Name: Technika niedrożności tętnicy środkowej mózgu do wywoływania depresji poudarowej u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: Poznaj technikę niedrożności tętnicy środkowej mózgu do wywoływania depresji poudarowej u szczurów. Ta metoda zmniejsza zmienność wyników i pozwala badać mechanizmy depresji po udarze.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy profesor Ołenie Siewierynowskiej z Wydziału Fizjologii Wydziału Biologii, Ekologii i Medycyny Uniwersytetu im. Olesa Honczara w Dnieprze na Ukrainie za jej wsparcie i pomocny wkład w nasze dyskusje. Uzyskane dane są częścią pracy doktorskiej R.K.

Komitet Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu Ben-Guriona w Negev, Izrael zatwierdził wszystkie procedury leczenia i testowania stosowane w tym protokole.
1. Przygotowanie szczurów do procedury eksperymentalnej
UWAGA: Wybierz dorosłego samca szczura Sprague-Dawley o wadze 300-350 g.
<ol>
	<li>Szczury, po cztery w klatce, należy umieścić w wiwarium w temperaturze 22 °C i wilgotności 40%, z odwróconym 12-godzinnym cyklem światła/ciemności (światła wyłączają się o 8:00 rano) i nieograniczonym dostępem do pożywienia i wody.</li>
	<li>Losowo przypisz szczury do dwóch grup, a mianowicie grupy MCAO (N = 24) i grupy pozorowanej (N = 19).</li>
</ol>
2. Przygotowanie szczurów do operacji
<ol>
	<li>Aby przygotować szczury do zmodyfikowanej procedury MCAO, znieczulaj każdego szczura przez 30 minut mieszaniną izofluranu (4% do indukcji, 2% do zabiegu chirurgicznego i 1,3% do konserwacji) w 24% tlenu (2 l/min) w komorze indukcyjnej i pozwól mu oddychać spontanicznie29,30. 
	UWAGA: Stymuluj odruch wycofania pedału, ściskając skórę między palcami u nóg i/lub opuszkami palców za pomocą kleszczy. Rozważ, że głębokość znieczulenia jest odpowiednia, gdy odruch znika.</li>
	<li>Utrzymuj temperaturę ciała na poziomie 37 °C za pomocą płyty grzewczej.</li>
	<li>Zmierz temperaturę ciała wszystkich szczurów za pomocą sondy umieszczonej w odbytnicy szczura przed rozpoczęciem zabiegu chirurgicznego.</li>
	<li>Utrzymuj stałą temperaturę ciała (37 °C) dla wszystkich szczurów, aby zminimalizować wpływ hipotermii na wynik neurologiczny i wszelkie urazy neurologiczne.</li>
	<li>Nałóż maść ze sztucznymi łzami na oba oczy każdego zwierzęcia, gdy leżą na stole przygotowawczym.</li>
	<li>Ogol szyję każdego szczura i zdezynfekuj skórę 70% alkoholem, chlorheksydyną (70% alkoholu i 0,5% glukonianu chlorheksydyny). Powtórz krok dezynfekcji jeszcze dwa razy. </li>
	<li>Przykryj szczury wysterylizowanymi obłożami chirurgicznymi.</li>
</ol>
3. Chirurgia (technika MCAO)
UWAGA: Wykonaj operację zgodnie z opisem Boyko et al.28 i użyj narzędzi dostarczonych przez McGarry et al.29 oraz Uluç et al.30.
<ol>
	<li>Wykonaj brzuszne nacięcie linii środkowej i wypreparuj powięź powierzchowną.</li>
	<li>Ostrożnie wykonaj ostre i rozwarstwienie w obrębie trzech mięśni w kształcie trójkąta (mięsień mostkowo-gnykowy, dwubrzasowy i mostkowo-sutkowy), aby zidentyfikować tętnice szyjne (ECA, ICA i tętnicę szyjną wspólną [CCA]).</li>
	<li>Dokładnie przeanalizuj i wyeksponuj właściwe CCA i ICA.</li>
	<li>Oddziel prawe CCA i ICA od nerwu błędnego. 
	nuta: Po zidentyfikowaniu tętnic szyjnych zgodnie z krokiem 3.2, ICA zostanie uznana za połowę oddziałów CCA obok ECA.</li>
