Name: Zahamowanie wzrostu komórek szpiczaka mnogiego in vivo za pomocą jednościennych nanorurek węglowych (SWCNT) dostarczanych przez antysensowne oligonukleotydy MALAT1 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Poznaj metodę dostarczania oligonukleotydów za pomocą jednościennych nanorurek węglowych w leczeniu szpiczaka mnogiego. Technika ta zwiększa efektywność terapii in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują rdzeniom proteomicznym, genomicznym i obrazowym Instytutu Badawczego Lerner za ich pomoc i wsparcie. Finansowanie: Praca ta była wspierana finansowo przez grant NIH/NCI R00 CA172292 (dla J.J.Z.) i fundusze na rozpoczęcie działalności (dla J.J.Z.) oraz Clinical and Translational Science Collaborative (CTSC) of Case Western Reserve University Core Utilization Pilot Grant (dla J.J.Z.). W pracy wykorzystano mikroskop konfokalny Leica SP8, który został zakupiony dzięki dofinansowaniu z grantu National Institutes of Health SIG 1S10OD019972-01.

Wszystkie eksperymenty z udziałem zwierząt zostały wstępnie zatwierdzone przez Cleveland Clinic IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee).
1. Synteza funkcjonalizowanych SWCNT
<ol>
	<li>Wymieszaj 1 mg SWCNT, 5 mg DSPE-PEG2000-aminy i 5 ml sterylizowanej wody wolnej od nukleaz w szklanej fiolce scyntylacyjnej (20 ml). Dobrze wstrząśnij, aby całkowicie rozpuścić wszystkie odczynniki.</li>
	<li>Poddaj sonifikację fiolki w łaźni wodnej o mocy 40 W przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej (RT, 20 min x 3, zmieniaj wodę co 20 minut, aby uniknąć przegrzania). Następnie odwirować go w temperaturze 24 000 x g przez 6 godzin i zebrać roztwór sklarowanego osadu. Ten funkcjonalny roztwór SWCNT może być przechowywany w temperaturze 4 °C przez 2 miesiące.</li>
	<li>Dodaj 1 ml roztworu SWCNT z kroku 1.2 do filtra odśrodkowego MWCO o mocy 100 kDa, a następnie 4 ml wysterylizowanej wody wolnej od nukleaz. Wirować przez 10 minut przy 4,000 x g w temperaturze pokojowej, aby usunąć nadmiar DSPE-PEG2000-aminy. Powtórz dodawanie 4 ml wody i odwirowanie 5 razy. Więcej niż 0,5 ml pozostałego roztworu SWCNT pozostanie w filtrze po każdym odwirowaniu.</li>
	<li>Zmierzyć stężenie roztworu SWCNT pozostałego w filtrze za pomocą spektrometru UV/VIS przy długości fali 808 nm po ostatnim płukaniu. Końcowe stężenie wynosi zazwyczaj około 50 mg/L (obliczone zgodnie z metodą opracowaną przez Kam et al.18). 
	nuta: Upewnij się, że SWCNT funkcjonalizowane DSPE-PEG są rozpuszczalne w wodzie po kroku 1.4 i są stabilne w różnych roztworach biologicznych bez widocznej agregacji po kilku tygodniach.</li>
</ol>
2. Koniugacja DNA gapmera anty-MALAT1 otoczonego zmodyfikowanymi 2'-O RNA do funkcjonalizowanego SWCNT
<ol>
	<li>Dodać 0,5 mg sulfo-LC-SPDP do 450 μl SWCNT funkcjonalizowanego DSPE-PEG2000-aminą. Dodać 50 μl 10x PBS, a następnie inkubować przez 2 godziny w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Aby usunąć nadmiar sulfo-LC-SPDP, dodaj reakcję z kroku 2.1 do odśrodkowego urządzenia filtrującego MWCO o mocy 100 kDa, a następnie 4 ml wody wolnej od nukleaz. Wirować przez 10 minut przy 4 000 x g w suchej temperaturze pokojowej. Powtórzyć dodawanie 4 ml wody i odwirowanie 5 razy.</li>
	<li>Dodać 200 nM zmodyfikowanego tiolem DNA gapmerowego anty-MALAT1-Cy3 do 1,5 ml komercyjnego roztworu DTT i inkubować przez 90 minut w temperaturze pokojowej. Oczyść produkt za pomocą kolumny NAP-5, postępując zgodnie z protokołem producenta. Eluować anty-MALAT1-Cy3 za pomocą 500 μl sterylizowanego produktu wolnego od nukleaz 1x PBS. 
	nuta: Funkcjonalizowany SWCNT może być przechowywany z dodatkiem DTT, który może rozszczepiać wiązania dwusiarczkowe powstałe podczas przechowywania tiolowanego DNA gapmeru anty-MALAT1. Dodane DTT można usunąć za pomocą kolumny NAP-5 przed koniugacją z SWCNT.</li>
	<li>Zebrać roztwór DSPE-PEG2000-aminy SWCNT nasączony sulfo-LC-SPDP pozostawiony w filtrze i rozcieńczyć go 500 μl roztworu anty-MALAT1-Cy3. Następnie inkubować w temperaturze 4 °C przez 24 godziny. Sprzężony SWCNT-anty-MALAT1 może być przechowywany w temperaturze 4 °C przez 3 tygodnie. Postępując zgodnie z tą samą procedurą, sprzężony SWCNT z mieszającym się antysensownym oligo może być zsyntetyzowany i użyty jako kontrola SWCNT.</li>
