Name: Multipleksowe monitorowanie leków terapeutycznych za pomocą rozcieńczania izotopów HPLC-MS/MS antybiotyków w chorobach krytycznych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Poznaj metodę HPLC-MS/MS z rozcieńczeniem izotopów do monitorowania stężeń antybiotyków w surowicy pacjentów w stanie krytycznym. Protokół umożliwia precyzyjne dostosowanie dawkowania do wrażliwości patogenów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy dziękują Dr. Schütze za pomoc w ustaleniu prezentowanej metody oraz Dr. Zollerowi za cenny wkład dotyczący prawidłowego zakresu kalibracji. Autorzy dziękują również personelowi technicznemu zakładu spektrometrii mas.

<ol><li>Fleischmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Global+Incidence+and+Mortality+of+Hospital-treated+Sepsis.+Current+Estimates+and+Limitations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).</li>
<li>Dellinger, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surviving+Sepsis+Campaign%3A+international+guidelines+for+management+of+severe+sepsis+and+septic+shock%2C+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Surviving Sepsis Campaign: international guidelines for management of severe sepsis and septic shock, 2012.</a> Intensive Care Medicine. 39 (2), 165-228 (2013).</li>
<li>Lodise, T. P., Drusano, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics%3A+optimal+antimicrobial+therapy+in+the+intensive+care+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Clinics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics: optimal antimicrobial therapy in the intensive care unit.</a> Critical Care Clinics. 27 (1), 1-18 (2011).</li>
<li>Macedo, R. S., Onita, J. H., Wille, M. P., Furtado, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+antimicrobial+drugs+in+intensive+care+unit+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of antimicrobial drugs in intensive care unit patients.</a> Shock. 39, Suppl 1. 24-28 (2013).</li>
<li>Petersson, J., Giske, C. G., Eliasson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+dosing+of+piperacillin+and+meropenem+fail+to+achieve+adequate+plasma+concentrations+in+ICU+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anaesthesiologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Standard dosing of piperacillin and meropenem fail to achieve adequate plasma concentrations in ICU patients.</a> Acta Anaesthesiologica Scandinavica. 60 (10), 1425-1436 (2016).</li>
<li>Abdul-Aziz, M. H., Lipman, J., Mouton, J. W., Hope, W. W., Roberts, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+pharmacokinetic%2Fpharmacodynamic+principles+in+critically+ill+patients%3A+optimizing+efficacy+and+reducing+resistance+development%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Applying pharmacokinetic/pharmacodynamic principles in critically ill patients: optimizing efficacy and reducing resistance development.</a> Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 36 (1), 136-153 (2015).</li>
<li>Imani, S., Buscher, H., Marriott, D., Gentili, S., Sandaradura, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Too+much+of+a+good+thing%3A+a+retrospective+study+of+beta-lactam+concentration-toxicity+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Too much of a good thing: a retrospective study of beta-lactam concentration-toxicity relationships.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 72 (10), 2891-2897 (2017).</li>
<li>Ventola, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antibiotic+resistance+crisis%3A+part+1%3A+causes+and+threats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacy+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats.</a> Pharmacy & Therapeutics. 40 (4), 277-283 (2015).</li>
<li>World Health Organization. Global Action Plan on Antimicrobial Resistance. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/antimicrobial-resistance/global-action-plan/en">http://www.who.int/antimicrobial-resistance/global-action-plan/en</a> (2015).</li>
<li>Pulcini, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+stewardship%3A+update+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Antibiotic stewardship: update and perspectives.</a> Clinical Microbiology and Infection. 23 (11), 791-792 (2017).</li>
<li>Cairns, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+a+multidisciplinary+antimicrobial+stewardship+team+on+the+timeliness+of+antimicrobial+therapy+in+patients+with+positive+blood+cultures%3A+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">The impact of a multidisciplinary antimicrobial stewardship team on the timeliness of antimicrobial therapy in patients with positive blood cultures: a randomized controlled trial.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (11), 3276-3283 (2016).</li>
<li>Baur, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+antibiotic+stewardship+on+the+incidence+of+infection+and+colonisation+with+antibiotic-resistant+bacteria+and+Clostridium+difficile+infection%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of antibiotic stewardship on the incidence of infection and colonisation with antibiotic-resistant bacteria and Clostridium difficile infection: a systematic review and meta-analysis.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (9), 990-1001 (2017).</li>