	<li>Wprowadzić monofilament cewnika (stępiony termicznie lub pokryty silikonem 4-0) bezpośrednio przez ICA, ~18,5-19 mm od punktu rozwidlenia prawego CCA do okręgu Willisa, aż do osiągnięcia łagodnego oporu, aby zamknąć MCA. 
	nuta: Żarnik stępiony na gorąco i powlekany silikonem nylon 4-0 odgrywają tę samą rolę i są ostatnio bardziej preferowanymi monofilamentami, biorąc pod uwagę, że zapewniają lepszą okluzję niż zwykła nić nylonowa28,30.</li>
	<li>Zawiąż jedwabny szew 4-0 wokół ICA tuż nad rozwidleniem prawej CCA (tętnicy skrzydłowo-podniebiennej), aby zablokować ICA proksymalnie do punktu wprowadzenia filamentu na stałe i tymczasowo dystalnie do niego.</li>
	<li>Zawiąż ICA wokół nici śródświetlnej, aby zapiąć jedwabny szew, aby zapobiec krwawieniu.</li>
	<li>Poddaj pozorowane szczury tej samej procedurze chirurgicznej, co szczury MCAO, ale zamiast tego włóż nylonową nić28. 
	nuta: Nić nylonowa, podobnie jak nylon pokryty silikonem, zasłania ICA, ale nie jest tak skuteczna jak ta ostatnia.</li>
	<li>Zamknij ranę na szyi szczura po zamknięciu MCA, wyłącz znieczulenie i umieść szczura w inkubatorze pod obserwacją, aż się obudzi. 
	nuta: Potrzeba podwiązania proksymalnego polega na zamknięciu ICA, a dodatkowe podwiązanie dystalne polega na zmniejszeniu krwawienia wokół włókna i zabezpieczeniu go na miejscu. Ponadto szczur powinien obudzić się kilka minut po zamknięciu rany.</li>
</ol>
4. Rekonwalescencja pooperacyjna
<ol>
	<li>Każdemu szczurowi należy podać 5 ml 0,9% roztworu soli fizjologicznej dootrzewnowo, bezpośrednio po zabiegu, aby zapobiec odwodnieniu.</li>
	<li>Środek przeciwbólowy należy podać bezwarunkowo w pierwszym dniu po operacji; należy zastosować meloksykam w dawce 1 mg/kg SQ Q24 H. Rozcieńczony dipyron (0,5 g rozpuszczony w 400 ml wody pitnej) należy podać szczurom wykazującym objawy bólu w ciągu pierwszych 3 dni.</li>
	<li>Uśmiercaj szczury z drgawkami (napady są spowodowane zwiększonym ciśnieniem śródczaszkowym spowodowanym obrzękiem mózgu lub krwotokiem mózgowym28).</li>
</ol>
5. Ocena nasilenia neurologicznego31
UWAGA: Ta procedura jest wykonywana przez dwóch obserwatorów, którzy nie biorą udziału w zabiegu chirurgicznym; testują deficyty neurologiczne i oceniają deficyty motoryczne na łącznym wyniku 0-432. Ocena tego wyniku może być przeprowadzana w różnych odstępach czasu; W tym badaniu wykonano go 50 minut, 24 godziny, 7, 15 i 30 dni po operacji. Poniżej znajdują się kroki, które należy wykonać, aby ocenić NSS. Chociaż w tej sytuacji nie jest to konieczne, wynik ten jest wymagany do stwierdzenia udaru u gryzoni w celu zastosowania leczenia.
<ol>
	<li>Umieść szczura na ceramicznej podłodze i pozwól mu swobodnie poruszać się przez 1 minutę.</li>
	<li>Delikatnie pociągnij szczura do tyłu za ogon i oceń w następujący sposób.
	<ol>
		<li>Oceń szczura z wynikiem 0 za brak deficytu neurologicznego.</li>
		<li>Oceń szczura z wynikiem 1 za zgięcie kończyn przednich.</li>
		<li>Oceń szczura z wynikiem 2 za słaby chwyt kończyny przedniej po kontrastronie.</li>
		<li>Oceń szczura z wynikiem 3 za krążenie w stronę niedowładu, gdy jest ciągnięty za ogon.</li>
		<li>Oceń szczura z wynikiem 4 za spontaniczne krążenie32. 
		nuta: Jeśli zaobserwuje się więcej niż jedną reakcję, preferowane jest działanie z wyższym wynikiem.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. Określenie objętości zawału (badanie histologiczne)
<ol>
	<li>Pomiar objętości zawału 