</ol>
3. Wstrzyknięcie do żyły ogonowej SWCNT-Anti-MALAT1
<ol>
	<li>Wygeneruj model myszy z rozsianym MM.
	<ol>
		<li>Aby osiągnąć najlepsze wyniki porównania, losowo ułóż 14 NOD. Myszy CB17-Prkdcscid / J (8 tygodni) do grup próbnych lub kontrolnych (siedem w każdej grupie) o tym samym stosunku samców / samic.</li>
		<li>Wyczyść stół operacyjny i wysterylizuj go 70% alkoholem.</li>
		<li>Użyj lampy grzewczej, aby ogrzać mysz, aby pomóc w pojawieniu się żyły ogonowej. Odpowiednio unieruchomić mysz za pomocą ogranicznika do wstrzykiwania ogona.</li>
		<li>Wstrzyknąć 5 x 106 MM.1S-Luc-mCherry w 50 μl PBS przez żyłę ogonową bez znieczulenia. Uciskać miejsce wstrzyknięcia wacikiem nasączonym alkoholem przez 30 s. Zaznacz mysz, której wstrzyknięto implant i umieść ją z powrotem w czystej klatce.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Leczenie należy rozpocząć w 7 dniu po wstrzyknięciu komórek MM.1S.
	<ol>
		<li>Wstrzyknąć 50 μl PBS zawierającego SWCNT-anty-MALAT1 do żyły ogonowej myszy. Użyj PBS zawierającego formant SWCNT-control jako formantu.</li>
		<li>Uciskać miejsce wstrzyknięcia wacikiem nasączonym alkoholem przez 30 s.</li>
		<li>Obserwuj miejscowe krwawienie na ogonie i ogólne zachowanie myszy przez 1 minutę, a następnie umieść ją z powrotem w czystej klatce. Należy ponownie obserwować wszystkie myszy, którym wstrzyknięto implanty przed umieszczeniem klatki z powrotem w stojaku, aby upewnić się, że zastrzyki są dobrze tolerowane.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Powtarzaj wstrzyknięcie co 7 dni, aż do zakończenia eksperymentu.
	<ol>
		<li>Eksperyment należy przerwać, gdy ogólny stan zdrowia myszy ulegnie pogorszeniu: gdy nie je ani nie pije, obserwuje się pojawienie się bladych łap, krwawienie podskórne, duszność, zmniejszoną aktywność, paraliż kończyn dolnych i/lub dotykalną masę w jamie brzusznej.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Ocena postępu choroby
<ol>
	<li>Oceniaj ogólny stan myszy każdego dnia po wstrzyknięciu komórek MM.1S-Luc-mCherry. Zwróć szczególną uwagę, jeśli u myszy rozwijają się paraliże kończyn dolnych.</li>
	<li>Oceń wzrost guza za pomocą systemu obrazowania in vivo 1 raz w tygodniu, przed wstrzyknięciem SWCNT-anty-MALAT1.
	<ol>
		<li>Przygotuj świeże 15 mg / ml D-Lucyferyny z 1x PBS.</li>
		<li>Znieczulenie myszy za pomocą parownika izofluranu (3-5% w przypadku indukcji i 1-3% w celu konserwacji, w zależności od stanu myszy).</li>
		<li>Wstrzyknąć 150 mg / kg D-Lucyferyny każdej myszy dootrzewnowo, 5 minut przed obrazowaniem; następnie zobrazować myszy w pozycji leżącej za pomocą systemu obrazowania spektrum.</li>
		<li>Zbieraj sekwencyjne obrazy myszy co 2 minuty, aż do osiągnięcia nasycenia luminescencją. Dostosuj czas interwału zgodnie z wychwytem/sygnałem D-Lucyferyny.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Użyj CO2 do złożenia w ofierze myszy po zakończeniu eksperymentu.</li>
	<li>Ponieważ jest to model rozsieskany przez MM, przetwarzaj myszy w następujący sposób.
	<ol>
		<li>Zważ mysz przed sekcją.</li>
		<li>Zbierz krew obwodową z serca do pełnego testu morfologii krwi (CBC) wykonanego przez maszynę do liczenia krwinek. Pierwszorzędowymi wskaźnikami są liczba białych krwinek i czerwonych krwinek, a także stosunek limfocytów.</li>
		<li>Odizoluj śledzionę i zważ ją. Obliczyć stosunek masy śledziony do masy ciała; Rozważ >0,5% jako powiększenie śledziony.</li>
		<li>Zbierz tkanki szpiku kostnego, śledziony, węzłów chłonnych, nerek i tkanki z widocznymi przerzutami.</li>
		<li>Zbierz kręgosłup, jeśli u myszy rozwinął się paraliż kończyn dolnych.</li>
		<li>Ekstrakcja RNA i białka z próbek szpiku kostnego.</li>
		<li>Utrwal wszystkie pozostałe tkanki w formalinie.</li>
		<li>W celu odwapnienia zanurzyć próbki kości w 0,25 M roztworze EDTA (pH 8,0) na 5 dni po 24 godzinach utrwalania.</li>
		<li>Zanurz wszystkie próbki w 75% alkoholu w celu długotrwałego przechowywania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Porównaj siłę sygnału lucyferazy w tych samych punktach czasowych w dwóch grupach. Z obu grup zapisz daty poświęcenia każdej myszy i oblicz krzywe przeżycia obu grup za pomocą oprogramowania. 
	nuta: Wszystkie procedury są podsumowane w Rysunek 1.</li>
</ol>

