Name: Wzbogacanie i rozszerzanie rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu za pomocą nanocząstek magnetycznych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Poznaj metodę E plus E do jednoczesnego wzbogacania i rozszerzania rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu przy użyciu nanocząstek magnetycznych. Ta technika umożliwia badanie neoepitopów i zastosowania w immunoterapii nowotworowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

J.W.H. dziękuje NIH Cancer Nanotechnology Training Center w Johns Hopkins Institute for NanoBioTechnology, National Science Foundation Graduate Research Fellowship (DGE-1232825) oraz fundacji ARCS za wsparcie stypendialne. Prace te zostały sfinansowane dzięki wsparciu National Institutes of Health (P01-AI072677, R01-CA108835, R21-CA185819), TEDCO/Maryland Innovation Initiative oraz Coulter Foundation (JPS).

<ol><li>Prasad, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((immunotherapy%3A+Tisagenlecleucel-the+first+approved+Car-t-cell+therapy%3A+implications+for+payers+and+policy+makers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">immunotherapy: Tisagenlecleucel-the first approved Car-t-cell therapy: implications for payers and policy makers.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (1), 11(2018).</li>
<li>Jenkins, M. K., Moon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+naive+T+cell+precursor+frequency+and+recruitment+in+dictating+immune+response+magnitude%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The role of naive T cell precursor frequency and recruitment in dictating immune response magnitude.</a> The Journal of Immunology. 188 (9), 4135-4140 (2012).</li>
<li>Rizzuto, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-antigen-specific+CD8%2B+T+cell+precursor+frequency+determines+the+quality+of+the+antitumor+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Self-antigen-specific CD8+ T cell precursor frequency determines the quality of the antitumor immune response.</a> Journal of Experimental Medicine. 206 (4), 849-866 (2009).</li>
<li>Newell, E. W., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+model+antigens%3A+high-dimensional+methods+for+the+analysis+of+antigen-specific+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Beyond model antigens: high-dimensional methods for the analysis of antigen-specific T cells.</a> Nature biotechnology. 32 (2), 149(2014).</li>
<li>Perica, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+and+expansion+with+nanoscale+artificial+antigen+presenting+cells+for+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+nano%22%5BJournal%5D)">Enrichment and expansion with nanoscale artificial antigen presenting cells for adoptive immunotherapy.</a> ACS nano. 9 (7), 6861-6871 (2015).</li>
<li>Kosmides, A. K., Necochea, K., Hickey, J. W., Schneck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separating+T+Cell+Targeting+Components+onto+Magnetically+Clustered+Nanoparticles+Boosts+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Separating T Cell Targeting Components onto Magnetically Clustered Nanoparticles Boosts Activation.</a> Nano Letters. , (2018).</li>
<li>Hickey, J. W., Vicente, F. P., Howard, G. P., Mao, H. Q., Schneck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologically+Inspired+Design+of+Nanoparticle+Artificial+Antigen-Presenting+Cells+for+Immunomodulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Biologically Inspired Design of Nanoparticle Artificial Antigen-Presenting Cells for Immunomodulation.</a> Nano Letters. 17 (11), (2017).</li>
<li>,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+magnetic+enrichment+of+antigen-specific+T+cells+by+engineering+particle+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Efficient magnetic enrichment of antigen-specific T cells by engineering particle properties.</a> Biomaterials. , (2018).</li>