<li>Roberts, J. A., Norris, R., Paterson, D. L., Martin, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+drug+monitoring+of+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic drug monitoring of antimicrobials.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 73 (1), 27-36 (2012).</li>
<li>Paal, M., Zoller, M., Schuster, C., Vogeser, M., Schutze, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+quantification+of+cefepime%2C+meropenem%2C+ciprofloxacin%2C+moxifloxacin%2C+linezolid+and+piperacillin+in+human+serum+using+an+isotope-dilution+HPLC-MS%2FMS+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Simultaneous quantification of cefepime, meropenem, ciprofloxacin, moxifloxacin, linezolid and piperacillin in human serum using an isotope-dilution HPLC-MS/MS method.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 152, 102-110 (2018).</li>
<li>Vogeser, M., Seger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pitfalls+associated+with+the+use+of+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+in+the+clinical+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Pitfalls associated with the use of liquid chromatography-tandem mass spectrometry in the clinical laboratory.</a> Clinical Chemistry. 56 (8), 1234-1244 (2010).</li>
<li>United States Pharmacopeia and National Formulary. Chapter <621>. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CHROMATOGRAPHY+%28USP+37-NF+32+S1%29%22">CHROMATOGRAPHY (USP 37-NF 32 S1)</a>. , United Book Press, Inc. Baltimore, MD. 6376-6385 (2014).</li>
<li>Wong, G., Sime, F. B., Lipman, J., Roberts, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+do+we+use+therapeutic+drug+monitoring+to+improve+outcomes+from+severe+infections+in+critically+ill+patients%3F%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">How do we use therapeutic drug monitoring to improve outcomes from severe infections in critically ill patients?</a> BMC Infectious Diseases. 14, 288(2014).</li>
<li>EUCAST: European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Information on clinical breakpoint tables. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.eucast.org/clinical_breakpoints/">http://www.eucast.org/clinical_breakpoints/</a> (2017).</li>
<li>Surveillance der Antibiotika-anwendung und der bakteriellen Resistenzen auf Intensivstationen. SARI information for antibiotic consumption 2016 of all intensive care units participating at SARI. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://sari.eu-burden.info/auswertung/down/AD-ZEIT.pdf">http://sari.eu-burden.info/auswertung/down/AD-ZEIT.pdf</a> (2016).</li>
<li>Cefepime hydrochloride: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/050679s040lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/050679s040lbl.pdf</a> (2016).</li>
<li>Meropenem: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2008/050706s022lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2008/050706s022lbl.pdf</a> (2006).</li>
<li>Ciprofloxacin hydrochloride: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/019537s086lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/019537s086lbl.pdf</a> (2016).</li>
<li>Moxifloxacin hydrochloride: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2010/021277s038lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2010/021277s038lbl.pdf</a> (2010).</li>
<li>Linezolid: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2012/021130s028lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2012/021130s028lbl.pdf</a> (2011).</li>
<li>Piperacillin and Tazobactam: Highlighs of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2017/050684s88s89s90_050750s37s38s39lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2017/050684s88s89s90_050750s37s38s39lbl.pdf</a> (2017).</li>
<li>Zander, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+biobanking+conditions+on+six+antibiotic+substances+in+human+serum+assessed+by+a+novel+evaluation+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry+and+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Effects of biobanking conditions on six antibiotic substances in human serum assessed by a novel evaluation protocol.</a> Clinical Chemistry and Laboratory. 54 (2), 265-274 (2016).</li>
<li>Zander, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+piperacillin%2C+tazobactam%2C+cefepime%2C+meropenem%2C+ciprofloxacin+and+linezolid+in+serum+using+an+isotope+dilution+UHPLC-MS%2FMS+method+with+semi-automated+sample+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry+and+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Quantification of piperacillin, tazobactam, cefepime, meropenem, ciprofloxacin and linezolid in serum using an isotope dilution UHPLC-MS/MS method with semi-automated sample preparation.</a> Clinical Chemistry and Laboratory. 53 (5), 781-791 (2015).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W tym manuskrypcie przedstawiamy protokół prostej i solidnej metody opartej na tandemowej spektrometrii mas do oznaczania ilościowego często stosowanych antybiotyków na OIT19, a mianowicie cefepimu, meropenemu, cyprofloksacyny, moksyfloksacyny, linezolidu i piperacyliny14. Do manuskryptu dołączony jest arkusz kalkulacyjny dotyczący przygotowania podstawowych roztworów antybiotyków, kalibratorów i kontroli jakości, biorąc pod uwagę czystość antybiotyków i masę cząsteczkową i...