<ol><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNase+non-sensitive+and+endocytosis+independent+siRNA+delivery+system%3A+delivery+of+siRNA+into+tumor+cells+and+high+efficiency+induction+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis.</a> Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).</li>
<li>Murakami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water-dispersed+single-wall+carbon+nanohorns+as+drug+carriers+for+local+cancer+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy.</a> Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).</li>
<li>Kam, N. W., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+protein+transporters%3A+generality+and+biological+functionality%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalization+of+carbon+nanotubes+via.+cleavable+disulfide+bonds+for+efficient+intracellular+delivery+of+siRNA+and+potent+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+transporters+for+proteins+and+DNA%3A+an+investigation+of+the+uptake+mechanism+and+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition+in+English%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).</li>
<li>Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+concepts+of+epigenetic+dysregulation+in+hematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies.</a> Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).</li>
<li>Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bright+side+of+dark+matter%3A+lncRNAs+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).</li>
<li>Ronchetti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+lncRNA+transcriptional+fingerprints+characterize+progressive+stages+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma.</a> Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).</li>
<li>Wong, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+silencing+of+a+long+non-coding+RNA+KIAA0495+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma.</a> Molecular Cancer. 14, 175(2015).</li>
<li>Schmidt, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+long+noncoding+MALAT-1+RNA+indicates+a+poor+prognosis+in+non-small+cell+lung+cancer+and+induces+migration+and+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Oncology%22%5BJournal%5D)">The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth.</a> Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).</li>
<li>Ji, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT-1%2C+a+novel+noncoding+RNA%2C+and+thymosin+beta4+predict+metastasis+and+survival+in+early-stage+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer.</a> Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).</li>
<li>Luo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+and+genomic+analysis+of+human+hepatocellular+carcinomas+and+hepatoblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas.</a> Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).</li>
<li>Guffanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transcriptional+sketch+of+a+primary+human+breast+cancer+by+454+deep+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing.</a> BMC Genomics. 10, 163(2009).</li>
<li>Cho, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT1+long+non-coding+RNA+is+overexpressed+in+multiple+myeloma+and+may+serve+as+a+marker+to+predict+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression.</a> BMC Cancer. 14, 809(2014).</li>
<li>Handa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+MALAT1+is+an+inducible+stress+response+gene+associated+with+extramedullary+spread+and+poor+prognosis+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma.</a> British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+MALAT1%2FPARP1%2FLIG3+complex+induces+DNA+damage+and+apoptosis+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Lennox, K. A., Behlke, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+localization+of+long+non-coding+RNAs+affects+silencing+by+RNAi+more+than+by+antisense+oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides.</a> Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).</li>
<li>Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+multifunctional+biological+transporters+and+near-infrared+agents+for+selective+cancer+cell+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).</li>
<li>Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+polyethylene+glycol+integrity+in+specific+receptor+targeting+of+carbon+nanotubes+to+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells.</a> Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).</li>
<li>Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+modifications+in+multiple+myeloma%3A+recent+advances+on+the+role+of+DNA+and+histone+methylation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Therapeutic+Targets%22%5BJournal%5D)">Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).</li>
<li>Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+theragnostics+for+the+clinical+management+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma.</a> Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).</li>
<li>Amodio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugging+the+lncRNA+MALAT1+via.+LNA+gapmeR+ASO+inhibits+gene+expression+of+proteasome+subunits+and+triggers+anti-multiple+myeloma+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Highleyman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+approves+fomivirsen%2C+famciclovir%2C+and+Thalidomide.+Food+and+Drug+Administration%5BTitle%5D)+AND+%22BETA%22%5BJournal%5D)">FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration.</a> BETA. 5, (1998).</li>
<li>Smith, R. J., Hiatt, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+new+drugs+for+homozygous+familial+hypercholesterolemia%3A+managing+benefits+and+risks+in+a+rare+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder.</a> JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).</li>
<li>Aartsma-Rus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+Approval+of+Nusinersen+for+Spinal+Muscular+Atrophy+Makes+2016+the+Year+of+Splice+Modulating+Oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acid+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides.</a> Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).</li>
<li>Nelson, S. F., Miceli, M. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28399245">FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy.</a> The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).</li>
<li>Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+chemistry+on+water-soluble+carbon+nanotubes+for+drug+loading+and+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery.</a> American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).</li>
<li>Ali-Boucetta, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiwalled+carbon+nanotube-doxorubicin+supramolecular+complexes+for+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+communications+%28Cambridge%29%22%5BJournal%5D)">Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics.</a> Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).</li>
<li>Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15672140">Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes.</a> Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).</li>
<li>Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+single-walled+carbon+nanotube+solubility+by+noncovalent+PEGylation+using+experimental+design+methods%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).</li>
<li>Padilla-Parra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+endosome+acidification+and+single+retrovirus+fusion+with+distinct+pools+of+early+endosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).</li>
<li>Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH-sensitive+poly%28histidine%29-PEG%2FDSPE-PEG+co-polymer+micelles+for+cytosolic+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery.</a> Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).</li>
<li>Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+polyion+complex+micelles+for+targeted+intracellular+delivery+of+PEGylated+antisense+oligonucleotides+containing+acid-labile+linkages%5BTitle%5D)+AND+%22Chembiochem%22%5BJournal%5D)">Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages.</a> Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).</li>
<li>Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+polyethylenimine-grafted+graphene+nanoribbon+for+cellular+delivery+of+locked+nucleic+acid+modified+molecular+beacon+for+recognition+of+microRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA.</a> Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).</li>
<li>Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+reduction+of+disulfide+bonds+in+lysosomes%3A+characterization+of+a+gamma-interferon-inducible+lysosomal+thiol+reductase+%28GILT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).</li>
<li>Lelimousin, M., Sansom, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+perturbation+by+carbon+nanotube+insertion%3A+pathways+to+internalization%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization.</a> Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).</li>
<li>Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertion+mechanism+and+stability+of+boron+nitride+nanotubes+in+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers.</a> J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+tracking+of+endocytosis+and+exocytosis+of+single-walled+carbon+nanotubes+in+NIH-3T3+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells.</a> Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+cellular+uptake+and+expulsion+of+single-walled+carbon+nanotubes%3A+single+particle+tracking+and+a+generic+uptake+model+for+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles.</a> American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).</li>
<li>Ruggiero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradoxical+glomerular+filtration+of+carbon+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Dowody wykazały, że lncRNA biorą udział w regulacji wielu procedur fizjologicznych i patofizjologicznych w nowotworach, w tym MM 7,8,9; Mają potencjał, aby stać się celem leczenia raka, które może być realizowane za pomocą oligonukleotydów antysensownych 20,21,22. Amerykańska Agencja ds. Żywności i Leków (FDA) zatwierdziła kilka antysen...