<li>Oelke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+purification+of+CD8%2B+melan-A-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+for+adoptive+transfer+in+tumor+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Generation and purification of CD8+ melan-A-specific cytotoxic T lymphocytes for adoptive transfer in tumor immunotherapy.</a> Clinical Cancer Research. 6 (5), 1997-2005 (2000).</li>
<li>Riccione, K., Suryadevara, C. M., Snyder, D., Cui, X., Sampson, J. H., Sanchez-Perez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+CAR+T+cells+for+adoptive+therapy+in+the+context+of+glioblastoma+standard+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Generation of CAR T cells for adoptive therapy in the context of glioblastoma standard of care.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (96), (2015).</li>
<li>Ho, W. Y., Nguyen, H. N., Wolfl, M., Kuball, J., Greenberg, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+methods+for+generating+CD8%2B+T-cell+clones+for+immunotherapy+from+the+naive+repertoire%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological+methods%22%5BJournal%5D)">In vitro methods for generating CD8+ T-cell clones for immunotherapy from the naive repertoire.</a> Journal of immunological methods. 310 (1-2), 40-52 (2006).</li>
<li>Rudolf, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+costimulation+of+human+CD8+T+cells+by+anti-4-1BB+and+anti-CD28+on+synthetic+artificial+antigen+presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+immunology%2C+immunotherapy+%3A+CII%22%5BJournal%5D)">Potent costimulation of human CD8 T cells by anti-4-1BB and anti-CD28 on synthetic artificial antigen presenting cells.</a> Cancer immunology, immunotherapy : CII. 57 (2), 175-183 (2008).</li>
<li>Gulukota, K., Sidney, J., Sette, A., DeLisi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+complementary+methods+for+predicting+peptides+binding+major+histocompatibility+complex+molecules1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Two complementary methods for predicting peptides binding major histocompatibility complex molecules1.</a> Journal of molecular biology. 267 (5), 1258-1267 (1997).</li>
<li>Castle, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+mutanome+for+tumor+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Exploiting the mutanome for tumor vaccination.</a> Cancer research. 72 (5), 1081-1091 (2012).</li>
<li>Duan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+bioinformatic+profiling+of+mutational+neoepitopes+reveals+new+rules+to+predict+anticancer+immunogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Genomic and bioinformatic profiling of mutational neoepitopes reveals new rules to predict anticancer immunogenicity.</a> Journal of Experimental Medicine. 211 (11), 2231-2248 (2014).</li>
<li>Srivastava, P. K., Duan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+the+antigenic+fingerprint+of+each+individual+cancer+for+immunotherapy+of+human+cancer%3A+genomics+shows+a+new+way+and+its+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology%2C+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Harnessing the antigenic fingerprint of each individual cancer for immunotherapy of human cancer: genomics shows a new way and its challenges.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (5), 967-974 (2013).</li>
<li>Yadav, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+immunogenic+tumour+mutations+by+combining+mass+spectrometry+and+exome+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Predicting immunogenic tumour mutations by combining mass spectrometry and exome sequencing.</a> Nature. 515 (7528), 572(2014).</li>
<li>Gros, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+neoantigen-specific+lymphocytes+in+the+peripheral+blood+of+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of neoantigen-specific lymphocytes in the peripheral blood of melanoma patients.</a> Nature medicine. 22 (4), 433(2016).</li>
</ol>

