Name: Mysi model ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu wywołanej wirusem dengi (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: Poznaj protokół tworzenia myszego modelu ICR do badania neuropatii wywołanej wirusem dengi. Ta metoda umożliwia monitorowanie ostrego zapalenia mózgu in vivo i stanowi platformę do analizy czynników wirusowych i gospodarza.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane przez granty z Ministerstwa Nauki i Technologii (MOST107-2321-B-038-001) oraz finansowanie stacjonarne 106TMU-CIT-01-2, Tajpej, Tajwan.

Eksperymentalne protokoły badań na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowników Narodowego Centrum Medycznego Obrony (numer IACUC: 16-261), zgodnie z wytycznymi ustalonymi przez Ministerstwo Nauki i Technologii na Tajwanie.
1. Procedura infekcji
<ol>
	<li>Przygotuj nieprzystosowany DENV2 (szczep PL046) stocks9 (pierwotnie uzyskany z Centers for Disease Control na Tajwanie, w zakresie od 2,5 x 107 do 1 x 109 PFU/ml).</li>
	<li>Rozcieńczyć zapas wirusa do 1 x 106 PFU za pomocą pożywki Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 do całkowitej objętości 40 μl.</li>
	<li>Napełnić jedną strzykawkę o pojemności 0,3 ml wyposażoną w igłę 30 G 10 μl (2,5 x 105 PFU) rozcieńczonego wirusa, a następnie napełnić kolejną strzykawkę o pojemności 0,3 ml wyposażoną w igłę 30 G 30 μl (7,5 x 105 PFU) rozcieńczonego wirusa.</li>
	<li>Przytrzymaj 7-dniową mysz ssącą ICR i wykonaj następujące czynności.
	<ol>
		<li>W przypadku wstrzyknięcia domózgowego przytrzymaj mysz w pozycji leżącej, naciskając małżowinę uszną między palcem wskazującym a kciukiem, a następnie wstrzyknij domózgowo 10 μl rozcieńczonego wirusa w obszar lambda, punkt na przecięciu szwu strzałkowego i lambdoidalnego16.</li>
		<li>Po wstrzyknięciu domózgowym należy przytrzymać mysz w pozycji leżącej na plecach za pomocą palca wskazującego i kciuka, a następnie delikatnie wstrzyknąć dootrzewnowo 30 μl rozcieńczonego wirusa w jamę brzuszną myszy. 
		UWAGA: Aby uniknąć kanibalizmu, stosuje się 75% alkoholu, aby spowodować tymczasową utratę czucia węchowego matki. Dodatkowo sugeruje się przykrywanie miotów stolcem i moczem matki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Połóż ssące myszy z powrotem w klatkach i odczekaj 5 minut, aby sprawdzić ich bezpieczeństwo po stymulacji z zachłannością myszy, w tym chodzeniem i ssaniem mleka matki. 
	nuta: Najczęściej myszy wykazują normalną aktywność po stymulacji i wydaje się, że nie ma żadnych szkodliwych skutków po wyzwaniu technicznym. Podczas tego eksperymentu zwierzęta były utrzymywane przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowników Narodowego Centrum Medycznego Obrony na Tajwanie.</li>
	<li>Oceń dzienny postęp myszy pod względem masy ciała (przy użyciu wagi mikrogramowej), ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu (według oceny choroby opisanej w sekcji 2) oraz wskaźnika przeżycia9,10,11,12,13,14,15.</li>
</ol>
2. Punktacja choroby
<ol>
	<li>Monitoruj stopień ostrych chorób podobnych do wirusowego zapalenia mózgu. Przypisz wynik 0 zdrowym myszom; 1 dla myszy z niewielkimi objawami chorobowymi, w tym utratą masy ciała, ograniczoną mobilnością i garbatą orientacją ciała; 2 dla myszy, które wykazują napad limbiczny; 3 u myszy wykazują osłabienie limbiczne, w tym trudności w poruszaniu się i osłabienie kończyn przednich lub tylnych; 4 na paraliż; 5 za śmierć. 
	nuta: Gdy wynik osiągnie 3, uważa się, że objawy choroby szybko ewoluują.</li>
	<li>Wykreśl punktację choroby, zgodnie z krokiem 2.1, dla każdego dnia jako liczbę opartą na krzywej, używając średniej ± SD dziennych wyników testów w każdej grupie.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Zakażenie DENV wykryto w OUN u pacjentów z ciężką postacią gorączki denga 3,17, co sugeruje, że podczas patogenezy dengi mogła wystąpić ostra wirusowa choroba zapalenia mózgu. W tym miejscu przedstawiamy mysi model zakażenia DENV in vivo w celu zbadania udziału dysfunkcji OUN w ciężkiej gorączce denga, szczególnie ze szczególnym uwzględnieniem chorób podobnych do ostrego wirusowego zapalenia mózgu wywołanych przez DENV. W porównaniu z poprzednimi modelami, szczeg...