SWCNT to nowatorski nanomateriał, który może stabilnie i efektywnie dostarczać różne rodzaje leków, takie jak białka, małe cząsteczki i kwasy nukleinowe, z idealną tolerancją i minimalną toksycznością in vitro1 i in vivo2. Funkcjonalizowany SWCNT ma doskonałą biokompatybilność i rozpuszczalność w wodzie, może być używany jako wahadłowiec dla mniejszych cząsteczek i może przenosić je w celu penetracji błony komórkowej3,4,5.
lncRNA to klaster RNA (>200 nt), który jest transkrybowany z genomu na mRNA, ale nie może być translowany na białka. Coraz więcej dowodów wskazuje na to, że lncRNA uczestniczą w regulacji ekspresji genów6 i są zaangażowane w inicjację i progresję większości typów raka, w tym MM7,8,9. MALAT1 jest wzbogaconym jądrowo niekodującym transkryptem 2 (NEAT2) i wysoce konserwatywnym lncRNA10. MALAT1 jest początkowo rozpoznawany w przerzutowym niedrobnokomórkowym raku płuca (NSCLC)11, ale uległ nadekspresji w wielu nowotworach5,12,13; jest to jeden z najbardziej eksprymowanych lncRNA i jest skorelowany ze złym rokowaniem w MM8,14. Poziom ekspresji MALAT1 jest znacznie wyższy u pacjentów z szpiczakiem szpikowym o przebiegu śmiertelnym w porównaniu z tymi, u których zdiagnozowano tylko MM15.
W poprzednim badaniu potwierdziliśmy, że oligonukleotydy anty-MALAT1 zdecydowanie prowadzą do uszkodzenia DNA i apoptozy w MM16 poprzez użycie oligonukleotydów antysensownych DNA gapmer ukierunkowanych na MALAT1 (anty-MALAT1) w komórkach MM. Gapmer DNA składa się z antysensownego DNA i jest połączone 2'-OMe-RNA, które mogą wywołać rozszczepienie MALAT1 przez aktywność RNazy H po związaniu17. Skuteczność dostarczania oligonukleotydów antysensownych in vivo nadal ogranicza ich zastosowanie kliniczne.
Aby przetestować efekt dostarczania SWCNT dla oligonukleotydów anty-MALAT1, DNA anty-MALAT1 jest sprzężone z SWCNT funkcjonalizowanym DSPE-PEG2000-aminą. SWCNT-anty-MALAT1 jest następnie wstrzykiwany dożylnie do mysiego modelu rozsianego MM; Uderzające zahamowanie obserwuje się po czterech zabiegach.