Autorzy deklarują następujące konkurencyjne interesy finansowe: zgodnie z umową licencyjną między NexImmune a Uniwersytetem Johnsa Hopkinsa, Jonathan Schneck jest uprawniony do udziału w tantiemach otrzymywanych przez uniwersytet od sprzedaży produktów opisanych w tym artykule. Był także założycielem NexImmune i posiada udziały w spółce. Pełni funkcję członka Rady Dyrektorów i naukowej rady doradczej NexImmune. Warunki tych ustaleń zostały zweryfikowane i zatwierdzone przez Uniwersytet Johnsa Hopkinsa zgodnie z jego polityką przeciwdziałania konfliktom interesów.

Stworzyliśmy nowatorską technologię izolacji limfocytów T swoistych dla antygenu w oparciu o nanocząsteczkowe sztuczne komórki prezentujące antygen (aAPC). Nanocząstki aAPC mają na powierzchni MHC załadowany peptydami, który umożliwia wiązanie i aktywację limfocytów T specyficznych dla antygenu wraz z aktywacją kostymulacyjną. aAPC są również paramagnetyczne, a zatem mogą być wykorzystywane do wzbogacania rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu za pomocą pola magnetycznego. Zoptymalizowaliśmy i zbadaliśmy kluczo...

Wraz z rozwojem wielu immunoterapii, istnieje potrzeba scharakteryzowania i kontrolowania odpowiedzi immunologicznych. W szczególności interesująca jest adaptacyjna odpowiedź immunologiczna ze względu na specyficzność i trwałość komórek. Ostatnio terapie limfocytami T z receptorem antygenu chimerycznego zostały zatwierdzone do terapii raka; jednak receptory antygenowe są oparte na wspólnym antygenie powierzchniowym CD19, a nie na antygenach specyficznych dla raka1. Poza specyficznością, immunoterapie mogą również cierpieć z powodu braku kontroli i ograniczonego zrozumienia dynamicznej odpowiedzi immunologicznej w obrębie raka lub autoimmunizacji.
Jednym z wyzwań związanych z badaniem odpowiedzi specyficznych dla antygenu jest ich bardzo niska częstotliwość, np. limfocyty T specyficzne dla antygenu to 1 z każdych 104 do 106 limfocytów T2,3. Tak więc, aby zbadać, które limfocyty T są obecne lub reagują, komórki muszą zostać wzbogacone i rozszerzone lub ich sygnał musi zostać wzmocniony. Utrzymanie komórek zasilających przy użyciu obecnych technik, które koncentrują się na ekspansji komórek specyficznych dla antygenu, jest kosztowne i trudne. Obecne techniki, które koncentrują się na wzmacnianiu sygnału limfocytów T specyficznych dla antygenu, takie jak test immunoenzymatyczny (ELISPOT), ograniczają ponowne użycie tych limfocytów T4. Wreszcie, ze względu na niską czułość, często te dwie techniki muszą być połączone w celu wyliczenia specyficznego dla antygenu.
Aby rozwiązać te problemy, opracowaliśmy sztuczną komórkę prezentującą antygen (aAPC) opartą na nanocząstkach magnetycznych5,6,7,8. aAPC może być funkcjonalizowany za pomocą specyficznego dla antygenu głównego kompleksu zgodności tkankowej (pMHC) i cząsteczek kostymulujących - np. Przeciwciała anty-CD28 - w celu wzbogacenia limfocytów T specyficznych dla antygenu, a następnie stymulowania ich ekspansji (Figura 1). Cząsteczki mogą być zatem opłacalnym, gotowym produktem, który można zarówno dostosować do stymulacji specyficznej dla antygenu, jak i ustandaryzować w eksperymentach i u pacjentów. Przeprowadzenie procesu wzbogacania i ekspansji powoduje od setek do tysięcy razy ekspansję limfocytów T CD8 + specyficznych dla antygenu i może skutkować częstością do 60 procent już po tygodniu, umożliwiając scharakteryzowanie lub terapeutyczne zastosowanie dużej liczby komórek. W tym miejscu opisujemy, jak wytwarzać nanocząsteczki aAPC, kilka krytycznych kwestii projektowych przy wyborze właściwości nanocząstek i demonstrujemy niektóre typowe wyniki wykorzystania tych cząstek do izolowania i rozszerzania rzadkich limfocytów T CD8 + specyficznych dla antygenu.