Chociaż antybiotyki zrewolucjonizowały praktykę medyczną, poważne infekcje bakteryjne pozostają główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności w chorobach krytycznych1. W związku z tym niezwłoczne podanie odpowiedniego środka przeciwinfekcyjnego w odpowiedniej dawce ma ogromne znaczenie dla kontroli choroby2.
Coraz więcej dowodów pokazuje, że empiryczne leczenie antybiotykami o szerokim spektrum działania staje się coraz bardziej problematyczne ze względu na złożoność populacji pacjentów. Jest to szczególnie prawdziwe w przypadku oddziałów intensywnej terapii (OIOM), gdzie często obserwuje się ogromną międzyosobniczą zmienność kluczowych parametrów farmakokinetycznych (PK)3,4. W związku z tym pacjenci OIT są narażeni na bezpośrednie ryzyko poziomów subterapeutycznych z niebezpieczeństwem niewystarczającego sukcesu terapeutycznego5,6. Z drugiej strony, pacjenci są niepotrzebnie narażeni na zbyt wysokie stężenia antybiotyków, które mogą prowadzić do poważnych zdarzeń niepożądanych bez korzyści klinicznych7. Zarówno nadużywanie antybiotyków, jak i niewystarczające dawkowanie przyczyniły się również do rozpowszechnienia oporności na antybiotyki, która staje się coraz większym zagrożeniem dla zdrowia publicznego8.
Aby poprawić stosowanie antybiotyków i zachować ich skuteczność tak długo, jak to możliwe, Światowa Organizacja Zdrowia uruchomiła globalny plan działania na rzecz oporności na środki przeciwdrobnoustrojowe w 2015 roku9. Programy zarządzania antybiotykami stanowią zasadniczy kamień węgielny rozważnego stosowania środków przeciwdrobnoustrojowych w krajowych strategiach zdrowia publicznego10, pomagając klinicystom poprawić jakość opieki nad pacjentem11 i jednocześnie znacznie zmniejszając oporność na antybiotyki12. Dawkowanie środków przeciwdrobnoustrojowych u poszczególnych pacjentów poprzez zastosowanie terapeutycznego monitorowania leków (TDM) jest kluczowym instrumentem w tym kontekście13.
Do tej pory, dostępne na rynku testy TDM są dostępne tylko dla antybiotyków glikopeptydowych i aminoglikozydów. Kwantyfikacja substancji z innych klas zwykle wymaga opracowania lub walidacji metody we własnym zakresie, co może być uciążliwe. W związku z tym przedstawiamy szczegółowo protokół solidnego testu opartego na spektrometrii mas, który może być wykorzystany do ilościowego określenia najbardziej odpowiednich antybiotyków na OIT w ich klinicznie istotnych zakresach stężeń14. Metoda ta została niedawno opracowana w naszym ośrodku spektrometrii mas i od tego czasu jest stosowana w rutynowym TDM na OIOM-ie. Procedura wykorzystuje proste i proste ustawienia analityczne z jednolitym czyszczeniem próbki, co pozwala na szybkie wdrożenie antybiotyku TDM w wielu obiektach z możliwościami spektrometrii mas.
Opisany tutaj protokół został zoptymalizowany do oznaczania ilościowego cefepimu, meropenemu, cyprofloksacyny, moksyfloksacyny, linezolidu i piperacyliny w surowicy ludzkiej, przy użyciu chromatografii cieczowej rozcieńczającej izotopy (LC) w połączeniu z tandemową spektrometrią mas (MS/MS). W przypadku metodologii rozcieńczania izotopów LC-MS/MS stabilne związki znakowane izotopowo dodaje się do próbki będącej przedmiotem zainteresowania o określonej matrycy (np. surowicy). Wzorce znakowane izotopowo można odróżnić od ich nieznakowanego odpowiednika, a mianowicie analitu będącego przedmiotem zainteresowania, ze względu na różne masy cząsteczkowe naturalnej cząsteczki i produkty ich fragmentacji, określane jako przejście między jonami macierzystymi a potomnymi. Ponieważ związki znakowane izotopowo mają prawie identyczne ogólne zachowanie fizykochemiczne w porównaniu z ich nieznakowanym odpowiednikiem, są idealnymi wzorcami wewnętrznymi dla MS/MS, umożliwiając prawie niezależną od matrycy kwantyfikację analitu z wysokim stopniem dokładności15. Obecnie na rynku dostępnych jest wiele stabilnych wzorców wewnętrznych znakowanych izotopami, które można wykorzystać do ilościowego oznaczania małych cząsteczek, w tym TDM środków przeciwdrobnoustrojowych.
Chromatograficzna separacja analitów antybiotykowych w opisanym protokole jest wykonywana za pomocą analitycznej kolumny C8 o długości łańcucha alkilowego o odwróconej długości (100 mm x 2,1 mm, wielkość cząstek 3 μm). Podczas opracowywania metody znormalizowane współczynniki matrycowe w standardzie wewnętrznym dla wszystkich analitów wynosiły od 94,6% do 105,4%, przy współczynniku zmienności ≤8,3%14.