DENV, przenoszony przez stawonogi wirus z rodziny Flaviviridae, zawiera genom RNA o pozytywnym sensie, który koduje trzy białka strukturalne wirusa (kapsyd, premembrana i otoczka) oraz siedem wirusowych białek niestrukturalnych (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B i NS5). Cztery serotypy DENV (DENV1-4), które zarażają około 390 milionów ludzi rocznie, powodują globalne obciążenie, mimo że rządy skierowały znaczne wysiłki na wektory komarów i kontrolę chorób1. Obecnie opracowywane są szczepionki ochronne i terapeutyczne leki przeciwwirusowe, które wymagają dalszej długoterminowej walidacji2. W praktyce klinicznej, mimo że pacjent z dengą z zakażeniem OUN jest rzadki, należy go dalej badać, aby zrozumieć różnorodność rozwoju choroby denga3. Potrzebne są dalsze badania i walidacja; Warto zauważyć, że Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) uwzględniła udział zaburzeń OUN, takich jak upośledzenie funkcji poznawczych, drgawki, encefalopatia i zapalenie mózgu, w klasyfikacji ciężkiej gorączki denga3,4. Konstruowanie zwierzęcych modeli zakażenia DENV jest niezbędne do zbadania neuropatogenezy zakażenia DENV.
W celu wywołania infekcji OUN przez DENV, kilka badań przeprowadziło różne drogi infekcji DENV, w tym (1) inokulację domózgową myszy C57BL/6, które otrzymały 4 x 103 jednostki tworzące płytkę miażdżycową (PFU) nieprzystosowanego DENV35,6, (2) inokulacja dootrzewnowa myszy BALB/c, które otrzymały 7 x 104 PFU in vitro neuroadaptowanego DENV47, (3) inokulacja śródmózgowa myszy szwajcarskich, które otrzymały 1 x 105 PFU neuroadaptacji in vivo DENV18, oraz (4) domózgowe i dootrzewnowe jednoczesne inokulowanie myszy ssących ICR, które otrzymały 1 x 106 PFU nieprzystosowanego DENV29. Zgodnie z wynikami tych badań5,6,7,8,9, zakażenie DENV u myszy powoduje replikację wirusa w mózgu, prowadząc do zespołów podobnych do wirusowego zapalenia mózgu, zmian w zachowaniu, którym towarzyszy paraliż kończyn i niestabilność postawy, neurotoksyczność i stan zapalny OUN, ogólny i miejscowy wyciek osocza przez bariera krew-mózg (BBB) i śmiertelność. Wszystkie wyniki tych badań5,6,7,8,9 wykazały zdolność DENV do infekowania OUN i indukcji ostrej choroby wirusowej podobnej do zapalenia mózgu po zakażeniu.
Na podstawie naszych aktualnych ustaleń9,10,11,12,13,14,15, stworzyliśmy mysi model infekcji DENV jako platformę in vivo do badania skuteczności terapeutycznej ukierunkowanych środków/czynników przeciwko replikacji wirusa, a także neurotoksyczność. W tym miejscu przedstawiamy protokół wykorzystany do stworzenia immunokompetentnej, niekrewniaczej myszy ICR do badania infekcji OUN i monitorowania rozwoju neuropatii o różnym nasileniu spowodowanych przez DENV. Wyniki wskazują na znaczny postęp choroby podobnej do zapalenia mózgu u myszy zakażonych DENV w sposób zależny od czasu.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 podłoże (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>Rozcieńczanie wirusa</td></tr><tr><td>0,3 ml Strzykawka insulinowa&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>Mikrowaga do wstrzykiwań domózgowych i dootrzewnowych</td></tr><tr><td></td> Mysz LabX <td>AL104</td> firmy <td>METTLER TOLEDO</td><td>Nieprzystosowana</td></tr><tr><td>DENV2 (szczep PL046)</td><td>Centra Kontroli Chorób Tajwanu-Infekcja</td><td></td> <td>myszy</td></tr><tr><td>Instytut Badań nad Rakiem (ICR)</td><td>ssie BioLASCO Taiwan Co.,</td> <td>Ltd-Nasz</td> <td>mysi model</td></tr></tbody></table>