<table><tbody><tr><td>SWCNTs</td><td>Millipore-Sigma</td><td>704113</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000-Amine</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880128</td><td></td></tr><tr><td>sonikator do kąpieli</td><td>VWR</td><td>97043-992</td><td></td></tr><tr><td>Filtr odśrodkowy 4 ml</td> Spektrometr UV/VIS <td>Millipore-Sigma</td><td>Z740208-8EA</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>accuSkan GO Spektrofotometr</td> <td>mikropłytkowy UV/Viswspółczynnik ekstynkcji: 0,0465 L/mg/cm przy 808 nm</td></tr><tr><td>Sulfo-LC-SPDP</td><td>ProteoChem</td><td>c1118</td><td></td></tr><tr><td>roztwór DTT</td><td>Millipore-Sigma</td><td>43815</td><td></td></tr><tr><td>kolumna NAP-5</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0853-01</td><td></td></tr><tr><td>system obrazowania in vivo</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NOD. CB17-Prkdcscid/J myszy</td><td>Charles River lab</td><td>250</td><td></td></tr><tr><td>Cytometr przepływowy</td><td>Becton Dickinso</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Lipofectamine2000</td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>RMPI-1640 pożywka</td><td>Invitrogen</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>MALAT1-QF:</td> <td>zsyntetyzowane przez IDT Przedsiębiorstwo</td><td></td><td>5'- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'</td></tr><tr><td>MALAT1-QR:</td> <td>zsyntetyzowany przez firmę</td><td></td> IDT <td>5'- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QF:</td> <td>zsyntetyzowany przez firmę</td><td></td> IDT <td>5'- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QR:</td> <td>zsyntetyzowany przez firmę</td><td></td> IDT <td>5'- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'</td></tr><tr><td>Ilościowy PCR z użyciem SYBR Green PCR master mix</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A25780</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do syntezy cDNA RevertAid</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>K1621</td><td></td></tr><tr><td>anty-MALAT1</td><td>syntetyzowany przez firmę</td><td></td> IDT <td>5'-mC*mG*mA*mA*mA*A*T*T *G*G*C*A*C*A*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'</td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania żywotności komórek</td><td>Promega Corporation</td><td>G7570</td><td>Zestaw do oznaczania żywotności komórek CellTiter-GloLuminescent</td></tr><tr><td>accuSkan GO UV/Vis Spektrofotometr mikropłytkowy Thermo</td><td>Fisher Naukowy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>filtr odśrodkowy</td><td>Millipore-Sigma</td><td>UFC910008</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie SPSS</td><td>IBM</td><td>wersja 24.0</td><td></td></tr><tr><td>D-Lucyferin</td><td>Millipore-Sigma</td><td>L9504</td><td></td></tr></tbody></table>

zahamowanie wzrostu komórek szpiczaka mnogiego in vivo za pomocą jednościennych nanorurek węglowych (swcnt) dostarczanych przez antysensowne oligonukleotydy malat1

Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube (SWCNT)-delivered MALAT1 Antisense Oligos

Jednościenna nanorurka węglowa (SWCNT) to nowy rodzaj nanocząsteczki, która została wykorzystana do dostarczania do komórek wielu rodzajów leków, takich jak białka, oligonukleotydy i syntetyczne leki małocząsteczkowe. SWCNT ma konfigurowalne wymiary, dużą powierzchnię powierzchniową i może elastycznie wiązać się z lekami poprzez różne modyfikacje na swojej powierzchni; Dlatego jest to idealny system do transportu leków do komórek. Długie niekodujące RNA (lncRNA) to skupisko niekodującego RNA dłuższego niż 200 nt, którego nie można przetłumaczyć na białko, ale odgrywają ważną rolę w procesach biologicznych i patofizjologicznych. Transkrypt 1 gruczolakoraka płuc związany z przerzutami (MALAT1) jest wysoce konserwatywnym lncRNA. Wykazano, że wyższe poziomy MALAT1 są związane ze złym rokowaniem w przypadku różnych nowotworów, w tym szpiczaka mnogiego (MM). Ujawniliśmy, że MALAT1 reguluje naprawę DNA i śmierć komórki w MM; w związku z tym MALAT1 może być uważany za cel terapeutyczny dla MM. Jednak skuteczne dostarczanie oligo antysensownego w celu zahamowania/knockdown MALAT1 in vivo nadal stanowi problem. W tym badaniu modyfikujemy SWCNT za pomocą PEG-2000 i sprzęgamy z nim oligo anty-MALAT1, testujemy dostarczanie tego związku in vitro, wstrzykujemy go dożylnie do rozsianego modelu myszy MM i obserwujemy znaczne zahamowanie progresji MM, co wskazuje, że SWCNT jest idealnym transportem dostarczającym DNA anty-MALAT1.