	nuta: Wykonaj tę procedurę zgodnie z wcześniejszym opisem33,34. Zmierzyć objętość zawału mózgu za pomocą barwienia chlorkiem 2,3,5-trifenylotetrazolu (TTC) 24 godziny po reperfuzji.
	<ol>
		<li>Poddaj eutanazji pięć szczurów z każdej grupy, 24 godziny po ostatnim NSS, wystawiając je na przedawkowanie izofluranu w komorze indukcyjnej.</li>
		<li>Odetnij głowy szczurom i szybko odizoluj ich mózgi za pomocą małych nożyczek i kleszczy.</li>
		<li>Umyj izolowane mózgi w 0,9% soli fizjologicznej.</li>
		<li>Zbadaj punkty krwawienia w mózgu, aby wykluczyć myszy, które przeszły krwotok podpajęczynówkowy w kręgu Willisa.</li>
		<li>Umieść każdy mózg na czystym szkiełku podstawowym na woreczku z lodu o temperaturze -20 °C, a następnie umieść je w lodówce o temperaturze -20 °C na 5 minut, aby mózg był łatwiejszy do krojenia.</li>
		<li>Wyjmij szklane szkiełko z mózgiem z lodówki o temperaturze -20 °C, połóż je z powrotem na okład z lodu o temperaturze -20 °C i rozetnij biegun czołowy i móżdżek za pomocą ostrza i kleszczy.</li>
		<li>Pokrój skrawki mózgu poziomo na grubość 2 mm za pomocą ostrza, aby uzyskać sześć plasterków.</li>
		<li>Przygotować 0,05% roztwór TTC, dodając 1,25 g proszku TTC do 500 ml normalnego roztworu soli fizjologicznej przed uśmierceniem, przenieść roztwór na 24-dołkową płytkę (1 ml na studzienkę) pokrytą folią i przechowywać w temperaturze 4 °C. 
		nuta: TTC i tkanki barwione TTC są wrażliwe na światło.</li>
		<li>Za pomocą kleszczy przenieś plastry mózgu na 24-dołkową płytkę zawierającą roztwór TTC (jeden plasterek na dołek) i rozciągnij plastry w roztworze.</li>
		<li>Inkubować zawartość płytki w temperaturze 37 °C w płytkiej łaźni wodnej przez 30 minut.</li>
		<li>Odessać roztwór TTC z płytki za pomocą pipety, przemyć je płynem do prania mózgu i inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 minut.</li>
		<li>Umieść plastry w kolejności, w jakiej zostały pokrojone, na szkle laboratoryjnym i zbadaj segmenty skanerem.</li>
		<li>Przeanalizuj rozmiar zawału jako procent całego wycinka mózgu, używając oprogramowania do analizy ImageJ, w oparciu o identyfikację wizualną.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza objętości zawału35
	<ol>
		<li>Określ ilościowo objętość zawału za pomocą standardowego oprogramowania do analizy obrazu (ImageJ) i przeanalizuj objętość mózgu po zawale jako procent całego rozmiaru mózgu33.</li>
		<li>Umieść wycinki mózgu na szklanych szkiełkach mikroskopowych i zeskanuj je skanerem optycznym w wysokiej rozdzielczości (1,600 x 1,600 dpi) w celu odpowiedniej analizy.</li>
		<li>Przytnij obrazy i ujednolic skalę dla wszystkich obrazów, używając linijki metrycznej dołączonej do zeskanowanego obrazu.</li>
		<li>Zmierz obszar zaznaczonej bladości w sześciu kolejnych 2-milimetrowych przekrojach koronalnych za pomocą narzędzia do śledzenia różdżki i odręcznego wyboru na oprogramowaniu ImageJ 1.37v 36.</li>
		<li>Oblicz objętość pośredniego zawału, korzystając z następującego wzoru37.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
7. Pomiar obrzęku mózgu38
UWAGA: Obrzęk mózgu został zmierzony 24 godziny po ostatnim MCAO. Eutanazja zwierząt z poważnym deficytem neurologicznym przeszkadzającym w jedzeniu i/lub piciu przez co najmniej trzy dni, ponad 20% utrata wagi, porażenie połowicze lub drgawki.
<ol>
	<li>Oceń wielkość obrzęku prawej półkuli, używając sumy obszarów pokrojonych koronalnie do obliczenia objętości prawej i lewej półkuli w dowolnych jednostkach (pikselach). 