mysi model ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu wywołanej wirusem dengi

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

Wirus dengi (DENV), wirus przenoszony przez stawonogi przenoszony przez komary, może powodować ciężką chorobę znaną jako gorączka krwotoczna denga, która charakteryzuje się śmiertelnymi powikłaniami spowodowanymi wyciekiem osocza, wodobrzuszem, wysiękiem opłucnowym, niewydolnością oddechową, ciężkim krwawieniem i upośledzeniem narządów. W kilku przypadkach zakażenia DENV występują objawy neurologiczne; jednak w badaniach nie analizowano dalej neuropatogenezy indukowanej przez DENV. W tym badaniu przedstawiamy protokół wykorzystania immunokompetentnej myszy niekrewniaczej ICR (Institute of Cancer Research) do badania indukcji zakażenia ośrodkowego układu nerwowego (OUN) DENV, a następnie progresji ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu.

W literaturze dotyczącej patogenezy dengi opisano ciężkie powikłania neurologiczne związane z zapaleniem mózgu i opon mózgowych u pacjentów4. Choć przypadki te są rzadkie w praktyce klinicznej, stworzenie immunokompetentnego mysiego modelu zakażenia DENV może służyć nie tylko do badania immunopatogenezy, ale także do analizy zakażeń OUN, neurozapalenia, neurotoksyczności oraz ostrego stanu chorobowego przypominającego wirusowe zapalenie mózgu. W niniejszym badaniu,...

Tutaj prezentujemy protokół tworzenia immunokompetentnego mysiego modelu infekcji ośrodkowego układu nerwowego ICR (Institute of Cancer Research), aby pokazać rozwój neuropatii. Monitorowanie ostrych wirusowych zaburzeń encefalitycznych za pomocą identycznych wyników choroby można przeprowadzić w celu wykazania neuropatii wywołanej wirusem dengi in vivo.

Mysi model ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu wywołanej wirusem dengi