<table><tbody><tr><td>chlorowodorek cefepimu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1097636</td><td>Wzorzec referencyjny USP</td></tr><tr><td>trójwodzian meropenemu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y0001252</td><td>EP Wzorzec</td></tr><tr><td>referencyjny cyprofloksacyny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17850</td><td></td></tr><tr><td>chlorowodorek moksyfloksacyny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML1581</td><td></td></tr><tr><td>linezolid</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td></td><td></td>L466500</tr><tr><td>sól sodowa piperacyliny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93129</td><td></td></tr><tr><td>cefepime-13C12D3 siarczan</td><td>Alsachim</td><td>C1297</td><td>Wzorzec wewnętrzny znakowany izotopem dla cefepimu</td></tr><tr><td>meropenem-D6</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>M225617</td><td>Wzorzec wewnętrzny znakowany izotopem dla</td></tr><tr><td>cyprofloksacyny meropenemu-D8</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>C482501</td><td>Wzorzec wewnętrzny znakowany izotopem dla</td></tr><tr><td>chlorowodorku moksyfloksacyny-13C1D3</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>M745003</td><td>Wzorzec wewnętrzny znakowany izotopem dla moksyfloksacyny</td></tr><tr><td>linezolid-D3</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>L466502</td><td>Wzorzec wewnętrzny znakowany izotopem dla linezolidu</td></tr><tr><td>piperacylina-D5</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>P479952</td><td>Izotop znakowany wewnętrznie norma dla metanolu piperacyliny</td></tr><tr><td></td><td>JT Baker</td><td>8402</td><td></td></tr><tr><td>Woda klasy HPLC</td><td>JT Baker</td><td>4218</td><td></td></tr><tr><td>kwas mrówkowy</td><td>Biosolve</td><td>6914132</td><td></td></tr><tr><td>kwas octowy</td><td>Biosolve</td><td>1070501</td><td></td></tr><tr><td>mrówczan amonu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70221-25G-F</td><td></td></tr><tr><td>eter metylowy tert-butylu</td><td>Merck</td><td>101845</td><td></td></tr><tr><td>Fortis 3 & m C8 100 * 2,1 mm</td><td>Fortis</td><td>F08-020503</td><td></td></tr><tr><td>Filtr Prifilter w obudowie Ti-PEEK (2 &mu; m)</td> <td>System HPLC Chromsystems</td><td>15011</td><td></td></tr><tr><td>2795 Alliance</td><td>Waters</td><td>176000491</td><td></td></tr><tr><td>Quattro micro API Tandem Quadrupol System</td><td>Waters</td><td>720000338</td><td></td></tr><tr><td>QuanLynx 4.1</td> Oprogramowanie do oceny <td>wód</td><td>/</td><td>danych dostarczone przez producenta spektrometru</td></tr> mas <tr><td>Uzupełnienie Rozwiązania</td><td></td><td></td><td>magazynowe</td></tr></tbody></table>