	nuta: Do tych obliczeń należy użyć oprogramowania ImageJ 1.37v, po skanowaniu optycznym (rozdzielczość: 1 600 x 1 600 dpi). Wybierz obszar zainteresowania i użyj funkcji Zmierz z menu Analiza. W naszym dochodzeniu wykorzystano makra.</li>
	<li>Wyraź obszar obrzęku mózgu jako procent standardowych obszarów w niedotkniętej półkuli przeciwległej.</li>
	<li>Oblicz stopień pęcznienia, korzystając z równania opracowanego wcześniej39.</li>
</ol>
8. Paradygmaty behawioralne
<ol>
	<li>Wykonuj testy behawioralne między 30 a 33 dniem po operacji w zamkniętym, cichym i kontrolowanym światłem pomieszczeniu.</li>
	<li>Przydziel badaczy ślepych na wszystkie procedury eksperymentalne, aby nagrali wszystkie testy behawioralne za pomocą dostępnego na rynku programu.</li>
	<li>Sacharoza preference test40,41
	<ol>
		<li>Umieść szczury w oddzielnych klatkach w tym samym pomieszczeniu, w którym są trzymane podczas ciemnego cyklu.</li>
		<li>Przez następne 24 godziny umieszczać jedną butelkę 100 ml 1% (w/v) roztworu sacharozy w każdej klatce ze szczurem, który ma być poddany badaniu, i pozwolić na adaptację szczura.</li>
		<li>Po 24 godzinach pozbawij szczury jedzenia i wody przez 12 godzin, wyjmując butelki.</li>
		<li>Następnie po 12 godzinach umieścić dwie butelki w każdej klatce na 4 godziny, jedną zawierającą 100 ml wody z kranu, a drugą zawierającą 100 ml roztworu sacharozy (1% [w/v]).</li>
		<li>Zapisz ilość roztworu sacharozy i wody spożywanej przez szczury w mililitrach. Oblicz powinowactwo do preferencji sacharozy w następujący sposób.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Test wymuszonego pływania Porsolt 42 
	nuta: Test wymuszonego pływania Porsolt został przeprowadzony zgodnie z opisem w poprzednim protokole opublikowanym przez Zeldetz et al.40 oraz Boyko et al.42. Zasada tego testu mówi, że gdy szczury są zmuszone do pływania w ograniczonym obszarze, skąd nie mogą uciec, w końcu stają się nieruchome, zaprzestając wszelkich prób ucieczki z wody43,44. Ten test został przeprowadzony w innym pomieszczeniu podczas cyklu ciemności.
	<ol>
		<li>Umieść każdego szczura w pionowym cylindrze z pleksiglasu (wysokość: 100 cm; średnica: 40 cm) zawierającym 80 cm wody o temperaturze 25 °C na 15 minut w celu przyzwyczajenia.</li>
		<li>Wyjmij szczura i pozostaw do wyschnięcia na 15 minut w ogrzewanej komorze (32 °C).</li>
		<li>Zwróć szczura do jego domowej (oryginalnej) klatki.</li>
		<li>Powtórz krok 8.4.1 24 godziny później, tym razem dla dochodzenia, przez 5 minut.</li>
		<li>Nagraj na taśmę wideo 5-minutowy test i oblicz całkowity czas trwania bezruchu w tym okresie.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Jednym ze sposobów, w jaki przedstawiona tutaj technika MCAO może zostać uznana za bezpieczniejszą niż oryginalny model MCAO, ilustruje fakt, że ECA i jego gałęzie, w tym tętnica potyliczna, końcowa tętnica językowa i tętnica szczękowa, nie są zagrożone podczas zamykania MCA przez ICA. Oryginalny model MCAO przesunął ECA (i jego gałęzie) poprzez dystalne ich rozwarstwienie i koagulację46, powoduje upośledzenie żucia, ze względu na naruszenie dopływu naczyń krwionośnych do mięśni żucia<sup class="x...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/58875">A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats</a>. The Authors section was updated.
One of the author names was updated from:
Dmitri Frank
to
Dmitry Frank

