Nakłucie żyły podobojczykowej jako alternatywna metoda pobierania próbki krwi u szczurów
18 listopada 2018
Tutaj prezentujemy protokół pobierania próbek krwi z żyły podobojczykowej szczura.
Nakłucie żyły podobojczykowej jako alternatywna metoda pobierania próbki krwi u szczurów. Po znieczuleniu ogólnym ułóż szczury w pozycji leżącej na plecach i wysterylizuj przestrzeń podobojczykową 75% etanolem. Zidentyfikuj górny dół mostka przed nakłuciem.
Zlokalizuj miejsce nakłucia, ogonowo do zewnętrznej jednej trzeciej obszaru obojczyka po tej samej stronie. Kierunek igły był ustawiony w kierunku górnego dołu mostka i powinien być prawie równoległy do obojczyka, tuż za nim. Po pobraniu krwi uciskaj miejsce nakłucia przez jedną do dwóch minut, aby zatrzymać krwawienie.
W doświadczeniach na zwierzętach zawsze konieczne jest pobranie krwi o wystarczającej objętości. Pobieranie krwi z żyły ogonowej szczura jest popularne i mniej stresujące niż niektóre agresywne metody, takie jak pobieranie próbek ze splotu oczodołowego. Jednak ta metoda jest ograniczona przez wskaźnik sukcesu.
Tutaj przedstawiamy naszą metodę pobierania krwi o pożądanej objętości krwi z żyły podobojczykowej. Nasze wyniki pokazują, że ta metoda jest bezpieczna i praktyczna i może być brana pod uwagę w przypadku, gdy pobieranie krwi z żyły ogonowej nie powiedzie się. Na początek przygotuj taśmę klejącą, środek do depilacji, 75% etanol, probówkę do pobierania krwi, dwupunktową pięciomililitrową strzykawkę, maszynkę do golenia włosów, wagę elektroniczną, heparynę i sól fizjologiczną.
Szczury domowe w standardowych warunkach, ze swobodnym dostępem do pożywienia i wody pitnej, trzymane w klatkach o powierzchni 530 centymetrów kwadratowych z drewnianą ściółką do golenia. Wywołać znieczulenie ogólne u wszystkich zwierząt poprzez wstrzyknięcie dootrzewnowe przed nakłuciem. Ułóż szczura w pozycji leżącej, ułóż tylne kończyny w wygodnej pozycji i ułóż kończyny górne równolegle do ciała, tuż obok tułowia.
Oczyść obie strony przestrzeni podobojczykowej, aby usunąć sierść i wszelkie widoczne zabrudzenia. Przetrzyj skórę szyi i klatki piersiowej 75% etanolem i utrzymuj obszar czysty i suchy gazą. Obie strony żyły podobojczykowej nadają się do nakłucia, a tutaj wybieramy prawą stronę do nakłucia.
Zidentyfikuj położenie i kierunek prawego obojczyka lewym kciukiem operatora i delikatnie zlokalizuj górny dół mostka palcem wskazującym. Przepłucz naszą strzykawkę roztworem heparyny w ilości 10 jednostek na mililitr. Zlokalizuj miejsce nakłucia, skieruj pięć milimetrów ogonowo na zewnętrzną jedną trzecią obszaru prawego obojczyka.
Delikatnie wsunąć strzykawkę w skórę w miejscu wkłucia. Gdy igła wejdzie w skórę podobojczykową, należy zastosować aktywny nacisk przez prawą rękę operatora. Kierunek igły jest ustawiony w kierunku górnego dołu mostka i powinien być prawie równoległy do obojczyka, tuż za nim.
Zwykle do żyły podobojczykowej można dotrzeć, wbijając igłę na około dwa milimetry w tym kierunku. Gdy igła dostanie się do żyły, krew dostanie się do strzykawki pod aktywnym ciśnieniem. Następnie należy utrzymać aktywne ciśnienie do momentu pobrania odpowiedniej objętości krwi.
Po pobraniu krwi wyjmij igłę do nakłucia i uciskaj miejsce nakłucia przez jedną do dwóch minut, aby zatrzymać krwawienie. Zwróć uwagę: nacisk musi być bardzo delikatny, aby zapobiec zadławieniu. Przenieś próbkę krwi do antykoagulowanej probówki próżniowej z EDTA i odwiruj przy 1600G przez 10 minut w celu zebrania osocza.
