Włączenie procedury biopsji wątroby, która daje się przeżyć, u myszy w celu oceny ustąpienia niealkoholowego stłuszczeniowego zapalenia wątroby (NASH)

W warunkach klinicznych, biopsja wątroby jest używana do oceny etapów niealkoholowego stłuszczeniowego zapalenia wątroby (stłuszczenie, stan zapalny, balonowanie hepatocytów i zwłóknienie). W tym miejscu ilustrujemy biopsję wątroby u myszy, która może być wykorzystana do analiz histologicznych, aby umożliwić ocenę środków terapeutycznych w sposób bardziej zgodny z badaniami klinicznymi.

Ta możliwa do przeżycia procedura biopsji wątroby u myszy z niealkoholowym stłuszczeniowym zapaleniem wątroby lub NASH pozwala zarówno na wykluczenie zwierząt, które nie mają NASH, jak i dokładny pomiar odpowiedzi na interwencje. Procedura ta ściśle naśladuje projekt badania klinicznego dla badań NASH, które porównują patologię wątroby po i przed leczeniem i pozwala na dokładniejszą ocenę skuteczności leku. Odsłonięcie płata wątroby może być na początku trudne.

Najpierw poćwicz odsłanianie tkanki palcem lub aplikatorem z bawełnianą końcówką, aby znaleźć najlepsze dla siebie dopasowanie. Po potwierdzeniu braku reakcji na szczypanie palca u nogi, wykonaj jedno- lub dwucentymetrowe, podłużne nacięcie skóry brzucha natychmiast doogonowo do wyrostka mieczykowatego i nieco po lewej stronie znieczulonej myszy. Użyj kleszczy i nożyczek, aby stępić skórę, aż ściana brzucha zostanie odsłonięta, a wątroba będzie mogła być uwidoczniona pod tkanką mięśniową.

Za pomocą sterylnego ostrza skalpela wykonaj jedno- lub dwucentymetrowe nacięcie w ścianie brzucha, aby odsłonić lewy boczny płat wątroby, a następnie umieść sterylny wacik pod lewym płatem bocznym, aby delikatnie wydobyć część, która ma być odsłonięta przez nacięcie. Umieść sterylny kawałek gazy nasączony solą fizjologiczną pod odsłoniętym płatem i użyj sterylnych nożyczek, aby wyciąć od 30 do 50 miligramów w kształcie klina z pobranej wątroby. Wytnij kawałek wchłanialnej gąbki sprasowanej żelatyną o wielkości podobnej do klinowego kawałka wątroby i użyj sterylnych kleszczy, aby włożyć gąbkę do wyciętej części wątroby.

Przytrzymaj gąbkę na miejscu za pomocą kleszczy, aż żelatyna przylgnie do powierzchni wątroby i uzyska hemostazę przed umieszczeniem biopsji wątroby w odpowiednim pojemniku do jej dalszej analizy. Delikatnie cofnij wątrobę do jamy brzusznej, uważając, aby nie naruszyć gąbki, a zaczynając i kończąc pełnym kwadratowym węzłem, zszyj ścianę brzucha szwami wchłanialnymi 5-0. Następnie zamknij skórę siedmiomilimetrowymi klipsami, potwierdzając całkowite zamknięcie po umieszczeniu, i umieść mysz z powrotem w czystej klatce na rozgrzanej powierzchni z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia.

W tym reprezentatywnym eksperymencie 118 myszy poddano biopsji po 29 tygodniach na niestandardowej diecie bogatej w tłuszcze, fruktozę i cholesterol w celu wywołania NASH. Poziom zwłóknienia i stłuszczenia był następnie oceniany dla każdej biopsji. Myszy wykluczono z badania na podstawie niskiego lub wysokiego zwłóknienia i nieprawidłowej utraty masy ciała lub gojenia się ran, a pozostałe myszy leczono nośnikiem lub agonistą receptora glukagonopodobnego peptydu-1 liraglutydem przez sześć tygodni.

W grupach leczonych podłożem jedna mysz wykazywała wzrost zwłóknienia, a cztery myszy wykazywały wzrost wyniku aktywności NASH. Leczenie liraglutydem wiązało się z ogólną poprawą w zakresie zwłóknienia, przy czym u 17% leczonej grupy nastąpiła poprawa, a 83% pozostało bez zmian. Podobnie, leczenie liraglutydem poprawiło ogólny wynik NASH, przy czym 66% grupy wykazało poprawę wyniku aktywności NASH, a 33% pozostało niezmienione.

Ponadto leczenie liraglutydem poprawiło stan zapalny, przy czym 75% grupy miało niższy wynik stanu zapalnego po leczeniu, podczas gdy zwierzęta leczone podłożem doświadczyły wzrostu stanu zapalnego. Leczenie agonistyczne nie miało wpływu na stłuszczenie, pozostając niezmienione w obu grupach przed i po interwencji. Uważaj, aby nie uszkodzić nadmiernie wyciętego kawałka wątroby, aby upewnić się, że może być odpowiednio przeanalizowany dla Twoich potrzeb.

Procedura ta może być stosowana do naśladowania projektów badań klinicznych poprzez porównywanie wpływu nowych terapii na wątrobę przed i po leczeniu.