Name: Synteza i charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych siarczanu chondroityny A (plCSA) ukierunkowanych na łożysko (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 55 s
Description: Poznaj metodę syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na łożysko i nowotwory. Technika ta umożliwia skuteczną, ukierunkowaną dostawę leków do trofoblastów i komórek nowotworowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty z Narodowego Programu Kluczowych Badań i Rozwoju Chin (2016YFC1000402), Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych (81571445 i 81771617) oraz Fundacji Nauk Przyrodniczych Prowincji Guangdong (2016A030313178) dla X.F. oraz Funduszu Badań Podstawowych Shenzhen (JCYJ20170413165233512) dla X.F.

1. Przygotowanie roztworów podstawowych
<ol>
	<li>Przygotować wodny roztwór 4% etanolu, rozcieńczając 4 ml absolutnego alkoholu etylowego w 100 ml ultraczystej wody. Przechowywać roztwór w temperaturze 4 °C. 
	UWAGA: Woda ultraczysta jest definiowana jako woda bez zanieczyszczeń, takich jak bakterie, cząstki stałe, jony lub nukleazy. Wodę ultraczystą uzyskano z systemu oczyszczania wody o docelowej rezystywności do 18,2 mΩ·cm, co oznacza niskie zanieczyszczenie anionowe.</li>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy lecytyny sojowej o stężeniu 1 mg/ml, rozpuszczając 20 mg lecytyny sojowej w 20 ml wodnego roztworu 4% etanolu. Roztwór podstawowy lecytyny sojowej należy przechowywać w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy o stężeniu 25 mg/ml DPE-PEG (2000)-COOH, rozpuszczając 100 mg DSPE-PEG-COOH w 4 ml wodnego roztworu 4% etanolu. Przechowywać roztwór podstawowy w temperaturze -20 °C.</li>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy DOX o stężeniu 10 mg/ml, rozpuszczając 50 mg DOX w 5 ml ultraczystej wody. Przechowywać roztwór podstawowy DOX w temperaturze 4 °C w ciemności.</li>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy PLGA o stężeniu 2 mg/ml, rozpuszczając 20 mg PLGA w 10 ml acetonitrylu. Przechowywać roztwór podstawowy PLGA w temperaturze 4 °C. 
	UWAGA: Acetonitryl jest łatwopalny i toksyczny. Zachowaj ostrożność w dygestoriach i noś odpowiedni sprzęt osobisty, taki jak fartuchy laboratoryjne, okulary ochronne i rękawice lateksowe.</li>
	<li>Przygotować 0,1 M roztwór podstawowy kwasu 2-(morfolino)etanosulfonowego (MES, pH 6,0), rozpuszczając 2,17 g MES w 100 ml ultraczystej wody. Przechowywać roztwór podstawowy w temperaturze 4 °C.</li>
</ol>
2. Synteza DNP
UWAGA: Aby uniknąć degradacji fotochemicznej DOX, wszystkie operacje były wykonywane w ciemności. 
Nanocząstki zostały zsyntetyzowane za pomocą wcześniej opisanej jednoetapowej metody sonikacji11,13,14.
<ol>
	<li>Dodać 3 ml wodnego roztworu 4% etanolu do sterylnej probówki wirówkowej o pojemności 10 ml. Następnie dodać 90 μg roztworu podstawowego lecytyny sojowej, 210 μg roztworu podstawowego DSPE-PEG-COOH i 750 μg roztworu podstawowego DOX do 3 ml wodnego roztworu 4% etanolu.</li>
	<li>Umieść probówkę wirówkową w łaźni lodowej i umieść łaźnię lodową na procesorze ultradźwiękowym.</li>
	<li>Za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml odpipetować kroplami 2 mg roztworu podstawowego PLGA (1 kropla/4-6 s) do probówki wirówkowej. W międzyczasie należy poddać lampę sonifikacji za pomocą procesora ultradźwiękowego o częstotliwości 20 kHz i amplitudzie wyjściowej 30% przez 5 minut, aby zsyntetyzować DNPs. 
	UWAGA: Aby zsyntetyzować jednorodne cząstki o małych rozmiarach, prędkość, z jaką roztwór PLGA wkrapla się do rurki, musi być wolna i należy unikać generowania pęcherzyków.</li>