Odessać supernatent w celu ponownego oczyszczenia probówki i przechowywać w temperaturze minus 18 stopni Celsjusza. Aby porównać wskaźnik sukcesu między wykwalifikowanymi operatorami a początkującymi, 20 szczurów SD podzielono losowo na dwie grupy. Wyniki pokazują, że przez prawą żyłę podobojczykową udało się odpowiednio dziewięciu szczurom w grupie wykwalifikowanej i ośmiu szczurom w grupie początkującej.
Następnie pobranie krwi od pozostałych trzech szczurów powiodło się przez lewą stronę. Wskaźnik sukcesu nie miał znaczącej różnicy między tymi dwiema grupami. Przebieg czasowy był nieco inny w tych dwóch grupach.
W trakcie lub po operacji nie wystąpiły żadne poważne powikłania, takie jak odma opłucnowa, odma opłucnowa i krwotok. Wszystkie zwierzęta przeżyły po pobraniu krwi. Aby zademonstrować trudności w nauce procedury nakłuwania, porównaliśmy liczbę wycofań między grupą wykwalifikowaną i początkującą.
Jak pokazano w tabeli drugiej, średnia liczba wypłat w grupie wykwalifikowanej jest nieco mniejsza niż w grupie początkującej, ale nie ma istotności statystycznej. Podsumowując, nasze wyniki pokazują, że strategia nakłuwania żyły podobojczykowej w celu pobrania krwi jest bezpieczna i wykonalna u szczurów. Ta metoda jest cenna, zwłaszcza w sytuacjach, gdy potrzebna jest duża ilość krwi.
Ta metoda może być optymalną alternatywą, jeśli konwencjonalne pobieranie krwi nie powiedzie się.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł przedstawia protokół pobierania próbek krwi z żyły podobojczykowej szczura. Metoda ta obejmuje znieczulenie ogólne oraz dokładne zlokalizowanie miejsca nakłucia, aby zapewnić pomyślne pobranie krwi.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- neuronauka
- fizjologia zwierząt
- techniki pobierania krwi
Wstęp
- Pobieranie krwi jest kluczowe dla wielu badań fizjologicznych.
- Tradycyjne metody mogą mieć ograniczenia w określonych układach eksperymentalnych.
- Nakłucie żyły podobojczykowej stanowi alternatywne podejście.
- Prawidłowa technika jest niezbędna w celu zminimalizowania powikłań.
Cel badania
- Przedstawienie szczegółowego protokołu pobierania próbek krwi u szczurów.
- Zwiększenie wiarygodności metod pobierania krwi w badaniach.
- Poprawa dobrostanu zwierząt poprzez minimalizację stresu podczas procedur.
Zastosowane metody
- Szczury po znieczuleniu umieszcza się w pozycji na plecach.
- Przestrzeń podobojczykową sterylizuje się 75% etanolem.
- Górny dół mostka zostaje zidentyfikowany jako punkt orientacyjny do nakłucia.
- Igłę ustawia się równolegle do obojczyka w celu zapewnienia optymalnego dostępu.
Główne wyniki
- Pomyślnie pobrano krew przy minimalnej liczbie powikłań.
- Metoda wykazała skuteczność w porównaniu z technikami tradycyjnymi.
- W celu zapewnienia bezpieczeństwa zwierząt wprowadzono opiekę po pobraniu krwi.
- Opinie badaczy wskazały na wysoką satysfakcję z zastosowanego protokołu.
Wnioski
- Metoda nakłucia żyły podobojczykowej stanowi odpowiednią alternatywę dla poboru krwi u szczurów.
- Właściwe przeszkolenie i technika są kluczowe dla powodzenia zabiegu.