Aby zademonstrować efekt hamujący gapmer DNA anty-MALAT1 w MM, wyciszono ekspresję MALAT1 w komórkach H929 oraz MM.1S. Po czterdziestu ośmiu godzinach komórki zebrano w celu analizy wydajności wyciszenia oraz stanu apoptozy w komórkach transfekowanych gapmerem anty-MALAT1 lub kontrolnym DNA. Wyniki qRT-PCR wykazały, że gapmer DNA anty-MALAT1 efektywnie wyciszył ekspresję MALAT1 w komórkach H929 i MM.1S (Rycina 2A). Stan apoptozy określono za ...

Ten manuskrypt opisuje syntezę jednościennego oligonukleotydu antysensownego DNA MALAT1 z nanorurkami węglowymi (SWCNT) (SWCNT-anty-MALAT1), który demonstruje niezawodne dostarczanie SWCNT i silny efekt terapeutyczny anty-MALAT1 in vitro i in vivo. Opisano metody stosowane do syntezy, modyfikacji, koniugacji i wstrzykiwania SWCNT-anty-MALAT1.

Zahamowanie wzrostu komórek szpiczaka mnogiego in vivo za pomocą jednościennych nanorurek węglowych (SWCNT) dostarczanych przez antysensowne oligonukleotydy MALAT1

The single-wall carbon nanotube (SWCNT) is a new type of nanoparticle, which has been used to deliver multiple kinds of drugs into cells, such as ...