<table><tbody><tr><td>DimerX I: Rekombinowany rozpuszczalny dimeryczny ludzki HLA-A2: Białko fuzyjne Ig</td><td>BD Biosciences</td><td>551263</td><td></td></tr><tr><td>DimerX I: Rekombinowana rozpuszczalna mysz dimeryczna H-2D[b]:Ig</td><td>BD Biosciences</td><td>551323</td><td></td></tr><tr><td>DimerX I: Rekombinowana rozpuszczalna mysz dimeryczna H-2K[b]: Białko fuzyjne Ig</td><td>BD Biosciences</td><td>550750</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 20 MWCO 50 000</td><td>GE Nauki Przyrodnicze</td><td>28932362</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 2 MWCO 50 000</td><td>GE Nauki przyrodnicze</td><td>28932257</td><td></td></tr><tr><td>Oczyszczona ludzka mikroglobulina beta 2</td><td>Bio-Rad</td><td>PHP135</td><td></td></tr><tr><td>nanomag-D-spio, NH2, nanocząstki 100 nm</td><td>Micromod</td><td>79-01-102</td><td></td></tr><tr><td>Super Mag NHS Aktywowane kulki, 0,2 i mikro; m</td><td>Ocean Nanotech</td><td>SN0200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Mikrokulki antybiotynowe UltraPure</td><td>Miltenyi</td><td>130-105-637</td><td></td></tr><tr><td>EZ-Link NHS-Biotyna</td><td>ThermoFisher</td><td>20217</td><td></td></tr><tr><td>Środek sieciujący Sulfo-SMCC&nbsp;</td><td>ProteoChem</td><td>c1109-100mg</td><td></td></tr><tr><td>chlorowodorek 2-iminotiolanu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6256 Sigma&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>96 Well Half-Area Microplate, polistyren</td><td>Corning</td><td>3875</td><td></td></tr><tr><td>FITC Rat Anti-Mouse Ig, &lambda; 1, &lambda; 2, & &lambda; 3 Lekki łańcuch&nbsp; Klon &nbsp; Czynnik chłodniczy R26-46&nbsp; &nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>553434</td><td></td></tr><tr><td>FITC Mysz Chomik antyormiański i syryjski IgG&nbsp; Klon &nbsp; G192-1</td><td>BD Nauki biologiczne</td><td>554026</td><td></td></tr><tr><td>B6. Cg-Thy1a/Cy Tg(TcraTcrb)8Rest/J (transgeniczny PMEL) myszy</td><td>Jackson Laboratory</td><td>005023</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J (B6 typu dzikiego) myszy</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ Zestaw do izolacji komórek T, mysz</td><td>Miltenyi</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>Kolumny MS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Kolumny LS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Streptawidyna-Fikoerytryna, SAv-PE</td><td>Biolegend</td><td>405203</td><td></td></tr><tr><td>Magnesy dyskowe N52 o średnicy 0,75 cala&nbsp;</td><td>K& J Magnetics</td><td>DX8C-N52</td><td></td></tr><tr><td>APC anty-mysie przeciwciało CD8a, klon 53-6.7</td><td>Biolegend</td><td>100711</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixable Green Dead Cell Stain Kit, do wzbudzenia 488 nm&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>L-34969</td><td></td></tr></tbody></table>

wzbogacanie i rozszerzanie rzadkich limfocytów t specyficznych dla antygenu za pomocą nanocząstek magnetycznych

Enrich and Expand Rare Antigen-specific T Cells with Magnetic Nanoparticles

Opracowaliśmy narzędzie zarówno do wzbogacania, jak i rozszerzania limfocytów T specyficznych dla antygenu. Może to być pomocne w takich przypadkach, jak: A) wykrycie istnienia limfocytów T specyficznych dla antygenu, B) zbadanie dynamiki odpowiedzi specyficznych dla antygenu, C) zrozumienie, w jaki sposób odpowiedzi specyficzne dla antygenu wpływają na stan choroby, taki jak autoimmunizacja, D) demistyfikacja heterogenicznych odpowiedzi na limfocyty T specyficzne dla antygenu lub E) wykorzystanie komórek specyficznych dla antygenu do terapii. Narzędzie opiera się na cząstce magnetycznej, którą sprzęgamy sygnały swoiste dla antygenu i kostymulujące limfocyty T, i którą nazywamy sztucznymi komórkami prezentującymi antygen (aAPC). W związku z tym, ponieważ technologia jest prosta w produkcji, może być łatwo przyjęta przez inne laboratoria; w związku z tym naszym celem jest szczegółowe opisanie produkcji i późniejszego wykorzystania APC. Wyjaśniamy, jak przyłączać sygnały specyficzne dla antygenu i kostymulujące do aAPC, jak wykorzystać je do wzbogacania limfocytów T specyficznych dla antygenu oraz jak rozszerzać limfocyty T specyficzne dla antygenu. Ponadto podkreślimy względy projektowania inżynieryjnego oparte na eksperymentalnych i biologicznych informacjach z naszego doświadczenia w charakteryzowaniu limfocytów T specyficznych dla antygenu.