	<li>Oczyścić DNP, przemłukując powyższy roztwór w 0,1 M buforze MES (pH 6,0) 3 razy za pomocą filtra wirówkowego (MWCO, 10 kDa). Wirować w temperaturze 4 °C i 1000 × g przez 3 minuty za każdym razem. Na koniec powinno pozostać około 1 ml nanocząstek rozpuszczonych w roztworze MES. 
	UWAGA: Jest to dopuszczalny punkt zatrzymania procedury. Jeśli nie są używane do koniugacji peptydów, nanocząstki można oczyścić za pomocą buforu PBS (pH 7,4), a oczyszczone DNP można przechowywać w temperaturze 4°C w ciemności.</li>
</ol>
3. Koniugacja peptydów z DNP
<ol>
	<li>Aktywacja estru
	<ol>
		<li>Dodać 0,4 mg EDC (stężenie końcowe 2 mM) do 1 ml DNP.</li>
		<li>Dodać 0,24 mg NHS do reakcji (końcowe stężenie 2 mM). 
		UWAGA: W celu łatwego dodania odpowiedniej ilości EDC i NHS, można przygotować roztwór podstawowy, jeśli odczynniki zostaną rozpuszczone i natychmiast zużyte.</li>
		<li>Dobrze wymieszać składniki reakcji i umieścić reakcję na wytrząsarce; pozostawić na reakcję przez 30 min-1 godzinę w temperaturze pokojowej w ciemności.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Reakcja aminowa
	<ol>
		<li>Zwiększyć pH buforu do 7,2-7,5 za pomocą PBS (20×, pH 7,4).</li>
		<li>Dodać 0,5 mg peptydu ukierunkowanego na plCSA (plCSA-BP, EDVKDINFDTKEKFLAGCLIVSFHEGKC) do roztworu reakcyjnego. 
		UWAGA: Przed dodaniem rozpuść peptydy w 20% acetonitrylu. Jeśli peptydy nie są rozpuszczalne, pomocna może być sonikacja w soniku do kąpieli.</li>
		<li>Dobrze wymieszać roztwór, a następnie umieścić go na shakerze; pozostawić reakcję do przebiegu w temperaturze 4 °C przez noc w ciemności.</li>
		<li>Umieścić sprzężony roztwór w workach do dializy (MWCO, 3,500 Da) w celu dializacji i oczyszczania plCSA-DNP za pomocą buforu PBS (pH 7,4) w temperaturze pokojowej przez 24 godziny w ciemności. 
		UWAGA: Alternatywnie oczyszczanie można przeprowadzić jak w kroku 2.4 w celu uzyskania plCSA-DNP.</li>
		<li>W przypadku hodowli komórkowych należy przefiltrować odtworzony roztwór przez sterylny filtr strzykawkowy 0,22 μm w celu usunięcia potencjalnych osadów.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na plCSA
<ol>
	<li>Pomiar hydrodynamicznej wielkości nanocząstek za pomocą dynamicznego rozpraszania światła (DLS)
	<ol>
		<li>Rozcieńczyć nanocząstki ultraczystą wodą (50-krotne rozcieńczenie). Załadować 500 μl próbki do kuwety zgodnie z instrukcjami DLS lub przyrządu do pomiaru potencjału zeta. 
		UWAGA: Kuwety potencjału Zeta i DLS mogą się różnić w zależności od specyfikacji instrumentu.</li>
		<li>Po zakończeniu pomiaru zapisz średnicę cząstek, wskaźnik polidyspersyjności (PDI) i potencjał zeta. Uśrednij wyniki uzyskane z 4 powtórzonych odczytów i oblicz odchylenie standardowe.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM) 
	UWAGA: Morfologię nanocząstek obserwowano za pomocą TEM metodą barwienia ujemnego. 24
	<ol>
		<li>Rozcieńczyć nanocząstki ultraczystą wodą (rozcieńczenie 400-krotne). Dodać 20 μl próbki do siatki TEM i pozostawić na 5 minut.</li>
		<li>Dodać 100 μl 2% (w/v) kwasu fosforowego i odstawić na 2 minuty. Odprowadzić kroplę.</li>
		<li>Wysuszyć siatkę TEM w temperaturze pokojowej.</li>
		<li>Ustaw napięcie przyspieszenia TEM na 80 kV i powiększ obraz do 100 000× aby uwidocznić nanocząstki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Oznaczanie skuteczności enkapsulacji (EE) i LE
	<ol>
		<li>Generowanie krzywej standardowej. Rozpuść DOX w ultraczystej wodzie, aby przygotować roztwory DOX o pięciu różnych stężeniach: 1 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/mL, 50 μg/ml i 100 μg/ml. Zmierzyć absorpcję roztworów DOX przy 480 nm za pomocą spektrometru UV-VIS. Wygeneruj krzywą standardową na podstawie stężeń DOX.</li>
		<li>Rozcieńczyć 25 μl nanocząstek w 500 μl ultraczystej wody. Zmierzyć absorpcję przy długości fali 480 nm za pomocą spektrometru UV-VIS. Obliczyć stężenia leku za pomocą krzywej wzorcowej.</li>