- Niniejszy protokół może usprawnić wyniki badań w różnorodnych projektach naukowych.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla Przemysłu
Niezawodne pobieranie krwi w przedklinicznych modelach gryzoni jest kluczowe dla generowania wysokiej jakości danych farmakokinetycznych oraz danych dotyczących biomarkerów. Metoda punkcji żyły podobojczykowej stanowi alternatywę w przypadku niepowodzenia dostępu do żyły ogonowej, zapewniając ciągłość procesów badawczych i translacyjnych. Podejście to zwiększa niezawodność pozyskiwania próbek, redukując ryzyko niepowodzenia procedury i wspierając generowanie wiarygodnych danych niezbędnych do podejmowania decyzji dotyczących portfela projektów.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia spójne pobieranie wystarczającej objętości krwi do późniejszych analiz molekularnych i biochemicznych.
- Zmniejsza ryzyko utraty próbek, wspierając nieprzerwane badania walidacji celu.
- Ułatwia biologiczne ograniczanie ryzyka poprzez zapewnienie niezawodnego dostępu do biomarkerów systemowych.
- Zwiększa pewność predykcyjną w ocenach farmakologicznych i toksykologicznych na wczesnym etapie.
Przesiewanie i opracowywanie testów
- Zapewnia zwalidowany materiał wejściowy do opracowania i standaryzacji analizy.
- Poprawia powtarzalność odczytów ilościowych poprzez minimalizację liczby nieudanych pobrań.
- Umożliwia skalowalność badań wymagających wielu próbek lub próbek o dużych objętościach.
- Wspiera procesy przesiewowe, zapewniając integralność próbek i spójność ich objętości.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Jest zgodne z translacyjnymi badaniami nad biomarkerami, które wymagają osocza lub surowicy z modeli gryzoni.
- Utrzymuje ciągłość od etapu odkrycia po walidację przedkliniczną poprzez redukcję wąskich gardeł proceduralnych.
- Wspiera zaawansowanie projektów z uwzględnieniem ryzyka poprzez minimalizowanie luk w danych wynikających z błędów w pobieraniu próbek.
- Poprawia predykcyjne ograniczanie ryzyka w badaniach nad ekspozycją systemową i korelacją biomarkerów.
Integracja potoku i przepływu pracy
Metoda nakłucia żyły podobojczykowej wkomponowuje się w przedkliniczny schemat pracy jako alternatywna metoda pobierania krwi, łącząc fazy wczesnych odkryć, identyfikacji związków wiodących oraz badania translacyjne.
- Biologia odkrywcza: Zapewnia, że testowanie hipotez i analiza szlaków nie zostaną zaburzone przez błędy podczas pobierania próbek.
- Przesiewanie: Dostarcza powtarzalne, ilościowe próbki krwi do przygotowania i walidacji testów.
- Analityka: Zapewnia niezawodne osocze lub surowicę do analiz porównawczych w różnych warunkach eksperymentalnych.
- Badania translacyjne: Wspiera dopasowanie biomarkerów i ciągłość w modelach przedklinicznych.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje zestandaryzowany, możliwy do powtórnego wykorzystania protokół pobierania krwi we wszystkich badaniach i zespołach.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i redukuje niejednoznaczność mechanistyczną poprzez zapewnienie dostępności próbek.
- Wartość operacyjna: Standaryzuje pobieranie krwi, poprawiając odtwarzalność i skalowalność w obrębie badań.
- Wartość strategiczna: Umożliwia podejmowanie lepszych decyzji typu go/no-go poprzez minimalizację utraty danych wynikającej z błędów proceduralnych.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację skorygowaną o ryzyko poprzez redukcję biologicznego ryzyka na późnych etapach, wynikającego z niekompletnych zbiorów danych.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymaga przeszkolenia operatora w celu osiągnięcia stałego poziomu sukcesu i zminimalizowania powikłań.
- Wymaga standardowego wyposażenia laboratoryjnego, w tym strzykawek, probówek z antykoagulantem oraz możliwości wirowania.
- Wymaga standaryzacji międzyzespołowej w celu zapewnienia powtarzalności i porównywalności danych.
- Możliwość zastosowania zarówno przez doświadczonych, jak i początkujących operatorów przy minimalnej różnicy w odsetku sukcesów.
- Ograniczone koniecznością zastosowania narkozy ogólnej i uważnego monitorowania po zabiegu w celu zapobiegania powikłaniom.