Aby pomyślnie przeprowadzić wzbogacenie i ekspansję limfocytów T swoistych dla antygenu, MHC-Ig obciążone peptydem oraz cząsteczki kostymulujące muszą zostać prawidłowo przyłączone do cząsteczki aAPC. W zależności od 3 metod przyłączania cząsteczek, przedstawiamy reprezentatywne dane dla pomyślnego wyniku procedury koniugacji (Rysunek 5a). Rzeczywiście, jeśli gęstość ligandów jest zbyt niska, nie dojdzie do efektywnej stymulacji swoistych dla antygenu limfocy...

Limfocyty T specyficzne dla antygenu są trudne do scharakteryzowania lub wykorzystania w terapiach ze względu na ich ekstremalnie niską częstotliwość. W tym miejscu przedstawiamy protokół rozwoju cząsteczki magnetycznej, która może wiązać się z limfocytami T specyficznymi dla antygenu, aby wzbogacić te komórki, a następnie rozszerzyć je kilkaset razy zarówno w celu charakteryzacji, jak i terapii.

Wzbogacanie i rozszerzanie rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu za pomocą nanocząstek magnetycznych

We have developed a tool to both enrich and expand antigen-specific T cells. This can be helpful in cases such as to A) detect the existence of ...

Główną zaletą naszej nowatorskiej techniki, którą nazwaliśmy E plus E, co oznacza wzbogacenie plus ekspansję, jest to, że możemy jednocześnie wzbogacać i rozszerzać te komórki, rzadkie komórki specyficzne dla antygenu. To pozwala nam na opracowanie wystarczającej liczby komórek, które będziemy mogli wykorzystać do zbadania ich roli w różnych warunkach i w różnych warunkach klinicznych, a nawet pozwala nam rozwinąć dużą liczbę komórek, które możemy wykorzystać do immunoterapii w sposób, w jaki wcześniej nie mogliśmy. Metoda, którą opracowaliśmy, ta E plus E, może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania z zakresu podstawowej immunologii dotyczące obecności neoepitopów.Co to są neoepitopy? Są to spersonalizowane epitopy, o których wiemy, że są obecnie bardzo ważne z punktu widzenia immunoterapii nowotworów, a także dynamiki specyficznej dla antygenu i tego, jak te czynniki wpływają na stany chorobowe oraz dla skutecznej terapii komórkowej. Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku immunoterapii, ponieważ sztuczna komórka prezentująca antygen w postaci nanocząstek może być gotowym produktem, który można łatwo dostosować do indywidualnych odpowiedzi immunologicznych pacjenta.Aby

enrich-expand-rare-antigen-specific-t-cells-with-magnetic

Research

JoVE Journal

Engineering

Inżynieria

W niniejszej pracy opisujemy metodę aktywacji i ekspansji ludzkich komórek NKT z populacji zmieszanych limfocytów T przy użyciu sztucznych komórek prezentujących antygen (aAPC). Wykorzystanie aAPC opartych na CD1d zapewnia zestandaryzowaną metodę generowania wysokiej liczby funkcjonalnych komórek NKT.

Aktywacja i ekspansja komórek Natural Killer T (NKT) za pośrednictwem sztucznych komórek prezentujących antygen (aAPC)

Niniejszy protokół opisuje zastosowanie tetramerów peptyd:MHC oraz magnetycznych mikrokulek do izolacji populacji limfocytów T specyficznych dla epitopu o niskiej częstotliwości oraz ich analizy za pomocą cytometrii przepływowej. Metoda ta umożliwia bezpośrednie badanie endogennych populacji limfocytów T w systemach eksperymentalnych in vivo.

