Nowatorskie rozpoznawanie obiektów i testy behawioralne lokalizacji obiektów u myszy przy ograniczonym budżecie

Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące regulacji pamięci. Na przykład określamy rolę określonych białek w pamięci, testując transgeniczne myszy z nokautem w tych zadaniach. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest to szybki i opłacalny sposób przeprowadzania testów pamięci w dowolnym laboratorium.

Demonstracja konstrukcji areny ma kluczowe znaczenie, ponieważ spawanie rozpuszczalnikiem przyniesie dobre wyniki tylko wtedy, gdy zostanie wykonane z należytą starannością. Zacznij od zdobycia pięciu arkuszy akrylu, cementu akrylowego i aplikatora hipo o rozmiarze 16. Usuń papierową powłokę ochronną z arkuszy akrylowych.

Następnie dopasuj wszystkie materiały na sucho, aby potwierdzić, że rozmiary są prawidłowe. Następnie zmontuj i załaduj strzykawkę cementem akrylowym. Wyrównaj długą krawędź ściany zewnętrznej z górną krawędzią podstawy i upewnij się, że są one prostopadłe do siebie za pomocą kwadratu kombinowanego lub kwadratu operatora.

Następnie za pomocą strzykawki nałóż małą i stabilną warstwę cementu bezpośrednio na róg dwóch łączonych elementów. Przytrzymaj dwa elementy na miejscu przez pięć minut, aż wstępnie się zestalą. Powtórz te same kroki, aby przymocować drugą ścianę zewnętrzną do podstawy.

Następnie przymocuj dwie ściany wewnętrzne, pojedynczo, podstawę za pomocą cementu akrylowego. Na koniec za pomocą strzykawki nałóż małą i stabilną kroplę cementu bezpośrednio na narożnik tworzony teraz przez ścianę zewnętrzną i ścianę wewnętrzną. Rozpocznij sesję habituacyjną od podzielenia myszy na grupy po cztery i umieść je w osobnych, czystych klatkach.

Następnie przyprowadź jedną grupę myszy do pokoju testowego i pozwól im zaaklimatyzować się przez co najmniej 30 minut. Po aklimatyzacji rozpocznij nagrywanie wideo. Umieść każdą mysz na arenie przodem do ścian rogu zwalniania i pozwól myszom swobodnie eksplorować areny przez sześć minut.

Następnie przestań nagrywać wideo i przywróć myszy do ich czystych klatek podczas przerwy między próbami. Wyczyść wszystkie areny za pomocą metod czyszczenia zalecanych przez zwierzęta, takich jak przecieranie 70% etanolem, aby zminimalizować sygnały węchowe. Na koniec, po wykonaniu łącznie trzech sesji habituacji, przywróć wszystkie myszy do ich domowych klatek.

Po 24 godzinach przynieś tę samą grupę myszy do pokoju testowego i pozwól im zaaklimatyzować się w pomieszczeniu testowym przez co najmniej 30 minut, tak jak to miało miejsce przed sesjami przyzwyczajenia poprzedniego dnia. Przeprowadź próbę treningową przy użyciu dwóch obiektów umieszczonych na arenie. Przymocuj przedmioty taśmą dwustronną w odległości sześć na sześć centymetrów od dwóch niezwalniających narożników, tak aby były przeciwwagi na arenie.

Pozwól myszom swobodnie badać arenę i obiekty przez 10 minut. Następnie zatrzymaj nagrywanie wideo. Umieść myszy z powrotem w czystych klatkach na 20 minut i oczyść obszary etanolem.

Następnie, aby wykonać zadanie lokalizacji obiektu OLT, przenieś jeden z obiektów używanych w próbie szkoleniowej do nowego narożnika bez zwalniania i przymocuj obiekt sześć centymetrów od każdej ściany tego narożnika za pomocą taśmy dwustronnej. Powtórz to samo nagranie wideo myszy w okolicy przez 10 minut, jak opisano wcześniej. Na koniec, aby wykonać zadanie rozpoznawania nowego obiektu NORT, zastąp obiekt, który nie został przeniesiony podczas OLT, nowym obiektem i przymocuj nowy obiekt sześć centymetrów od dwóch ścian rogu za pomocą taśmy dwustronnej.

Powtórz to samo nagranie wideo myszy w okolicy przez 10 minut, jak opisano wcześniej. Podczas OLT pamięć o lokalizacji obiektu jest odzwierciedlana przez grupę myszy spędzających średnio znacznie więcej czasu z obiektem po jego przemieszczeniu. Można to również przedstawić jako wzrost wskaźnika dyskryminacji.

W NORT pamięć o lokalizacji obiektu jest odzwierciedlona przez grupę myszy spędzających średnio znacznie ponad 50% czasu badawczego z nowym obiektem lub wykazujących wskaźnik dyskryminacji znacznie większy od zera. Wybieranie obiektów, do których myszy nie mają wrodzonych preferencji, jest kluczowe. Na przykład w teście pilotażowym z próbą o wielkości czterech myszy wykazywały tendencję do spędzania mniej niż 50% czasu badania z obiektem A, gdy zostały sparowane z obiektem B. Kiedy obiekt A został następnie użyty jako nowy obiekt w NORT, przy większej wielkości próby wynoszącej 16, myszy spędziły znacznie mniej niż 50% czasu badania z obiektem A. Dane te sugerują wrodzoną awersję do obiektu A. Podczas tej procedury, Ważne jest, aby pamiętać o dokładnym czyszczeniu wszystkich przedmiotów i aren między użyciem.

W tej metodzie badanie obiektów może być oceniane ręcznie przez badaczy lub za pomocą komercyjnego oprogramowania. Oprogramowanie wiąże się z wyższymi kosztami początkowymi, ale po skalibrowaniu może zaoszczędzić czas i zasoby finansowe w dłuższej perspektywie.