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Ten protokół modelu choroby, który obserwuje zakażenie wirusem dengi w mózgu, staje się platformą in vivo do badań przesiewowych wektorów wirusowych i gospodarza związanych z neuropatogenezą. W przeciwieństwie do poprzednich modeli, nasze modele wykorzystują narzędzia infekcji z niskim mianem wirusa, aby zainfekować immunokompetentne myszy ssące Instytut Badań nad Rakiem w celu indukcji prokreacji choroby podobnej do encefalitycznej. Procedurę zademonstruje Ting-Jing Shen, doktorantka z mojego laboratorium.Przed rozpoczęciem procedury infekcji należy rozcieńczyć nieprzystosowany wirus dengi dwa zapasy, do jednej razy 10 do piątej jednostki tworzącej płytkę na 40 mikrolitrów pożywki o stężeniu RPMI 1640. Następnie załaduj jedną strzykawkę o pojemności 0,3 mililitra wyposażoną w igłę o rozmiarze 30 z 10 mikrolitrami rozcieńczonego wirusa. I jedna strzykawka o pojemności 0,3 mililitra wyposażona w igłę o rozmiarze 30, z 30 mikrolitrami wirusa na zwierzę.W celu międzymózgowego dostarczenia wirusa, naciśnij wyrocznię między kciukiem a palcem wskazującym, aby delikatnie przytrzymać siedmiodniową ssącą mysz Instytutu Badań nad Rakiem w pozycji leżącej i wstrzyknąć 10 mikrolitrów objętości rozcieńczonego wirusa w obszar lambda, na przecięciu szwu strzałkowego i lambdoidalnego. Po wstrzyknięciu międzymózgowym użyj kciuka i palca wskazującego, aby utrzymać mysz w pozycji leżącej, a następnie delikatnie dootrzewnowo wstrzyknąć 30-mikrolitrową objętość rozcieńczonego wirusa do mysiego brzucha. W celu oceny postępu choroby przypisz wynik od zera do pięciu każdej zaszczepionej myszy dziennie, zgodnie ze stopniem chorób podobnych do ostrego wirusowego zapalenia mózgu, i wykreśl wyniki dla każdego dnia jako liczbę opartą na krzywej, używając średniej plus i minus odchylenie standardowe dziennych wyników testów w każdej grupie.W porównaniu ze zmianami masy ciała mierzonymi u symulowanych, zaszczepionych tylko pożywką myszy, zwierzęta zaszczepione wirusem dengi wykazują spadek masy ciała w każdym momencie badania. Ponadto zwierzęta zakażone wirusem dengi wykazują znaczny wzrost pozycji zgarbionych pleców, napadów limbicznych, osłabienia układu limbicznego, paraliżu i śmierci w porównaniu z objawami wykazywanymi przez pozorowane zaszczepione zwierzęta. Rzeczywiście, myszy zakażone dengą wykazują zależne od czasu zmniejszenie wskaźników przeżycia, którego nie obserwuje się u pozorowanych zaszczepionych zwierząt, co potwierdza ustanowienie zakaźnego modelu wirusa dengi w ośrodkowym układzie nerwowym, który pokazuje postęp ostrych chorób podobnych do wirusowego zapalenia mózgu u myszy.Nakłucie w niewłaściwym miejscu może spowodować zablokowanie igły przez nacięcie i wylanie roztworu wirusa na zewnątrz głowy, co skutkuje nieudanym wstrzyknięciem i nieudaną infekcją. Po zabiegu próbki mózgu można pobrać w celu wykrycia uszkodzenia patologicznego, infiltracji komórek odpornościowych i analizy replikacji wirusa za pomocą odpowiednio cytometrii przepływowej barwienia hematoksyliną i eozyną oraz testu tworzenia płytki nazębnej. Nasz immunokompetentny model mysi stanowi platformę do badania patogennych mechanizmów infekcji wirusem dengi, do opracowywania szczepionek przeciwko wirusowi dengi lub leków przeciw wirusowi dengi.Wirus dengi jest patogenem o drugim poziomie bezpieczeństwa biologicznego, w związku z czym wszystkie eksperymenty z tym wirusem powinny być przeprowadzane w wykwalifikowanym laboratorium zapewniającym bezpieczeństwo biologiczne zwierząt na drugim poziomie bezpieczeństwa biologicznego.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

W tym filmie zaprezentowano indukcję oraz ocenę kliniczną modelu zwierzęcego stwardnienia rozsianego: przewlekłego nawracającego eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u szczurów linii DA. Choroba, wywołana immunizacją szczurów emulsją zawierającą cały rdzeń kręgowy szczura i pełny adiuwant Freunda, wykazuje objawy kliniczne przypominające przebieg choroby u ludzi.

Indukcja i ocena kliniczna przewlekłej postaci nawrotowej eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia

Wykorzystanie lucyferazy oraz systemów obrazowania in vivo (IVIS) jako nowej metody identyfikacji punktów końcowych choroby przed wystąpieniem objawów klinicznych. IVIS pozwolił nam na wizualizację w czasie rzeczywistym inwazji wirusów zapalenia mózgu przez wiele dni, co zapewnia dokładniejszy model choroby do przyszłych badań. Pozwoliło to również na szybszą identyfikację potencjalnych właściwości ochronnych leków przeciwwirusowych i szczepionek niż w przypadku obecnie stosowanych modeli...