Wzbogacanie limfocytów T swoistych dla epitopu z wykorzystaniem tetramerów peptyd-MHC

Ten film opisuje wzbogacanie limfocytów T ze śledziony myszy poprzez selekcję negatywną za pomocą separatora magnetycznego. Technika ta polega na ukierunkowaniu na inne komórki w próbce w celu zubożenia za pomocą przeciwciał lub ligandów skierowanych przeciwko określonym antygenom powierzchniowym komórki.

Wzbogacanie limfocytów T: technika izolowania limfocytów T z mieszanej populacji komórek za pomocą separacji magnetycznej

Ten film opisuje protokół izolacji limfocytów T CD8+ specyficznych dla rzadkiego antygenu za pomocą magnetycznych komórek prezentujących sztuczny antygen oparty na nanocząstkach (aAPC) funkcjonalizowanych antygenowymi peptydami MHC-Igs i przeciwciałami anty-CD28. Interakcja aAPC z limfocytami T CD8 + specyficznie eksprymującymi receptory limfocytów T ukierunkowanych na peptydy antygenowe, a następnie ich ekspansję in vitro, powoduje wzbogacenie i ekspansję tej populacji limfocytów T CD8 +.

Wzbogacanie i ekspansja limfocytów T CD8+ specyficznych dla antygenu

Tutaj opisujemy protokół syntezy magneto-plazmonicznych nanocząstek o silnym momencie magnetycznym i silnej absorbancji bliskiej podczerwieni (NIR). Protokół obejmuje również koniugację przeciwciał z nanocząstkami za pomocą ugrupowania Fc do różnych zastosowań biomedycznych, które wymagają specyficznego celowania molekularnego.

Synteza immunoukierunkowanych magnetoplazmonicznych nanoklastrów

Tutaj prezentujemy dostosowany protokół, który może być użyty do wygenerowania dużej liczby mysich niezmiennych limfocytów T NK z mysiej śledziony. W protokole przedstawiono podejście, dzięki któremu komórki iNKT śledziony mogą być wzbogacane, izolowane i namnażane in vitro przy użyciu ograniczonej liczby zwierząt i odczynników.

Zoptymalizowana metoda izolowania i namnażania niezmiennych limfocytów T NK ze śledziony myszy

Przedstawiono protokół syntezy i kationizacji magnetoferytyny domieszkowanej kobaltem, a także metodę szybkiego magnesowania komórek macierzystych za pomocą kationizowanej magnetoferytyny.

Synteza kationizowanej magnetoferytyny do ultraszybkiego namagnesowania komórek

Opisana jest prosta, ale skuteczna metoda, która wykorzystuje magnetyczne nanocząstki do wykrywania i wzbogacania komórek B reagujących na antygen do analizy funkcjonalnej i fenotypowej.

Wykrywanie i wzbogacanie rzadkich limfocytów B specyficznych dla antygenu w celu analizy fenotypu i funkcji

Opisujemy szybki i solidny protokół wzbogacania niezmiennych komórek T natural killer (iNKT) ze śledziony myszy i rozszerzania ich in vitro do odpowiedniej liczby dla badań in vitro i in vivo.

Oczyszczanie i namnażanie mysich niezmiennych limfocytów T NK do badań in vitro i in vivo

Dostarczamy szczegółowy protokół do izolowania i identyfikacji rzadkich populacji limfocytów T specyficznych dla antygenu w płucach myszy poprzez magnetyczne wzbogacanie limfocytów T na bazie kulek magnetycznych i tetramery peptydu:głównego kompleksu zgodności tkankowej (MHC).

Identyfikacja rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu z płuc myszy za pomocą peptydów: głównych tetramerów kompleksu zgodności tkankowej

Poznaj metodę E plus E do jednoczesnego wzbogacania i rozszerzania rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu przy użyciu nanocząstek magnetycznych. Ta technika umożliwia badanie neoepitopów i zastosowania w immunoterapii nowotworowej.

Wzbogacanie i rozszerzanie rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu za pomocą nanocząstek magnetycznych

Przeglądaj więcej filmów