy naskórka, powodując infekcję tkanek i zmiany na liściach. Metoda ta wspomaga badania przesiewowe patotypów i poprawia zrozumienie odporności roślin na hodowlę molekularną.

Ustalenie infekcji liści ryżu poprzez inokulację grzybów poprzez zranienie

Ten protokół demonstruje dwie metody inokulacji w celu wprowadzenia entomopatogenu grzyba Beauveria bassiana jako endofitu do fasoli zwyczajnej (Phaseolus vulgaris), w ramach przygotowań do kolejnych ocen endofitycznej kontroli biologicznej.

Ustanawianie entomopatogenów grzybów jako endofitów: w kierunku endofitycznej kontroli biologicznej

Opisano użycie metody iniekcji igłą do inokulacji roślin kukurydzy i teosinte biotroficznym patogenem Ustilago maydis.  Metoda inokulacji igłowej ułatwia kontrolowane dostarczanie patogenu grzybowego między liście rośliny, gdzie patogen dostaje się do rośliny poprzez tworzenie appresorii. Metoda ta jest bardzo skuteczna, umożliwiając powtarzalne inokulacje U. maydis.

Szybka i skuteczna metoda oceny patogenności Ustilago maydis na liniach kukurydzy i teosinte

Kwantyfikacja wzrostu patogenów jest potężnym narzędziem do charakteryzowania różnych odpowiedzi immunologicznych Arabidopsis thaliana (dalej: Arabidopsis). Opisana tutaj metoda przedstawia zoptymalizowany test infiltracji strzykawki w celu ilościowego określenia Pseudomonas syringae pv. Maculicola powiedział: Wzrost ES4326 w dorosłych liściach Arabidopsis.

Test infiltracji bakteryjnych liści w celu dokładnej charakterystyki reakcji obronnych roślin przy użyciu patosystemu Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae

Przedstawiamy protokół budowy prostego systemu dystrybucji zarodników, składającego się z pudełka do zaszczepiania z siatką ~50 μm i przezroczystej komory z tworzywa sztucznego. Można to wykorzystać do równomiernego zaszczepienia roślin zarodnikami mączniaka prawdziwego, umożliwiając w ten sposób dokładną i odtwarzalną ocenę fenotypów chorobowych badanych roślin.

Łatwa i elastyczna metoda inokulacji do dokładnej oceny fenotypów infekcji mączniakiem prawdziwym Arabidopsis i innych roślin

Tutaj prezentujemy protokół oparty na systemie przynęty na mącznika mącznika (Tenebrio molitor), który był używany do izolowania i selekcji grzybów entomopatogenicznych (EPF) z próbek gleby. Skuteczna formuła liczby konidiów (ECN) jest stosowana do wyboru EPF o wysokiej tolerancji na stres w oparciu o cechy fizjologiczne do zwalczania mikrobiologicznego szkodników na polu.

Izolacja i selekcja grzybów entomopatogenicznych z próbek glebowych oraz ocena zjadliwości grzybów wobec szkodników owadzich

Nakłuwanie podstawowej główki rośliny czarnego pieprzu to krótka i oszczędzająca czas metoda jej uszkodzenia. Tutaj przedstawiliśmy szczegółowe instrukcje wraz z filmem dotyczącym infekowania roślin czarnego pieprzu.

Skuteczna metoda inokulacji Phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu

Ten protokół przedstawia szczegółowe podsumowanie strategii inokulacji korzeni roślin mikrobami przenoszonymi przez glebę. Na przykładzie grzybów Verticillium longisporum i Verticillium dahliae opisano trzy różne systemy infekcji korzeni. Przedstawiono potencjalne zastosowania i możliwe dalsze analizy, a także omówiono zalety i wady każdego systemu.

Strategie inokulacji w celu infekowania korzeni roślin mikroorganizmami przenoszonymi przez glebę

Poznaj metodę inokulacji roślin patogenem Magnaporthe grisea w celu szybkiego i wielkoskalowego badania patotypów grzybów. Technika ta umożliwia badanie mechanizmów odporności roślin.

Test infekcji roślin: inokulacja w sprayu i za pośrednictwem ran patogenem roślinnym Magnaporthe Grisea

Przeglądaj więcej filmów