		<li>Oblicz LE, korzystając z następującego równania: 
		LE=((ilość leków w nanocząstkach)/(całkowita masa materiałów))×100%.</li>
		<li>Oblicz EE, korzystając z następującego równania: 
		EE=((ilość narkotyków w nanocząstkach)/(ilość dodanego leku))×100%.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pomiar efektywności koniugacji za pomocą testu kwasu bicinchoninowego (BCA)25,26,27
	<ol>
		<li>Odpipetować 25 μl wzorcowych roztworów peptydów (Tabela 1) lub plCSA-DNP do studzienek mikropłytek w dwóch egzemplarzach. Dodać 200 μl odczynnika roboczego do każdej studzienki i dobrze mieszać płytkę na wytrząsarce płytek przez 30 s.</li>
		<li>Przykryć płytkę i inkubować w temperaturze 37 °C przez 30 minut.</li>
		<li>Zmierzyć absorbancję przy długości fali 562 nm na czytniku płytkowym. Użyj wygenerowanej krzywej standardowej, aby obliczyć stężenia plCSA w plCSA-DNP.</li>
		<li>Oblicz sprawność koniugacji za pomocą następującego równania: 
		Wydajność koniugacji=((ilość peptydu w nanocząstkach)/(ilość dodanego peptydu))×100%.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>fiolka</td>
			<td>Objętość rozcieńczalnika (μl)</td>
			<td>Objętość i źródło peptydu (μL)</td>
			<td>Końcowe stężenie peptydu (μg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZA</td>
			<td>0</td>
			<td>300 w magazynie</td>
			<td>1000</td> szt.
		</tr>
		<tr>
			<td>W</td>
			<td>Z kolei 250</td> szt.
			<td>250 rozcieńczeń w fiolce A</td>
			<td>500</td> szt.
		</tr>
		<tr>
			<td>Z</td>
			<td>Z kolei 250</td> szt.
			<td>250 rozcieńczenia B w fiolce</td>
			<td>Z kolei 250</td> szt.
		</tr>
		<tr>
			<td>D</td>
			<td>Z kolei 250</td> szt.
			<td>250 rozcieńczeń C w fiolce</td>
			<td>125</td> Rozdział
		</tr>
		<tr>
			<td>E</td>
			<td>300</td> szt.
			<td>200 rozcieńczeń D w fiolce</td>
			<td>50</td> Rozdział
		</tr>
		<tr>
			<td>Z</td>
			<td>Z kolei 250</td> szt.
			<td>250 rozcieńczenia E w fiolce</td>
			<td>25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Z</td>
			<td>400</td> szt.
			<td>100 rozcieńczenia F w fiolce</td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H</td>
			<td>500</td> szt.
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1. Przygotowanie peptydów wzorcowych
5. Mikroskopia fluorescencyjna oceniająca wychwyt nanocząstek ukierunkowanych na plCSA w komórkach raka skromówki (JEG3)
<ol>
	<li>Komórki nasienne na sterylnych 12-dołkowych płytkach w 1,0×104 komórki/basenik z kompletnym DMEM/F12 (cDMEM/F12, zawierające 1% penicyliny/streptomycyny i 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS)). Pozwól komórkom rosnąć do 60% konfluencji w temperaturze 37 °C i 5% CO2 w wilgotnych warunkach.</li>
	<li>Usuń pożywkę i dodaj 1 ml zimnej świeżej pożywki o niskiej zawartości surowicy (5% FBS) i DNP lub plCSA-DNP (5 μg ekwiwalentu DOX).</li>
	<li>Mieszaninę komórek i nanocząstek inkubować w temperaturze 4 °C przez 1 godzinę.</li>
	<li>Po inkubacji usunąć pożywkę i trzykrotnie umyć komórki PBS. Następnie dodać 1 ml świeżego cDMEM/F12 i inkubować komórki w temperaturze 37 °C przez 30 minut.</li>
	<li>Usuń cDMEM/F12 i umyj komórki trzykrotnie PBS.</li>
	<li>Dodaj 2 ml zimnego 4% paraformaldehydu (PFA) i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 15 minut, aby utrwalić komórki.</li>
	<li>Usuń PFA. Umyj komórki 2 ml PBS raz. Dodać 1 ml PBS zawierającego DAPI (1 μg/ml) do barwienia jąder i inkubować w temperaturze pokojowej przez 10 minut.</li>
	<li>Odessać PBS i przemyć komórki trzykrotnie PBS.</li>
	<li>Dodaj pożywkę montażową i zobrazuj fluorescencję za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej, używając zielonych i niebieskich kanałów do wizualizacji odpowiednio DOX i jąder.</li>
</ol>