Wykrywanie neuroinwazyjnego wirusa zapalenia mózgu za pomocą systemów obrazowania In Vivo (IVIS)

Film demonstruje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u myszy poprzez wstrzyknięcie kombinacji glikoprotein oligodendrocytów mielinowych i inaktywowanych Mycobacterium tuberculosis. Model umożliwia naukowcom badanie mechanizmów chorobowych i testowanie interwencji terapeutycznych.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego w modelu mysim

Ten film pokazuje generowanie modelu myszy z infekcją OUN. Młodemu szczeniakowi ssącemu wstrzykuje się wirusa zarówno wewnątrzczaszkowo, jak i dootrzewnowo. Wirus rozprzestrzenia się, infekując OUN, powodując śmierć komórek neuronalnych i stan zapalny. Szczenię jest oceniane pod kątem objawów infekcji w miarę postępu choroby.

Generacja modelu mysiego z infekcją ośrodkowego układu nerwowego

W tym filmie mysi model stwardnienia rozsianego jest tworzony za pomocą eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE). Myszowi wstrzykuje się emulsję zawierającą peptyd neuronalny i adiuwant, wywołując odpowiedź immunologiczną, która aktywuje autoreaktywne limfocyty T. Następnie podaje się wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (PTX) w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając autoreaktywnym limfocytom T infiltrację mózgu. Ten naciek inicjuje kaskadę...

Ten film pokazuje indukcję napadów wywołanych obsługą u myszy zakażonej wirusem mysiego zapalenia mózgu i rdzenia Theilera (TMEV). Zarażona mysz, która ma nadpobudliwe neurony, jest narażona na zewnętrzne bodźce fizyczne. To narażenie powoduje stres, co prowadzi do nieprawidłowej aktywności elektrycznej neuronów, co skutkuje drgawkami.

Napady wywołane obsługą w modelu mysim

Wirusy grypy typu A (IAV) są ważnymi ludzkimi patogenami układu oddechowego. Aby zrozumieć patogenność wirusów IAV i przeprowadzić badania przedkliniczne nowych metod szczepień, potrzebne są modele zwierzęce naśladujące ludzką fizjologię. W tym miejscu opisujemy techniki oceny patogenezy IAV, odpowiedzi humoralnych i skuteczności szczepionki przy użyciu mysiego modelu infekcji.

Badania wirusa grypy A w mysim modelu infekcji

Tutaj opisujemy metodę tworzenia modelu mikrocefalii wywołanej wirusem Zika u myszy. Protokół ten obejmuje metody inokulacji śródmózgowej wirusa Zika w stadium embrionalnym, noworodkowym i dorosłym.

Tworzenie mysich modeli zaburzeń neurologicznych wywołanych wirusem Zika przy użyciu strategii iniekcji domózgowych: embrionalnej, noworodkowej i dorosłej

Przedstawiony tutaj protokół pozwala na reprodukcję rozległej demielinizacji istoty szarej obu półkul korowych u dorosłych samców szczurów Dark Agouti. Metoda polega na domózgowym wszczepieniu cewnika, subklinicznej immunizacji przeciwko glikoproteinie mielinowych oligodendrocytów oraz domózgowej iniekcji prozapalnej mieszaniny cytokin przez wszczepiony cewnik.

Szczurzy model rozległej demielinizacji kory mózgowej indukowanej przez domózgowe wstrzyknięcie cytokin prozapalnych

Celem protokołu jest zademonstrowanie technik używanych do badania chorób wirusowych poprzez izolację i ilościowe określenie wirusa Zika z wielu narządów u myszy po zakażeniu.

Izolacja i kwantyfikacja wirusa Zika z wielu narządów myszy

Zakażenie śródmózgowe wirusem mysiego zapalenia mózgu i rdzenia Theilera (TMEV) u myszy C57BL/6 powiela wiele wczesnych i przewlekłych objawów klinicznych wirusowego zapalenia mózgu i późniejszej padaczki u ludzi. W artykule opisano zakażenie wirusem, objawy i histopatologię modelu TMEV.

Model padaczki o etiologii zakaźnej z wykorzystaniem wirusa mysiego zapalenia mózgu i rdzenia Theilera

Poznaj protokół tworzenia myszego modelu ICR do badania neuropatii wywołanej wirusem dengi. Ta metoda umożliwia monitorowanie ostrego zapalenia mózgu in vivo i stanowi platformę do analizy czynników wirusowych i gospodarza.

Mysi model ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu wywołanej wirusem dengi

Przeglądaj więcej filmów