multipleksowe monitorowanie leków terapeutycznych za pomocą rozcieńczania izotopów hplc-ms/ms antybiotyków w chorobach krytycznych

Multiplex Therapeutic Drug Monitoring by Isotope-dilution HPLC-MS/MS of Antibiotics in Critical Illnesses

W wielu placówkach klinicznych stale rośnie zapotrzebowanie na monitorowanie leków terapeutycznych antybiotyków, szczególnie w odniesieniu do realizacji szpitalnych programów zarządzania antybiotykami.
W obecnej pracy prezentujemy protokół multipleksowej wysokosprawnej chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas (HPCL-MS/MS) do oznaczania ilościowego cefepimu, meropenemu, cyprofloksacyny, moksyfloksacyny, linezolidu i piperacyliny, powszechnie stosowanych antybiotyków na oddziałach intensywnej terapii. Metoda została wcześniej kompleksowo zwalidowana zgodnie z wytycznymi Europejskiej Agencji Leków.
Po szybkim oczyszczeniu próbki, anality są rozdzielane na kolumnie HPLC C8 z odwróconymi fazami w ciągu 4 minut i oznaczane ilościowo za pomocą odpowiednich stabilnych wzorców wewnętrznych znakowanych izotopami w spektrometrii mas z jonizacją elektrorozpylania (ESI+) w monitorowaniu czasu wielokrotnej reakcji (MRM). Prezentowana metoda wykorzystuje proste ustawienie instrumentacji z jednolitymi warunkami chromatograficznymi, co pozwala na codzienne i solidne monitorowanie antybiotykoterapii leków w laboratoriach klinicznych. Krzywa kalibracyjna obejmuje zakres stężeń farmakokinetycznych i obejmuje w ten sposób ilości antybiotyków zbliżone do minimalnego stężenia hamującego (MIC) wrażliwych bakterii i stężeń szczytowych (Cmax), które uzyskuje się przy podawaniu w bolusie. Bez konieczności rozcieńczania surowicy przed oczyszczeniem próbki, obszar pod krzywą dla podawanego antybiotyku można uzyskać poprzez wielokrotne pomiary.

Przy zastosowaniu opisanego protokołu typowy chromatogram przedstawiono na Rysunku 2. Zgodnie z wytycznymi chromatograficznymi Farmakopei Stanów Zjednoczonych (USP)16, objętość martwa kolumny w obecnym systemie została określona na ~0,2 mL, a objętość pozakolumnowa (obejmująca injektor, rurki i złączki) na ~0,08 mL, co daje objętość retencyjną wynoszącą ~0,30 mL. Obliczone czynniki retencji dla wszystkich analitów wynosiły od 2,8 (dla ...