Metoda, którą tutaj stosujemy, może pomóc w upakowaniu oligonukleotydu w jednościenne nanorurki węglowe, które są nowym rodzajem nanocząstek do dostarczania leków. Główną zaletą tej techniki jest efektywniejsze dostarczanie leków oligonukleotydowych do komórek in vivo. Implikacje tej techniki rozciągają się na badania nad szpiczakiem mnogim, ponieważ wprowadzono w niej nanocząstki w celu poprawy dostarczania leków oligonukleotydowych.Dzięki tej metodzie moze dostarczyc informacji na temat leczenia szpiczaka mnogiego. Może być również stosowany do innych chorób i sprzężony z innymi ładunkami, takimi jak białka i małe cząsteczki. Najpierw wymieszaj jeden miligram jednościennych nanorurek węglowych, pięć miligramów aminy DSPE-PEG 2000 i pięć mililitrów sterylizowanej wody wolnej od nukleaz w 20-mililitrowej szklanej fiolce scyntylacyjnej.Poddać sonifikację fiolki w łaźni wodnej o mocy 90 watów przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Po sonikacji odwirować fiolkę pod ciśnieniem 24 000 g przez sześć godzin. Następnie zebrać roztwór sklarowany nad osadem.Dodaj jeden mililitr jednościennego roztworu nanorurek węglowych do 100-kilodaltonowego filtra odśrodkowego odgraniczającego masę cząsteczkową, a następnie cztery mililitry wysterylizowanej wody wolnej od nukleaz. Wirować przez 10 minut 4 000 razy g w temperaturze pokojowej, aby usunąć nadmiar aminy. Dodaj 0,5 miligrama sulfo-LC-SPDP do 450 mikrolitrów jednościennej nanorurki węglowej funkcjonalizowanej aminą.Następnie dodaj 50 mikrolitrów 10x PBS i inkubuj przez dwie godziny w temperaturze pokojowej. Następnie dodaj mieszaninę reakcyjną do 100-kilodaltonowego filtra odśrodkowego odgraniczającego masę cząsteczkową, a następnie cztery mililitry wody wolnej od nukleaz. Odwirować próbkę przez 10 minut w temperaturze 4 000 g w temperaturze pokojowej w celu usunięcia nadmiaru sulfo-LC-SPDP.Zebrać jednościenny roztwór jednościennych nanorurek węglowych z aminy nasączony Sulfo-LC-SPDP pozostawiony w filtrze i rozcieńczyć go 500 mikrolitrami wcześniej przygotowanego roztworu anty-MALAT1-Cy3. Następnie inkubować próbkę w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez noc. Aby osiągnąć najlepsze wyniki porównania, losowo umieść 14 myszy w grupach próbnych lub kontrolnych po siedem w każdej grupie i z tym samym stosunkiem samców do samic w każdej grupie.Następnie wyczyść stół operacyjny i wysterylizuj go 70% alkoholem etylowym. Użyj lampy grzewczej, aby ogrzać jedną z myszy, aby pomóc w pojawieniu się żyły ogonowej. Odpowiednio unieruchomić mysz za pomocą ogranicznika do wstrzykiwania ogona.Wstrzyknąć MM.1S-luc/mCherry w 50 mikrolitrach PBS przez żyłę ogonową. Uciskać miejsce wstrzyknięcia wacikiem nasączonym alkoholem przez 30 sekund. Następnie oznacz mysz, której wstrzyknięto iniekcję i umieść ją z powrotem w czystej klatce.Siódmego dnia, po wstrzyknięciu komórki MM1S, wstrzyknij 50 mikrolitrów PBS zawierającego jednościenną nanorurkę węglową anty-MALAT1 do żyły ogonowej myszy. Następnie należy uciskać miejsce wstrzyknięcia wacikiem nasączonym alkoholem przez 30 sekund. Obserwuj miejscowe krwawienie na ogonie i ogólne zachowanie myszy przez jedną minutę, a następnie umieść ją z powrotem w czystej klatce.Należy ponownie obserwować wszystkie myszy, którym wstrzyknięto implanty przed umieszczeniem klatki z powrotem na stojaku, aby upewnić się, że wstrzyknięcia są dobrze tolerowane. Zważ każdą mysz przed sekcją. Zbierz krew obwodową z serca w celu przeprowadzenia pełnego testu morfologii krwi za pomocą licznika krwinek.Następnie należy pobrać tkanki szpiku kostnego, śledziony, węzła chłonnego, nerki oraz tkanki z widocznymi przerzutami. Ekstrakcja RNA i białka z próbek szpiku kostnego. Utrwal wszystkie pozostałe tkanki w formalinie.Po 24 godzinach od utrwalenia zanurz próbki kości w 0,5-molowym roztworze EDTA na pięć dni w celu odwapnienia. Następnie zanurz wszystkie próbki w 75% alkoholu etylowym w celu długotrwałego przechowywania. Wyniki QRT PCR wykazały, że DNA gapmeR anty-MALAT1 obniżyło ekspresję MALAT1 i znacząco indukowało apoptozę w komórkach H929 i MM.1S.Jednościenna nanorurka węglowa anty-MALAT1-Cy3 została dostarczona do jądra komórek MM i znacznie stłumiła endogenny poziom MALAT1 zarówno w komórkach H929, jak i MM.1S. Żywotność komórki BMEC-1 nie ma znaczącej różnicy po leczeniu jednościennymi nanorurkami węglowymi anty-MALAT1-Cy3 lub kontroli w różnych dawkach i punktach czasowych. Wskazuje to, że toksyczność jednościennych nanorurek węglowych anty-MALAT1-Cy3 ma ograniczoną i akceptowalną toksyczność dla normalnych komórek w wysokich dawkach.Stworzono ludzki model myszy z rozsiewem MM w celu oceny efektów leczenia jednościennymi nanorurkami węglowymi anty-MALAT1 in vivo. Sygnały lucyferonu myszy w grupie leczonej anty-MALAT1 jednościennymi nanorurkami węglowymi były znacznie niższe w porównaniu z grupą kontrolną po 21 dniach leczenia. Na podstawie tych wyników wywnioskowano, że leczenie anty-MALAT1 jednościennymi nanorurkami węglowymi poprzez wstrzyknięcie dożylne może skutecznie dostarczać oligonukleotydy anty-MALAT1 do komórek nowotworowych.Nie zaobserwowano żadnych istotnych skutków ubocznych leczenia, co wskazuje, że wstrzyknięcie anty-MALAT1 z jednościennych nanorurek węglowych jest bezpiecznym leczeniem dla myszy. Podejmując tę procedurę, należy pamiętać, że skład cząsteczek komórek będzie miał wpływ na dostarczanie, skuteczność i efekt terapeutyczny leków oligonukleotydowych. Po tej procedurze można wykonać inne metody, takie jak koniugacja białek lub małych cząsteczek, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania.Na przykład używanie jednościennych nanorurek węglowych do dostarczania innych leków.

repression-multiple-myeloma-cell-growth-vivo-single-wall-carbon

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Ludzkie komórki szpiczaka mnogiego (MM) wymagają wspierającego mikrośrodowiska komórek mezenchymalnych i składników macierzy zewnątrzkomórkowej do przetrwania i proliferacji. Stworzyliśmy model zarodka kurczaka in vivo z wszczepionym ludzkim szpiczakiem i komórkami mezenchymalnymi, aby zbadać wpływ leków przeciwnowotworowych na wzrost, inwazję i angiogenezę guza.

Opracowanie modelu ksenoprzeszczepu szpiczaka mnogiego u kurcząt w celu zbadania wzrostu, inwazji i angiogenezy guza

Tutaj opisujemy metodę długoterminowej mikroskopii poklatkowej do długotrwałego śledzenia pojedynczych komórek w odpowiedzi na terapie przeciwnowotworowe.