<ol><li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+therapeutics%3A+an+emerging+treatment+modality+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).</li>
<li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17439359">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li>
<li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medical+Research+and+Opinion%22%5BJournal%5D)">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li>
<li>Pillai, G. <a target="_blank" href="https://symbiosisonlinepublishing.com/pharmacy-pharmaceuticalsciences/pharmacy-pharmaceuticalsciences09.php">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li>
<li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="https://www.hindawi.com/journals/jnm/2016/5436458/">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458(2016).</li>
<li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin+in+cancer+therapy%3A+molecular+mechanisms+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li>
<li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li>
<li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+current+nanoparticle+and+targeting+moieties+for+the+delivery+of+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).</li>
<li>Salanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+human+cancer+by+a+glycosaminoglycan+binding+malaria+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein.</a> Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).</li>
<li>Seiler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Oncofetal+Glycosaminoglycan+Modification+Provides+Therapeutic+Access+to+Cisplatin-resistant+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Urology%22%5BJournal%5D)">An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer.</a> European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembled+lipid--polymer+hybrid+nanoparticles%3A+a+robust+drug+delivery+platform%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform.</a> ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).</li>
<li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+assembly+of+DOX%2FICG+loaded+lipid-polymer+nanoparticles+for+highly+effective+chemo-photothermal+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy.</a> ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).</li>
<li>Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+synthesis+of+lipid%E2%88%92+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Quick synthesis of lipid− polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li>
<li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folate-modified%2C+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomaterials+Science%2C+Polymer+Edition%22%5BJournal%5D)">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li>
<li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vitro+evaluation+of+core-shell+type+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+the+delivery+of+erlotinib+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).</li>
<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+legumain-recognition+and+NIR+controlled+released+of+cisplatin-indocyanine+nanosphere+against+gastric+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma.</a> European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).</li>
<li>Grabarek, Z., Gergely, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zero-length+crosslinking+procedure+with+the+use+of+active+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.</a> Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).</li>
<li>Hadjipanayis, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li>
<li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li>
<li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li>
<li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters%3A+bis%28N-hydroxysulfosuccinimide%29+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic%2C+membrane-impermeant%2C+protein+cross-linkers%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li>
<li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+assembly+of+homogenous+lipid%E2%88%92+polymeric+and+lipid%E2%88%92+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Single-step assembly of homogenous lipid− polymeric and lipid− quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li>
<li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanobody-albumin+nanoparticles+%28NANAPs%29+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li>
<li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydrate+Polymers%22%5BJournal%5D)">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li>
<li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li>
<li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+investigation+of+EDC%2FsNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li>
<li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Mass+Spectrometry+Reviews%22%5BJournal%5D)">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li>
<li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems%3A+proteolytic+stability+requirements%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li>
<li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li>
</ol>