Tutaj prezentujemy protokół oparty na tandemowej spektrometrii mas do oznaczania ilościowego często stosowanych antybiotyków na oddziałach intensywnej terapii, a mianowicie cefepimu, meropenemu, cyprofloksacyny, moksyfloksacyny, linezolidu i piperacyliny.

Multipleksowe monitorowanie leków terapeutycznych za pomocą rozcieńczania izotopów HPLC-MS/MS antybiotyków w chorobach krytycznych

There is an ever-increasing demand for the therapeutic drug monitoring of antibiotics in many clinical facilities, particularly with regard to the ...

Monitorowanie leków terapeutycznych antybiotyków jest coraz częściej uznawane za ważny element wdrażania krajowych i lokalnych programów zarządzania antybiotykami. Aby sprostać temu rosnącemu zapotrzebowaniu na monitorowanie antybiotykoterapii leków w placówkach medycznych, przedstawiamy protokół oznaczania ilościowego antybiotyków w obiegu, który ma na celu dostosowanie dawki do podatności zaangażowanych patogenów. Przedstawiony protokół oparty na spektrometrii mas został zoptymalizowany pod kątem oznaczania ilościowego najczęściej stosowanych antybiotyków na oddziałach intensywnej terapii, a mianowicie cefepimu, meropenemu, cyprofloksacyny, moksyfloksacyny, linezolidu i piperacyliny.Ze względu na szeroki zakres kalibracji, metoda może być również stosowana do obliczania pola farmakokinetycznego pod krzywą dla podawanego antybiotyku. Przy całkowitym czasie realizacji wynoszącym około 30 minut, prezentowany protokół nadaje się do codziennego monitorowania antybiotykoterapii leków w laboratoriach klinicznych. Najpierw nabij dziewięć objętości surowicy wolnej od leków z jedną objętością wcześniej przygotowanych 10-krotnie skoncentrowanych roztworów kolców, aby uzyskać kalibratory sur

multiplex-therapeutic-drug-monitoring-isotope-dilution-hplc-msms

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Nieukierunkowana metabolomika dostarcza hipotezy generującej migawkę profilu metabolicznego.  Protokół ten zademonstruje ekstrakcję i analizę metabolitów z komórek, surowicy lub tkanki.  Szereg metabolitów jest badany za pomocą ekstrakcji ciecz-faza cieczowa, ultraprzepływowej chromatografii cieczowej/spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS) w połączeniu z oprogramowaniem do analizy różnicowej.

Nieukierunkowana metabolomika ze źródeł biologicznych przy użyciu ultrasprawnej chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS)

Tutaj opisujemy test wysokiej wydajności chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas (HPLC-MS/MS) do ilościowego oznaczania immunosupresyjnego takrolimusu w wysuszonych plamach krwi przy użyciu prostego ręcznego etapu wytrącania białka i ekstrakcji kolumnowej online.

Oznaczanie ilościowe takrolimusu działającego immunosupresyjnie na wysuszonych plamkach krwi za pomocą LC-MS/MS

Tutaj opisujemy test chromatograficzny połączony z separacją ruchliwości jonów prekursorów peptydów, po której następuje detekcja MS w wysokiej rozdzielczości (~30 000) MS dla kwantyfikacji wzorców peptydów wzbogaconych w trawieniu przeciwciał monoklonalnych.

Test HS-MRM do oznaczania ilościowego białek komórek gospodarza w biofarmaceutykach białkowych za pomocą chromatografii cieczowej Mobilność jonów Spektrometria mas QTOF

Połączone znakowanie izotopowe prekursorów i znakowanie izobaryczne (cPILOT) to ilościowa strategia proteomiczna, która zwiększa możliwości multipleksowania próbek znaczników izobarycznych. Protokół ten opisuje zastosowanie cPILOT do tkanek z mysiego modelu choroby Alzheimera i kontroli typu dzikiego.