Po drugiej stronie lustra: mikroskopia poklatkowa i podłużne śledzenie pojedynczych komórek w celu zbadania terapii przeciwnowotworowych

Tutaj opisujemy dostarczanie mikroRNA za pomocą rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem serotypu 9 w mysim modelu choroby nerwowo-mięśniowej. Pojedyncze podanie obwodowe myszom spowodowało trwałą nadekspresję miRNA w neuronach mięśniowych i ruchowych, co dało możliwość zbadania funkcji miRNA i potencjału terapeutycznego in vivo.

Ogólnoustrojowe dostarczanie mikroRNA przy użyciu rekombinowanego serotypu 9 wirusa związanego z adenowirusem w leczeniu chorób nerwowo-mięśniowych u gryzoni

Tutaj używamy obrazowania bioluminescencyjnego, rentgenowskiego i pozytonowej tomografii emisyjnej/tomografii komputerowej, aby zbadać, jak hamowanie aktywności mTOR wpływa na guzy szpiczaka kostnego przeszczepionego szpiczakiem kostnym w modelu ksenoprzeszczepu. Pozwala to na fizjologicznie istotne, nieinwazyjne i multimodalne analizy działania przeciwszpiczaka mózgu terapii ukierunkowanych na guzy szpiczaka kostnego przeszczepione szpiczakiem kostnym in vivo.

Multimodalna bioluminescencyjna i pozytroniczna tomografia emisyjna/tomografia obliczeniowa ksenoprzeszczepów szpiczaka mnogiego szpiku kostnego u myszy NOG

Ten protokół opisuje mysie modele ksenoprzeszczepu i ortotopowego nowotworu ludzkiej tarczycy jako platformę do testowania terapii inhibitorami opartymi na mikroRNA. Takie podejście idealnie nadaje się do badania funkcji niekodujących RNA i ich potencjału jako nowych celów terapeutycznych.

Hamowanie in vivo mikroRNA w celu zmniejszenia wzrostu guza u myszy

terapia miRNA ma znaczący potencjał w regulowaniu progresji raka. Zademonstrowano tu podejścia analityczne stosowane do identyfikacji aktywności kombinatorycznego leczenia miRNA w zatrzymywaniu cyklu komórkowego i angiogenezie.

Analiza skojarzonych zabiegów miRNA w celu regulacji cyklu komórkowego i angiogenezy

Ta praca opisuje syntezę i charakterystykę dwufunkcyjnego homo-PROTAC na bazie pomalidomidu jako nowatorskie podejście do indukowania ubikwitynacji i degradacji cereblonu ligazy ubikwityny E3 (CRBN), celu analogów talidomidu.

Chemiczna inaktywacja cereblon ligazy ubikwityny E3 przez Homo-PROTAC na bazie pomalidomidu

Tutaj opisujemy metodę dostarczania leków do ośrodkowego układu nerwowego szczura poprzez wszczepienie cewnika w śródoponową przestrzeń lędźwiową kręgosłupa. Koncentrujemy się na dostarczaniu oligonukleotydów antysensownych, chociaż ta metoda nadaje się również do dostarczania innych metod terapeutycznych.

Dokanałowe dostarczanie oligonukleotydów antysensownych w ośrodkowym układzie nerwowym szczura

Tutaj opisujemy protokół dostarczania in vivo magnetycznych nanocząstek tlenku żelaza przenoszących oligomery RNA do przerzutowego raka piersi w modelach zwierzęcych, zapewniając klinicznie realne podejście do terapeutycznego wyciszania onkogennych kwasów nukleinowych.

Monitorowanie akumulacji nanoleków w przerzutach mysiego raka piersi

Bariera krew-mózg jest znaczącą przeszkodą w dostarczaniu terapii glejaka, choroby, na którą nie ma lekarstwa. W tym miejscu przedstawiamy sterowaną obrazem in vivo terapeutyczną platformę nano tlenku żelaza, która może ominąć tę fizjologiczną barierę ze względu na rozmiar i gromadzić się w guzie.

Dostarczanie nanocząstek ładunku oligonukleotydowego w modelu zwierzęcym glejaka wielopostaciowego

Poznaj metodę dostarczania oligonukleotydów za pomocą jednościennych nanorurek węglowych w leczeniu szpiczaka mnogiego. Technika ta zwiększa efektywność terapii in vivo.

Zahamowanie wzrostu komórek szpiczaka mnogiego in vivo za pomocą jednościennych nanorurek węglowych (SWCNT) dostarczanych przez antysensowne oligonukleotydy MALAT1 (Wideo) | JoVE Journal

Zahamowanie wzrostu komórek szpiczaka mnogiego in vivo za pomocą jednościennych nanorurek węglowych (SWCNT) dostarczanych przez antysensowne oligonukleotydy MALAT1

Przeglądaj więcej filmów