X.F. i B.Z. są wynalazcami patentu PCT/CN2017/108646 i 201710906587.6 złożonego przez SIAT, który obejmuje metodę i zastosowanie syntezy nanocząstek ukierunkowanej na plCSA. Pozostali autorzy nie ujawnili żadnych potencjalnych konfliktów interesów.

Protokół ten zapewnia wydajną i powtarzalną metodę syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych sprzężonych z plCSA-BP. Jednoetapowa metoda sonikacji w celu przygotowania nanocząstek lipidowo-polimerowych jest szybka, powtarzalna i różni się od typowych metod nanoprecypitacji, które obejmują ogrzewanie, wirowanie lub odparowywanie. Stąd opracowana metoda znacznie skraca czas syntezy. Ponadto biokoniugat EDC/NHS zastosowany w tym protokole jest powszechnie stosowaną i wygodną techniką koniugacji peptydów i przeciwciał przeci...

Skuteczna metoda leczenia raka zmniejsza i eliminuje guzy przy minimalnej toksyczności ogólnoustrojowej. Dlatego selektywne celowanie w guz jest kluczem do zbadania skutecznych metod terapeutycznych. Nanocząstki stanowią obiecującą szansę w terapii przeciwnowotworowej, a zespoły molekularne z różnymi grupami funkcyjnymi zwiększą skuteczność leków i zmniejszą związane z nimi skutki uboczne1,2. Co więcej, systemy nanocząsteczkowe wykorzystują głównie pasywne i aktywne celowanie, aby dotrzeć do docelowych nowotworów3.
Pasywne celowanie wykorzystuje wrodzone cechy nanocząsteczek oraz efekty zwiększonej przepuszczalności i retencji (EPR), aby dotrzeć do komórek nowotworowych. Liposomy kationowe są z powodzeniem stosowane do dostarczania różnych leków przeciwnowotworowych do nowotworów w zastosowaniach klinicznych4,5,6. Pomimo potencjalnie skutecznego efektu terapeutycznego w leczeniu raka, niskie stężenie leku w regionie guza i niezdolność do odróżnienia komórek nowotworowych od normalnych tkanek to dwa główne ograniczenia nanocząstek ukierunkowanych pasywnie7.
Aktywne strategie celowania wykorzystują interakcje antygen-przeciwciało, ligand-receptor i inne molekularne rozpoznawanie, aby konkretnie dostarczać leki do nowotworów8. Glikozaminoglikan łożyskowy siarczan chondroityny A (plCSA) ulega szerokiej ekspresji w większości komórek nowotworowych i trofoblastów łożyska. Co więcej, białko malarii VAR2CSA może specyficznie wiązać się z plCSA9,10. W związku z tym może VAR2CSA być narzędziem do celowania w ludzkie komórki rakowe. Jednakże, gdy VAR2CSA jest sprzężone z nanocząstkami, białko o pełnej długości może ograniczać przenikanie nanocząstek do komórek nowotworowych. Niedawno odkryliśmy peptyd wiążący plCSA (plCSA-BP), pochodzący z białka malarii VAR2CSA. Sprzężone z plCSA-BP nanocząstki lipidowo-polimerowe szybko wiązały się z komórkami raka kosmówki i znacznie zwiększały aktywność przeciwnowotworową doksorubicyny (DOX) in vivo11; Cząstki te również specyficznie wiązały się z trofoblastami łożyska i mogły służyć jako narzędzie do ukierunkowanego dostarczania leków do łożyska12.
Nanocząstki polimeru lipidowego składają się z monowarstwowej powłoki lipidowej i hydrofobowego polimerowego rdzenia i stanowią nowy nośnik do dostarczania leków. Te nanocząstki łączą w sobie zalety liposomów i nanonośników polimerowych, takie jak kontrolowany rozmiar nanocząstek, wysoka biokompatybilność, przedłużone uwalnianie leku, wysoka wydajność ładowania leku (LE) i doskonała stabilność13. W tej pracy zastosowaliśmy jednoetapową metodę sonikacji do syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych. Ta metoda jest szybka, wygodna i odpowiednia do skalowania i jest szeroko stosowana do przygotowywania nanocząstek lipidowo-polimerowych przez naszą grupę11,14 i inne15,16,17,18.
1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodimidowy chlorowodorek (EDC) jest popularnym karbodimidem używanym jako środek sieciujący do koniugacji biomolekuł zawierających aminy i karboksylany19. Oprócz EDC, N-hydroksysulfosuccinimid (NHS) jest najpowszechniejszym odczynnikiem koniugacyjnym w reakcjach koniugacji powierzchni i nanocząstek20,21. NHS może zmniejszyć liczbę reakcji ubocznych oraz zwiększyć stabilność i wydajność estrów pośrednich 22,23.
Tutaj opisujemy protokół syntezy nanocząsteczek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na plCSA. Po pierwsze, opisano jednoetapową syntezę sonikacyjną nanocząstek lipidowo-polimerowych (DNP) obciążonych DOX. Następnie wprowadzana jest technika biokoniugatu EDC/NHS do generowania nanocząstek lipidowo-polimerowych sprzężonych z plCSA-BP. Ta technika biokoniugatu może być również stosowana do koniugacji innych przeciwciał i peptydów z nanocząstkami. Na koniec opisujemy właściwości fizykochemiczne i test in vitro stosowany do charakteryzowania nanocząstek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na plCSA. Uważamy, że te nanocząstki lipidowo-polimerowe ukierunkowane na plCSA mogą stanowić skuteczny system do ukierunkowanego dostarczania leków na większość nowotworów u ludzi oraz ukierunkowanego dostarczania ładunków do łożyska w celu leczenia chorób łożyska.

