Spektrometria mas oprysków liściowych: technika szybkiej jonizacji otoczenia do bezpośredniej oceny metabolitów z tkanek roślinnych

Oprysk do liści MS to szybka metoda analizy jakościowej i półilościowej nienaruszonych tkanek roślinnych, która ma szeroki zakres zastosowań. Główną zaletą tej techniki jest to, że tkanka roślinna może być analizowana bezpośrednio, praktycznie bez przygotowania próbki. Chociaż metoda ta zapewnia dobry wgląd w alkaloidy mesembryny ze Sceletium, może być również stosowana do analizy różnych innych gatunków roślin i egzogennych substancji chemicznych, takich jak pestycydy.

Osoby, które są nowicjuszami w tej metodzie, mogą uznać ją za wyzwanie, ponieważ konieczna jest optymalizacja protokołu dla każdego gatunku rośliny, rodzaju tkanki i związku będącego przedmiotem zainteresowania. Użyj zmodyfikowanego źródła nano sprayu do opryskiwania liści, MS.As do opryskiwania liści nie są potrzebne żadne składniki płynne do opryskiwania liści, zmodyfikuj źródło, usuwając sondę chromatografii cieczowej ze źródła. Drut do spektrometrii mas w sprayu do liści, który będzie przykładał napięcie do tkanki roślinnej, ma kołek, który został przylutowany do drutu na jednym końcu i zacisk, który został przylutowany na drugim końcu.

Jeśli system był ostatnio używany, pozwól mu ostygnąć w dotyku przed usunięciem jakiegokolwiek alternatywnego źródła w stożku zamiatania. Następnie podłącz nano spray do liści MS Source. Na koniec utwórz plik strojenia i plik metody zgodnie z opisem w protokole tekstowym.

Zawsze noś rękawiczki i nie używaj tkanek roślinnych, z którymi obchodziło się gołymi rękami. W przeciwnym razie jony zanieczyszczające, takie jak glikol polietylenowy, zdominują widma. Przenieść tkanki roślinne do analizy do tego samego pomieszczenia, w którym znajduje się system spektrometrii mas, aby umożliwić szybkie pobranie próbek.

W przypadku tkanki roślinnej, która nie ma naturalnie spiczastej końcówki, użyj żyletki na szklanym szkiełku, aby wyciąć zwężający się punkt. Pokrój liście Sceletium tortuosum po 10 tygodniach od wykiełkowania w cienkie paski, każdy ze zwężającym się końcem, aby utworzyć punkt. Użyj kleszczy, aby delikatnie wybrać tkankę roślinną na końcu, która zostanie zaciśnięta.

Trzymając tkankę kleszczami, ostrożnie przenieś ją do zacisku. Wyreguluj elastyczne ramię i drut z zaciskiem, aby ustawić tkankę w jednej linii z wlotem MS. Zapoznaj się z tekstem, aby uzyskać optymalną odległość od wlotu jonów dla każdego konkretnego spektrometru masowego.

Jeśli pierwsze próby wytworzą niską intensywność sygnału, tkanka roślinna może zostać przesunięta bliżej wlotu jonów. Załaduj plik metody. Nazwij plik danych i ustaw lokalizację przechowywania plików.

Następnie włącz system MS, klikając play i kliknij start, aby rozpocząć pobieranie danych. Nałóż rozpuszczalnik za pomocą pipety z końcówką do ładowania żelu, aby zmaksymalizować odległość między wysokim napięciem a rękami użytkownika w celu ochrony. Zbieraj dane tak długo, jak długo sygnał utrzymuje się lub do momentu zebrania odpowiednich widm, zwykle od 30 do 60 sekund.

Zatrzymaj pobieranie danych i wstrzymaj system MS. Po pobraniu usuń chusteczkę i umyj zacisk 100% metanolem w niestrzępiącej się chusteczce. Otwórz plik danych i sprawdź wzrokowo chronogram podstawowej masy szczytowej.

Sprawdź, czy intensywność sygnału wynosi około 10 milionów do 500 milionów. Utwórz nowy plik metody z listą dołączeń od M do Z z dokładnością do czterech miejsc po przecinku. Kliknij na listy globalne i włączenie.

W obszarze Właściwości PRM wybierz energię fragmentacji i inne parametry MS tandemu. Aby uzyskać tandemowe dane MS dla alkaloidów mesembrynowych, należy rozdrobnić jony na 276,1583 M nad Z, 290,1742 M nad Z i 292,1897 M nad Z przy znormalizowanej energii zderzenia wynoszącej 35. Następnie załaduj plik metody tandem MS i nazwany plik danych.

Włącz system MS i rozpocznij pobieranie danych, dodając w razie potrzeby rozpuszczalnik. Po zebraniu odpowiednich widm, zwykle po 30 do 60 sekundach, należy przerwać akwizycję. Wykonaj analizę danych zgodnie z opisem w protokole tekstowym.

Reprezentatywne wyniki profilowania metabolicznego Sceletium tortuosum za pomocą oprysku dolistnego MS i jonizacji dodatniej przedstawiono z wkładką wyświetlającą od 260 do 295 M Z.In tym badaniu wykryto łącznie dziewięć alkaloidów mesembryny za pomocą oprysku z liści MS i dokonano identyfikacji pudytywnej. Chronogram masy całkowitej liczby jonów w sprayu MS w sprayu do liści reprezentuje udany eksperyment MS z opryskiem do liści, w którym stabilny sygnał był utrzymywany przez cały czas akwizycji. Dla każdego piku górna liczba to czas w minutach, a dolna to M over Z.Widma masowe tandemu zebrano w jonizacji dodatniej wykonanej z liścia ciętego Sceletium tortuosum za pomocą sprayu do liści MS. Pudytywna identyfikacja alkaloidów została dokonana na podstawie dokładnej frakcji masy i rozdrobnienia masy dla izomerów mesembryny M i mesembrenonu M, mesembryny i mesembryny M dihydro.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak używać sprayu do liści MS do wykrywania metabolitów roślinnych. Spray do liści MS był stosowany do wykrywania związków endogennych, a także związków egzogennych, takich jak pestycydy.