In vitro Różnicowanie mysich komórek T Helper (THGM) wytwarzających czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów makrofagów (GM-CSF)

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie limfocytów T CD4, takie jak to, który podzbiór komórek pomocniczych T jest głównym źródłem GM-CSF w patogenezie chorób zapalnych, takich jak stwardnienie rozsiane. Główną zaletą tej techniki jest to, że generuje ona ponad 50% komórek T z ekspresją GM-CSF z naiwnych limfocytów T CD4 bez lub z kilkoma interferującymi komórkami ekspresyjnymi gamma OI17, które stanowią niezbędne źródło komórkowe do badania regresji i funkcji THGM, nowego podzbioru komórek pomocniczych T. Procedurę zademonstruje Yi Lu, doktorant z mojego laboratorium.

Zacznij od użycia kleszczy, aby unieść skórę nad brzuchem myszy w wieku od sześciu do ośmiu tygodni i wykonać około czterocentymetrowe nacięcie poniżej klatki piersiowej po lewej stronie zwierzęcia. Otwórz worek otrzewnowy, aby odsłonić śledzionę i użyj sterylnych kleszczy, aby przenieść śledzionę na sitko o średnicy 70 mikrometrów, wstępnie zwilżone dwoma mililitrami buforu do izolacji komórek. Po pobraniu dwóch do trzech śledzion, użyj końcówki pięciomililitrowej strzykawki do maceracji tkanki śledziony i przepłucz sitko kilka razy jednym do dwóch mililitrów buforu do izolacji komórek, aż wszystkie komórki zostaną przepłukane do probówki.