<table><tbody><tr><td>Peptyd plCSA</td><td>Shanghai GL Biochem</td><td>573518</td><td>do syntezy peptydów</td></tr><tr><td>Absolutny</td><td>etanol Sinopharm Chemical</td><td>10009218</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>Lecytyna sojowa</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>441601</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>DSPE-PEG-COOH</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880125</td><td>do syntezy</td></tr> <tr><td>nanocząstekDoksorubicyna</td><td>JKhemical</td><td>113424</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>Acetonitryl</td><td>Shanghai Lingfeng</td><td>1008621</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>PLGA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>719897</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>Procesor ultradźwiękowy</td><td>Sonics</td><td>VCX130</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>Filtr wirówkowy (MWCO 10 kDa)</td><td>Millipore</td><td>UFC801024</td> do wirówki <td>do oczyszczania nanocząstek</td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>3-18KS</td><td>do oczyszczania nanocząstek</td></tr><tr><td>Kwas 2-[morfolino]etanosulfonowy(MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3671</td><td>do koniugacji peptydów</td></tr><tr><td>chlorowodorek 1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodimidu (EDC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3450</td><td>do koniugacji peptydów</td></tr><tr><td>N-hydroksysukcynimidu (NHS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>56480</td><td>do koniugacji peptydów</td></tr><tr><td>Worki do dializy</td><td>Spectrum</td><td>132592T</td><td>do oczyszczania nanocząstek</td></tr>, <tr><td>PBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30028.01</td><td>do hodowli komórkowych</td></tr>, <tr><td>probówki wirówkowe 10 ml, polipropylen</td><td>Aladdin</td><td>S-025</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>, probówki wirówkowe 15 ml, polipropylen</td><td>Corning</td><td>430791</td><td>do różnych zastosowań</td></tr><tr><td>0,22 &m; m sterylny filtr strzykawkowy</td><td>Millipore</td><td>SLGV033RB</td><td>do oczyszczania nanocząstek</td></tr><tr><td>Strzykawka 1 ml, polipropylenowa</td><td>BD</td><td>328421</td><td>do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>Malvern Zetasizer</td><td>Malvern</td><td>Nano ZS</td><td>do analizatora wielkości cząstek</td></tr><tr><td>Kwas</td><td></td><td></td> fosfowolframowy <td>do TEM</td></tr><tr><td>siatka TEM</td><td>EMCN</td><td>BZ10024a</td><td>do TEM</td></tr><tr><td>Spektrometr UV-VIS</td><td>Leagene</td><td>DZ0035</td><td>do</td></tr><tr><td>transmisyjnego mikroskopu elektronowego TEM </td><td>JEOL</td><td>JEM-100CXII</td><td>do analizatora wielkości cząstek</td></tr><tr><td>Odczynnik BCA A</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23228</td><td>do testu BCA</td></tr><tr><td>Odczynnik BCA B</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23224</td><td>do testu BCA</td></tr><tr><td>96-dołkowe płytki</td><td>Corning</td><td>3599</td><td>do BCA test</td></tr><tr><td>Czytnik płytek</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Multiskan&trade; GO</td><td>do testu BCA</td></tr><tr><td>12-dołkowe płytki</td><td>Corning</td><td>3513</td><td>do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Komórka JEG3</td><td>Bank komórek Chińskiej Akademii Nauk</td><td>TCHu195</td><td>Łożysko ludzkie</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Hyklon</td><td>SH30272.01</td><td>fenol bez czerwieni</td></tr><tr><td>Surowica bydlęca płodu (FBS)</td><td>GIBCO</td><td>10100</td><td>do hodowli komórkowej</td></tr><tr><td>Penicylina/streptomycyna</td><td>GIBCO</td><td>15070063</td><td>do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Mikroskop fluorescencyjny</td><td>OLYMPUS</td><td>CKK53</td><td>do pobierania przez komórkę</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Shanghai Lingfeng</td><td>1372021</td><td>do pobierania komórkowego</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sangon Biotech</td><td>A606584</td><td>do wychwytu komórkowego</td></tr><tr><td>Medium montażowe</td><td></td><td>Life P36961</td><td>do pobierania komórkowego</td></tr></tbody></table>

synteza i charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych siarczanu chondroityny a (plcsa) ukierunkowanych na łożysko

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

Skuteczna metoda leczenia raka zmniejsza i eliminuje guzy przy minimalnej toksyczności ogólnoustrojowej. Aktywne oddziaływanie na nanocząstki stanowi obiecujące podejście do terapii nowotworów. Glikozaminoglikan łożyskowy siarczan chondroityny A (plCSA) ulega ekspresji w szerokim zakresie komórek rakowych i trofoblastów łożyska, a VAR2CSA białkowe malarii mogą specyficznie wiązać się z plCSA. Zgłoszony peptyd wiążący siarczan chondroityny A łożyska (plCSA-BP), pochodzący z białka malarii VAR2CSA, może również specyficznie wiązać się z plCSA na komórkach rakowych i trofoblastach łożyska. W związku z tym nanocząstki sprzężone z plCSA-BP mogą być wykorzystywane jako narzędzie do ukierunkowanego dostarczania leków do nowotworów u ludzi i trofoblastów łożyska. W tym protokole opisujemy metodę syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych sprzężonych z plCSA-BP obciążonych doksorubicyną (plCSA-DNPs); Metoda składa się z pojedynczego etapu sonikacji i technik biokoniugatu. Ponadto opisano kilka metod charakterystyki plCSA-DNP, w tym określanie ich właściwości fizykochemicznych i wychwytu komórkowego przez komórki łożyskowego raka kosmówki (JEG3).

W niniejszym protokole PLGA, DSPE-PEG-COOH oraz lecytyna sojowa stanowią odpowiednio reprezentatywny polimer, koniugat lipid-PEG-COOH i lipid. Synteza nanocząstek lipidowo-polimerowych celowanych w plCSA poprzez jednoetapową metodę sonikacji oraz technikę EDC/NHS przedstawiono na Rysunku 1. Najpierw, w warunkach sonikacji, lecytyna sojowa, PLGA i DSPE-PEG-COOH ulegają samoorganizacji, tworząc DNPs o strukturze rdzeń-otoczka. Rdzeń składa się z PLGA i...

Tutaj prezentujemy protokół syntezy łożyskowych nanocząstek lipidowo-polimerowych skojarzonych z peptydem wiążącym siarczan chondroityny A (plCSA-BP) za pomocą jednoetapowej techniki sonikacji i biokoniugatu. Cząstki te stanowią nowatorskie narzędzie do ukierunkowanego dostarczania leków do większości ludzkich nowotworów i trofoblastów łożyska w leczeniu nowotworów i zaburzeń łożyska.