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/58875">A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats</a>. The Authors section was updated.

Erratum: A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats

Udar jest czwartym na liście chorób powodujących zgony w Stanach Zjednoczonych1,2,3, podczas gdy powoduje większość niepełnosprawności u dorosłych w krajach rozwiniętych4; to sprawia, że udar mózgu jest jednym z najważniejszych problemów zdrowotnych na świecie. Normalność u pacjentów, którzy przeżyli udar mózgu, jest rzadka, około 15%-40% ofiar przeżyło trwałe niepełnosprawność, 20% wymagało opieki instytucjonalnej 3 miesiące po wystąpieniu udaru5, a około jedna trzecia 6-miesięcznych przeżyć potrzebuje pomocy innych osób do przeżycia każdego dnia6. Udar mózgu podobno odpowiada również za rosnące krajowe wydatki na opiekę zdrowotną7. Szacunki American Heart Association wskazują, że koszty związane z udarem mózgu w Stanach Zjednoczonych wynoszą ponad 50 miliardów dolarów w 2010 roku8.
Udar nie tylko powoduje długotrwałe szkody u osób, ale niektóre osoby, które przeżyły, mają tendencję do zaburzeń emocjonalnych i behawioralnych, takich jak demencja, zmęczenie, lęk, depresja, majaczenie i agresja9,10,11,12,13,14. Najbardziej nawracającym następstwem psychologicznym po udarze jest depresja poudarowa (PSD), diagnozowana u około 40%-50% przeżytów15,16,17. Depresja wywołana udarem mózgu powoduje zwiększoną zachorowalność i śmiertelność18,19,20,21,22. Patofizjologia PSD nie jest do końca znana, ale najwyraźniej jest spowodowana wieloma czynnikami i jest związana z niepełnosprawnością, upośledzeniem funkcji poznawczych i uszkodzeniem site23.
Szczurzy model ogniskowego niedokrwienia mózgu, stworzony przez MCAO, jest najbardziej rozpowszechnionym zwierzęcym modelem udaru mózgu24,25,26,27. Aby zademonstrować indukcję PSD u szczurów poprzez zamknięcie MCA za pomocą ICA, zastosowano techniki minimalizujące śmiertelność i zmienność w modelu MCAO28.
Głównym celem tego protokołu jest nakreślenie etapów indukcji PSD u szczurów poprzez zamknięcie MCA za pomocą ICA, zmodyfikowanego modelu MCAO, który zmniejsza śmiertelność i wynik zmienności28. Szczegółowe cele obejmują wykonanie badań neurologicznych i histologicznych (określenie skali nasilenia neurologicznego [NSS], objętości strefy zawału i obrzęku mózgu) w celu weryfikacji skuteczności MCAO oraz wykorzystanie testów behawioralnych do zbadania wpływu tej procedury MCAO na rozwój zaburzeń emocjonalnych, głównie PSD.

<table><tbody><tr><td>Wkładka chłonna</td> <td>-</td><td>--</td> <td>Czarne</td></tr> <tr><td>pudełko z pleksiglasu bez połysku</td> <td>-</td><td></td> <td>(120 cm i razy 60 cm & razy 60 cm), podzielone na 25% strefę centralną i otaczającą strefę graniczną</td></tr><tr><td>Butelki</td><td>Techniplast</td><td>ACBT0262SU</td><td>Butelki 150 ml wypełnione 100 ml wody i 100 ml 1% (w/v) roztworu sacharozy</td></tr><tr><td>System ogrzewania porażenia prądem</td><td>Ultasonic Inc.</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Horizon-XL</td><td>Mennen Medical Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>System obrazowania</td><td>Kodak-Do</td><td></td> <td>obrazowania i kwantyfikacji</td></tr><tr><td>Monofilament</td> <td>-</td><td>--</td><td></td></tr> <tr><td>Ręczniki papierowe</td><td>Apteka-Suche</td><td></td> <td>ręczniki używane do utrzymywania szczurów w suchości po zanurzeniu ich w wodzie</td></tr><tr><td>Butla Pexiglass</td> <td>-</td><td>-</td><td>cylinder o wysokości 100 cm i średnicy 40 cm używany do przeprowadzania testu wymuszonego pływania</td></tr><tr><td>Karma laboratoryjna Purina Chow</td><td>Purina</td><td>5001</td><td>dla gryzoni podawana szczurom, myszom i chomikom to żywienie oparte na cyklu życia, które jest stosowane w badaniach biomedycznych od ponad 5 dekad. Dostarczony szczurom ad libitum w tym eksperymencie</td></tr><tr><td>Klatki dla szczurów</td><td>Techniplast</td><td>2000P</td><td>Konwencjonalne pomieszczenie dla gryzoni. Był używany do trzymania szczurów przez cały czas trwania eksperymentu</td></tr><tr><td>Skaner&nbsp;</td><td>Canon CanoScan</td><td>4200F-Video</td><td></td></tr> <tr><td>Camera</td><td>ETHO-VISION (Noldus)</td><td>-</td><td>Cyfrowa kamera wideo do nagrywania w wysokiej rozdzielczości zachowania szczurów podczas testu w terenie otwartym</td></tr></tbody></table>

technika niedrożności tętnicy środkowej mózgu do wywoływania depresji poudarowej u szczurów