Ulepszone multipleksowanie próbek tkanek przy użyciu połączonego znakowania izotopowego prekursorów i znakowania izobarycznego (cPILOT)

Ten protokół opisuje efektywny i wygodny proces analityczny pobierania próbek i jednoczesnego oznaczania wielu leków, doksorubicyny (DOX), mitomycyny C (MMC) i kardiotoksycznego metabolitu DOX, doksorubicyny (DOXol), w próbkach biologicznych z przedklinicznego modelu guza piersi traktowanego preparatami nanocząsteczkowymi synergicznego połączenia leków.

Ekstrakcja próbki i jednoczesna chromatograficzna ocena ilościowa doksorubicyny i mitomycyny C po dostarczeniu kombinacji leków w nanocząstkach myszom z nowotworem

Przedstawiamy protokół do dokładnego oznaczania ilościowego białek za pomocą znakowania izobarycznego, intensywnego frakcjonowania, narzędzi bioinformatycznych i etapów kontroli jakości w połączeniu z chromatografią cieczową połączoną ze spektrometrem masowym o wysokiej rozdzielczości.

Głębokie profilowanie proteomu za pomocą znakowania izobarycznego, rozległej chromatografii cieczowej, spektrometrii mas i kwantyfikacji wspomaganej programowo

Tutaj opisujemy protokół wykorzystujący mikrodysekcję laserową w połączeniu z analizą LC/MS do przestrzennego ilościowego określania dystrybucji leków w ziarniniakach gruźlicy płuc. Podejście to ma szerokie zastosowanie w ilościowym określaniu stężeń leków w tkankach przy dużej szczegółowości przestrzennej.

Kwantyfikacja przestrzenna leków w zmianach gruźlicy płuc za pomocą mikrodysekcji laserowej Chromatografia cieczowa ze spektrometrią mas (LCM-LC/MS)

Tutaj opisujemy wysokoprzepustową metodę kompleksowego nadzoru nad narkotykami, która pozwala na lepszą rozdzielczość i wykrywanie dużych paneli nadużywanych narkotyków i ich metabolitów, z kontrolą jakości opartą na wielosegmentowej elektroforezie kapilarnej i spektrometrii mas.

Wysokowydajny i kompleksowy nadzór nad lekami za pomocą wielosegmentowej elektroforezy kapilarnej i spektrometrii mas

Połączone znakowanie izotopowe prekursorów i znakowanie izobaryczne (cPILOT) to ulepszona strategia multipleksowania próbek, która jest w stanie zwiększyć liczbę próbek, które mogą być analizowane jednocześnie z dostępnymi znacznikami izobarycznymi. Zastosowanie platformy robotycznej znacznie zwiększyło przepustowość eksperymentalną, powtarzalność i dokładność ilościową.

Automatyczne multipleksowanie próbek przy użyciu połączonego znakowania izotopowego prekursorów i znakowania izobarycznego (cPILOT)

Spektroskopia magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) służy do wykrywania dysregulacji metabolitów u pacjentów z różnymi chorobami. Technika ta pozwala na ilościowe określenie zaburzonych metabolitów, odkrywając patofizjologiczne wglądy. W tym miejscu opisujemy krok po kroku procedurę podejścia opartego na NMR w celu charakterystyki metabolicznej pacjentów.

Identyfikacja i kwantyfikacja metabolitów zaburzonych u pacjentów w stanie krytycznym przy użyciu metabolomiki opartej na NMR

Poznaj metodę HPLC-MS/MS z rozcieńczeniem izotopów do monitorowania stężeń antybiotyków w surowicy pacjentów w stanie krytycznym. Protokół umożliwia precyzyjne dostosowanie dawkowania do wrażliwości patogenów.

Multipleksowe monitorowanie leków terapeutycznych za pomocą rozcieńczania izotopów HPLC-MS/MS antybiotyków w chorobach krytycznych (Wideo) | JoVE Journal

Multipleksowe monitorowanie leków terapeutycznych za pomocą rozcieńczania izotopów HPLC-MS/MS antybiotyków w chorobach krytycznych

Przeglądaj więcej filmów