Synteza i charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych siarczanu chondroityny A (plCSA) ukierunkowanych na łożysko

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie dostarczania leków, takie jak celowane dostarczanie leków na nowotwory u ludzi i cystoblasty łożyska. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest to prosta i powtarzalna metoda syntezy peptydów sprzężonych z innymi cząstkami. Na początek dodaj trzy milimetry czteroprocentowego etanolu do sterylnej 10-mililitrowej probówki wirówkowej.Następnie dodaj 90 mikrogramów roztworu podstawowego lecytyny sojowej, 210 mikrogramów roztworu podstawowego kwasu DSPE-PEG-karboksylowego i 750 mikrogramów roztworu podstawowego DOX. Za pomocą strzykawki o pojemności jednego mililitra odpipetować dwa miligramy roztworu podstawowego PLGA. Umieścić probówkę wirówkową w łaźni lodowej na procesorze ultradźwiękowym i sonikować przez dwie minuty.Następnie kroplami dodawać roztwór podstawowy PLGA do probówki wirówkowej. Aby oczyścić DNP, użyj filtra wirówkowego, aby przepłukać roztwór w 0,1-molowym buforze MES. Następnie odwirować roztwór o sile 1000 G przez trzy minuty w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Aby rozpocząć aktywację estru, dodaj 0,4 miligrama EDC do jednego mililitra DNP. Następnie dodaj 0,24 miligrama NHS do reakcji. Następnie pozwól reakcji zachodzić do jednej godziny w temperaturze pokojowej w ciemności.Następnie dokładnie wymieszaj składniki reakcji i umieść reakcję na shakerze. Aby rozpocząć reakcję aminową, należy użyć PBS w celu zwiększenia pH buforu z 7,2 do 7,5. Następnie dodaj 0,5 miligrama peptydu celującego pICSA do roztworu reakcyjnego.Dobrze wymieszaj roztwór i umieść go na shakerze. Następnie pozwól, aby reakcja postępowała w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez noc w ciemności. Następnego dnia napełnij worki dializacyjne roztworem sprzężonym.Oczyszczać DNP pICSA buforem PBS w temperaturze pokojowej przez 24 godziny w ciemności. Po wyhodowaniu komórek zgodnie z protokołem tekstowym usuń pożywkę i dodaj jeden mililitr świeżej, zimnej pożywki z pięcioprocentowymi DNP lub DNP FBS i pICSA. Następnie inkubuj mieszaninę komórek i nanocząstek przez godzinę w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Następnie usuń pożywkę i umyj komórki trzykrotnie PBS. Następnie dodaj jeden mililitr świeżej pożywki i inkubuj komórki przez 30 minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnie usuń pożywkę i umyj komórki trzykrotnie PBS.Następnie dodaj dwa mililitry zimnego, czteroprocentowego PFA i inkubuj mieszaninę w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Usuń PFA i umyj komórki dwoma mililitrami PBS. Następnie dodaj jeden mililitr PBS z DAPI do barwienia jąder.Pozostaw mieszaninę do inkubacji w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Na koniec dodaj pożywkę montażową i zobrazuj fluorescencję za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego. Korzystając z tego protokołu, DNP zostały pomyślnie przygotowane i skoniugowane z pICSA BP. Po koniugacji średnica pierwotnych DNP wzrosła do około 109 nanometrów.Obrazy TEM DNP i pICSA DNP wykazały, że cząstki były dobrze rozproszone i ogólnie wykazywały sferyczną morfologię. Potencjał zeta nanocząstek wynosił minus 20,1 i 29,9 miliwoltów, co wskazuje, że nanocząstki były wysoce stabilne. Test wychwytu komórkowego JEG3 wykazał DNP pICSA związane z komórkami JEG3 w ciągu 30 minut.W związku z tym pICSA BP został skutecznie sprzężony z powierzchnią. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać o sonikacji mieszaniny przez jedną do dwóch minut przed dodaniem PLGA. Zgodnie z tą procedurą można wykonać nasze metody, takie jak test HPLC, w celu dokładniejszego określenia wydajności koniugacji.Po jej opracowaniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się biologią rozrodu do zbadania możliwości leczenia ukierunkowanego na łożysko w przypadku powikłań ciąży.

synthesis-characterization-placental-chondroitin-sulfate-plcsa

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Niniejszy artykuł opisuje metodę nanoprecypitacji do syntezy nanocząsteczek polimerowych z wykorzystaniem kopolimerów diblokowych. Omówimy syntezę kopolimerów diblokowych, technikę nanoprecypitacji oraz potencjalne zastosowania.