A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats

Depresja poudarowa (PSD) jest najczęściej powtarzającym się ze wszystkich powikłań psychiatrycznych wynikających z udaru niedokrwiennego. Zdecydowana większość (około 60%) wszystkich pacjentów z udarem niedokrwiennym cierpi na PSD, zaburzenie uważane za prekursor udaru niedokrwiennego związanego ze zwiększeniem śmiertelności i pogorszenia stanu zdrowia. Patofizjologia PSD jest nadal niejasna. Aby dokładniej zbadać mechanizm rozwoju i występowania PSD oraz znaleźć terapię, podjęliśmy próbę opracowania nowego protokołu, który wymaga zamknięcia środkowej tętnicy mózgowej (MCA) przez tętnicę szyjną wewnętrzną (ICA) u szczurów. Protokół ten opisuje model PSD indukowanego u szczurów przez niedrożność tętnicy środkowej mózgu (MCAO). W eksperymencie wykorzystano również test wymuszonego pływania Porsolta i test preferencji sacharozy w celu potwierdzenia i oceny nastroju depresyjnego badanych szczurów. Zamiast wprowadzać cewnik przez tętnicę szyjną zewnętrzną (ECA), jak określono w pierwotnej procedurze, ta technika MCAO polega na tym, że monofilament przechodzi bezpośrednio przez ICA. Ta technika MCAO została opracowana kilka lat temu i prowadzi do zmniejszenia śmiertelności i zmienności. Powszechnie przyjmuje się, że stosowane kryteria są preferowane przy wyborze modeli biologicznych. Dane uzyskane za pomocą tego protokołu pokazują, że ten model MCAO może być sposobem indukowania PSD u szczurów i może potencjalnie prowadzić do zrozumienia patofizjologii i przyszłego rozwoju nowych leków i innych środków neuroprotekcyjnych.

Wyniki histologiczne (Tabela 1) wykazały statystycznie istotną objętość zawału jako procent całkowitej masy mózgu (p &lt; 0,0001) po MCAO w porównaniu z zwierzętami w grupie kontrolnej (sham). Odnotowano również statystycznie istotny obrzęk mózgu po zestawieniu wyników z grupy eksperymentalnej (p &lt; 0,0003) z wynikami z grupy kontrolnej (sham).
Uzyskane wyniki NSS, przedstawione w Tab...

Tutaj prezentujemy protokół wywoływania depresji poudarowej u szczurów poprzez zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej przez tętnicę szyjną wewnętrzną. Używamy testu wymuszonego pływania Porsolt i testu preferencji sacharozy, aby potwierdzić i ocenić indukowane nastroje depresyjne.

Technika niedrożności tętnicy środkowej mózgu do wywoływania depresji poudarowej u szczurów

Post-stroke depression (PSD) is the most recurrent of all psychiatric complications resulting from an ischemic stroke. A greater majority (about 60%) of ...

