Test labiryntu Elevated Plus w połączeniu z oprogramowaniem do śledzenia wideo w celu zbadania przeciwlękowego działania egzogennych suplementów ketogenicznych

Tutaj prezentujemy protokół do badania zmian w poziomie lęku u modeli gryzoni. Test elevated plus maze (EPM), stosowany w połączeniu z oprogramowaniem do śledzenia wideo, zapewnia niezawodną metodę dokumentowania efektu różnych potencjalnych terapii przeciwlękowych w przedklinicznych scenariuszach laboratoryjnych.

Podwyższony labirynt plus to metoda dokumentowania wpływu różnych potencjalnie anksjolitycznych metod leczenia na laboratoryjne modele gryzoni w bardziej humanitarny sposób w porównaniu z innymi metodami. Główną zaletą tej metody jest to, że opiera się ona na instynktownej skłonności gryzonia zarówno do ciemnych, jak i zamkniętych przestrzeni, a także na nieuwarunkowanym lęku wysokości i unikaniu otwartych przestrzeni. Collin Park, współpracownik z mojego laboratorium, pomoże zademonstrować tę procedurę.

Na kilka dni przed badaniem zajmij się zwierzętami, chwytając je za tułów i trzymając przez minutę, aby przyzwyczaić je do eksperymentatora. Następnie należy zmierzyć masę ciała zwierząt przed rozpoczęciem jakichkolwiek zabiegów, aby określić obliczenie dawki dla leczenia. Następnie zapoznaj zwierzęta z metodą gajnika dożołądkowego za pomocą wody po zgłębniku przez pięć dni przed suplementacją ketonów.

Do testu lęku użyj labiryntu z podwyższonym plusem lub aparatu EPM, aparatu w kształcie plusa z czterema ramionami, z których dwa są otwarte i dwa zamknięte. Oświetl aparat EPM, używając pośredniego oświetlenia z sufitu zamiast bezpośredniego oświetlenia. Upewnij się, że wszystkie cztery ramiona są podobnie oświetlone.

Podłącz klucz instalacyjny oprogramowania do śledzenia ruchu do portu USB 2.0 i zainstaluj oprogramowanie. Następnie zamocuj kamerę nad obszarem eksperymentu i upewnij się, że pozostanie nieruchoma przez cały czas trwania eksperymentu. Na koniec przeprowadź nowy eksperyment w systemie oprogramowania do śledzenia ruchu, korzystając z instrukcji obsługi.

Umieść zwierzę na obszarze doświadczalnym. Następnie rozpocznij proces akwizycji danych, naciskając przycisk start na panelu sterowania czasem. W pomieszczeniu testowym zbieraj dane EPM na dwa sposoby, ręcznie i za pomocą oprogramowania.

Oślepieni obserwatorzy oddzieleni są kurtyną. Poczekaj, aż rozpocznie się nagrywanie procesu śledzenia lub naciśnij przycisk stop na panelu sterowania czasem. Następnie usuń zwierzę z obszaru doświadczalnego.

Na koniec, aby uzyskać dostęp do narzędzia do analizy, naciśnij przycisk analizy na pasku asystenta eksperymentowania. Wybierz wersje próbne i przedziały czasowe, aby przeanalizować i wygenerować raport. Zacznij od przeniesienia szczurów z ich domowej klatki do pomieszczenia doświadczalnego 30 minut przed rozpoczęciem eksperymentu.

Umieść szczura na przecięciu czterech ramion EPM, przodem do otwartego ramienia naprzeciwko eksperymentatora. Uruchom oprogramowanie do śledzenia wideo, a także ręcznie nagrywaj zachowanie zwierzęcia przez pięć minut. Następnie, jeśli zwierzę spadnie z EPM, podnieś je i umieść z powrotem w tym samym miejscu EPM, w którym spadło.

Wyklucz z analizy dane behawioralne tego zwierzęcia. Pod koniec pięciominutowego testu zatrzymaj oprogramowanie do śledzenia wideo. Wyjmij zwierzę z EPM i umieść je z powrotem w klatce domowej.

Na koniec wyczyść EPM detergentem dezynfekującym, a następnie wodą z kranu. Osusz urządzenie ręcznikami papierowymi. Po przewlekłym karmieniu szczury w grupie KSMCT spędzały znacznie więcej czasu w otwartych ramionach w porównaniu z grupą kontrolną.

Grupa KS spędziła znacznie więcej czasu w ośrodku w porównaniu z grupą kontrolną. A mniej czasu spędza się w zamkniętych ramionach w grupach LKE, KS, KSMCT w porównaniu z grupą kontrolną. Szczury w grupach KS i KSMCT pokonywały znacznie większe odległości w otwartych ramionach.

Podczas gdy szczury w grupach LKE, KS i KSMCT wykazywały znacznie mniejszą odległość przebytą w zamkniętych ramionach w porównaniu z grupą kontrolną. Co więcej, po siedmiu dniach stosowania przez zgłębnik doustny czas spędzony w otwartych ramionach był dłuższy w grupie KE, ale zmniejszył się w centrum w grupie KE, KS i KSMCT. Liczba wpisów do zamkniętych ramion była również istotnie niższa po siedmiu dniach podawania w grupach KE i KS.

Bardzo ważne jest, aby umieścić wszystkie szczury na sprzęcie w spójnym dworze na skrzyżowaniu, odwróconym tyłem do eksperymentatora. Test EPM na gryzoniach jest odpowiednią i czułą metodą do badania wpływu różnych zabiegów, które wpływają na obszary mózgu zaangażowane w działanie przeciwlękowe i mechanizmy działania.