Formułowanie diblokowych nanocząstek polimerowych za pomocą techniki nanoprecypitacji

Opisujemy produkcję i charakterystykę nanocząsteczek i mikrocząsteczek składających się z poli(kwasu mlekowo-ko-glikolowego) przy użyciu witaminy E-TPGS jako emulgatora. Dzięki różnicowaniu parametrów formulacji, takich jak stężenie emulgatora, możliwe jest wytworzenie nanocząstek o średnich średnicach w zakresie od 220 nm do 1,98 μm.

Nanocząstki PLGA utworzone przez pojedynczą lub podwójną emulsję z witaminą E-TPGS

Celem tego protokołu jest włączenie SDF-1α, czynnika naprowadzającego komórki macierzyste, do nanocząsteczek siarczanu dekstranu i chitozanu.  Powstałe cząstki są mierzone pod kątem ich wielkości i potencjału zeta, a także zawartości, aktywności i szybkości uwalniania in vitro SDF-1α z nanocząstek.

Przygotowanie i charakterystyka nanocząstek siarczanu SDF-1α-chitozan-dekstranu

W tym badaniu opisano metodę syntezy ultra-małych populacji biokompatybilnych nanocząstek, a także kilka metod in vitro, za pomocą których można ocenić ich interakcje komórkowe.

Stałe nanocząstki lipidowe (SLN) do zastosowań wewnątrzkomórkowych

Przygotowano rusztowanie do wstrzykiwań inżynierii tkankowej składające się z mikrocząsteczek poli(N-izopropylacrylamidu)-siarczanu chondroityny (PNIPAAm-g-CS)-zawierającego poli(N-izopropylacrylamid). W tym badaniu analizowana jest siła adhezji, właściwości pęcznienia i biokompatybilność in vitro. Opracowane tutaj techniki charakterystyki mogą mieć zastosowanie do innych systemów termożelowania.

Synteza termożelujących kompozytów siarczanowych poli(N-izopropylacyloamidu)-grafto-chondroityny z mikrocząstkami alginianowymi dla inżynierii tkankowej

Nanonośnik ciekłokrystalicznej nanocząstki (LCNP) jest wykorzystywany jako narzędzie do kontrolowanego dostarczania hydrofobowego ładunku do błony komórkowej żywych komórek.

Celowane dostarczanie przez błonę plazmatyczną hydrofobowego ładunku zamkniętego w nośniku nanocząstek ciekłokrystalicznych

Ten artykuł opisuje proces dostrajania rozmiaru i gęstości sieciowania kowalencyjnie usieciowanych nanocząstek z liniowych poliestrów zawierających funkcjonalność wisiorka. Dostosowując parametry syntezy (masa cząsteczkowa polimeru, włączenie funkcjonalności wisiorka i równoważniki środków sieciujących), można osiągnąć pożądany rozmiar nanocząstek i gęstość usieciowania do zastosowań związanych z dostarczaniem leków.

Przestrajalność nanogąbek pod względem wielkości i gęstości usieciowania

Opisujemy system, który wykorzystuje trzy metody do oceny bezpieczeństwa i skuteczności dostarczania leków ukierunkowanych na łożysko: obrazowanie in vivo do monitorowania akumulacji nanocząstek, ultradźwięki o wysokiej częstotliwości do monitorowania rozwoju łożyska i płodu oraz HPLC do ilościowego określania dostarczania leków do tkanek.

Kompleksowa ocena skuteczności i bezpieczeństwa podawania leków ukierunkowanych na łożysko przy użyciu trzech uzupełniających się metod

Ten artykuł opisuje enkapsulację falkarindiolu w pokrytych lipidami nanocząstkach o długości fali 74 nm. Komórkowy wychwyt nanocząstek przez ludzkie komórki macierzyste do kropelek lipidów jest monitorowany za pomocą obrazowania fluorescencyjnego i konfokalnego. Nanocząstki są wytwarzane metodą szybkiego wstrzykiwania rozpuszczalnika, a ich rozmiar mierzy się za pomocą techniki dynamicznego rozpraszania światła.

Wychwyt nowych nanocząstek pokrytych lipidami zawierających falkarindiol przez ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste

Ten protokół opisuje syntezę i formułowanie wstrzykiwalnych, supramolekularnych biomateriałów hydrożelowych polimerowo-nanocząsteczkowych (PNP). Przedstawiono zastosowania tych materiałów do dostarczania leków, stabilizacji biofarmaceutycznej oraz enkapsulacji i dostarczania komórek.

Supramolekularne hydrożele polimerowo-nanocząsteczkowe do wstrzykiwań do zastosowań w dostarczaniu komórek i leków

Poznaj metodę syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na łożysko i nowotwory. Technika ta umożliwia skuteczną, ukierunkowaną dostawę leków do trofoblastów i komórek nowotworowych.

Synteza i charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych siarczanu chondroityny A (plCSA) ukierunkowanych na łożysko

Przeglądaj więcej filmów