W naszym protokole zaproponowano nową technikę niedrożności przyśrodkowej tętnicy mózgowej u szczurów, aby pomóc w badaniu mechanizmu rozwoju depresji po udarze mózgu i znalezieniu skuteczniejszej terapii. Główną zaletą naszej techniki jest jej zdolność do zmniejszania zmienności zmian masy ciała, obrzęku mózgu i objętości zawału oraz minimalizowania zgonów związanych z zabiegiem. Po potwierdzeniu braku reakcji na szczypanie ogona u samca szczura Sprague Dawley o wadze od 300 do 350 gramów, umieść zwierzę na płycie grzewczej o temperaturze 37 stopni Celsjusza i użyj sondy doodbytniczej do monitorowania temperatury głębokiej ciała.Nałóż maść na oczy zwierzęcia i zgol włosy z szyi. Następnie zdezynfekuj odsłoniętą skórę 70-procentowym alkoholem chlorheksydyny i przykryj szczura sterylną serwetą chirurgiczną przed wykonaniem okluzji zgodnie ze standardowymi technikami. Aby uzyskać ocenę nasilenia neurologicznego, umieść szczura z okluzją na płaskiej powierzchni i pozwól zwierzęciu swobodnie się poruszać.Po minucie delikatnie pociągnij szczura do tyłu za ogon i oceń reakcję chodu zwierzęcia. Aby zmierzyć objętość zawału, zeskanuj przygotowane barwione wycinki mózgu z rozdzielczością 1 600 na 1 600 punktów na cal, a następnie przytnij i ujednolic skalę dla wszystkich obrazów. Następnie załaduj ustandaryzowane obrazy do odpowiedniego oprogramowania do analizy obrazu i użyj narzędzia do śledzenia, aby zmierzyć obszar zaznaczonej bladości w sześciu kolejnych dwumilimetrowych wycinkach, aby określić rozmiar zawału jako procent całego wycinka mózgu.30 do 33 dni po operacji przenieś zwierzęta do zamkniętego, cichego, kontrolowanego światła pomieszczenia w indywidualnych klatkach i umieść butelkę zawierającą 100 mililitrów 1% roztworu sacharozy w każdej klatce na 24 godziny. Następnego dnia wyjmij butelki, a także jedzenie i wodę pitną na 12 godzin. Pod koniec okresu deprywacji umieść jedną butelkę zawierającą 100 mililitrów 1% roztworu sacharozy i jedną butelkę zawierającą 100 mililitrów wody z kranu w każdej klatce na cztery godziny.Następnie należy zapisać objętość roztworu sacharozy i zużytej wody, aby umożliwić obliczenie preferencji powinowactwa do sacharozy dla każdego zwierzęcia. W teście wymuszonego pływania Porsolta, 30 do 33 dni po operacji, najpierw umieść każdego szczura w pionowym cylindrze z pleksiglasu zawierającym 80 centymetrów wody o temperaturze 25 stopni Celsjusza na 15 minut. Pod koniec okresu przyzwyczajenia pozwól szczurowi wyschnąć przez 15 minut w ogrzewanym pomieszczeniu w temperaturze 32 stopni Celsjusza przed powrotem do klatki domowej.Następnego dnia należy umieścić szczura z powrotem w cylindrze na ostatnie pięć minut, rejestrując pięciominutowy test, aby umożliwić obliczenie całkowitego czasu trwania bezruchu w tym okresie. Analiza histologiczna ujawnia statystycznie istotną objętość zawału jako procent całkowitej objętości mózgu po MCAO w porównaniu ze zwierzętami w pozorowanej grupie kontrolnej. Statystycznie istotny obrzęk mózgu obserwuje się również u zwierząt doświadczalnych w porównaniu z pozorowaną grupą kontrolną.Zwierzęta z MCAO wykazują niższą sprawność neurologiczną w porównaniu ze zwierzętami operowanymi pozorami po 50 minutach, 24 godzinach i siedmiu dniach po operacji. Szczury MCAO spożywają również znacznie mniejszą ilość sacharozy i wykazują dłuższy bezruch podczas testów wymuszonego pływania Porsalta w porównaniu ze zwierzętami pozorowanymi. Jest to ważny model dla behawioralnych badań nad udarem mózgu i może służyć jako narzędzie do oceny przyszłych terapii lub dostarczania krytycznych danych przedklinicznych na temat skuteczności substancji terapeutycznych.

a-middle-cerebral-artery-occlusion-technique-for-inducing-post-stroke

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Chirurgiczne wywołanie niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u szczura jest powszechnie stosowanym modelem w badaniach nad udarem. W niniejszej pracy demonstrujemy indukcję ogniskowego niedokrwienia mózgu poprzez zamknięcie tętnicy środkowej mózgu. Przedstawiono również wizualizację powstałego zawału za pomocą barwienia histologicznego oraz obrazowania rezonansem magnetycznym.

Model ogniskowego niedokrwienia mózgu poprzez endowaskularną okluzję tętnicy środkowej mózgu u szczura za pomocą szwu

Ten film przedstawia procedurę wykonywania trwałej dystalnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu lub MCAO z tętnicą szyjną wspólną lub podwiązaniem CCA u starszych szczurów w celu modelowania udaru niedokrwiennego. Blokuje to przepływ krwi do mózgu, prowadząc do śmierci neuronów i generowania modelu do badania mechanizmów udaru i potencjalnych metod leczenia.

Wywoływanie niedokrwienia poprzez niedrożność środkowej części mózgu i tętnicy szyjnej wspólnej w modelu szczurzym

Źródło: Larpthaveesarp, A., et. al. Przemijający model niedrożności tętnicy środkowej mózgu udaru noworodka u szczurów P10. J. Vis. Exp. (2017)Ten film pokazuje ustanowienie modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczeniaka szczura. Tętnica szyjna wewnętrzna (ICA) jest odsłonięta, a ligatura jest zabezpieczona, aby ograniczyć napływ krwi. Okluda jest wprowadzana przez ICA, aby dotrzeć do tętnicy środkowej mózgu. Szczenię może następnie dojść do siebie przed dalszą analizą.

Generowanie niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczeniaka szczura w celu wywołania lokalnego niedokrwienia mózgu

Opisujemy wysoce powtarzalną metodę trwałego zamknięcia głównego naczynia krwionośnego mózgu gryzoni.  Technikę tę można osiągnąć przy bardzo niewielkim uszkodzeniu obwodowym, minimalnej utracie krwi, wysokim wskaźniku długoterminowego przeżycia i stałej objętości zawału współmiernej do populacji klinicznej ludzi.

Stała niedrożność naczynia mózgowego poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie

Tutaj prezentujemy protokół do trwałego zamknięcia dystalnej tętnicy środkowej mózgu u starszych samic szczurów z jednoczesnym zamknięciem tętnic szyjnych w celu wygenerowania dużych zawałów korowych i utrzymujących się deficytów. Pokazujemy potwierdzenie wielkości zmiany za pomocą strukturalnego rezonansu magnetycznego po 24 godzinach i 8 tygodniach po udarze.

Wykonywanie stałej dystalnej środkowej części mózgu z niedrożnością tętnicy szyjnej wspólnej u starszych szczurów w celu zbadania niedokrwienia kory mózgowej z trwałą niepełnosprawnością

Udar noworodkowy jest istotną przyczyną wczesnego uszkodzenia mózgu, wymagającym modelu translacyjnego ze spójnymi wzorcami urazów ogniskowych i wysoką odtwarzalnością, aby umożliwić badanie. W pracy opisano szczegółową procedurę chirurgiczną mającą na celu stworzenie niekrwotocznego, jednostronnego ogniskowego uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego u gryzoni o długości równoważnej.

Przemijający model niedrożności tętnicy środkowej mózgu udaru noworodka u szczurów P10

Ten protokół opisuje model przejściowego ogniskowego niedokrwienia mózgu u myszy poprzez śródświetlne zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej. Dodatkowo przedstawiono przykłady oceny wyników z wykorzystaniem rezonansu magnetycznego i testów behawioralnych.

Przejściowy model niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Tutaj prezentujemy protokół do ustalenia modelu dystalnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu (dMCAO) poprzez przezczaszkową elektrokoagulację u myszy C57BL/6J i oceny późniejszego zachowania neurologicznego i cech histopatologicznych.

Indukcja ostrego udaru niedokrwiennego u myszy przy użyciu techniki niedrożności dystalnej tętnicy środkowej

Ten protokół opisuje proces wywoływania modelu śpiączki niedokrwiennej mózgu przy użyciu zmodyfikowanej metody okluzji czterech naczyń.

Model śpiączki niedokrwiennej mózgu wywołany zmodyfikowaną okluzją czterech naczyń

Protokół ten opisuje ustanowienie modelu depresji po udarze (PSD) na szczurze poprzez połączenie okluzji tętnicy środkowej (MCAO) z przewlekłym, łagodnym stresem, ograniczaniem zachowań i izolacją oraz ocenę terapeutycznych efektów recepty Yi-nao-jie-yu (YNJYP) za pomocą testów behawioralnych.

Wpływ recepty Yi-nao-jie-yu na depresję po udarze u szczurów stosujących okluzję środkowej tętnicy mózgowej w połączeniu z ograniczeniem behawioralnym

Celem niniejszej pracy było ustalenie reprodukowalnej metody wykonywania kraniektomii z późniejszym trwałym, selektywnym zamknięciem tętnicy mózgowej środkowej u szczurów dla zastosowania w badaniach eksperymentalnych nad deficytami ruchowymi i przestrzenną pamięcią.

Selektywne i trwałe zatorowanie środkowej tętnicy mózgowej u szczurów: eksperymentalne podejście do badania niedoborów motorycznych i przestrzennej pamięci

Poznaj technikę niedrożności tętnicy środkowej mózgu do wywoływania depresji poudarowej u szczurów. Ta metoda zmniejsza zmienność wyników i pozwala badać mechanizmy depresji po udarze.

Technika niedrożności tętnicy środkowej mózgu do wywoływania depresji poudarowej u szczurów

Przeglądaj więcej filmów